基因组DNA的分离纯化提取方式综述

基因组DNA的分离纯化提取方式综述

中西医结合学院

摘要： DNA 的提取是分子生物学研究的基础技术, 提取的DNA 的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。归纳基因组DNA提取的各个环节．同时对DNA提取进程中的常见问题、缘故及应计谋略作简要的分析综述。

关键词：基因组DNA；分离；纯化；提取

自20 世纪50 年代Watson 和Crick 提出DNA 双螺旋模型以来, 分子生物学在广度和深度上都取得空前的进展。核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的要紧对象。核酸样品的质量直接关系到分子生物学实验的成败。研究和应用DNA的基础是提取纯化结构完整的DNA，作为分子生物学研究的基础技术，至今成立了多样的提取纯化方式。本文针对DNA的分离纯化提取进程中所利用的不同方式进行综述。

实验的一样步骤为

1． 破碎细胞.

2． DNA的提取

3． DNA的纯化

第一步中破碎细胞经常使用有三种方式

① 机械法 ：要紧通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方式。本实验经常使用的器械有玻璃匀浆器。将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙维持在十分之几毫米距离。此法细胞破碎程度较高，适用于量少和动物脏器组织。

② 化学法：有些化学药品能够改变细胞膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。例如某些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等。

实验中经常使用GA缓冲液，GA缓冲液中含有表面活性剂能够打开细胞的磷脂双分子层，增加通透性。且GA缓冲液是低渗溶液，细胞易吸水涨破，达到更好打开细胞的成效。

特点：作用比较温和

存在的问题：作用时刻长，效率低；化学试剂毒性较强，同时对产物也有作用，进一步分离时需要用透析等方式除去这些试剂。

③ 酶解法：利用各类水解酶，破碎细胞将细胞内含物释放出来。常用蛋白酶K和十二烷基硫酸钠(SDS)消化破碎细胞。

此种方式的特点是：适用范围广；作用条件温和； 内含物成份不易受到破坏。但其本钱高，了大规模的利用且耗时较长。

以上三种破碎细胞的方式可结合利用，使细胞破碎完全，利于接下来的步骤。

第二步中DNA的提取有两种方式：

① 沉淀法

实验常采纳异丙醇或无水乙醇快速提取DNA

一样经典酒精标本DNA提取方式都会加入蛋白酶K，且在56℃条件下消化3h以上，以达到组织中蛋白质的完全消化。取得的提取液经RNA酶处置，酚、氯仿和异戊醇反复抽提，即可得较纯的DNA产物。

② 介质吸附法

一样介质吸附法有三种吸附材料可供选择

Ⅰ.硅介质

硅介质纯化提取DNA原理是：在高盐低pH值条件下结合核酸，反复漂洗，后再低盐高pH值条件下洗脱。

Ⅱ.阴离子互换树脂

阴离子互换树脂纯化提取DNA原理是：在低盐高pH值条件下结合核酸，高盐低pH值条件下洗脱。

Ⅲ.磁珠

磁珠吸附的原理是：磁性微粒挂上不同基因可吸附并携带RNA

在第二步中DNA的提取的基础上进行第三步。

DNA的纯化别离在两种提取方式的基础上进行。

① 沉淀法纯化

2种沉淀纯化方式的选取

Ⅰ.酚/氯仿抽提法 ：有机溶剂对操作人员损害较大；操作时刻长

Ⅱ.盐析法：操作经济，本钱低但操作的时刻比较长。

② 介质吸附法纯化

反复用缓冲液漂洗后离心空甩2分钟，室温下晾干，用高pH低盐洗脱Buffer溶液洗脱。

常采纳柱离心式纯化方式。其优势是抽提速度快，能有效去除阻碍下游实验的抑制物。可是 这种纯化方式价钱较贵。

上述即为一些经常使用DNA的分离纯化提取方式的综述，综合DNA的提取方式，各类提取方式也有很多相通的地方，能够彼此借鉴，彼此结合，以达到更好的实验成效。随着生物技术的飞速进展，对这一技术的体会总结将会愈来愈多，更为简捷、高效的方式也必将显现，为生物技术提供更高纯度的DNA。

参考文献

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