第４３卷第１２期 ２０１５年１２月 东北林业大学学报 Ｖｏ１．４３ Ｎｏ．１２ Ｄｅｃ．２０１５ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｎ０ＲＴＨＥＡＳＴ ＦＯＲＥＳＴＲＹ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ 聚（３一羟基丁酸－－Ｃ０－－４－－羟基丁酸共聚酯） 降解菌株的选育及其降解特性 ） 张虹 （大庆师范学院，大庆，１６３７１２） 郭子琦 侯春妹 李凡 陈珊 （东北师范大学） 摘要从工业污水中筛选出一株可高效降解聚（３－羟基丁酸一ｃｏ一４一羟基丁酸共聚酯）（Ｐ３／４ＨＢ）的真菌菌 株，经形态学鉴定和系统发育学分析，鉴定该菌株为烟曲霉，命名为ａ￣ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＤＳ０９０６。该菌株还能够特异性 降解高分子聚酯聚３一羟基丁酸酯、聚（３一羟基丁酸酯一ｃｏ一４一羟基戊酸共聚酯）和聚丁二酸丁二醇酯，但是不能降 解聚乳酸和聚ｓ一己内酯。菌株发酵粗酶液的最适反应温度为６０℃，在１０～５０℃之间酶的温度稳定性较好，最适 反应ｐＨ值为６．０，在ｐＨ：６．０—８．０的范围内稳定性较高。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＤＳ０９０６粗酶液降解Ｐ３／４ＨＢ的产物为羟基 丁酸单体，推测降解酶以每次剪切一个羟基丁酸单元的外切酶模式发挥降解作用。 关键词 聚（３一羟基丁酸一ｃｏ一４一羟基丁酸共聚酯）；烟曲霉；底物特异性；解聚酶；外切酶模式 分类号Ｑ９４９．３２７．１ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＤＳ０９０６ ｗｉｔｈ Ｐｏｌｙ（３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙＪｒａｔｅ一－ｃｏ一４一ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｉｔｙｒａｔｅ）（Ｐ３／４ＨＢ）Ｄｅｇｒａｄｉｎｇ Ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ／／Ｚｈａｎｇ Ｈｏｎｇ（Ｄａｑｉｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ １６３７１２，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）； Ｇｕｏ Ｚｉｑｉ，Ｉ－Ｉ，ｉｏｎ Ｃｈｕｎｍｅｉ，Ｌｉ Ｆａｎ，Ｃｈｅｎ Ｓｈａｎ（Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｎ ｏｑｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）／／Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮＪｏｒｔｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ． ２０１５，４３（１２）：６０—６４． Ａ ｆｕｎｇｕｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｏｌｙ（３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ一－ｃｏ一４一ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ）（Ｐ３／４ＨＢ）ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｓｅｗａｇｅ．ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｎａｍｅｄ ａｓ Ａｗｅｒ＃／／ｕｓ ｓｐ．Ｄ）Ｓ０９０６ ｔｈｒｏｕｇｈ ｆｕｎｇａｌ ｍｏｒｐｈｏ１． ｏｇｙ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＤＳ０９０６ ｃｏｕｌｄ ａｌｓｏ ｄｅｇｒａｄｅ ｐｏｌｙ（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕ— ｔｙｒａｔｅ）（ＰＨＢ），ｐｏｌｙ（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ－ｃｏ－ｈｙｄｒｏｘｙｖａｌｅｒａｔｅ）（ＰＨＢＶ）ａｎｄ ｐｏｌｙ（ｂｎｔｙｌｅｎｅ ｓｕｅｃｉｎａｔｅ）（ＰＢＳ）ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｐｏｌｙｌａｅｔｉｅ ａｃｉｄ（ＰＬＡ）ａｎｄ ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ（ＰＣＬ）．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｐＨ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｅｎｚｙｍｅ ｗａｓ ６０℃ａｎｄ ６．０． ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ ｆｏｒｍ １０℃ｔｏ ５０℃ａｎｄ ｐＨ ｏｆ ｆｒｏｍ ６．０ ｔｏ ８．０．Ｔｈｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｐ３／４ＨＢ ｂｙ ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｅｎｚｙｍｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｓ ３－ｈｖｄｒ０ｘｖｂｕｔｖｒａｔｅ ｍｏｎｏｍｅｒ ｏｒ ４．ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ ｉｎｓｔｅａｄ ｏｆ ｄｉｍｅｒ ｏｒ ｔｒｉｍｅｒ ｂｙ ＧＣ ａｎａｌｙｓｉｓ．ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｐｏｉｙｍｅｒａｓｅ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ａｎ ｅｘｏ—ｔｙｐｅ ａｃｔｉｏｎ ｔｈａｔ ｃｌｅａｖｅｄ ｔｈｅ ｆｉｓｔｒ ｂｏｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈａｉｎ ｅｎｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｐｏｌｙ（３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ－ｃｏ－４－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ）（Ｐ３／４ＨｉＢ）；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｍｍｉｇａｔｕｓ；Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｄ． ｉｅｉｆｔｙ；Ｄｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ；Ｅｘｏ－－ｔｙｐｅ 以石油为基础的化学合成塑料，如聚乙烯和聚 氯乙烯等，已经广泛应用到人类生活的各个领域。 能与低密度的聚乙烯（ＬＤＰＥ）相似 Ｊ。目前，对于 Ｐ３／４ＨＢ的研究多集中在其合成和改性上，对其胞外 生物降解的报道较少，但完善的生物降解性能评价及 可控降解模式的建立．对于聚酯材料的应用和产业化 这种传统的化学合成塑料难以降解，大量废弃物对 环境造成了严重的“白色污染”＿１ｊ。近年来，来源于 生物并具有生物可降解性的绿色塑料受到人们的广 泛关注，其中聚（３一羟基丁酸酯一ｃｏ一４一羟基丁酸酯） 简称Ｐ３／４ＨＢ，为新生代（第四代）聚羟基烷酸酯类 材料，被认为具有广阔的应用前景。 相对于传统的聚 一羟基丁酸酯（ＰＨＢ），Ｐ３／ ４ＨＢ有如下优点：结晶度低、熔点低、韧性好、便于 至关重要。本文对Ｐ３／４ＨＢ降解菌株进行了筛选、鉴 定，并测定了其对Ｐ３／４ＨＢ的降解特性，为进一步研 究Ｐ３／４ＨＢ的降解机理及可控转化奠定了基础。 １材料与方法 样品采集自吉林市化工厂的工业废水。 试剂：Ｐ３／４ＨＢ购自天津国韵生物材料有限公 司，分子生物学相关试剂购自Ｔａｋａｒａ生物公司，其 它生化试剂均为国产分析纯。 基本培养基：Ｐ３／４ＨＢ为０．１５ ｇ、ＭｇＳＯ ．７Ｈ，Ｏ为 ０．５ ｇ、ＮＨ４Ｃ１为１ ｇ、ＣａＣ１２．２Ｈ２Ｏ为０．００５ ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ 加工等 ｊ。而且Ｐ３／４ＨＢ的性能可以通过调节聚合 物中４ＨＢ的含量来进行调节，据报道当Ｐ３／４ＨＢ聚 合物中４ＨＢ的含量小于５％。其性能接近聚丙烯 （ＰＰ）；调节４ＨＢ含量至９％时，其性能与高密度乙 烯（ＨＤＰＥ）相近；而调节４ＨＢ含量至１２％时，其性 １）黑龙江省自然科学基金（Ｃ２０１２２７）；国家自然科学基金 （３１２７０１６４）；吉林省科技应用基础研究（２０１３０１０２０６２ＪＣ）。 第一作者简介：张虹，女，１９６４年４月生．大庆师范学院生物工 程学院，教授。Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｕａｎｌｉｎｇｍｕ１２３＠ｓｉｎａ．ｃｏｌｎ。 通信作者：陈珊，东北师范大学生命科学学院，教授。Ｅ—ｍａｉｌ： ｃｈｅｎｓ０９３＠ｎｅｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。 为４．５４ ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ为１１．９４ ｇ 。 马铃薯培养基（ＰＤＡ）：马铃薯２００ ｇ、葡萄糖２０ ｇ、琼脂１５ ｇ。马铃薯去皮，切成块煮沸３０ｍｉｎ，然后用 纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至１ ０００ ｍＬ。 察氏培养基：ＮａＮＯ 为３ ｇ、ＫＨ２ＰＯ 为１ ｇ、Ｍｇ— ＳＯ ．７Ｈ Ｏ为０．５ ｇ、ＫＣ１为０．５ ｇ、ＦｅＳＯ 为０．０５ ｇ、蔗 收稿日期：２０１５年６月２９日 责任编辑：潘华 第１２期 张虹，等：聚ｌ：３－羟基丁酸一ＣＯ一４一羟基丁酸共聚酯）降解菌株的选育及其降解特性 ６１ 糖为３０ ｇ、琼脂为１５ ｇ。 菌种的筛选：将工业废水水样５ ｍＬ接人基本培 养基中，置于３０℃，１５０ ｒ／ｍｉｎ的恒温震荡培养箱中 进行富集。７ ｄ后取上清液１００ ＩｘＬ涂布于以Ｐ３／ ４ＨＢ为唯一碳源的乳化平板上，置于培养箱中３０℃ 培养．观察菌株的生长及透明圈形成情况，选取透明 圈与菌落直径最大的菌株为目的菌株。 菌株形态学鉴定：采用点植培养法观察菌株的 菌落形态和颜色．扦片法观察菌丝、分生孢子梗、分 生孢子穗、孢子等形态特征。检索真菌鉴定手册，进 行菌种的初步鉴定 ５］。 系统发育学鉴定：ＣＴＡＢ法提取菌株的基因组 ＤＮＡ做为模板．ＩＴＳ通用引物为ＩＴＳ１：５ＬＴＣＣＧＴＡＧ． ＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ一３ 和ＩＴＳ４：５ 一ＴＣＣＴＣＣＧＣＴｒＡＴＴ— ＧＡＴＡＴＧＣ一３ ．进行ＰＣＲ反应扩增菌株基因组中保 守的ＩＴＳ片段．扩增后的目的片段送生工生物公司 测序，所得序列在ＮＣＢＩ数据库进行同源性比对后， 选取代表性菌株利用Ｍｅｇａ４．１构建系统发育树。 菌株对Ｐ３／４ＨＢ膜的降解：将Ｐ３／４ＨＢ粉末置 于１８０℃热压机上预热２ ｍｉｎ，热压约５ ｍｉｎ之后转 移到冷压机上．室温自然冷却，获得厚度为０．１ ｃｍ 的Ｐ３／４ＨＢ薄膜。将Ｐ３／４ＨＢ膜片（１．０ ｅｍｘ１．０ ｃｍＸ ０．１ ｃｍ）７０％酒精消毒并经紫外灯照射后加入到灭 菌的不含Ｐ３／４ＨＢ的基本培养基中，接入孢子悬液， ２８ ｏＣ。１５０ ｒ／ｍｉｎ振荡培养，间隔２４ ｈ取样，计算薄 膜失重率．并将薄膜喷金后进行扫描电子显微镜 （ＳＥＭ）观察。 菌株底物特异性分析：分别Ｉ以Ｐ３／４ＨＢ、聚３一羟 基丁酸酯（ＰＨＢ）、聚羟基丁酸羟基戊酸酯（ＰＨＢＶ）、 聚 一己内酯（ＰＣＬ）、聚乳酸（ＰＬＡ）、聚丁二酸丁二 醇酯（ＰＢＳ）为底物制备乳化固体平板，将分生孢子 点植到平板中央．２８℃倒置培养５ ｄ，观察菌落的直 径大小及其透明圈的形成情况。 解聚酶活力的测定：将Ｐ３ ／４ＨＢ粉末溶于氯仿 中，所得溶液与十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）混合，混合液 经超声波破碎５ ｍｉｎ，制得Ｐ３／４．ＨＢ乳化液，７５℃加 热９０ ｍｉｎ除去氯仿．得到Ｐ３／４ＨＢ悬浮液。取３ ｍＬ Ｐ３／４ＨＢ悬浮液加入酶液１ ｍＬ，反应一定时间后。于 ６５０ ｎｍ波长下测其吸收值（降低值）。一个酶活单 位定义为每分钟引起光吸收降低０．００１（Ａ６５０ ｎｍ） 单位所需的酶量ｌ６］。每个测试样品设置３个平行， 以灭活酶液做空白对照。 粗酶液的制备：配制以Ｐ３ ／４ＨＢ粉末为唯一碳 源的液体培养基５ Ｌ，分装至三角瓶中．灭菌后接入 分生孢子悬液．２８ ｃｃ １５０ ｒ／ｍｉｎ振荡培养１２０ ｈ，所 得的发酵液经纱布过滤．４℃，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心制 得粗酶液。 最适反应温度的测定：将Ｐ３／４ＨＢ乳化液分别 于ｌＯ、２０、３Ｏ、４０、５Ｏ、６０、７０、８０℃的水浴中保温１０ ｍｉｎ，然后分别加入同样经过预热的酶液，保温３０ ｍｉｎ，测定酶在不同温度下的酶活力。 温度稳定性的测定：将酶液分别置于４、１０、２０、 ３０、４０、５０、６０、７０℃下保温１ ｈ后，在酶的最适反应 温度下检测酶活力，绘制相对酶活力一温度曲线。 最适反应ｐＨ测定：将粗酶液加入到不同ｐＨ值 的３ ｍＬ Ｐ３／４ＨＢ乳化底物中（ｐＨ＝４．０～６．０为柠檬 酸盐缓冲体系，ｐＨ＝６．０～８．０为磷酸盐缓冲体系，ｐＨ＝ ８．０～９．０为Ｔｒｉ—ＨＣ１缓冲体系，ｐＨ＝９．０～１０．０为甘 氨酸一氢氧化钠缓冲体系），在酶的最适反应温度 下测定其酶活力，绘制粗酶液的最适反应ｐＨ曲线。 ｐＨ稳定性的测定：将冻干的粗酶粉在不同ｐＨ 的缓冲体系中４ ｃｃ放置２４ ｈ后，按照标准酶活测定 方法在酶的最适反应温度和ｐＨ条件下测定酶活 力，绘制ｐＨ稳定性曲线。 粗酶降解产物的测定：将发酵液装人透析袋中， 在蒸馏水中４℃过夜．以除掉酶液中的无机盐。将 透析后的酶液与Ｐ３／４ＨＢ底物按体积比１：３的比 例混合，６０℃水浴保温３０ ｍｉｎ，以加热灭活的酶液 做对照。产物离心后使用高效液相色谱四级杆串联 质谱联用仪得到质谱图谱。 ２结果与分析 ２．１ Ｐ３／４ＨＢ降解菌株的筛选 将经过富集培养的污水样品稀释涂布在Ｐ３／ ４ＨＢ乳化平板上，３０℃培养７ ｄ后．可观察到形成 明显透明圈的细菌及真菌菌落，将菌株纯化后重 新点种于乳化平板上，挑取透明圈与菌落直径比 值最大的一株真菌进行后续研究，命名为菌株 ＤＳ０９０６（图１）。 图１ 明圈 ２．２菌种鉴定 该菌株在ＰＤＡ及察氏培养基上生长良好，菌落 第１２期 张虹，等：聚（３一羟基丁酸一ＣＯ一４一羟基丁酸共聚酯）降解菌株的选育及其降解特性 ＼ 船谣莨罂 ６３ 最适反应温度及温度稳定性，结果显示粗酶的最 ２．４．２ ｐＨ对酶活力的影响 适反应温度为６０℃，在５０ ｑＣ和７０ ｃＣ时酶活力也 ∞ ∞ ∞ ∞ 加 Ｏ 测定ＰＣＬ解聚酶粗酶在不同ｐＨ条件下的酶活 相对较高．达到最高酶活力的８０％以上，当反应温 度为８０℃时，酶活力仍能达到最适反应温度下酶 力，结果如图５Ｃ所示，该酶在酸性和中性环境下具 有较高的酶活力；而在碱性条件下，酶活力较低，最 活力的７８％．但在温度４０ ｑｃ以下时，解聚酶活力 较低（图５Ａ）。 温度稳定性的试验结果显示，ＰＣＬ解聚酶粗酶 适反应ｐＨ值为６．０（柠檬酸缓冲体系）。 将等量的粗酶粉分别加入不同ｐＨ（４．０～１０．０） 的缓冲液中，４℃保温２４ ｈ后测定酶的残余活力，结 果显示．在酸性和中性体系中，酶的稳定性较高，在 在５０℃以下稳定性良好，可以保留８０％以上的酶活 力，但随着温度的升高，酶活力迅速下降，６０℃保温 １ ｈ后酶活力仅能残留３０％左右，而当温度达到７０ ＤＨ＝４．０～８．０范围内粗酶的残余活力能够达到最高 酶活力的７０％以上，当ｐＨ大于８．０时，酶的稳定性 ℃时，保温１ ｈ后酶活几乎完全丧失（图５Ｂ）。 迅速下降（图５Ｄ）。 Ｂ １Ｏ０ ＼ ８Ｏ 娌 、 螺谧４）ｆ ６０ １４０ ２Ｏ 罐 霞 ０ ０ ２０ ４０ ６０ ８０ ２０ ４０ ６０ 温度／℃ 温度／℃ ｐＨ值ｐＨＺ￣ ｌＡ．粗酶液的最适反应温度；Ｂ．粗酶液的温度稳定性曲线；ｃ．粗酶液的最适反应ｐＨ；Ｄ．粗酶液的ｐＨ稳定性曲线。 图５温度和ｐＨ对粗酶液降解Ｐ３／４ＨＢ活力的影响 ２．４．３粗酶降解Ｐ３／４ＨＢ的产：物测定 使用高效液相色谱四级杆串联质谱联用仪绘制 粗酶液降解Ｐ３／４ＨＢ产物的质谱图，结果如图６所 示．结合分子量计算结果，可以判断产物中存在羟基 １ＯＯ ８Ｏ ６０ Ａ 丁酸单体（ｐｅａｋ １０２．９），但并没有发现二聚体、三聚 体及其它寡聚体，推测该Ｐ３／４ＨＢ解聚酶是一种外 切酶，每次以剪切链端一个羟基丁酸单元的模式发 挥水解作用。 １ＯＯ Ｏ． Ｏ ８０ Ｂ －誊 ＿ ６ｏ ＊ 卅 ＿ 靛４０ ２０ ● １９４．９ Ｏ ５０ ． ２６５．２ １ｌ Ｊ ｌ５Ｏ ｌ。ｌ Ｉ．１ ２００ ２５０ 墨４ｏ ＨＢ单体．、Ｉ １０： ２０ ．。．．． ．． １００ 质核比 Ｏ ０ ５０ １００ １５０ ２００ ２５０ ３００ ３５０ ４００ ４５０ ５００ 质核比 Ａ灭活酶液降解的对照组 Ｂ粗酶液实验组 图６粗酶液降解Ｐ３／４ＨＢ产物的质谱图 ３结论与讨论本研究采用富集培养、稀释涂布等方法从工业 污水中筛选出一株可高效降解聚（３一羟基丁酸一ＣＯ一 茎 萎 器霍 丛梗孢目，丛梗孢科，单胞亚科，曲霉族，曲霉属的烟 曲霉，该菌株与Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ ｓｔｒａｉｎ Ｎ２９的 东北林业大学学报 第４３卷 ＩＴＳ序列同源性高达９９％，命名为Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ． ＤＳ０９０６。 Ｐ３／４ＨＢ解聚酶的分离纯化，以及该类降解酶与 ＰＨＢ解聚酶结构和功能的比较，从而全面的阐明 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＤＳ０９０６菌株对Ｐ３／４ＨＢ及其它 聚酯的降解特性研究表明．Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＤＳ０９０６除 高效降解聚（３一羟基丁酸一ｃｏ一４－羟基丁酸共聚酯） 外，还能够特异性降解高分子聚酯聚３一羟基丁酸 酯、聚（３一羟基丁酸酯一ｃｏ一４一羟基戊酸共聚酯）和聚 Ｐ３／４ＨＢ的降解机制等工作做好准备。 参 考 文 献 杨惠娣，翁云．胡汉杰．中国生物降解塑料开发历史、现状和发 展趋势［Ｊ］．中国塑料，２００５，１９（３）：３－１１． 宋昭峥，赵密福．可降解塑料生产技术［Ｊ］．精细石油化工进展， ２００５，６（３）：２３—２０． Ｂｒａｎｄｌ Ｈ，Ｇｒｏｓｓ Ｒ Ａ，Ｌｅｎｚ Ｒ Ｗ．Ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｈｏｔｏｔｒｐｈｉｃ ｂａｃｔｅ— 丁二酸丁二醇酯，但是不能降解聚乳酸和聚 一己内 酯。菌株发酵粗酶液的最适反应温度为６０℃。在 １Ｏ～５０ ｃｃ之间酶的温度稳定性较好，最适反应ｐＨ 值为６．０，在ｐＨ＝６．０～８．０的范围内稳定性较高。 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＤＳ０９０６粗酶液降解Ｐ３／４ＨＢ的 ［４］ ｒｉｕｍ Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｒｕｈｕｍ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｖａｒｉｏｕｓ ｐｏｌｙ（Ｂ—ｈｙｄｒｏｘｙａｌ— ｋａｎｏａｔｅｓ）：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｏｕｒｃｅ ｆｏｒ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙｓｔｅｒ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒ－ ｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｅｒｏｍｏｌｅｅｕｌｅｓ，１９８９，１１（１）：４９— ５５． Ｗａｎｇ Ｙ，Ｌｉ Ｆ，Ｗａｎｇ Ｚ Ｙ．Ｐｕｒｉｉｃａｔｉｆｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｎ ｅｘｔｒａ— ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｂｕｔｙｒａｔｅ ｄｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｆｒｏｍ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏ— 产物为羟基丁酸单体，推测降解酶以每次剪切一个 羟基丁酸单元的外切酶模式发挥降解作用：同时，这 也表明该酶为一种外切酶，但不同的单体单元（３ＨＢ ｒ｝ ＿ ；ｃｉｎａ ＤＳＷＹ０６０１［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ， ２０１２，２８（３）：４５９—４６４． 陈珊．微生物学实验指导［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２０１１． 马晶，陈珊，何艳．等．ＤＳ９７０１菌株的紫外诱变及ＰＨＢ解聚酶 高产菌株的筛选ｆ Ｊ］．东北师大学报：自然科学版，２００４，３６ （１）：８３—８７． ｒｌ 或者４ＨＢ）是否对酶的识别和催化具有影响作用还 ｊ５ ６ ７ ８ ］魏景超．真菌鉴定手册『Ｍ］．上海：上海科技出版社，１９７９． １Ｊ ９ 需要进一步的研究。 Ｗｅｎｇ Ｙ Ｘ，Ｗａｎｇ Ｘ Ｌ，Ｗａｎｇ Ｙ Ｚ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ＰＨＡｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｕｎｄｅｒ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｅｏｍｐｏｓ— 现阶段，对Ｐ３／４ＨＢ生物降解的研究主要是利 用生物堆肥或者利用ＰＨＢ解聚酶进行降解ｌ８ ］，而 关于Ｐ３／４ＨＢ降解菌株筛选的研究很少。因此。本 ｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｔｅｓｔｉｎｇ，２０１１，３０（４）：３７２—３８０． Ｚｈａｎｇ Ｊ Ｑ．Ｋａｓｕｙａ Ｋｅｎｉｃｈｉ，Ｈｉｋｉｍａ Ｔａｋａａｋｉ．ｅｔ ａ１．Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｎｉａｘｉａｌｌｙ ｃｏｌｄ ｄｒａｗｎ ｆｉｌｍｓ ｏｆ ｐｏｌｙ『（Ｒ）．３－ｈｙｄｒｏｂｕｔｙｒａｔｅ．ｃｏ一４一ｈｙｄｒｏｂａ— 文从工业废水中筛选出的高效降解Ｐ３／４ＨＢ的真菌 菌株，是Ｐ３／４ＨＢ的降解机制研究的重要补充。为 （上接５４页） 『ｌ７］ Ｃｕｍｍｉｎｓ Ｋ Ｗ．Ｓｔｒｅａｍ ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ『Ｊ］．Ｂｉｏ ｔｙｒａｔｅ］ｒ Ｊ］．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，２０１ １，９６（１２）： ２１３０－２】３８． Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７４，２４（¨）：６３１—６４１． 『ｌ８ Ｉ Ｇｕｌｌｓ Ｖ．Ｆｅｒｒｅｉｒａ Ｖ，Ｇｒａｃａ Ｍ Ａ Ｓ．Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅａｆ ｌｉｔｔｅｒ ｄｅ． ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｕｎｇｉ ａｎｄ ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ ｂｙ ｍｏｄｅｒａｔｅ 邓红兵．唐涛，等．香溪河流域河流中树叶分解速率的 ［２３］ 江明喜，比较研究［Ｊ］．应用生态学报，２００２，１３（１）：２７－３０． ［２４］ Ｄｕｄｇｅｏｎ Ｄ．Ｔｒｏｐｉｃａｌ ａｓｉａｎ ｓｔｒｅａｍｓ［Ｍ］．Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ：Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９． ｅｕｔｒｏｆ）ｈｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｓｔｒｅａｎｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｆｒｅｓｈｗａ— ｔｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，５１（９）：１６５５—１６６９． ｆ １９ Ｎｅｌｓｏｎ Ｓ Ｍ．ＩＪｅａｆ ｐａｃｋ ｂｒｅａｋｄｏｗｎ ａｎｄ ｍａｃｒｏｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｃｏｌｏｎｉ． ｚａｔｉｏｎ：Ｂｉｏａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ａ ｈｉｇｈ－ａｌｔｉｔｕｄｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｓｙｓｔｅｍ ［２５］ 颜玲，赵颖，韩翠香，等．粤北地区溪流中的树叶分解及大型底 栖动物功能摄食群［Ｊ］．应用生态学报，２００７，１８（１１）：２５７３— ２５７９． 刘曼红，王令刚，等．亚布力山涧溪流２种树叶的分解 ［２６］ 阚春梅，速率与大型底栖动物定殖关系［Ｊ］．东北林业大学学报，２０１３， ４ｌ（９）：１０３—１０６，ｌ１２． ［２７］ 杨洪学，蒙宽宏，盂祥楠，等．阿什河流域不同林分类型枯落物 持水能力研究『Ｊ１．防护林科技，２００５（５）：ｌ４—１７． ｏｎ Ｊ Ｓ．Ｅｎｅｒｇｙ ｓｔｏｒａｇｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｂａｌａｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｅｒｓ ａｎｄ ｄｅ— ［２８］ Ｏｌｓｃｏｍｐｏｓｅｒｓ ｉｎ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｅｃｏｌｏｇｙ，１９６３，４４（２）：３２２— ３３】． 『Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｌａ Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ，２０００，１１０（２）：３２１－３２９． 『２０ ｉ Ｐａｓｃｏａｌ Ｃ，Ｃａｓｓｉｏ Ｆ。Ｇｏｍｅｓ Ｐ．Ｌｅａｆ ｂｒｅａｋｄｏｗｎ ｒａｔｅｓ：ａ ｍｅａｓｕｒｅ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｑｕａｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｂｉｏｔｏｇｙ，２００１， ８６（４）：４０７—４１６． ２１ Ｉ Ｐａｓｃｏａ】Ｃ，Ｐｉｎｈｏ Ｍ．Ｃｒｓｓｉｏ Ｆ．ｅｔ ａ１．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｓｔｒｕｅｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ ｃｏｉａｄｉｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｌｅａｒ ｂｒｅａｋｄｏｗｎ：ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ａ ｐｏｌｌｕｔｅｄ ｒｉｖｅｒ［Ｊ］．Ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，４８（１１）：２０３３— ２０４３ ［２９］ Ｍｏｒｓｅ Ｊ Ｃ，Ｙａｎｇ Ｌｉａｎｇ Ｆａｎｇ，Ｔｉａｎ Ｌｉ Ｘｉｎ．Ａｑｕａｔｉｃ ｉｎｓｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｑｕａｌｉｔｙ［Ｍ］．Ｎａｎｊｉｎｇ：Ｈｅｈａｉ Ｕ－ ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９４． 『２２ ｊ Ｂｅｎｓｔｅａｄ Ｊ Ｐ．Ｍａｃｒｏｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ １ｅａｆ ｌｉｔｔｅｒ ｉｎ ａ ｔｒｏｐｉｃａｌ ｓｔｒｅａｍ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｒｏｐｉｃａ，１９９６，２８（３）：３６７—３７５．