第１９卷３期 １７８ ２０１３年５月 天津医科大学学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖｏ１．１９．Ｎｏ．３ Ｍａｙ．２０１３ 文章编号１００６—８１４７（２０１３）０３—０１７８—０４ 功能化氧化石墨烯作为基因和抗肿瘤药物纳米载体 的制备及性能研究 曹秀芬，冯福立，杨晓英，周晶 （天津医科大学药学院，天津市临床药物治疗和诊断重点实验室，天津３０００７０） 摘要 目的：制备乳糖酰化壳聚糖修饰的氧化石墨烯季铵盐（ＧＯ—ＬＣＯ＋），作为基因和抗肿瘤药物载体。方法：采用ＥＤＣ／ＮＨＳ催 化法制备乳糖酰化壳聚糖，并连接到氧化石墨烯（ＧＯ）上，再用２，３一环氧丙基三甲基氯化铵将其季铵化，制备ＧＯ—ＬＣＯ＋。采用红 外光谱（ＩＲ）、电位及纳米粒度分析仪、原子力显微镜（ＡＦＭ）等方法对ＧＯ—ＬＣＯ 的结构和形态进行表征。然后通过非共价键将抗 肿瘤药盐酸阿霉素（ＤＯＸ）负载到栽体上，紫外光谱仪（ＵＶ）测定负载量。通过静电作用负载荧光素标记的ＤＮＡ（ＦＡＭ—ＤＮＡ），琼 脂糖凝胶电泳测定负载量，共聚焦荧光显微镜观察人肝癌细胞（ＱＧＹ一７７０３）对ＧＯ—ＬＣＯ＋／ＦＡＭ—ＤＮＡ的摄取情况，最后采用 ＷＳＴ一１试验对ＧＯ～ＬＣＯ 的细胞毒性进行了测定。结果：ＩＲ、ＡＦＭ、Ｚｅｔａ电位数据显示成功制备ＧＯ—ＬＣＯ＋，ｕｖ检测载体对ＤＯＸ 的负载量为４７７ ｇ／ｍｇ，电泳试验检测载体对ＦＡＭ—ＤＮＡ的负载量是４ Ｉｘｍｏｌ／ｇ，激光共聚焦荧光显微镜下观察ＧＯ—ＬＣＯ＋可快速 运载ＦＡＭ—ＤＮＡ到达细胞内，ＷＳＴ一１试验显示栽体对细胞基本没有毒性。结论：ＧＯ—ＬＣＯ 作为基因和抗肿瘤药物栽体，具有优 良的栽药性能和较低的细胞毒性。 关键词氧化石墨烯；药物载体；负载量；细胞毒性 Ｒ９ 文献标志码Ａ 中图分类号Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ａｓ ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｄｒｕｇｓ ＣＡＯ Ｘｉｕ－ｆｅｎ，ＦＥＮＧ Ｆｕ—ｌｉ，ＹＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｙｉｎｇ，ＺＨＯＵ Ｊｉｎｇ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｅｎａｂｌｉｎｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｔｈｅｒａｎｏｓ— ｔｉｃｓ），Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００７０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｌａｃｔｏｓｅ ａｃｙｌａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｍｏｄｉｉｆｅｄ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓａｌｔ（ＧＯ－ＬＣＯ￣）ａｓ ｎａｎｏｃａｒ－ ｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｄｒｕｇｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｆｉｒｓｔ，ｌａｃｔｏｓｅ ａｃｙｌａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｖｉａ ＥＤＣ／ＮＨＳ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｎ ｌｉｎｋｅｄ ｉｔ ｔｏ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ（ＧＯ），ｆｉｎａｌｌｙ ｌａｃｔｏｓｅ ａｃｙｌａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｍｏｄｉｉｆｅｄ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓａｈ（ＧＯ－ＬＣＯ￣）ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ２，３－ｅｐｏｘｙｐｒｏｐｙｌ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ．Ｉｎｆｒａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＩＲ），ｌａｓｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ ａｎｄ ａｔｏｍｉｃ ｆｏｒｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ （ＡＦＭ）ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｔｈｅ ｓｔｕｃｔｒｕｒｅ ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ ｄｒｕｇｓ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｃｈｏｌｏｒｉｄｅ（ＤＯＸ）ｗａｓ ｌｏａｄｅｄ ｏｎｔｏ ｔｈｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｖｉａ ｎｏｎｃｏｖａｌｅｎｔ ｂｏｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｏｇｒａｐｈ（ｕｖ）．Ｔｈｅｎ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ＦＡＭ—ｌａｂｅｌｅｄ ＤＮＡ （ＦＡＭ－ＤＮＡ）ｗａｓ ｌｏａｄｅｄ ｏｎｔｏ ｉｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｖｉａ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ ｕｐ— ｔａｋｅ ｏｆ ＧＯ－ＬＣＯ￣／ＦＡＭ－ＤＮＡ ｂｙ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｕｍｏｒ ｃｅｉｌｓ（ＱＧＹ一７７０３）ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ｆｉ— ｎａｌｌｙ，ｔｈｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｉｓ ｃａｒｒｉｅｒ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ＷＳＴ－１ ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＩＲ，ＡＦＭ，Ｚｅｔａ－ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｅｃｏｒｄｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＧＯ— ＬＣＯ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｔｈｅ ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ＤＯＸ ｗａｓ ４７７ Ｉｘｇ／ｍｇ．Ｔｈｅ ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ＦＡＭ—ＤＮＡ ｗａｓ ４ ｉｘｍｏｌ／ｇ．ＧＯ— ＬＣＯ ｌｏａｄｉｎｇ ＦＡＭ—ＤＮＡ ｃｏｕｌｄ ｆａｓｔ ｕｐｔａｋｅ ｂｙ ＱＧＹ－７７０３．Ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ＷＳＴ一１ ｔｅｓｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＧＯ—ＬＣＯ ｕｓｅｄ ｉｎ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｄｒｕｇｓ ｃａｒｒｉｅｒ ａｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ｗｈｉｃｈ ｈａｖｅ ｇｏｏｄ ｌｏａｄｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｗｅｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ；ｄｒｕｇ ｃａｒｒｉｅｒ；ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ；ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ 目前肝脏肿瘤的药物治疗仍不理想，其主要原 因之一就是药物对肝脏的选择性低，如果将抗癌活 效ｆｌｌ。基于纳米材料的药物载体由于具有高效的药 物负载量、靶向运输和控制释放等优点，在生物医 性药物与运载药物的特殊载体相联而制成前药，使 该药到达特定的肝脏病灶，则可以显著提高抗癌疗 基金项目国家自然科学基金资助项目（５１１０３１０６） 学领域有广泛的应用前景ｌ２－３ｌ。石墨烯（ｇｒａｐｈｅｎｅ）是 碳原子紧密堆积成单层二维蜂窝状晶格结构的一 种碳质新材料，氧化石墨烯（ＧＯ）为单层的氧化石 墨，平面上含有羧基、羟基、环氧基等，表面丰富的 作者简介曹秀芬（１９８６一），女。硕士在读，研究方向：抗肿瘤药物载 体；通信作者：杨晓英，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙａｎｇｘｉａｏｙｉｎｇ＠ｔｉｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃａ。 官能团赋予其新的特性，如分散性、亲水性、与聚合 物的兼容性等 。研究发现，通过耵一盯共轭、静电 第３期 曹秀芬，等助能化氧化石墨烯作为基因和抗肿瘤药物纳米载体的制备及性能研究 １７９ 作用等非共价键作用能有效地将化学药物、ＤＮＡ、 ＲＮＡ等固定在氧化石墨烯上 。本试验采用具有良 （ＬＣＯ）、ＧＯ—ＬＣＯ 的红外光谱图。将载体分散在水溶 液中，滴于云母片上，在涂膜机上旋涂均匀后烘干， ＡＦＭ观察修饰前后的形态特征。用电位及纳米粒度 好生物相容性的乳糖酸和天然多糖一壳聚糖作为修 饰ＧＯ的材料，从协同用药的层面出发，制备出可同 时运载基因药物和抗肿瘤药物ＤＯＸ的纳米载体。 另外，乳糖酰化壳聚糖可以模拟去唾液酸糖蛋白， 具有肝靶向性ｆ８］，这种设计使得载体能够肝靶向的 运输基因和抗肿瘤药物，提高疗效的同时也降低药 分析仪检测载体所带电荷情况。 １．４ ＧＯ—ＬＣＯ＋对抗肿瘤药物ＤＯＸ负载量的研 究取１ ｒａｇ／ｍＥ的载体溶液６ ｍＬ，加人６６９ ｇ／ｍＬ 的ＤＯＸ溶液１２ ｍＬ，避光搅拌２４ ｈ。１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离 心１ ｈ，取上层清液，测定吸光度，利用事先绘制的 物对人体正常器官、组织的毒副作用。 １材料和方法 １．１试剂与仪器ＧＯ（南开大学高分子研究所提 供），壳聚糖（青岛海普生物技术有限公司，脱乙酰 度８０％），乳糖酸（上海晶纯试剂有限公司），ＥＤＣ［１一 （３一二甲氨基丙基）一３一乙基碳二亚胺盐酸盐， Ａｌｄｒｉｃｈ１，ＮＨＳ（Ｎ一羟基琥珀酰亚胺，上海晶纯试剂有 限公司），三乙胺（天津市化学试剂批发公司），２，３一 环氧丙基三甲基氯化铵（Ａｄａｍａｓ），ＤＯＸ（上海浩然 生物技术有限公司），改良型ＲＰＭＩ一１６４０培养基（赛 默飞世尔生物化学制品北京有限公司），ＷＳＴ一１细 胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（碧云天生物科技有 限公司），ＦＡＭ—ＤＮＡ序列为５ 一ＴＧＣ—ＡＴＴ一１ＹＩＴｒ— ＡＡＴ—ＧＧＴ—Ａ１Ｔｒ—ＴＡ一３ 一ＦＡＭ（上海生工生物科技有 限公司）。傅立叶红外光谱仪（Ｂｒｕｋｅｒ，Ｔｅｎｓｏｒ ２７），紫 外光谱仪（ＪＡＳＣＯ，Ｖ一５７０），酶标仪（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｇｌｏ— Ｍａｘ￣一Ｍｕｌｔｉ），离心机（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５８ＩＯＲ），电位及纳米粒度分析仪（美国贝克曼库尔 特有限公司，Ｄｅｌｓａ Ｎａｎｏ Ｃ），琼脂糖凝胶电泳仪 （ＢＩＯ—ＲＡＤ，ＰｏｗｅｒＰａｃ Ｂａｓｉｃ），紫外成像仪（ＢｉｏＲａｄ）， 激光共聚焦荧光显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ，ＦＶＩＯ００）。 １．２ ＧＯ—ＬＣＯ＋的制备称取乳糖酸２６７ ｍｇ，溶于 １０ ｍＬ蒸馏水中，加入ＮＨＳ、ＥＤＣ各５０ ｍｍｏｌ／Ｌ，电 磁搅拌活化４０ ａｒｉｎ。称１ ｇ纯化壳聚糖，加入活化的 乳糖酸中，超声溶解，三乙胺调ＰＨ至８～９，电磁搅 拌４０ ｃＩ＝反应４８ ｈ。过葡聚糖凝胶柱纯化乳糖酰化壳 聚糖（ＬＣＯ），冷冻干燥。取３ ｍｇ ＧＯ，加入ＮＨＳ、ＥＤＣ ５０ ｍｍｏ］／Ｌ，超声溶解后电磁搅拌，活化４０ ａｒｉｎ，向已 活化的ＧＯ中加入８０ｍｇ的ＬＣＯ，溶解后用三乙胺 调节ｐＨ至８～９，４０℃电磁搅拌反应４８ ｈ。纯化处理 后加入４００ ｍｇ过量的２，３一环氧丙基三甲基氯化铵， 超声溶解后，８０ ｃ【＝油浴，搅拌反应２４ ｈ，１２ ０００ ｒ／ａｒｉｎ 离心洗涤数次后定容至１ ｍｇ／ｍＬ。 １．３ ＣＯ—ＬＣＯ 的表征ＧＯ—ＬＣＯ 的结构和形态采 用傅立叶红外光谱仪（ＦＴ—ＩＲ）、电位及纳米粒度分 析仪、原子力显微镜（ＡＦＭ）检测和观察。采用溴化 钾压片法测定壳聚糖（ＣＯ）、乳糖酰化壳聚糖 药物浓度一吸光度标准曲线计算出离心清液中药物 的浓度。根据公式（１）计算载药量。 Ｗ：（ＣｏｘＶ０一ＣｌｘＶ１）／ｍ （１） ｗ为负载量，Ｃ。为初始加入的ＤＯＸ的浓度，Ｖ。 为初始加入的ＤＯＸ的体积，Ｃ 为载药后经离心所 得的上清液中ＤＯＸ的浓度，Ｖ 为载药后经离心所 得的上清液的体积，ｍ为载体的质量。 １．５ 电泳试验及细胞摄取试验 ２ ＩｘＬ ＦＡＭ—ＤＮＡ （１０ Ｉｘｍｏｌ／Ｌ）分另０与０、１、２、３、４、５、６、８、ｌ０、１２、１４ Ｌ ＣＯ—ＬＣＯ＋（０．５ ｍｇ／ｍＬ）混合，室温孵育１ ｈ后琼脂糖 凝胶电泳，紫外成像仪上观察。２５ ＩｘＬ ＧＯ—ＬＣＯ （１ ｍｇ／ｍＬ）与４ ＩｘＬ ＦＡＭ—ＤＮＡ（２０ Ｉｘｍｏｌ／Ｌ）混合，室 温孵育１ ｈ后，加入１６４０基本培养基至５００ ＩｘＬ，转 染ＱＣ，，Ｔ一７７０３细胞３０ ｒａｉｎ，另外，４ ＩｘＬ ＦＡＭ—ＤＮＡ （２０ ｍｏｌ／Ｌ）相同条件下转染，作为对照试验。最后 用４％多聚甲醛固定，水溶性封片剂封片，在激光共 聚焦荧光显微镜下观察。 １．６细胞毒性试验ＱＣＹ一７７０３细胞培养于含体 积分数１０％灭活的小牛血清、１％青／链霉素的ＲＰＭＩ １６４０培养液中，在３７ ，含体积分数５％ＣＯ 的培 养箱中培养，长满后用０．２５％的胰酶消化，以１：３传 代。按每孔约５ｘｌＯ。个细胞接种于９６孔细胞培养板 中，每孔终体积为２００ Ｌ，培养箱中培养１ ｄ后，按 浓度分别为０．１、１、１０、１００、５００ Ｉｘｇ／ｍＬ加入载体 ＧＯ—ＬＣＯ ，每个浓度设置３个复孔。培养４８ ｈ后，弃 去孔内的培养基，并向孔板内加入ＷＳＴ １０ ＩｘＬ和 １６４０基本培养基１００ ＩｘＬ，培养箱中孵育２ ｈ后，用 酶标仪测定４５０ ｎｍ波长处每孔的吸光值，以未加 载体的孔作为对照孔，以空白孔作为调零孑Ｌ，按公 式（２）计算上述培养基中的细胞存活率。 Ｗ＝（Ａ—Ａｏ）／（Ａ１一Ａ０）ｘｌＯ０％ （２） ｗ为细胞存活率，Ａ为试验孔吸光值，Ａ。为空 白孔吸光值，Ａ 为对照孔吸光值。 ２结果 ２．１ ＧＯ—ＬＣＯ 的表征 ２．１．１ ＧＯ—ＬＣＯ 的红外光谱鉴定ＣＯ的ＩＲ特征 峰，如图１所示，１ ６４８ ｅｍ （Ｃ＝Ｏ伸缩振动峰，酰胺 第３期 曹秀芬，等．功能化氧化石墨烯作为基因和抗肿瘤药物纳米载体的制备及性能研究 １８１ 烯，因其独特的结构和优异的电学＿ｌｏＪ、热学…】、力 学 、光学性能＿１］１以及在纳米技术中的潜在应用性 而倍受关注。石墨烯是由碳原子以ｓｐ２杂化连接的 单原子层构成的，其基本结构单元为有机材料中最 稳定的苯六元环，其厚度仅为０．３５ Ｈ１ＴＩ，是目前发现 的最薄的二维材料＿ｌ４］。石墨烯已成为备受关注的 研究热点，而其在生物医药领域的研究还处于探 索阶段。 共聚焦荧光显微镜观察显示，载体可以快速高效地 运载ＦＡＭ—ＤＮＡ到达肝癌细胞，通过ＷＳＴ—ｌ试验 对载体的细胞毒性进行了检测，证明载体本身具有 较低的细胞毒性。研究结果初步证明ＧＯ—ＬＣＯ 可以 用于基因和抗肿瘤药物运载输送的研究，为氧化石 墨烯在生物医学领域的应用以及今后的研究奠定 了基础。另外，乳糖酰化壳聚糖可以模拟去唾液酸 糖蛋白，作为抗肿瘤药物的肝靶向载体，对于ＧＯ— 虽然石墨烯是由稳定的六元环构成，但是其边 沿以及缺陷部位具有较高的反应活性，可以通过化 学氧化的方法制备氧化石墨烯。氧化石墨烯含有大 量的羧基、羟基和环氧键等活性基团，可以利用这 些基团与其它分子之间的化学反应对石墨烯进行 功能化修饰。Ｄａｉ等ｌ１５］首先制备了具有生物相容性 的聚乙二醇功能化的石墨烯，通过碳二亚胺催化将 聚乙二醇的氨基连接到氧化石墨烯的羧基上，使这 种功能化的石墨烯具有了良好的水溶性，并且能够 在血浆、细胞培养液等生理环境下保持稳定的分 散，作为抗肿瘤药物喜树碱衍生物ＳＮ３８的载体，开 启了石墨烯在生物医药领域的应用研究。Ｚｈａｎｇ等＿ｌ６ｌ 采用阳离子聚合物聚乙烯亚胺修饰ＧＯ，负载ｓｉＲ— ＮＡ和ＤＯＸ，实验结果证明这种输送体系可以显著 增强抗肿瘤疗效，而目前基于石墨烯的肝靶向抗肿 瘤药物载体的研究报道很少。 盐酸阿霉素（ＤＯＸ）是广谱的抗肿瘤药物，临床 上主要用于治疗乳腺癌、甲状腺癌、肝癌、卵巢癌、 肉瘤等实体瘤。ＤＯＸ易溶于水，既具有脂溶性蒽环 配基和水溶性柔红糖胺，又有酸ｌ生的酚羟基和碱性 氨基，易通过细胞膜进人肿瘤细胞，具有很强的药 理活性。而氧化石墨烯两面均具有芳香结构，可以 通过盯一盯共轭、氢键和疏水效应等非共价键和抗肿 瘤药ＤＯＸ的蒽环作用，负载于ＧＯ—ＬＣＯ 表面，因此 选择ＤＯＸ作为装载药物，来考察载体ＧＯ—ＬＣＯ 在 生物医药方面的应用。ＤＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ等基因 药物都带正电荷，很难进入细胞发挥其疗效，因此 开发出一种基因药物载体很重要【１７］。Ｚｅｔａ电位显示 ＧＯ—ＬＣＯ 带正电荷，可以通过静电吸附作用将基因 药物负载于载体上。 本试验采用一种新颖的修饰方法，首先制备乳 糖酰化壳聚糖，通过酰胺键连接壳聚糖的氨基和 ＧＯ的羧基，制备出乳糖酰化壳聚糖修饰的ＧＯ，最 后利用２，３一环氧丙基三甲基氯化铵将其季铵化，从 协同用药的层面出发，制备出既可以携带基因药 物，又可以负载抗肿瘤药物的载体ＧＯ—ＬＣＯ ，并对 ＤＯＸ和ＦＡＭ—ＤＮＡ的负载量进行了检测。通过激光 ＬＣＯ＋的肝肿瘤靶向性有待进一步研究。 （本文图２、４见第２５９页） 参考文献： ［１］马淑艳．甘草有效成分的制备及甘草次酸类肝靶向抗癌前药的 合成研究『Ｄ１．乌鲁木齐：新疆医科大学，２００８ ［２］ Ｂｕｒｇｅｒ Ｋ Ｎ，Ｓｔａｆｆｈｏｒｓｔ Ｒ Ｗ，ｄｅ Ｖｉｊｌｄｅｒ Ｈ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ： ｌｉｐｉｄ—ｃｏａｔｅｄ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ ｏｆ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｃｙｔｏｔｏｘｉｅｉｔｙ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ ２００２，８（１）：８１ ｌ３ Ｊ Ｇｕｏ Ｒ，Ｌｉ Ｒ，Ｌｉ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｄｕａｌ—ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｌｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ ｈｙｂｒｉｄ ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ［Ｊ］．Ｓｍａｌｌ，２００９，５ （６）：７０９ ｌ４］Ｇｕｏ Ｈ Ｌ，ＷａｎｇＸ Ｆ，Ｑｉａｎ Ｑ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａ ｇｒｅｅｎ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ ｓｙｎ－ ｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｎａｎｏｓｈｅｅｔｓ［ＪＪ．ＡＣＳ Ｎａｎｏ，２００９，３（９）：２６５３ ［５］『ＪｉｘＬ，ＺｈａｎｇＧＹ，ＢａｉＸＤ，ｅｔａ１．Ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇｇｒａｐｈｅｎｅ ｓｈｅｅｔｓ ａｎｄ ｌａｎｇｍｕｉｒ－ｂｌｏｄｇｅｔｔ ｉｆｌｍｓ［Ｊ１．Ｎａｔ Ｎａｎｏｔｅｃｈ，２００８，３（９）：５３８ ｌ ６ Ｊ Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｘｉａ Ｊ，Ｚｈａｏ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ａｓ ａ ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｌｏａｄｉｎｇ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｍｉｘｅｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ［Ｊ】＿Ｓｍａｌｌ，２０１０，６（４）：５３７ ［７］Ｐｅｎｇ Ｃ，Ｈｕ Ｗ，Ｚｈｏｕ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ｗｉｔｈ ａ ｇｒａｐｈｅｎｅ—ｂａｓｅｄ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｂｅ［Ｊｊ．Ｓｍａｌｌ，２０１０，６（１５）：１６８６ ［８］王银松，韩月莲，李英霞，等．甲氨蝶呤一乳糖酰基壳聚糖的制备 及其体外实验ｌＪ１．高等学校化学学报，２００７，２８（６）：１０９２ ｌ９ Ｊ Ｇｅｉｍ Ａ Ｋ，Ｎｏｖｏｓｅｌｏｖ Ｋ Ｓ．Ｔｈｅ ｒｉｓｅ ｏｆ ｇｒａｐｈｅｍｅ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍａｔｅｒ， ２００７．６（３）：１８３ ｌ １０ Ｊ Ｎｏｖｏｓｅｌｏｖ Ｋ Ｓ，Ｊｉａｎｇ Ｚ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｏｍ—ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｑｕａｎ— ｔｕｍ ｈａｌｌ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｇｒａｐｈｅｎｅ阴．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００７，３１５（５８１７）：１３７９ ｌ １ １ Ｊ Ｂａｌａｎｄｉｎ Ａ Ａ，Ｇｈｏｓｈ Ｓ，Ｂａｏ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｈｅｒｍａｌ ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉ— ｔｙ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ—ｌａｙｅｒ ｇｒａｐｈｅｍｅ［Ｊ１＿Ｎａｎｏ Ｌｅｔｔ，２００８，８（３）：９０２ ｌ １２ ｊ Ｌｅｅ Ｃ，Ｗｅｉ Ｘ，Ｋｙｓａｒ Ｊ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌａｓｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒ— ｔｉｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｏｆ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ ｇｒａｐｈｅｍｅ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００８， ３２１（５８８７）：３８５ ［１３］Ｍａｋ Ｋ Ｆ，Ｓｆｅｉｒ Ｍ Ｙ，Ｗｕ Ｙ．ｅｔ ａ１．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆｔｈｅ ｏｐｔｉｃａｌ ｃ０ｎ— ｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇｒａｐｈｅｍｅ［ＪＪ．Ｐｈｙｓ Ｒｅｖ Ｌｅｔｔ，２００８，１０１（１９）：１９６４０５ ｌｌ４ｊ Ｎｏｖｏｓｅｌｏｖ Ｋ Ｓ，ＧｅｉｍＡＫ，Ｍｏｒｏｚｏｖ Ｓ Ｖ ｅｔａ１．Ｅｌｅｃｔｒｉｃｆｉｅｌｄ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ａｔｏｍｉｃａｌｌｙ ｔｈｉｎ ｃａｒｂｏｎ ｆｉｌｍｓ［Ｊ１．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，３０６（５６９６）：６６６ ｌ １５ ｊ Ｓｕｎ Ｘ，Ｌｉｕ Ｚ，Ｗｅｌｓｈｅｒ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｎａｎｏ—Ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ｆｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙ［Ｊｌ＿ＮａｎｏＲｅｓ，２００８，１（３）：２０３ 【１６ ｊ Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｌｕ Ｚ，Ｚｈａｏ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｅｆｉｆｃａｃｙ ｂｙ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｉＲＮＡ ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ ｕｓｉｎｇ ＰＥＩ— Ｇｒａｆｔｅｄ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ［Ｊｌ＿Ｓｍａｌｌ，２０１ １，７（４）：４６０ ｌ １７ Ｊ Ｙａｎｇ Ｘ Ｙ，Ｎｉｕ Ｇ Ｌ，Ｃａｏ Ｘ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ— ｉｚｅｄ ｇｒａｐｈｅｎｅ ｏｘｉｄｅ ｏｆｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｉＲＮＡ［Ｊ１ ．Ｊ Ｍａｔｅｒ Ｃｈｅｍ，２０１２，２２（１３）：６６４９ （２０１２—１２—１７收稿）