黑腹果蝇Schneider_2细胞表达的HBsAg颗粒的纯化和特性鉴定

低。

　　攻击试验结果,第21天,MBDIIP免疫组保护率为100%;SC组为92.3%,PO组为76.75%。CCDIIP免疫组,保护率为100%;SC组为90.0%;PO组为70.0%。至第81天,MBDI和CCDIPO组的保护率分别降至60%和40%,而IP组的保护率下降并不明显。

　　本研究首次证明,小鼠口服活JEV后可迅速产生保护性免疫应答,从而为今后口服免疫JEV显示了良好的前景。(吕文利摘　张　薇校)

085　纯化的甲型肝炎灭活疫苗的纯度评价[英]󰃗HennesseyJrJP…∥Vaccine.21999,17(22).22830～2835　　在培养基灌流生物反应器中用MRC25细胞培养甲型肝炎病毒(HAV),然后用层析和沉淀法进行病毒纯化,最后,用甲醛灭活病毒并将其吸附于氢氧化铝佐剂上,制成HAV疫苗(VAQTATM)。

　　经十二烷基硫酸钠2聚丙烯酰胺凝胶电泳后,用考马斯亮蓝或银染色及光密度测定法分析纯化的HAV,发现95%以上的蛋白是病毒核壳蛋白,形成与VP0、VP1、VP2和VP3相对应的4条带,未发现其他杂带。用抗MRC25抗体进行的蛋白印迹法也未测到来源于宿主细胞的成分。高效分子筛层析、免疫印迹等方法均未检测出纯化过程中的残留物。用高pH阴离子交换层析2脉冲电流检测法(HPAEC2PAD)分析碳水化合物的组成,证实HAV疫苗含有正常的、低水平的源于HAV基因组的核糖和可能来源于上游层析步骤的葡萄糖。此外,在1Λg蛋白中,用杂交法测出DNA残余量小于0.08ng,用脂肪酸甲酯气相色谱法测出脂肪酸含量小于80ng。　　基于上述实验结果和已发表的文献,可以确证VAQTATM生产过程中HAV的纯度已达到全病毒疫苗生产中的最高纯度标准,以前只在重组蛋白治疗制品中达到过该纯度

《国外医学》预防、诊断、治疗用生物制品分册(>95%)。

　　对该产品高纯度方面的严格要求,有利于降低该产品临床开发过程中由于产品不纯带来的不利影响,同时有利于该产品与其他疫苗产品联合使用。

(匡祥晶摘　李卫东　王　炯校)086　黑腹果蝇Schneider-2细胞表达的

HBsAg颗粒的纯化和特性鉴定[英]󰃗DemlL…∥JVirolMethods.21999,79(2).2205～217

　　用金属硫因启动子稳定转染的黑腹果蝇Schneider22(DS22)细胞系KO823能分泌

作者采用不含双价铁离子的HBsAg小蛋白。

无血清SF900培养基培养KO823细胞,次日加入硫酸铜诱导表达,8～12天后取培养细胞裂解液及上清进行分析。

　　选用人肝细胞瘤细胞系PLC󰃗5为PRF󰃗阳性对照,无硫酸铜诱导的和非转染的KO823细胞为阴性对照。培养细胞裂解液经十二烷基硫酸钠2聚丙稀酰胺凝胶电泳分离后采用蛋白印迹法检测HBsAg,结果显示

5均大量表达分子量为KO823及PLC󰃗PRF󰃗

25kDa的多肽,与非糖基化HBsAg小蛋白

5细胞不同,p25分子量相等。与PLC󰃗PRF󰃗

在不同KO823细胞不表达糖基化蛋白gp27。的培养时点对KO823细胞上清检测显示,分

泌25kDaHBsAg量最高可达7Λg󰃗ml,而

5细胞的分泌量最高为0.7Λg󰃗PLC󰃗PRF󰃗

ml,提示KO823细胞能高效分泌HBsAg。培养上清经氯化铯密度梯度离心后发现,KO823及PLC󰃗5细胞的HBsAg均在密度PRF󰃗

3为1.17～1.21g󰃗cm处显示条带,说明KO823细胞分泌的p25蛋白多肽能形成22nm的脂蛋白颗粒。

　　作者先后对培养上清进行了蛋白沉淀、

等密度KBr离心及蔗糖密度梯度离心,得到纯度大于95%的HBsAg颗粒。为评价此抗原的免疫原性,作者用提纯的抗原对BALB󰃗

“裸”抗原组和加c小鼠进行免疫。接种组为

2000年　第23卷　第3期—133—

触过乙型肝炎病毒,这次免疫应答是加强应答。免前抗体阳性者,其抗体滴度在接种后没有升高。

　　作者认为,接种这种极低剂量的DNA疫苗,不能引起初次免疫应答,但可激发经蛋白质疫苗免疫而呈低抗体水平(<10mIU󰃗ml)或者抗体滴度下降的个体的免疫应答。

(徐其武摘　李卫东　王　炯校)

088　慢性乙型肝炎的特异性疫苗治疗:诱导

铝佐剂的抗原组,以酵母源性HBsAg为对照,抗原接种量均为5Λg。5周后接种组及对照组小鼠血清中均检测到高滴度抗2HBs,加铝佐剂组的抗体滴度为“裸”抗原组的20倍。接种组抗体滴度略低于对照组,但两组间无明显差别。接种组及对照组中的“裸”抗原组均产生细胞毒性T细胞应答。

　　由此,作者认为,稳定转染的DS22细胞可为乙型肝炎的研究、检测及疫苗开发提供有用的替代抗原。

(付海军摘　姜庆五校)087　基因注射HBsAgDNA疫苗的󰂪期

安全性和免疫应答研究[英]󰃗TacketCO…∥Vaccine.21999,17(22).22826～2829

　　作者将编码adw亚型乙型肝炎病毒完整S蛋白226个氨基酸(不包括前S1、前S2区)的DNA质粒表达载体pWRG7128,经Accell基因接种到志愿者的上臂皮肤上皮细胞内,然后对该DNA疫苗的安全性和免疫原性进行了研究。

　　共对6名血清阴性和1名血清阳性的健康成人志愿者进行了2次乙型肝炎DNA疫苗接种和3次重组乙型肝炎疫苗接种。在0天,分别以250psi(2人)、400psi(2人)和500psi(3人)3种压强接种0.25ΛgDNA疫苗。接种后连续观察14天。在56天,对其中5名血清阴性者以同样方法进行第2次

140和280天,又对DNA疫苗接种。在112、

其中4名血清阴性者接种三次重组疫苗。　　结果表明,在所有压强下,疫苗接种后几分钟内,可在注射部位观察到急性皮肤反应,包括轻微疼痛、红斑和色素沉着过多。7名被试者中有5名在112天前抗2HBs一直阴性(<3mI112天后,其中1名因故退U󰃗ml)。出,另4名在3次重组疫苗接种后都出现了强抗体应答。另1名血清阴性者在接种1次DNA疫苗后抗2HBs水平升高,并一直维持到最后检测时间421天。经分析她可能已接

包膜抗原特异性T细胞增殖应答[英]󰃗CouillinI…∥JInfectDis.21999,180(1).215～26

　　约半数慢性活动性乙型肝炎患者经标准的抗乙型肝炎病毒(HBV)疫苗特异治疗,可以有效降低HBV复制及消除对HBsAg颗粒的免疫耐受。为进一步证实疫苗治疗的效果,作者进行了一项多中心对照研究。

　　将40例慢性活动性乙型肝炎患者随机分成三组。17例接种GenHevacB疫苗〔来源于中国仓鼠卵巢细胞(CHO),含HBsAg,包括中和小分子HBV包膜蛋白,ayw亚型〕,10例接种Recombivax疫苗(来源于酵母细胞,含HBsAg,只包括小分子HBV包膜蛋白,adw亚型),13例为对照组。所有患者先每隔1个月注射1次,共3次,每次0.5ml含20ΛgHBsAg。然后每隔3个月加强免疫1次

)共3次,12个月后用5MUΧ干扰素(IFN2Χ

皮下注射(3次󰃗周),共6个月。疫苗接种者

在24个月加强1针。在接种前后不同时间取血分离外周血单个核细胞(PBMC)及淋巴细胞亚群,在有或无HBsAg或前S2合成肽存在时培养3天,测PBMC增殖应答。用ELISA测抗前S2抗体。用液相DNA2DNA杂交法测血清HBVDNA。用ELISA试剂盒测定细胞因子。

　　结果显示,GenHevacB疫苗组中5例有T细胞增殖应答,Recombivax疫苗组有2例,对照组则无。IFN2Χ治疗对增殖应答无明显影响。GenHevacB疫苗组5例有应答者