第１０期 兰红梅，等：ＨＰＬＣ法快速监测５一羟基间苯二甲酸反应液 ・７ｌ・ ＨＰＬＣ法快速监测５一羟基间苯二甲酸反应液 兰红梅，曹琴西，王（浙江海洲制药有限公司，浙江台州伟 ３１８０００） 摘要：目的：建立简单快速的ＨＰＬＣ法监测５一羟基间苯二甲酸反应液。方法：梯度洗脱反相液相色谱。结果：５一羟基间苯二甲酸 和５一溴间苯二甲酸保留时间分别约４．５ｒａｉｎ和８．２ｍｉｎ，检测限分别为０．０５ｎｇ和０．０６５ｎｇ。重复检测反应液的ＲＳＤ分别为０．０６％ 和１．３％。结论：本法可作为５一溴间苯－－ｒｐ酸合成５一羟基间苯二甲酸反应液的一种快速、灵敏、可行的监控方法。 关键词：ＨＰＬＣ法；５一羟基间苯二甲酸；反应液 中图分类号：０６５７．７＋ｌ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００８—０２１Ｘ（２０１４）１０—０７１—０２ Ｆａｓｔ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ５——Ｈｙｄｒｏｘｙ——ｎｌ——ｐｈｔｈａｌｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｃａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｌａｎ Ｈｏｎｇｍｅｉ，Ｃｈａｏ Ｑｉｎｇｘｉ，Ｗａｎｇ Ｗｅｉ （Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈａｉｚｈｏｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔａｉｚｈｏｕ ３１８０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ５一Ｈｙｄｒｏｘｙ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｃａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔＲ ｏｆ ５一Ｈｙｄｒｏｘｙ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ５一ｂｒｏｍｉｄｅ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｓ ａｂｏｕｔ ４． ５ｍｉｎ ａｎｄ ８．２ ｍｉｎ．ｔｈｅ ＬＯＤ ｏｆ５一Ｈｙｄｒｏｘｙ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ５一ｂｒｏｍｉｄｅ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｓ ａｂｏｕｔ ０．０５ｎｇ ａｎｄ ０．０６５ｎｇ．ｔｈｅ ＲＳＤ ｏｆ５一Ｈｙｄｒｏｘｙ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ５一ｂｒｏｍｉｄｅ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｓ ａｂｏｕｔ ０．０６％ａｎｄ １．３％． Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ Ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ鹊ａ ｆａｓｔ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ５一Ｈｙｄｒｏｘｙ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｆｒｏｍ ５一ｂｒｏｍｉｄｅ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ）． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ ５一Ｈｙｄｒｏｘｙ—ｍ—ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ；Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ５一羟基间苯二甲酸是一种合成染色聚酯纤维和高速热 敏记录材料的增色剂，对谷氨酸脱氢酶、谷氨酸脱羧酶有抑 制作用，具有一定药用价值”Ｊ，也是合成造影剂碘海醇、碘氟 醇和碘帕醇等的重要中间体。以间苯二甲酸为原料，合成至 ５一羟基间苯二甲酸有多种合成路径，传统的工艺采用三氧 化硫或发烟硫酸磺化，氢氧化钠碱熔，酸化而成，本文研究了 间苯二甲酸先溴化，在碱性条件下水解而合成５一羟基间苯 二甲酸时，对最后一步合成过程采用ＨＰＬＣ建立简单快速的 温：３５℃；检测波长：２４０ｎｍ。 流动相：Ａ为甲醇，Ｂ为０．１％磷酸，洗脱程序如下 流速：１．ＯｍＬ・ｍｉｎ 进样量：ＩＯＩ￣Ｌ ‘ 监控方法，以随时跟踪反应过程，对合成反应设计及优化起 着重大的指导作用。 ２．２ 溶液配制 ２．２．１对照溶液配制 １仪器和试药 １．１ 仪器 岛津ＬＣ一２０Ａ液相色谱系统、ＳＰＤ—Ｍ２０Ａ检测器、ＬＣ —精密称取５一羟基间苯二甲酸对照品和５一溴间苯二甲 酸对照品各２５．Ｏｍｇ至２５ｍＬ量瓶中，以６０％甲醇溶解并定 容至刻度，摇匀。 ２．２．２样品溶液配制 ｓｏｌｕｔｉｏｎ色谱工作站，Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＰ２１１Ｄ型电子分析天平， ＭｉＵｉｐｏｒｅ超纯水机 以毛细管取少量５一溴间苯二甲酸合成５一羟基间苯二 甲酸反应液于２５ｍＬ具塞试管中，加６０％甲醇溶解并定容至 刻度，摇匀。 １．２试剂和试药 ５一溴间苯二甲酸对照品（批号：２０１３０７０２），公司自制；５ 一２．３分析及结果 ２．３．１检测限 羟基间苯二甲酸对照品（批号：２０１３０７０１），公司自制；甲醇 为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水。 在２．１色谱条件下，取配好的５一羟基间苯二甲酸和５ 一２试验部分 溴间苯二甲酸对照液，逐步稀释，进样分析得到５一羟基问 ２．１ 色谱条件 色谱柱：Ｔｈｅｒｍｏ ＢＯＳ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃｌ８，１５０×４．６ｍｍ，５１ｘｍ；柱 收稿日期：２０１４—０８—０６ 苯二甲酸的检出限（Ｓ／Ｎ＝３）为０．０５ｎｇ、５一溴间苯二甲酸的 检出限为０．０６５ｎｇ。 作者简介：兰红梅（１９７６一），女，工程师，硕士学位从事质量管理和质量研究。 。７２。 山东化工 ＳＨＡＮＤ０ＮＧ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＩＮＤＵ Ｙ ２０１４年第４３卷 ２．３．２样品测定和精密度 谱柱价格较贵，而离子对试剂法操作繁琐，系统不易稳定，平 衡时间长，为了简便易控，希望采用普通反相液相色谱系统， 但由于５一羟基问苯二甲酸和５一溴间苯二甲酸极性相差较 大，试样如果选择５一羟基间苯二甲酸成品的分析方法，则反 应液样品溶解度很差，且５一溴间苯二甲酸出峰较晚（约 ５０ｍｉｎ），所以重点考察了梯度洗脱方式，大大缩短了分析时 间，达到１０ｍｉｎ内得到中控结果的需求。该法简便、快速、灵 敏、可靠。 反应液样品取样后立即冷藏，临分析前取出配制样品溶 液（３份）。精密吸取样品溶液ｌＯｌ￣Ｌ，进样分析，记录色谱图 （图１），结果５一羟基问苯二甲酸和５一溴间苯二甲酸保留时 间分别约４．Ｓｔａｉｎ和８．２ｍｉｎ，ＰＤＡ对两峰进行光谱纯度分 析，表明两峰均为单一成分。重复测定３份样品溶液，计算 ＲＳＤ，结果见表１。 试验考察了５一溴间苯二甲酸在一系列溶剂中的溶解 度，发现在甲醇中的溶解度远远大于乙腈，故流动相采用了 甲醇一水系统，水相采用０．１％磷酸而不用纯水，是因为采用 ０．１％磷酸可以增加酸性成分样品的溶解度，同时可以有效 改善峰形。 由于５一羟基间苯二甲酸合成反应液样品在８０％甲醇 ｌＯ ｔ２ ｌ● ■＾ｎ 中溶解不完全，容易有油状不溶物出现，因此试验考察了不 同比例甲醇对样品的溶解度，发现易溶于６０％以上的甲醇， 故在样品配制时所用溶剂选择６０％甲醇。 图１ 样品溶液色谱图 表１精密度试验 参考文献 ［１］俞马金，陈中峻，陆大东．５一羟基间苯二甲酸的合成 ［Ｊ］．江苏化工，１９９８，２６（６）：２０—２１． ［２］钱玉萍，刘燕，钱玲．高效液相色谱法测定间苯二甲 酸中的微量杂质［Ｊ］．化学工业与工程技术，２００９，３０ （１）：５８—６０． ３讨论 ５一羟基间苯二甲酸是间苯二甲酸经不同路线合成而 得，其原料和杂质均为强离子化合物，在普通Ｃ，８柱上不易保 留，分析方法开发一般采用离子色谱分析，可采用离子对试 曹琴西。王伟．ＨＰＬＣ法快速监 测５一羟基问苯二甲酸反应液［Ｊ］山东化工，２０１４，４３（１Ｏ）： ７１—７２） ，．．（本文文献格式：兰红梅剂做流动相，或者采用阴离子交换键合固定相 ，因离子色 ｊｌ ｊ ｊ ｝ ｊ １Ｉ －ｊ 蕾｝ｊ ｊ ｒ ｊ ・ ‘｝ ０拿 坐业夸 ｝船 ｊ ｊ 业 拿 盥 ｅ ｝业 （上接第７Ｏ页） 量测定出来，最优实验条件为：ＨＰ—ｉｎｎｏｗａｘ色谱柱（３０ｍ× ０．３２ｒａｍ，０．２５ｌａ，ｍ）、分流比为２１５：１，初始温度５０％，保持 １ｍｉｎ后以０．５￣Ｃ／ｍｉｎ的速率升至７０￣Ｃ保留５ｍｉｎ，最后以 在实验最佳色谱柱、柱温程序、载气流速、分流比的条件 下，分别用甲醇和乙酸乙酯作为溶剂，将邻二甲苯、间二甲 苯、对二甲苯、乙苯按１：１：１：１比例混合后进行实验，对比分 １￣／ｍｉｎ速率升温至ＩＯ０￣Ｃ保留５ｍｉｎ。载气流速为０．９ｍＬ／ ｍｉｎ，溶剂为乙酸乙酯。本文的测定结果为实验室进行混合 二甲苯的分离提供了一些数据支持，有助于对分离混合二甲 离度，实验结果见图６、７所示。实验结果表明，甲醇作为溶 剂时分离度较好，但乙酸乙酯毒性较甲醇要小，因此选择乙 酸乙酯为溶剂。 苯的精确分离。 ２．２标准曲线的建立 分别量取１０ｕＬ邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、乙苯于 ［１］张［２］葛参考文献 娟．气相色谱法分析混合二甲苯［Ｊ］．河北化工， 萍，韩鸿印，张俊刚，等．吹扫捕集一气相色谱法测 １０ｍＬ容量瓶中，再从容量瓶中分别取ｌＯｐ，Ｌ邻二甲苯、间二 甲苯对二甲苯、乙苯于ｌＯｍＬ容量瓶中，用乙酸乙酯定容，配 １９９６（２：）５９—６１． 成储备液，用移液管分别量取一定量储备液配制成系列标准 溶液：邻二甲苯３Ｏ、２５、２０、１５、１０１￣／Ｌ，间二甲苯７Ｏ、６ｏ、５Ｏ、 ４０、３０ｐｃ，／Ｌ，对二甲苯３０、２５、２０、１５、ｌＯ￣ｇ／Ｌ，乙苯ｌ４、１２、１Ｏ、 定水中苯系物［Ｊ］．化学分析计量，２００５，１４（２）：３２—３３． ［３］陈斌生，陶晶，韩志宇，等．吹脱捕集一毛细管气相色 谱法测定饮用水及水源水中苯系物［Ｊ］．中国卫生检验 ８、６ｔ￣／Ｌ，在气相色谱仪上进行色谱分析，进液量为１ ，每 个组分平行测定四次，取平均值，以浓度（ｘ）对峰面积（Ｙ）绘 制标准曲线，在实验最佳色谱条件下： 邻二甲苯标准曲线Ｙ＝９６．２７５ｘ＋１８００８，Ｒ２＝０．９９６３；间 二甲苯标准曲线Ｙ＝６４．２９５＋１６８３１，Ｒ２＝０．９９１７；对二甲苯 标准曲线Ｙ＝６８．８６２ｘ＋１５７７３，Ｒ２＝０．９９６２；乙苯标准曲线ｙ ＝２７４．２７ｘ＋１５４０３，Ｉ１２＝０．９９１７。 杂志，２００９，１９（９）：２００８—２００９． ［４］车轩．气相色谱法测定水中苯系物［Ｊ］．河北省科学院 学报，２０ｏｏ，１７（３）：１６４—１６７． ［５］国青．吹扫捕集气相色谱法测定水中苯系物［Ｊ］．干旱 环境监测，２０１１，２５（２）：１１５—１１８． （本文文献格式：杨玉敏。胡洁，臧红霞．气相色谱法测定混 通过以上实验可知，使用Ａｇｉｌｅｎｔ ７８９０Ａ型气相色谱仪对 混合二甲苯组分及含量进行分析，能将混合二甲苯组分及含 合二甲苯组分［Ｊ］．山东化工，２０１４，４３（１Ｏ）：６８－７０，７２．）
