2005年版中国药典 《细菌内毒素检查法》

2005年版中国药典 素检查法》

《细菌内毒凝胶法鲎试剂使用说明书

【名称】通用名：鲎试剂 英文名：Tachypleus Amebocyte Lysate （简称TAL） 汉语拼音：hou shi ji

本品主要成份为B因子、C因子、凝固酶原、凝固蛋白原。

【用途】专用于细菌内毒素检查。

【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。

【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。 【用法】 1．材料和设备

1.1选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。

1.2准备若干支10ⅹ75mm玻璃反应试管（若使用0.1ml规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（37±1℃）。 2．实验操作

2.1 稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）1支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。

2.2 TAL试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于TAL试剂中，轻轻振摇至少30S至试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。 2.3 检查操作

2.3.1 取分装有0.1ml 鲎试剂溶液的10×75mm试管或复溶后的0.1ml /支规格的鲎试剂原安瓿8支，其中2支作供试品管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。

2.3.2 每支供试品管加入0.1ml供试品；阴性对照管加入0.1ml检查用水；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ内毒素的供试品。

2.3.3 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃的恒温器中孵育60±2分钟，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何的振动。 2.4 结果判断

2.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。

2.4.2 阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。 【注意事项】

1.本品仅用于体外细菌内毒素检测，禁止用于注射、口服等。

2. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在250℃干烤至少60min，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。

3.当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“鲎试剂灵敏度复核试验”。

4.有些物质可能引起假阳性或假阴性，所以第一次使用本品，供试品必须进行干扰实验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“干扰试验”。

5.若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查用水或实验器具受到污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确，或标准内毒素的稀释有误；供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。 【贮藏条件】避光，阴凉处保存。 【批准文号】[88]卫药准字SJ-02号 【规 格】0.1ml、0.5ml、1ml、2ml 【包 装】安瓿10支装、抗生素瓶10瓶装

【产品批号】见外盒【生产日期】见外盒【有效期至】见外盒 【生产企业】公司名称：厦门鲎试剂实验厂有限公司 公司地址：厦门海沧新阳工业区新嘉路131号（361022）

销售电话：（0592）2085561、2095294销售传真：（0592）2095294网 址：www.houshiji.com

2005年版中国药典 《细菌内毒素检查法》

本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。

细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。

细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。

凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。定量测定用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。

试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250℃干烤至少30分钟，也可用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物的污染。

供试品溶液的制备 某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的PH值在6.0-8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲剂调节PH值。酸或碱溶液须用检查用水在已去除内毒素的容器中进行配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。

内毒素限值的建立 药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：

L=K/M

式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；

K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg·h)表示，注射剂K=5E U/(kg·h)，放射性药品注射剂K=2.5 EU/(kg·h)，鞘内用注射剂K=0.2 EU/(kg·h)。

M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml(kg·h)、mg (kg·h)或U/ (kg·h)表示，人均体重按60kg计算，注射时间若不足1小时，按1小时计算。

按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调整，但需说明理由。

确定最大有效稀释倍数（MVD） 最大有效稀释倍数是指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数下可进行内毒素限值的检测。用以下公式来确定MVD：

MVD=CL/λ

式中L为供试品的细菌内毒素限值；

C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则C等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位需为mg/ml或U /ml。如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD取1，计算供试品的最小有效浓度C=λ/L。

λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml），或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。

方法1 凝胶法

凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml表示。

鲎试剂灵敏度复核试验 当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。

根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。取含有分装了0.1ml鲎试剂溶液的10mm×75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，及每一个浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃适宜恒温器中，保温60分钟±2分钟。

将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；形成的凝胶不坚实、变形或从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。

若最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值(λc).

λc=1g-1(∑X/4)

式中X为反应终点浓度的对数值（1g）。反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。 当λc在0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。

干扰试验 按表1制备溶液A、B、C和D，使用的供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（MVD）的溶液，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。

只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。按下式计算C和B的反应终点浓度的几何平均值（Es和Et）。

Es= 1g-1(∑Xs/4) Et= 1g-1(∑Xt/4)

式中Xs、Xt分别为系列溶液C和溶液B的反应终点浓度的对数值（1g）。

当Es在0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)及Et在0.5Es-2Es (包括0.5 Es和2 Es)时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。若供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对试验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。

表1 凝胶法干扰试验溶液的制备

编号 A B 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 无/供试品溶液 2λ/供试品溶液 稀释用液 - 供试品溶液 稀释倍数 - 1 2 4 8 C 2λ/检查用水 检查用水 1 2 4 8 D 无/检查用水 - - 所含内毒 素的浓度 - 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ - 平行 管数 2 4 4 4 4 4 4 4 4 2 注：A 供试品溶液；B干扰试验系列；C鲎试剂标示灵敏度的对照系列；D阴性对照。

可通过对供试品进行更大倍数的稀释或通过其他适宜的方法（如过滤、中和、透析或加热处理等）排除干扰。为确保所选择的处理方法能有效的排除干扰且不会使内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素再经过处理的供试品溶液进行干扰试验。

当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验。

当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。 检查法

1）凝胶限量试验

按表2制备溶液A、B、C、D。使用稀释倍数为MVD并且已经排除干扰的供试品溶液来制备溶液A和B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。

表2 凝胶限量试验溶液的制备

编号 A B C D 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 无/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/检查用水 无/检查用水 平行管数 2 2 2 2 注：A供试品溶液；B供试品阳性对照；C阳性对照；D阴性对照。

结果判断 保温60分钟±2分钟后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。

若溶液A的两个平行管都为阴性，判供试品符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否则判供试品不符合规定。 2）凝胶半定量试验

本方法系通过确定反应终点浓度来量化供试品中内毒素的含量。依表3制备溶液A、B、C和D。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。

结果判断 若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照B的平行管均为阳性，系列溶液C的反应终点浓度的几何平均值在0.5λ-2λ之间，试验有效。

系列溶液A中每一系列平行管的终点稀释倍数乘以λ，为每个系列的反应终点浓度，所有平行管反应终点浓度的几何平均值即为供试品溶液的内毒素浓度（按公式CE=1g-1(∑X/2)）。如果试验时采用的是供试品的稀释液，则计算原始溶液内毒素浓度时要将结果乘上稀释倍数。

如试验中供试品溶液的结果都为阴性，应记为内毒素浓度小于λ（如果检验的是稀释过的供试品，则记录为小于λ乘以该供试品的最低稀释倍数）。如果结果都为阳性，应记为内毒素的浓度大于或等于最大的稀释倍数乘以λ。

若内毒素浓度小于规定的限值，判供试品符合规定。若内毒素浓度大于或等于规定的限值，判供试品不符合规定。

表3 凝胶半定量试验溶液的制备

编号 A 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 无/供试品溶液 稀释用液 检查用水 稀释倍数 1 2 4 8 B C 2λ/供试品溶液 2λ/检查用水 检查用水 1 1 2 4 8 D 无/检查用水 - - 所含内毒素的浓度 - - - - 2λ 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ - 平行管数 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 注：A：没有超过MVD并且通过干扰试验的供试品溶液。用检查用水进行2倍系列稀释，从通过干扰试验的稀释倍数开始再稀释至1倍、2倍、4倍和8倍，但随后的稀释也不得超过MVD； B：含2λ浓度标准内毒素的溶液A（供试品阳性对照）； C：含2λ、1λ、0.5λ和0.25λ浓度标准内毒素的检查用水系列； D：阴性对照。 方法2 光度测定法

光度测定法分为浊度法和显色基质法。

浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，可分为终点浊度法和动态浊度法。终点浊度法是依据反映混合物中的内毒素浓度和其在孵育终止时的浊度（吸光度和透光率）之间存在着量化关系来测定内毒素含量的方法。动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。

显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法。根据检测原理，分为终点显色法和动态显色法。终点显色法是依据反应混合物中内毒素浓度和其在孵育终止时释放出的有色团的量之间存在着量化关系来测定内毒素含量的方法。动态显色法是检测反应混合物的色度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测色度增长速度的方法。

光度测定试验应在特定的仪器中进行，温度一般为37℃±1℃。

供试品和鲎试剂的加样量、供试品和鲎试剂的比例以及保温时间等，参照所用仪器和试剂的有关说明进行。 为保证浊度和显色试验的有效性，应预先进行标准曲线的可靠性试验以及供试品溶液的干扰试验。

标准曲线的可靠性试验 当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能会影响检验结果的改变时，需进行标准曲线的可

靠性试验。

用标准内毒素配成溶液，并制成至少3个浓度的稀释液（相邻浓度间稀释倍数不得大于10），最低浓度不得低于所用鲎试剂的标示检测限。每一稀释步骤的混匀时间同凝胶法，每一浓度至少做3支平行管。同时要求做2支阴性对照。当阴性对照在设定的时间内不发生反应，将全部数据进行线性回归分析。

根据线性回归分析，标准曲线的相关系数（r）的绝对值应该大于或等于0.980，试验方为有效。否则须重新试验。 干扰试验 选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度。按表4制备溶液A、B、C和D。每种溶液至少做2个平行管。

表4 光度测定法干扰试验的制备

编号 A B C D 无 内毒素浓度 配制内毒素的溶液 供试品溶液 平行管数 不少于2个 不少于2个 每一浓度不少于2个 不少于2个 标准曲线的中点（或附近点）的浓度（设为λm） 供试品溶液 至少3个浓度（最低一点设定为λ） 无 检查用水 检查用水 注 A：稀释倍数未超过MVD的供试品溶液。

B：加入标准曲线中点或靠近中点的一个已知内毒素浓度的，且与溶液A有相同稀释倍数的供试品溶液。 C：如“标准曲线的可靠性试验”项下描述的，用于制备标准曲线的标准内毒素溶液。 D：阴性对照。

按所得线性回归方程分别计算供试品溶液和含标准内毒素的供试品溶液的内毒素含量Ct和Cs，再按下式计算该试验条件下的回收率（R）。

R=(CS-Ct)/λm×100%

当内毒素的回收率在50%~200%之间，则认为在此该试验条件下供试品溶液不存在干扰作用。

当内毒素的回收率不在指定的范围时，须按“凝胶法干扰试验”中的方法去除干扰因素。并要重复干扰试验来验证处理的有效性。

当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。 检查法

按“光度法的干扰试验”中的操作步骤进行检测。

使用溶液C生成的标准曲线来计算溶液A的每一平行管的内毒素浓度。 试验必须符合以下三个条件方为有效：

（1）系列溶液C的结果要符合 “标准曲线的可靠性试验”中的要求。

（2）用溶液B中的内毒素浓度减去溶液A中的内毒素浓度后，计算出的内毒素的回收率要在50%-200%的范围内。 （3）溶液D在规定的时间内不发生反应。

若供试品溶液所在平行管的平均内毒素浓度乘以稀释倍数和浓度后，小于规定的内毒素限值，判供试品符合规定。若大于规定的内毒素限值，判供试品不符合规定。

（注：本检查法中，“管”的意思包括其他任何反应容器，如微孔板中的孔。） 来源--中华人民共和国药典2005年版 附录Ⅺ E 厦门鲎试剂厂整理

中国药典和美国药典中的细菌内毒素检测法的不同点比较

Requirements 细菌内毒素工作标准品（CSE） 细菌内毒素检查用水 CP 对CSE的用途及效价进行定义“细菌内毒素工作标准品中每1ng细菌内毒素的效价应不小于2EU，不大于50EU” 与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水 用于细菌内毒素定量测定用的细菌内毒USP 未提到CSE 与鲎试剂在限定的灵敏度下不发生反应的灭菌注射用水或其它水 未提到 素检查用水，内毒素含量应小于0.005EU/ml 实验用具的准备 实验所用器皿需经处理，除去可能存在的外源性内毒素，常用的方法是250℃下干烤至少1小时，也可用其它确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。 试验操作过程应防止微生物污染 内毒素标准品贮备液和标准品溶液的制备 未提到 未提到 USP的RSE的效价定为10,000USP EU/支，用5ml鲎试剂检查用水复溶1支RSE的全部内容物，用漩涡混合器间歇混合30分钟，并用此原液作系列稀释，将原液置于冰柜中保存不超过14天，作以后的稀释之用，在使用前用漩涡混合器强力混合不少于3分钟，在作下一步稀释前需对前面的稀释液混合不少于30秒，不要贮存稀释液，因为没有数据能证明其不会因为吸附作用而失去活性。 供试品溶液的制备 某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提 对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，一般要求供试品溶液的pH值在6.0-8.0的范围内 内毒素限值的建立 药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公司确定：L=K/M K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以其中放射性药品注射剂，K=2.5EU/(kg.h)，鞘内用注射剂，K=0.5EU/(kg.h) 灵敏度复核实验 未说明 当最大浓度2.0λ管为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性时，实验方为有效 按下式计算反应终点浓度的几何平均值，用下式计算终点浓度的对数值的平均值，然后再计算该平即为鲎试剂灵敏度的测定值（λc）： λc=lg-1(ΣX/4) 均值的反对数： 终点浓度的几何平均值= antilog(Σe/f) Σe是稀释系列的终点浓度的对数值之和，f为重复管数，反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的测定值 凝胶法限量实验 溶液制备中的表添加了内毒素的溶液为“供试品溶液” 使用稀释倍数为MVD并且已经排除干扰的供试品液来制备溶液A和B 在复试中，溶液A需做4支平行管，当所有平行管都为阴性时，供试品溶液符合规定 未说明 如果供试品溶液以不超过MVD的某个稀释倍数稀释，检测结果为阳性时，可进一步稀释供试品溶液但不能超过MVD，使用经验证的除热原程序对所有玻璃器皿和遇热稳定的材料在热空气烘箱中进行除热原，常用的最低温度和最少的时间是250℃下30分钟 用LRW复溶或稀释药品或抽提医疗器械，某些物质可能更适于用其它水性溶液来溶解、稀释或抽提 如果需要，可调节待测溶液（或其稀释液）的pH值，以使鲎试剂和样品的混合物的pH范围落在鲎试剂生产商指定的范围内，这通常适用于pH值在6.0-8.0范围内的产品 非经肠道药品的内毒素限值，以剂量定义，等于K/M 除了鞘内给药以外的任何给药途径，K均为5 USP-EU/kg，鞘内给药时，K为0.2 USP-EU/kg，对于非鞘内给药放射最大推荐剂量，对于鞘内给药的放射性药品，其内毒素限值为14/V，对于按以每平方体表面积计算的给药剂量（通常是抗肿瘤药品），计算公式为K/M，其中K=5EU/kg，M为（最大剂量/m/小时×1.80m)/70kg 至少用每批鲎试剂中的1支试剂进行灵敏度复核实验 浓度最低的标准品溶液的所有重复管均为阴性，实验方为有效 22EU/(kg.h)表示。注射剂，K=5EU/(kg.h)，性药品，内毒素限值的计算为175/V，V为以mL为单位的为“经稀释的供试品溶液” 使用稀释倍数不超过MVD的稀释液来制备溶液A和B 在复试中，如果溶液A的两支平行管均为阴性，供试品溶液符合规定 再重新进行试验。 光度测定法 所有的光度测定实验都要求在特定的仪器中进行，温度一般在37±1℃ 未提到 溶液D（阴性对照）在规定的反应时间内没有可检测到的内毒素 所有的光度法实验都应在鲎试剂供应商推荐的恒温温度下进行，通常为37±1℃ 如果动态法中所需的浓度范围大于两个对数级，应增加一个标准品以便在标准曲线范围内包括每个对数增长 阴性对照系列D的结果不超出所用鲎试剂所说明的空白对照限值 细菌内毒素化学结构(LPS)：

革兰氏阴性菌细胞壁结构

(1) O-特异性多糖链(亲水端) (2) 核心多糖 (3) 类脂A（生理活性中心）(疏水端)

细菌内毒素在水溶液中的状态：

细菌内毒素很容易吸附在容器壁上或聚集在一起，2005版中国药典明确注明：细菌内毒素溶液要混旋15min和30s，以充分混匀。

1.4 细菌内毒素的耐热特性

由于细菌内毒素要在高温250℃ 30分钟才能完全灭活，所以在制药工业和一次性医疗器械及血袋等生产工艺中都是让人头疼的问题，检测使用的各种玻璃器材均应严格清除内毒素后才能使用，我们提供的成品试验器材要经过7道严格工序才达到要求。

2 鲎试剂（TAL）

海洋节肢动物——鲎 鲎血提取得生物制剂——鲎试剂细菌内毒素和鲎试剂生化反应原理：

革兰氏阴性细菌内毒素C因子 被活化为B因子 被活化为真菌等代谢1,3-(β,D)-G因子 被活化为凝固酶原产生 凝固

凝固蛋白原产生凝 鲎试剂有两条反应通路，可检测革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素和真菌产生的 1,3-(β,D)-葡聚糖，即

可以间接检测革兰氏阴性菌和真菌的存在，目前试剂厂家可以提供分别针对于这两种物质的特异性鲎试剂