现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．８ 保健酒中萘普生免疫学检测方法的建立 郭杰标，郝卿辰，李杏娉，肖仔君，何颖娟，刘艳珊 （韶关学院，广东韶关５１２００５） 摘要：萘普生是疗效显著但有一定副作用的非甾体抗炎药物，近期频繁发现不法生产者在抗风湿保健酒中添加萘普生增加治疗 效果，这种现象对消费者健康构成威胁。为了究建立快速检测萘普生的免疫学方法，本文以活泼酯法将萘普生分别连接到ＢＳＡ制备 免疫抗原，连接到ＯＶＡ上制备检测抗原。用免疫抗原免疫家兔制备多克隆抗体，配合检测抗原经条件优化建立竞争抑制酶联免疫吸 附检测方法。实验结果表明，检测体系ＩＣ５ｏ值为２３．０ ｎｇ／ｍＬ，最低检测限为３．１ ｎｇ／ｍＬ，检测保健酒中萘普生加标回收率在８７．３～１０２．１％， 变异系数小于８．９％，与８种相关药物交叉反应率都小于０．０５％。且与用ＥＬＩＳＡ方法与ＨＰＬＣ检测市售保健酒，１例阳性和ｌ９例阴性 结果全部吻合。因此，本文所建立的免疫学检测萘普生的实验方法，具有高灵敏度和特异性，能够满足保健酒萘普生快速筛选的需要。 关键词：功能食品；萘普生；违法添加；人工抗原；免疫检测 文章篇号：１６７３．９０７８（２０１３）８．２０１ １－２０１４ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ０ｆ ａｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉ‘０ｎ ０ｆ Ｎａｐｒｏｘｅｎ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｌｉｑｕｏｒ ＧＵＯ Ｊｉｅ－ｂｉａｏ，ＨＡＯ Ｑｉｎｇ－ｃｈｅｎ，ＬＩ Ｘｉｎｇ－ｐｉｎｇ，ＸＩＡＯ Ｚｉ－ｊｕｎ，ｌ皿Ｙｉｎ ｕａｎ，ＬＩＵ Ｙａｎ－ｓｈａｎ （Ｓｈａｏｇｕａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｈａｏｇｕａｎ ５ １２００５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎａｐｍｘｅｎ，ａ ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇ，ｗａｓ ｒｅｑｕｅｎｔｆｌｙ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｂｅｉｎｇ ａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄ ｏｎｔｏ ｎｔｉａｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｈｅａｌｔｈ ｌｉｑｕｏｒｓ ｏ ｔｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ．Ｔｈｉｓ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ｐｏｓｅｓ ａ ｓｅｒｉｏｕｓ ｔｈｒｅａｔ ｔｏ ｐｕｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ．Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａｎ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｐｒｏｘｅｎ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ａｎ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆｉｌｌｅｇａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｎａｐｒｏｘｅｎ ｗａｓ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｏ ｔＢＳＡ ｎｄ ａＯＶＡ ｏｔ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ ａｒｔｉｉｆｃｉａｌ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｕｓｉｎｇ ａｃｔｉｖｅ ｅｓｔｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ ａｎｄ ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ ｗａｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｉｍｍｕｎｉｚｅ ｒａｂｂｉｓｆｔｏｒ ｒａｉｓｉｎｇｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａｎ ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂａｓｅｄ ｏｎｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｎｄ ａｔｅｓｔｉｎｇ ｎｔａｉｇｅｎ．Ｔｈｅ ＩＣ５０ ｖａｌｕｅ ｎｄ ａＬＯＤ ｏｆｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ＥＬＩＳＡｗｅｒｅ ２３．０ ｉｒｇ／ｍＥ ｎｄ ａ３．１ ｎｅｄｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｅ ｒ８７．３ ～１ｏ２．１％ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆｖａｒｉａｔｉｏｎ（ＣＶ％）ｗｅｒｅ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ８．９％ｗｈｅｎ ｄｅｔｅｃｔｎｉｇ Ｎａｐｒｏｘｅｎ ｎｉ ｈｅａｌｈｔ ｌｉｑｕｏｒｓ．Ａｌｌ ｃｏｓｒｓ—ｒｅａｃｔｉｖｉｉｔｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ８ ｓｓｏｃｉａａｔｅ ｄｒｕｇｓ ｗｅｒｅ ｌｅｓｓ ｈａｔｎ ０．０５％．Ｔｈｅ ＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄ Ｗａｓ ｉｎ ｇｏｏｄ ａｇｒｅｅｍｅｎｔ ｗｉｈ ＬＣ－ＵＶｗｈｅｎ ｔｄｅｔｅｃｔｉｎｇ Ｎａｐｒｏｘｅｎ ｉｎ １ ｐｏｓｉｉｔｖｅ ａｎｄ １９ ｎｅｇａｔｉｖｅｈｅａｌｈｌｉｔｑｕｏｒｓｆｒｏｍｍａｒｋｅｔ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇＮａｐｒｏｘｅｎａｓｉｌｌｅｇａｌ ａｄｄｉｉｔｖｅｓｉｎｈｅａｌｈｌｔｉｑｕｏｒｓ ｄｕｅｔｏｉｓｔ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｏｏｄｓ；ｎａｐｒｏｘｅｎ；ｉｌｌｅｇａｌ ａｄｕｌｔｅｒａｎｔ；ａｒｔｉｆｉｃｉｌａａｎｔｉｇｅｎ；ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ 风湿性疾病是以关节、肌肉、软组织、神经等疼 痛为主要症状，病程多呈慢性和反复发作。临床治疗 健酒中违法添加这类药物，以增强疗效牟取不正当利 益【】 。违法产品对消费者的健康造成危害，患者在不 知情前提下服用含非甾体抗炎药物的保健食品后，可 风湿性疾病主要使用的抗炎镇痛药物存在诸多副作 用，而我国又有通过“食疗”调理慢性疾病的传统， 针对风湿性疾病的天然功能食品（以保健酒为主）近 年来广受市场青睐。非甾体抗炎药物治疗风湿性疾病 能产生恶心、头痛、肝功能损伤或过敏性皮疹等不良 反应［３ ，严重的甚至导致过敏性休克和急性肾功能衰 竭ｌ －－６］。萘普生是常用的非甾体抗炎药物，曾经被发现 违法添加在抗风湿保健酒中【３】，必须加强对这类违法 现象的监督抽查。 起效迅速且价格低廉，近期不断发现有不法厂家在保 收稿日期：２０１３－０４－０５ 基金项目：香港铭源基金科研项目（２０１０／１８８）；广东省营养膳食与健康重点 实验室开放基金项目（２０１１ＫＯ０４）；广东省自然科学基金项目 （￥２０１ １０４０００１３６２）： 目前，检测违法添加非甾体抗炎药物的主要方法 是高效液相色谱检测【 Ｊ、液相．质谱联用检测 。但 是这些方法设备投入大、运行费用高、样品预处理复 杂，需要受过专门训练的技术人员进行操作，难以展 开大规模筛查。而已经报道的针对违法添加药物的快 ２０１ｌ 作者简介：郭杰标（１９７１＿），博士，讲师，研究食品安全检测 通讯作者：肖仔君（１ ９７３一），博士，副教授，研究食品安全检测 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．８ 速检测方法，如化学检测方法［ 和薄层色谱法嘲的灵敏 度和抗干扰能力都有待提高。免疫学检测方法具有灵 敏、特异、快速和价廉的特点，已经在农药残留 ￣８］、 兽药残留 ∞ 和真菌毒素残 １１－１３］等食品安全检测工 作中推广，快速筛查食品中违法添加药品［１４１也有成功 应用的报道。本研究开发筛查保健酒中萘普生的酶联 免疫吸附检测（ＥＬＩＳＡ）方法，为大规模的专项打假 工作提供有效的筛查工具。 １材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 实验动物 新西兰大白兔购自南方医科大学实验动物中心 （机构许可证号ＳＹＸＫ（粤）２００５—００５６）。 １．１．２主要药品及试剂 萘普生标准品购自中国药品生物制品检定所；弗 氏完全（不完全）佐剂、牛血清白蛋白（ＢｓＡ）、卵清白蛋 白（ＯＶＡ）、二环己基碳二亚胺（ＤＣＣ）、Ｎ一羟基琥珀 酰亚胺（ＮＨＳ）购自上海生工；山羊抗兔ＩｇＧ二抗酶 结合物购自Ｊａｃｋｓｏｎ；其他试剂均为国产分析纯。 １．１．３主要仪器 ９６孔酶标板购自Ｎｕｎｃ公司；紫外／可见光扫描仪 购自美国Ｔｈｅｒｍｏ公司；酶标仪购自Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ公司。 高效液相色谱为Ａｇｉｌｅｎｔ １ １００型（Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８柱４．６ ｍｍｘ２５０ＩＴＵＴＩ，Ｐ／Ｎ０７２５ｌ９６７）。 １．２方法 １．２．１人工抗原的合成 称取０．８ ｍｇ萘普生溶解于１．０ ｍＬ四氢呋喃中， 再加入２．０ ｍｇ ＮＨＳ和３．０ ｍｇ ＤＣＣ，室温反应２４ ｈ， １００００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ去除沉淀，取上清液经旋转蒸 发得到活化产物。 活化产物溶解于０．５ ｍＬ二甲基亚砜中，缓ｌ曼滴入 ＢＳＡ溶液中（１０ｍｇ溶于２ｍＬ ０．１５ｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ ）。 ２５℃振荡反应４ ｈ，得到萘普生免疫抗原。同样方法， 与ＯＶＡ反应得到萘普生检测抗原。反应完全后，蛋 白溶液用０．０１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ（ｐＨ ７）溶液充分透析，用 紫外扫描判断偶联结果。 １．２．２萘普生人工抗原偶联比的计算 萘普生在２８０ ｎｌＹｌ处有特征吸收，测定萘普生浓 度消光系数Ｋ２８ｏ，则人工抗原中萘普生的浓度：Ｃｏｎ． 萘普生＝ＣＡ２８０人工抗原一Ａ２８０载体蛋（ａ）／Ｉ（２８ｏ；用双缩脲 法检测载体蛋白质量浓度，计算萘普生的人工抗原偶 联比Ｒ。 其中，Ｍ萘普生是萘普生的摩尔质量，Ｍ载体 蛋白是载体蛋白的摩尔质量。 Ｃｏｎ．萘普生／Ｍ萘普生 （１） — Ｃｏｎ．载体蛋白／Ｍ载体蛋白 １．２－３动物免疫 将与ＢＳＡ偶联成功的免疫原免疫新西兰雄性大 白兔。首次免疫，取２００ ｇｇ免疫抗原与弗氏完全佐剂 乳化，采用背部多点免疫健康大白兔。首次免疫后４ 周，然后每间隔３周，取免疫抗原１００ ｇｇ与弗氏不完 全佐剂乳化加强免疫４次。最后一次免疫８ ｄ后心脏 取血，血液在４℃条件下放置过夜，５０００ ｒ／ｍｉｎ离心 １０ ｍｉｎ，保留血清，并加入等体积的甘油存放于．２０℃ 的冰箱中。 １．２．４血清效价测定 参照Ｌｉ等 ｌＪ报道的方法，采用间接ＥＬＩＳＡ测定 免疫兔血清的抗体的效价。 １．２．５最佳检测条件的确定 参照Ｗａｎｇ等【８Ｊ报道的方法，通过棋盘滴摸索最 佳抗原包被浓度和抗体稀释倍数：检测抗原按２．０、 ５．０、８．０、１０ ｒｔｇ／ｎ￣的浓度包被酶标板，抗血清分别 按１．０×１０ 、２．０×１０ 、３．０×ｌ０ 、４．０×ｌ０ 倍稀释，每种 抗原／抗体工作组合形成的检测体系，分别检测萘普生 浓度为０和２０ ｎｇ／ｍＬ的两种溶液，按公式（２）计算 抑制率（Ｉ％）。Ｉ％最大而且 值在１．３－１．６之间的孔， 所采用的抗原／抗体工作组合就是最佳检测条件。 抑制率（１０／ｏ）＝ Ａ０‘ＡＢ ×１００％ ｆ２ 注：Ａｉ是加入萘普生的检测值，Ａｏ未加入萘普生的检测 值，ＡＢ是未加入抗体的空白检测值。 １．２．６ ＥＬＩＳＡ标准曲线的建立 按照１．２．４摸索的最佳检测条件，用萘普生系列浓 度９０、３Ｏ、１０、３．０、１．０ｎｇ／ｍＬ进行竞争抑制ＥＬＩＳＡ检 测。以萘普生标准品系列浓度为横坐标、 。值为纵 坐标，用ＲＩＤＡＷＩＮ软件拟合标准曲线方程。 １．２．７交叉反应率的测定 以ＥＬＩＳＡ方法检测８种相关的抗炎药品（吲哚美 辛、舒林酸、布洛芬、萘普生、双氯芬酸、阿司匹林、 美洛昔康、酮布芬），计算各相关药物的５０％抑制浓 度（ＩＣ５ｏ值）。按公式（３）计算的检测系统对各种药 品的交叉反应率（Ｃｒｏｓｓ．ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＣＲ）： Ｔｒ、 … 交叉反应率（ｃＲ％）＝ ×１００％ ｌ ５０相关药物 １．２．８样品检测 取０．２ ｍＬ样品溶解在２０ ｍＬ ＰＢＳ溶液中，然后 取０．２ ｍＬ样品制备液溶解在２０ ｍＬ样品缓冲液（０．０１ 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．８ Ｍ ＰＢＳ，ｐＨ ７．４，０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０，０．２％ＢＳＡ）中， ０．２８０，远高于阴性血清的检测值０．０６０。萘普生特异 性抗体的滴度符合要求。 样品被稀释了１０，０００倍。按照１．２．５的步骤进行ＥＬＩＳＡ 检测，将检测数值内插到标准曲线获得样品溶液萘普 生的浓度，在乘以稀释倍数就是样品中萘普生的含量。 ２－３最佳检测条件的确定 按１．２．５步骤以棋盘实验，摸索最优抗原／抗体工 作浓度，结果显示当检测抗原包被浓度为８．０￣ｇ／ｍＬ， 抗血清稀释３．Ｏ×１０ 倍条件下，检测２０ｎｅＣｍＣ萘普生 样品溶液，产生的抑制率达到最高，以此条件构建 ＥＬＩＳＡ检测体系。 １．２．９加标回收率和变异系数实验 在空白保健酒样品中添加０．１０、０．２０、０．３０ ｍｇ ｍＬ。的萘普生，各取Ｏ．２ ｍＬ样品按１．２．７步骤进行萘 普生含量检测；每个加标浓度的样品平行检测３次， 按公式（４）计算各个加标水平的加标回收率，并用统 计软件分析各个加标水平的检测变异系数（Ｉ１＝３）。 加标回收率（Ｒ％）＝｛ ×１ｏ０％（４） １．２．１０ ＨＰＬＣ比对验证 按照李存金【２Ｊ等报道的方法，以甲醇．０．Ｏ１ ｍｏｌ／Ｌ 磷酸二氢钾溶液（ｐＨ ３－３）（６６：３４）为流动相，在流 速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ、检测波长２８０ ｎｌｉｌ的条件下，检测１．２．７ 步骤检测过的保健酒中萘普生的含量，与ＥＬＩＳＡ检测 结果进行比对验证。 ２结果与分析 ２．１人工抗原的鉴定 如图１所示，萘普生．ＢＳＡ偶联物的紫外扫描图 谱，与ＢＳＡ载体蛋白明显不同，在萘普生吸收峰２６０ ｎｌＴｌ、３００ ｎｌＴｌ处吸光光度值明显增强，证明萘普生与 ＢＳＡ偶联成功。同样方法检测萘普生一ＯＶＡ偶联物的 紫外扫描图谱，证明萘普生与ＯＶＡ偶联成功。 《 坡＆／ｎｍ 图１人工免疫抗原、载体蛋白和萘普生紫外扫描图谱 Ｆｉｇ．１［ＩＶ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆａｒｔｉｉｆｃｉａｌ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ、ｃａｒｒｉｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｎａｐｒｏｘｅｎ 根据１．２．２中的公式（１），计算得到免疫抗原的萘 普生／载体蛋白偶联比为６．８，检测抗原的萘普生／载体 蛋白偶联比为２．６。 ２．２血清效价测定 检测两只家兔稀释１．６￣１０。倍血清的 ５０值大于 ２．４ ＥＬＩＳＡ标准曲线的建立 按照１．２．５方案进行竞争抑制ＥＬＩＳＡ检测，使用 ＲＩＤＡＷ］Ｎ软件拟合的萘普生浓度对结合率ＥＬＩＳＡ曲 线如图３所示，回归方程 ８８．３—２９．１５１ ｌｏｇ（Ｘ） （Ｒ，．Ｏ．９９６４），ＩＣ５０值为２３．０ ｎｅＣｍ￣。 爨 、 ≈： 蠊 恭瞥生浓度／（ｒｉｇ／ｍＥ） 图２萘普生Ｅｌ＿ＩｓＡ标准曲线 Ｉ ．２ ＥＬＩＳＡ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｏｆＮａｐｒｏｘｅｎ 设定检测阈值为Ｉ％＿２５％，内插到标准曲线，萘 普生最低检出浓度为３．１ ｎｅＣｍＬ。 ２．５交叉反应率的测定 如表１所示，检测８种相关药物与抗体的交叉反 应率结果都小于０．０５％，证明检测所有抗体的特异性 良好。 表１抗体对不同药物的交叉反应 Ｔａｂｌｅ １ Ｃｒｏｓｓ—ｒｅａｅｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ８ ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｄｒｕｇｓ 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．８ ２．６加标回收率和变异系数实验 表２萘普生加标保健酒样品ＥＬ ｌ ｓＡ检测回收率和变异系数结果 Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｅｆｆｅｃｉｅｎｔｓ ｏｆｖａｒｉａＵｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｐｒｏｘｅｎ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ｌｉｑｕｏｒｓ 如表２所示，使用ＥＬＩＳＡ方法检测添加０．１０、 ０．２０、０．３０ ｍｅｇｎ￣萘普生的保健酒，加标回收率在 ８７．３～１０２．１％之间，变异系数小于８．９％。检测准确性 和精密度满足违法添加样品快速筛查的要求。 ２．７样品检测与验证 分别使用ＥＬＩＳＡ和ＨＰＬＣ对２０个市售保健酒样 品进行检测，结果如表３所示，证实两种方法的检测 结果有很高的吻合度。 表３ ２０个保健酒样品的ＥＬＩＳＡ和ＨＰＬＣ检测结果 Ｔａｂｌｅ ３ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ２０ ｈｅａｌｔｈ ｌｉｑｕｏｒｓ ｕｓｉｎｇ ＥＬＩＳＡ ａｎｄ曰 ＬＣ ３结论 本研究使用活泼酯法制备了萘普生人工抗原，通 过动物免疫获得了抗萘普生抗体，所建立竞争抑制酶 联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）检测方法，ＩＣ５ｏ值为２３．０ ｎｅｇｍＬ， 最低检测限为３．１ ｎｇ／ｍＬ。检测添加０．１０、０．２０、０．３０ ｍｅｇｎ￣萘普生的保健酒，加标回收率在８７．３—１０２．１％ 之间，变异系数小于８．９％。与８种相关药物交叉反应 率都小于０．０５％，检测２０市售保健酒样品的结果与 ＨＰＬＣ完全吻合。本免疫检测方法灵敏度和特异性满 足于检测保健酒中的非法添加的萘普生，能够为食品 药品安全专项检查提供方便的筛查工具。 参考文献 ［１］ 刘福艳，李军，谢元超，等．中成药中非法添加化学物质的现 状与分析检测对策【Ｊ］．中国药事，２００８，２２（１２）：１０６７—１０６９ ＬｉｕＦ Ｌｉ Ｊ，ＸｉｅＹＣ，ｅｔ ａ１．ＲｅｃｅｎｔＡｄｖａｎｃｅｓａｎｄａｎａｌｙｔｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｎ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｒｕｇ Ｍｉｘｅｄ ２０１４ Ｉｌｌｅｇａｌｌｙ ｉｎ ＴＣＰＭ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｆｆａｉｒｓ，２００８， ２２（１２）：１０６７—１０６９ ［２ ２］李存金，郭飞宇．ＨＰＬＣ检测抗风湿类中成药中非法添加非 甾体类化学物质［Ｊ】．中成药，２０１０，３２（１２）：２１９１－２１９４ Ｌｉ Ｃ Ｊ．Ｇｕｏ Ｆ Ｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｎａｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇｓ ｉｎ ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｃｈｉｎｅｓｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｔａｔｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ｕｓｎｉｇＨＰＬＣ［Ｊ】．ＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＰａｔｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｎｉｅ，２０１０，３２（１２）：２１９１－２１９４ ［３］ 宁素云，郭兴杰，张虹，等．ＨＰＬＣ法同时检测清热解毒类中 成药中非法添加的９种化学药品［Ｊ】．中国药事，２００９， ２３（９）：９０７—９１０ Ｎｉｎｇ Ｓ Ｇｕｏ Ｘ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ９ Ｉｌｌｅｇａｌ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｆｏｒ ｄｅｔｏｘｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｂｙ ＨＰＬＣ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｆｆａｉｒｓ， ２００９，２３（９）：９０７—９１０ ［４］ 赵凤菊，来国防，孙刚，等．ＵＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法检测抗风湿类制 剂中添加醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、双氯芬酸钠和布洛 芬［Ｊ】．药物分析杂志，２０１０，３０（６）：１０３５－１０３７ Ｚｈａｏ Ｆ Ｊ，Ｌａｉ Ｇ Ｆ＇Ｓｕｎ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ，ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ，ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ ｍｉｘｅｄ ｉｎ ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｂｙ ＵＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ，２０１０，３Ｏ（６）：１０３５－１０３７ ［５】 王仕平，黄炳泉，刘卿，等．中成药中非法添加双氯芬酸钠与 尼美舒利的快速检测［Ｊ】．中国药品标准，２０１１，１２（３）： ２１１－２１４ Ｗａｎｇ Ｓ Ｈｕａｎｇ Ｂ Ｑ，Ｌｉｕ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ Ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ Ｎｉｍｅｓｕｌｉｄｅ ｉｌｌｅｇａｌｌｙ ｍｉｘｅｄ ｉｎｔｏ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．Ｄｒｕｇ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ， ２０１１，１２（３）：２１１－２１４ ［６］ 邓树勇，马启龙，丁燕，等．ＴＬＣ法快速筛选抗风湿类中成药 中的化学药品【Ｊ］．药物分析杂志，２００９，２９（１０）：１７１９—２１ Ｄｅｎｇ Ｓ Ｍａ Ｑ Ｌ，Ｄｉｎｇ ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆＴＬＣ ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ｏｆ ａｄｄ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ［『．］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ，２００９， ２９（１０）：１７１９—２１ ［７】Ｌｉｎａｇ Ｌｉｕ Ｘ Ｊ，Ｌｉｕ ｅｔ ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆｔｈｒｅｅ ｈａｐｔｅｕｓ ｏｆｒ ｔｈｅ ｃｌａｓｓ・ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｏｆ Ｏ，Ｏ－ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓａｎｄ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｈａｐｔｅｎｈｅｔｅｒｏｌｏｇｙ ｏｎ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ２００８，６１５：１７４・１８３ 【８］ Ｗａｎｇ Ｃ Ｍ，Ｌｉｕ Ｙ Ｈ，Ｇｕｏ Ｙ ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ＭｃＡｂ－ｂａｓｅｄｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｆｏｒｐａｒａｔｈｉｏｎａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅ ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００９，１ １５：３６５－３７０ （下转第２０３４页） 现代食品科技 Ｍｏｄｅｒｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．８ （上接第２０１４页） ［９ ９］Ｊｅｏｎ Ｍ Ｓ，Ｐａｅｎｇ Ｉ Ｒ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｉｔｏｎ ｏｆｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｈｏｎｅｙ ｂｙ ａ ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ［Ｊ］． ａｎａｌｙｔｉｃａ ｃｈｉｍｉｃａ ａｃｔａ，２００８．６２６：１８０．１８５ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ａｎｄｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｏｍｌ ａｌｆａｔｏｘｉｎｓ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００８，６３０：８２—９０ ［１３］Ｐｅｉ ＳＣ，ＺｈａｎｇＹ ＳＡ．Ｅｒｅｍｉｎ，ｅｔａ１．Ｄｅｔｅｃｉｔｏｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｍ１ ｉｎ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎａ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ｕｓｉＩ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ［１０】Ｃｈｅｎ Ｊ，Ｘｕ Ｊｉａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｏｖｅｌ ｑｕａｎｔｕｍ ｄｏｔ－ｂａｓｅｄ ｌｆｕｏｒｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ ｎｔａｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ】．Ｆｏｏｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２００９，２０：１０８０－１０８５ ｒｅｓｉｄｕｅ ｎ ｉｃｈｉｃｋｅｎ ｍｕｓｃｌｅ ｉｔｓｓｕｅ【Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｏ０９， １１３：１１９７．１２０１ ［１４］Ｇｕｏ Ｊ Ｂ，Ｘｕ Ｈｅ Ｑ ｌ｛ｌ ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｌ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｖａｒｄｅｎａｆｉｌ ａｎｄ ｉｔｓ 【ｌ１］Ｌｉ Ｐ Ｚｈａｎｇ Ｑ，Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｉｎ ｈｅｒｂａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｇｒｏｕｐ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２０１０， ６５８：】９７—２０３ ｃｌａｓｓ－－ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ－－ｂａｓｅｄ ＥＬＩＳＡ ｆｏｒ ａｌｆａｔｏｘｉｎｓｉｎｐｅａｎｕｔ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００９，１１５：３１３－３１７ ［１２】Ｄ Ａｃｈａｒｙａ，Ｔ Ｋ Ｄｈａｒ．Ａｎｏｖｅｌ ｂｒｏａｄ－ｓｐｅｃｉｉｃ ｆｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｉｔｖｅ ２０３４
