・ １３２２ ・ 检验医学与临床２０１４年５月第１１卷第１０期 Ｉ ａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｍａｙ ２０１４，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．１０ ・论 著・ 非小细胞肺癌血清８个抑癌基因启动子ＣｐＧ岛甲基化的 联合检测及意义 赵培革 ，鲁德矸 ，姬晓青 ，赵 琦 ，刘 伟。，刘妹梅 （山东省聊城市人民医院：１．呼吸内科；２．消化内科； ３．中心实验室 ２５２０００） 【摘要】 目的探讨非小细胞肺癌患者血清中８个抑癌基因启动子ＣｐＧ岛甲基化的联合检测在诊断非小细 胞肺癌患者中的意义，以期提高非小细胞肺癌早期无创检出率，提升治愈率。方法 选取６２例非小细胞肺癌患者 设为肺癌组，选取３Ｏ例肺部良性疾病患者作为对照组，选取１６例健康者作为健康组，取３个组研究对象的血清采 取癌基因测序法检测８种基因启动子区域甲基化情况，比较３个组研究对象的上述指标，分析上述指标的变化和３ 个组研究对象不同临床状态的相关性。结果肺组结肠腺瘤性息肉病基因（ＡＰＣ）、钙粘蛋白１３（ＣＤＨ １３）、死亡相 关蛋白激酶基因（ＤＡＰＫ）、人类０６一甲基鸟嘌呤一ＤＮＡ甲基转移酶（ＭＧＭＴ）、ＲＡＳ相关区域家族Ｆ２（ＲＡＳＳＦ２）、人 类Ｒｕｎｔ相关转录因子３（ＲＵＮＸ３）、ＲＡＳ相关区域家族１Ａ（ＲＡＳＳＦ１Ａ）和ＴＭＳ１／ＡＳＣ基因甲基化检出率均明显高 于对照组，组间比较差异具有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），非小细胞肺癌患者血清中抑癌基因８个指标联合检测敏感性 达到９３．５４ ，特异性达到９Ｏ．３ ，敏感性明显高于所有单项检测和４个指标联合检测。结论 ＡＰＣ、ＣＤＨ １３等８ 个抑癌基因异常甲基化状态的联合检测可以明显提高非小细胞肺癌患者抑癌基因甲基化的检出率。该８个基因异 常甲基化有望成为非小细胞肺癌辅助诊断和预后判断的分子标记，并有可能成为非小细胞肺癌治疗的新靶点，从而 提高临床对非小细胞肺癌患者的诊治水平。 【关键词】非小细胞肺癌；ＤＮＡ甲基化； 联合检测； 无创诊断 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１４．１０．０１０ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—９４５５（２０１４）１Ｏ一１ ３２２一Ｏ３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＣｐＧ ｉｓｌａｎｄ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｉｇｈｔ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ＺＨＡＯ Ｐｅｉ—ｇｅ ，ＬＵＤｅ—ｘｕａｎ ，Ｊ Ｊ Ｘｉａｏ—ｑｉｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｑｉ ，ＬＩＵ Ｗｅｉ ， Ｌ儿 Ｓｈｕ—ｍｅｉ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ；３．Ｃｅｎｔｒａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｐｅｏｐｌｅ ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏＪ’Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ Ｃｉｔｙ，Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２５２０００，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＣｐＧ ｉｓｌａｎｄ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｉｇｈｔ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｌｉｓｅｒｕｍ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ（ＮＳＣＩ Ｃ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ６２ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＮＳＣＩ Ｃ ｗｅｒｅ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ａｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｇｒｏｕｐ，３０ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｅｎｉｇｎ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｗｅｒｅ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ １６ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ａｓ ｈｅａｌｔｈｙ ｇｒｏｕｐ．Ｓｅｒｕｍ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｓｓａｙ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａ— ｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｐｒｏ— ｍｏｔｅｔ ｒｅｇｉｏｎ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ ｃｏｌｉｉ（ＡＰＣ）ｇｅｎｅ，ｃａｄｈｅｒｉｎ １ ３（ＣＤＨ １ ３）ｇｅｎｅ，ｄｅａｔｈ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ（ＤＡＰＫ）ｇｅｎｅ，ｈｕｍａｎ ０６ ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｊｎｅ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｈｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＭＧＭＴ）ｇｅｎｅ，Ｒａｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｄｏ— ｍａｉｎ ｆａｍｉｌｙ Ｆ２（ＲＡＳＳＦ２）ｇｅｎｅ，ｒｕｎｔ—ｒｅｌａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ３（ＲＵＮＸ３）ｇｅｎｅ，Ｒａｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｆａｍｉｌｙ Ｆ１Ａ（ＲＡＳＳＦ１Ａ）ｇｅｎｅ ａｎｄ ＴＭＳ１／ＡＳＣ ｇｅｎｅ ｉｎ ＮＳＣＬＣ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜ ０．０５）．Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｅｉｇｈｔ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｉｎ ＮＳＣＩ Ｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ９３．５４ ａｎｄ ９０．３ ，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｒｅｇｉｏｎ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＰＣ， ＣＤＨ １ ３ ａｎｄ ８ｏ ｏｎ，ｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＮＳＣＩ Ｃ， ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒｅ ｅｉｇｈｔ ｇｅｎｅｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＮＳＣＩ Ｃ， ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｎｅｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ＮＳＣＩ Ｃ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ＮＳ（ Ｉ （ ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ；ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ； ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ； ｎｏｎ—ｉｎｖａｓｉｖｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ 基金项目：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（２００８ＢＳ０８０４６）。 作者简介：赵培革，男，硕士，副主任医师，研究方向为肺癌的基础与临床。 检验医学与临床２０１４年５月第１１卷第１０期 Ｉ ａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｍａｙ ２０１４，Ｖｏ！．１１，Ｎｏ．１０ ・ １３２３ ・ 目前非小细胞肺癌的首要治疗方法仍然是手术治疗 。。 。 手术治疗效果和患者的病情分期情况密切相关。提高非小细 胞肺癌的早期诊断率足提高其治疗质量的关键环节。无创快 速检测足任何肿瘤 期诊断的理慰方向。本组资料在前期进 离心管中。密封后放置于冰箱中４℃静置２ ｈ，取出放于离心 器中，采用３ ０００ ｒ／ｒａｉｎ的离心速度离心１０ ａｉｒｎ，倾取上层血清 于一８０。Ｃ保存待后续进行标本预处理。取２ ｍＬ血清，采用德 国Ｑｉａｇｅｎ公司生产的ＱＩＡａｍｐ Ｂｌｏｏｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ ＤＮＡ试剂盒进 行ｒ大量的非小细胞肺癌患者和健康者血清中８个抑癌基因 启动子ＣｐＧ甲基化分析：１二作的基础上 。］，对８个基因［结肠 腺瘤性息肉病基因（ＡＰＣ）、钙粘蛋Ｉ １３（ＣＤＨ １３）、死亡相关 蛋白激酶基因（ＤＡＰＫ）、人类０６一 基鸟嘌呤一ＤＮＡ一甲基转移 酶（ＭＧＭＴ）、ＲＡＳ相关区域家族Ｆ２（ＲＡＳＳＦ２）、人类Ｒｕｎｔ相 行上述标本的血清ＤＮＡ提取。加入反应试剂一反复通过离 心柱一用５Ｏ Ｉ 蒸馏水洗脱下Ｉ）ＮＡ一一８Ｏ℃保存一亚硫酸 氢钠修饰将ＤＮＡ序列中未甲基化的胞嘧啶（ｃ）转变为尿嘧啶 （Ｕ）一ＤＮＡ纯化一脱磺基反应一聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增 。 关转录因子３（ＲＵＮＸ３）、ＲＡＳ相关区域家族１Ａ（ＲＡｓｓＦｌＡ） １．２．２ ＰＣＲ序列分析 将１．２．１所得ＰＣＲ产物采用德国 Ｑｉａｇｅｎ公司生产的ＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ产物纯化试剂进行纯化封 和ＴＭＳ］／ＡＳＣ￣联合检测以早期诊断非小细胞肺癌进行ｒ研 究，现将结果报道如下。 １资料与方法 装，委托上海生工公司对其进行序列分析。 １．３观察指标分别计算３个组受试者８个基因甲基化的单 １．１ 一般资料 选取本院２００８年１２月至２００９年１Ｏ月呼吸 科收治的非小细胞肺癌患者６２例没为肺癌组，选取同期在本 院呼吸科进行治疗的肺部良性疾病患者３Ｏ例，设为对照组，再 项阳性检出率、非小细胞肺癌患者８个指标进行组合（每４个 指标为一种组合和８个指标连个）检测的阳性检｝ｆＩ牢及敏感 性、特异性，并进行比较。 ‘ 选取Ⅻ期来本院进行健康体检者１ ６例设为健康组。肺癌组 巾，男４Ｏ例，女２２例；年龄（５９．６±６．５）岁。所有患者均首次 确诊为非小细胞肺癌，未进行任何放化疗。对照组中，男１８ １．４统计学处理 采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件进行分析。计数 资料以率表示，采用Ｙ 检验。以Ｐ＜０．０５为差异有统计学 意义。 ２结 果 例，女１２例；年龄（５８．１±６．９）岁。健康组中，男１０例，女６ 例；年龄（５７．３±６．８）岁。３个组受试者的男、女性别比例及年 龄比较，差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５），具有可比性。 １．２方法 ２．１ ３个组受试者血清８个基因甲基化阳性率比较：ＡＰＣ、 ＣＤＨ １３、ＤＡＰＫ、ＭＧＭＴ、ＲＡＳＳＦ２、ＲＵＮＸ３、ＲＡＳＳＦ１Ａ、ＴＭＳ］／ ＡＳＣ基因甲基化检出率均明显高于对照组和健康组，组问比较 差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表ｌ。 １．２．１标本采集及预处理 所有入组受试者（非小细胞肺癌 组患者于放化疗前）于凌晨采集５ ｍＩ 空腹外周静脉血于抗凝 表１血清８个基因在各研究组中的甲基化阳性率比较［ （ ）］ 基因 ＡＰＣ基因甲基化 ＣＤＨ １ ３基因甲基化 肺癌组（”一６２） ３２（５１．６１） 对照组（ｎ一３０） ０（０．００） 健康组（ｎ一１６） ０（０．００） ０（０．００） ０（０．００） ０（０．００） ０（０．００） 船 Ｍ Ｍ ¨ ＜０．０１ 盯 ＜０．０５ ＜０．０５ ＜Ｏ．０１ ＜Ｏ．０１ ＜０．０１ 船 ∞ ２３（３７．１０） ２３（３７．１０） ０（０．００） ＤＡＰＫ基因甲基化 ＭＧＭＴ基因甲基化 ０（０．００） ０（０．００） １ ７（２７．４２） ２４（３８．７１） ＲＡＳｓＦ２基因甲基化 ＲＵＮＸ３甲基化检 ＲＡＳＳＦ１Ａ基因甲基化 ＴＭＳＩ／ＡＳＣ基因甲基化 ０（０．００） ０（０．００） ０（０．００） ０（０．００） ２５（４０．３２） ２８（４５．１６） １４（２２．５９） ０（０．００） ０（０．００） ０（０．００） ＜０．０１ ＜０．０５ ２．２非小细胞肺癌患者８个基因【１１基化单项检测结果 非小 细胞肺癌患者８个指标单项检测的敏感性和特异性见表２。 表２ 非小细胞肺癌患者抑癌基因启动因子ＣｐＧ 岛甲基化单项检测结果 续表２非小细胞肺癌患者抑癌基因启动因子ＣｐＧ 岛甲基化单项检测结果 注：一表示无数据。 ２．３非小细胞肺癌患者８个基因甲基化联合检测结果分析 非小细胞肺癌患者８个指标联合检测敏感性达到９３．５４ ，特 异性达到９Ｏ．３ ，敏感性明显高于所有单项检测和４个指标 联合检测。见表３。 检验医学与临床２Ｏ１４年５月第１１卷第１０期 Ｉ ａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｍａｙ ２Ｏ１４，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．１０ 表３ 非小细胞肺癌患抑癌基因启动因子ＣｐＧ甲基化联合检测结果（”一６２） 检测指标联合方式 ＡＰＣ基因、ＣＤＨ １３基因、ＤＡＰＫ基因、ＭＧＭＴ基因 阳性例数（ ） 敏感性（ ） ５３．２３ ６６．１３ ６２．９０ ６９．３５ ８２．２６ ７７．４２ ７５．８１ ８ｏ．６５ 特异性（ ） ＲＡＳＳＦ２基因、ＲＵＮＸ３甲基、ＲＡＳＳＦ１Ａ、ＴＭＳ１／ＡＳＣ基因 ＣＤＨ １３基因、ＤＡＰＫ基因、ＭＧＭＴ基因、ＲＡＳＳＦ２基因 ＡＰＣ基因、ＲＵＮＸ３甲基、ＲＡＳＳＦ１Ａ、ＴＭＳ１／ＡＳＣ基因 ＤＡＰＫ基因、ＭＧＭＴ基因、ＲＡＳＳＦ２基因、ＲＵＮＸ３甲基 ＡＰＣ基因、ＣＤＨ １３基因、ＲＡＳＳＦ１Ａ、ＴＭｓｌ／ＡＳＣ基因 ＡＰＣ基因、ＣＤＨ １３基因、ＤＡＰＫ基因、ＴＭＳ１／ＡＳＣ基因 ＭＧＭＴ基因、ＲＡＳＳＦ２基因、ＲＵＮＸ３甲基、ＲＡＳＳＦ１Ａ ＡＰＣ基因、ＣＤＨ １３基因、ＤＡＰＫ基因、ＭＧＭＴ基因、ＲＡｓｓＦ２基因、ＲＵＮＸ３甲基、 ９３．５４ ＲＡＳＳＦ１Ａ、ＴＭ￥１／ＡＳＣ基因 ３讨 论 筛查。 参考文献 肿瘤作为目前世界公认的医学难题，治疗模式是以手术、 放疗和化疗为主的综合治疗，在一定程度上延长了患者的生 命，提高了患者的生活质量，但仍有许多不尽如人意之处。进 展期肺癌手术后患者５年生存率不到１Ｏ ，肺癌总生存率在 过去的２０年中无明显提高，约１４ 。而在过去的３Ｏ年中，乳 ［１］乇建平，鲁德歼，杨燕．盂鲁斯特用于稳定期慢性阻塞性 肺疾病患者疗效观察［Ｊ］．ｉＩ Ｊ东医药，２００７，４７（５）：４１－４２． ［２７鲁德歼，姬晓青．非小细胞肺癌【ｆ Ｉｓｕｒｖｉｖｉｎ及ｂｃｌ—ｘｌ基因 腺癌、结肠癌、前列腺癌等生存率大大提高，其中的重要原因是 早期得到了确诊并及早采取了手术治疗。早期诊断研究中，无 创、快速的榆测方法一直是人们关注的重点领域。肿瘤的发生 蛋白的表达及其相关性研究［Ｊ］．中国实用内科杂志， ２００６，２６（１９）：１５２３ １ ５２５． ［３］鲁德歼，姬晓青．非小细胞肺癌患者血清死亡卡Ｈ关蛋白激 酶基因异常甲基化的榆测及意义［Ｊ］．山东医药，２０１０，５０ （９）：６９—７０． 和遗传学改变之间存在直接的关系，这得到众多学者的肯定。∞ 钉 ∞ 船 蝎 ＂ ∞ 黯 遗传学改变中，基因甲基化作用和组蛋白乙酰化作用是最为显 著的特征。随着近年来ＰＣＲ技术的不断发展和日趋完善，其 ［４］鲁德歼，姬晓青，徐国强，等．非小细胞肺癌患者血清Ｒａｓ 相关区域家族１Ａ基因异常甲基化榆测及意义［Ｊ］． 际 呼吸杂志，２Ｏ１０，３０（１８）：１０９３—１０９６． 在遗传学检测中得到越来越广泛的应用。ＰＣＲ技术的发展使 得ＤＮＡ特异片段的甲基化检测的更为简便、快捷。肿瘤患者 的肿瘤组织及血液标本中研究发现多个基因的高度甲基化，从 而使ＤＮＡ特异片段的甲基化检测极有可能成为临床最新的 肿瘤早期诊断指标，对肿瘤的监测及预后也均有明显的意义。 目前肺癌的抑癌基因启动子甲基化是早期肺癌的危 ３ ４ １ １ ５ ５ ［５］鲁德歼，姬晓青，刘伟．非小细胞肺癌患者血清ＲＵＮＸ３ 基因异常甲基化的检测及意义［Ｊ］．肿瘤防治研究，２ｏ１１， ３８（６）：６７１－６７４． ％ ３ ％ ２ ∞ ３ ［６］鲁德歼，姬晓青，刘伟，等．非小细胞肺癌患者ＩＩＩＬ清０６甲 基鸟嘌呤一ＤＮＡ一甲基转移酶基因异常甲基化检测及其临 床意义［Ｊ］．国际呼吸杂志，２００９，２９（２０）：１２２卜１２２４． ［７］鲁德 ，王建平，姬晓青，等．ＮＳＣＩ Ｃ患者血清ＲＡＳＳＦ２ 基凶甲基化检测临床意义分析［Ｊ］．中华肿瘤防治杂志， ２０１２，１９（１９）：１４７４—１４７６． 险因素。深入研究肺癌相关抑癌基因启动子甲基化将可能导 致肺癌早期诊断的进展。 本组资料中，通过检测具有可比性的非小细胞肺癌患者、 良性肺部病变患者和健康者的８个抑癌基因启动因子ＣｐＧ岛 甲基化阳性情况，发现非小细胞肺癌组患者的检出率均明显高 于良性肺部病变者和健康者，差异具有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）。非小细胞肺癌患者８个指标联合检测敏感性达到 ９３．５４ ，特异性达到９０．３ ，敏感性明显高于所有单项检测和 ４个指标联合检测。 Ｅ８］Ｚｉｎｎ ＲＩ ，Ｐｒｕｉｔｔ Ｋ，Ｅｇｕｅｈｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．ｈＴＥＲＴ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｄｅｓｐｉｔｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｎｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ＤＮＡ ａｎｄ ａｃｔｉｖｅ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ａｒｏｕｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｓｔａｒｔ ｓｉｔｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００７， ６７（１）：１９４—２０１． 综上所述，对外周血所提取得到的ＤＮＡ进行相关基因甲 基化状况进行检测，采用８个基因检测数据联合分析，对非小 细胞肺癌的检测敏感性高、特异性高，且该方法可以做到基本 （收稿日期：２０１３－１０ ３０ 修回Ｈ期：２０１３－１２—３０） 无创，操作简便、快捷，可大批量用于非小细胞肺癌的早期
