安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ Ａ ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２０１Ｉ，１７（０９） 不同成分培养基影响致病疫霉生长的比较研究 李海鹰蒋继志 孙海丽 ０７１００２） （河北大学生命科学学院，河北保定摘要：为获得经济有效且简便易行的黑麦培养基的替代培养基，通过考查菌落直径、疏密程度及产孢量就以黑麦、 小麦和面粉等为主要材料配制的培养基对致病疫霉生长的影响进行了评价。结果表明，在小麦酵母培养基和面粉酵 母培养基上致病疫霉菌落直径大（８１ｍｍ）、菌层厚、产孢量大（４．４×１０ ／ｍＬ），与黑麦与其它成分组成的复合培养基相 比，达到显著性差异。小麦、面粉来源广、培养基制备简便，表明这２种培养基最有潜力作为黑麦培养基的替代培养 基来使用。 关键词：致病疫霉；培养基成分；纯化培养 中图分类号￥４３５．１２ 文献标识码Ａ 文章编号１００７—７７３１（２０１１）０９—２３—０２ 致病疫霉在自然条件下主要侵染马铃薯和番茄，引起 的马铃薯晚疫病已成为国际第一大作物病害…，但由于该 病菌寄生水平很高，在普通培养基上生长缓慢且易被杂菌 污染，加之生长过程中对氮源、碳源、维生素、辅助生长素 同培养基平板上培养致病疫霉（２０￣Ｃ、黑暗），至第８ｄ时采 用十字交叉法测量菌落直径，用无菌刀片切开菌落断面评 估菌层厚薄，用无菌水冲洗菌落在显微镜下统计产孢量。 每种培养基处理重复３～５次，实验重复３次。并利用 ＳＰＳＳ数据处理系统软件对其进行方差分析比较不同培养 基对致病疫霉生长的影响。 的需求较为特殊，使得对该病菌的分离、培养、纯化和保存 等环节难以高效率地进行。目前国际上主要利用Ｖ８汁、 利马豆以及黑麦等制作的培养基或新鲜薯片等方法来培 养和繁殖该病菌，国内则主要利用黑麦培养基。然而，购 买适合的黑麦品种比较困难，且价格昂贵。探讨利用燕 麦 ］、大豆和玉米 、其它豆类 等为主要成分培养致病 疫霉已有报道，但利用普通小麦、面粉等作为主要培养基 成分培养致病疫霉还未见报道，本实验就几种不同成分的 培养基对致病疫霉生长的影响进行了初步研究，现将结果 简述如下。 ２结果与分析 ２．１不同黑麦复合培养基对致病疫霉生长的影响在黑 麦、面粉培养基或黑麦加面粉不同比例、或黑麦与大豆不 同比例的培养基上（表１），致病疫霉的生长最好，菌层最 厚，平均菌落直径达到８４ｍｍ以上，产孢量也最大，与其它 黑麦复合培养基上的生长有显著差异，其次是黑麦与胡萝 １－或黑麦与玉米不同比例的复合培养基，菌落直径可达到 ７７～７９ｍｍ，而黑麦与番茄复合培养基的菌落直径略低 （５３．３３～７６ｍｍ），但均比以大豆、胡萝ｂ、玉米培养基为对 照的生长要好，尤其是在番茄培养基上生长最差，菌落直 径均仅８ｍｍ。表明面粉、大豆、胡萝卜或玉米可在一定程 度上替代黑麦的用量。 表１ 致病疫霉在黑麦复合培养基上的生长状况 １材料与方法 １．１供试菌种、植物材料及试剂 致病疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏ— ｍ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ Ｈ２０３）为本实验室保存菌株；胡萝卜、马铃薯、 番茄、小麦、面粉、玉米面和大豆购自超市，黑麦（本实验室 委托农户种植于邯郸市馆陶县），马铃薯叶片（本实验室 种植）；蔗糖、琼脂条、酵母提取物、可溶性淀粉、葡萄糖、蛋 白胨、青霉素、链霉素、制霉菌素等购自保定时运达试剂经 销公司，灰黄霉素购自保定古城医药公司。 １．２培养基及其制作黑麦培养基（ＲＡ）、ＰＤＡ（马铃薯 蔗糖培养基）、胡萝卜培养基、番茄培养基、玉米培养基 （ＭＳＡ）、大豆培养基、番茄汁培养基、Ｖ８汁培养基、小麦培 养基、面粉培养基等的制备参考李慧霞 和毕朝位 等的 方法。将制备好的培养基，按照不同比例混合、或在其中 加入一定比例的其它成分组成复合培养基。 １．３对致病疫霉生长的观察与测定按照常规方法在不 ２．２小麦、面粉复合培养基对致病疫霉生长影响 在小 麦或面粉培养基中加入其它成分组成的复合培养基对致 基金项目：河北省自然科学基金项目（Ｃ２０１１２０１００３）。 作者简介：李海鹰（１９８３一），女，河北张家口人，在读硕士生，研究方向：生物化学与分子生物学。 通讯作者 收稿日期：２０１１—０４—０６ 安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２０１１，１７（０９） 病疫霉生长的影响见表２，在小麦或面粉培养基（１００ｍＬ） 中加入０．２ｇ酵母提取物后，致病疫霉生长最好，菌层厚， 菌落直径大（８４．６７ｍｍ），产孢量也大；其次面粉或小麦单 独培养基，但与前两者无显著差异；小麦或面粉培养基中 加入可溶性淀粉、或小麦／面粉与大豆、胡萝ｂ以不同比例 配合后，对致病疫霉的生长影响不大，而小麦或面粉培养 基中加入番茄汁的效果最差，菌落直径不到３５ｒａｍ。 表２致病疫霉在小麦、面粉复合培养基上的生长状况 培养基组成 菌层菌落直径（ｍｍ）产孢量（１０ ／ｍＬ） 求高，尤其是生长缓慢易被杂菌污染，不易用常规培养基 培养和纯化，其中最常用的是黑麦培养基，但黑麦产量较 低（平均产量２３０ｋｇ／６６７ｍ ）、价格昂贵。燕麦与黑麦亲缘 关系较近、营养成分相似，李惠霞等…比较了白云豆、ｖ８、 燕麦、黑麦、胡萝ｂ等７种培养基之后，认为燕麦培养基培 养致病疫霉的效果仅次于黑麦培养基，可以作为替代培养 基，但燕麦产量更低（平均产量７５ｋｇ／６６７ｍ ）；毕朝位等 等研究了黑麦、黑麦加不同成分（番茄汁、蔗糖、甾醇）、Ｖ８ 汁、利马豆＋Ｖ８汁、大豆、玉米等１１种培养基后，认为最 适培养基是黑麦加蔗糖培养基（ＲＳＡ）；姚裕琪等 比较了 利马豆、日本菜豆、８０３菜豆、白粘豆、山西芸豆、北京小黑 豆和“紫花白”、“弗乌瑞它”两品种的鲜薯汁后，认为１３本 菜豆培养基可以用来代替利马豆繁殖晚疫病菌；金光辉 ２．３ ＰＤＡ复合培养基对致病疫霉生长的影响 在ＰＤＡ 等 报道，致病疫霉在黑麦与胡萝卜的比例为１：１的培养 培养基中加入不同成分组成复合培养基对致病疫霉生长 基上，菌落生长速度最快、产孢量最大，培养效果最好，可 有明显的影响（表３），几种成分的影响程度强弱依次为： 以利用这种培养基来培养马铃薯晚疫病菌，减少黑麦的用 黑麦、面粉、胡萝卜和番茄。其中在ＰＤＡ与黑麦以不同比 量。本实验研究表明，黑麦和玉米比例３：１的复合培养 例的培养基上，致病疫霉的菌层厚、菌落直径在７０．６７～ 基、黑麦Ｉ玉米＝１：．１混合培养基、黑麦和小麦／面粉的混 ７５ｍｍ，产孢量也最大；在ＰＤＡ与面粉不同比例的培养基 合培养基、小麦培养基、面粉培养基、黑麦与胡萝ｂ的混合 上次之，而在ＰＤＡ与番茄汁不同比例的培养基上最差，菌 培养基等均可作为黑麦培养基的替代培养基，尤其是在小 层稀薄、菌落直径不到１５ｍｍ。 麦酵母培养基和面粉酵母培养基上，致病疫霉菌落菌层厚 表３ 致病疫霉在ＰＤＡ复合培养基上的生长状况 且菌丝延伸快，且材料来源广泛、制备过程简便，最适于替 代黑麦培养基。 参考文献 ［１］宋伯符，谢开云．ＣＩＰ的全球晚疫病防治倡议与我国的参与 ［Ｊ］．马铃薯杂志，１９９７，１１（１）：５１—５５． ［２］李惠霞，刘永刚，王蒂，等．马铃薯晚疫病菌培养条件的研究 ［Ｊ］．中国马铃薯，２００７，２１（４）：２０３—２０５． ［３］毕朝位，黎艳平，罗国全．致病疫霉的分离与培养方法［Ｊ］．中国 农学通报，２００５，２１（１ｏ）：３０６—３０８． ［４］姚裕琪，梁德霖，孔繁春．适宜马铃薯晚疫病菌生长的豆类培养 基筛选［Ｊ］．华北农学报，１９９８，１３（３）：８８—９０． ３讨论 ［５］金光辉，白雅梅，孙秀梅，等．适合马铃薯晚疫病菌生长的培养 在研究致病疫霉的生理小种、致病型、交配型、生物学 基改良试验［Ｊ］．中国马铃薯，２００７，２１（６）：３３１—３３３． 特性、药剂筛选、抗药性测定、抗病育种等方面均需要生长 （责编：施婷婷） 良好、且产孢量大的纯化菌种，但因其寄生性强、对环境要 ＧＢ／Ｔ ７７１３—１９８７责任者姓名 ＧＢ／Ｔ ７７１３—１９８７题名题名是以最恰当、最简明的词语反映报告、论文中最重要的 特定内容的逻辑组合，所用每一词语必须考虑到有助于选定关键词和编制题录、索引等二次文献可以提供检索的特 定实用信息。题名应该避免使用不常见的缩略词、首字母缩写字、字符、代号和公式等，一般不宜超过２０字。报告、 论文用作国际交流，应有外文（多用英文）题名。 ＧＢ／Ｔ ７７１３－－１９８７关键词 关键词是为了文献标引工作从报告、论文中选取出来用以表示全文主题内容信息款目 的单词或术语。每篇报告、论文选取３一Ｓ个词作为关键词，以显著的字符另起一行，排在摘要的左下方。如有可 能，尽量用《汉语主题词表》等词表提供的规范词。为了国际交流，应标注与中文对应的英文关键词。目次页长篇报 告、论文可以有目次页，短文无需目次页。目次页由报告、论文的篇、章、条、附录、题录等的序号、名称和页码组成， 另页排在序之后。
