DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制

50×TAE缓冲液 pH8.5 配 制 量： 配制方法： 1L 1. 称取Tris碱242.3g，置于烧杯中 2. 再称取EDTA固体29.3g或Na2EDTA·2H2O固体37.2g 3. 加入约700ml ddH2O，溶解完全 4. 加入57ml的HAc，充分搅拌 5. 用HAc调pH至8.5 6. 定容至1L，室温保存 配方： 2M Tris-HAc 100mM EDTA pH＝8.5

5×TBE 缓冲液 pH8.3 配 制 量： 配制方法： 1L 1. 称取Tris碱53.88g，EDTA固体2.93g或Na2EDTA·2H2O固体3.72g，H3BO3 27.5g置于烧杯中 2. 加入约700ml的ddH2O，溶解完全 3. 调pH至8.3 4. 定容至1L，室温保存 配方： 0mM Tris-H3BO3 20mM EDTA pH＝8.3

EB溴化乙锭 配 制 量： 配制方法： 100ml 1. 称取1g EB固体于专用容器中 2. 加入100ml的ddH2O，搅拌数小时至溶解完全 3. 转移至棕色瓶中，4℃避光保存 注意：EB为强致癌物质，专用容器小心操作 配方： 10mg/ml EB

1

6×上样缓冲液 Loading Buffer 配 制 量： 配制方法： 100ml 1. 用移液器吸取6ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约50ml ddH2O中 2. 再吸取5ml 1%的溴酚蓝 3. 量取36ml丙三醇 4. 用2N NaoH调pH至7.0 5. 定容至100ml，4℃保存 配方： 30mM EDTA 36%(V/V)丙三醇 0.05％(W/V)溴酚蓝 pH＝7.0

10×上样缓冲液 Loading Buffer 配 制 量： 配制方法： 100ml 1. 用移液器吸取2ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约40ml ddH2O中 2. 再称取250mg的溴酚蓝 3. 量取50ml丙三醇 4. 定容至100ml，4℃保存 配方： 10mM EDTA 50%(V/V) 丙三醇 0.25%(W/V) 溴酚蓝

1%(W/V)溴酚蓝 配 制 量： 配制方法： 100ml 1. 2. 3. 4. 5. 称取1g溴酚蓝置于烧杯中 加入约80ml的ddH2O，溶解完全 定容至100ml 转移至棕色容器中 避光，4℃保存 配方： 1%(W/V)溴酚蓝

10%(W/V) 过硫酸铵 配 制 量： 配制方法： 50ml 1. 2. 3. 4. 称取5g过硫酸铵置于烧杯中 加入ddH2O定容至50ml 分装于1.5ml离心管中 -20℃保存 配方： 10%(W/V) AP

2

30%(W/V) 丙烯酰胺储液 (DNA用) 配方： 配 制 量： 配制方法： 1L 1. 称取丙烯酰胺固体290g置于专用的烧杯中 2. 再称取10g甲叉双丙烯酰胺 3. 加入约500ml ddH2O，充分搅拌，溶解完全后定容至1L 4. 用0.45um滤纸过滤除杂 5. 转移棕色瓶中，4℃避光保存 注意：丙烯酰胺有毒，需小心操作，专用容器配制 29.0%(W/V) Acr 1.0%(W/V) Bis

1. 0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml蒸馏水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na2·2H2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH调解pH值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。最后定容至1L。高压灭

菌。

2. 5 X TBE:Tris碱g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L。高压灭菌。（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。1 X TBE:5 X TBE缓冲液与蒸馏水按 1: 4稀释就OK。

配置方法方法1：1%的溴酚蓝

将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。

方法2：0.05%的溴酚蓝

配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：

0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围pH2.8～4.6

3

（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。

方法3：1％溴酚蓝

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。 相关词条

甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠

4