受体牛营养对黄体的影响及黄体等级对冻胚移植受胎率影响的试验研究

Ｖｏ１．３６．Ｎｏ４　研究报告　５　受体牛营养对黄体的影响及黄体等级对　冻胚移植受胎率影响的试验研究　周顺成’，马志远　，尹世东　（１．甘肃省武威市畜牧兽医技术服务中心，甘肃武威７３３０００；　２．甘肃省家畜繁育中心）　摘要：为了探讨受体牛黄体形成的影响因素及黄体质量对胚胎移植受胎率的影响，２００４ｍ２００５年　利用冷冻胚胎移植受体的受胎结果与受体牛黄体等级之间的关系进行分析。结果表明，营养是影响　受体牛黄体等级的主要因素，饲喂全价饲料和单一饲料的黄体合格率为６１．２％、３５．４％，差异极显著　（Ｐ＜０．０１）。Ａ、Ｂ级黄体受体移植受胎率为７１．７％、６３．９％，二者之间差异不显著（Ｐ＞Ｏ，０５）。　关键词：营养；黄体等级；胚胎移植；受胎率　中国图书分类号：ｓ　８２３．３　６文献标识码：　文章编号：ｌ０ｏ６—７９９Ｘ（２００６）Ｏ４—０ｏ０５－－０３　胚胎移植（ＥＴ）作为一项生物工程的核　领先。我国在１９７８年，由广东协作组应用手　心内容，被称为继人工授精技术后动物繁殖　术法成功进行了首次奶牛的胚胎移植，此后　技术的第二次，尤其以牛胚胎移植技术　胚胎移植技术发展很快，应用非手术进行生　产冻胚和冷冻胚胎移植，取得了满意的效果。　收稿日期：２０ｏ６—０２—１８　但是，如何提高受胎牛的黄体合格率和胚胎　殊仪器和特种试剂，成本又较低，是基层手工　一肟法（Ｙ）有良好的相关性。其对尿素高、　操作实验室测定血清尿素的首选方法。　中、低值的标准液测定的平均批内和批间ＣＶ　３小结与讨论　值分别为０．１８％、０．５９％、０．７２％和０．４６％、　根据上述结果分析，验证了ＮａＯＨ滴定　０．７４％、１．１０％、２．５６％。鉴于以上特点氢氧　法操作简便、专一性好、结果准确，不受溶血　化钠滴定法测定血清尿素受到越来越多的　标本的干扰，避免了煮沸、冷却这一烦琐的过　欢迎。　程，而且该法具有不需要特殊仪器和特种试　剂、成本又很低等优点，是测定血清尿素首选　主要参考文献　的简便易行的方法。适合无自动或半自动生　［１］南京农业大学．家畜生理学（第三版）［Ｍ］．北京：　化分析仪的中小型基层实验室推广应用。二　中国农业出版社，１９９６．１４．　乙酰一肟法是常规血清尿素测定的方法，需　［２］周祖寅，蒋兴亮．脲酶电导电极法测定血清尿素　在强酸的环境下测定且费时费电，虽然操作　方法学探讨［Ｊ］．川北医学院学报，２ＯＯ２．１７．２７９—２８０．　快速，但因测定过程需煮沸显色，容易受煮沸　［３］魏旭东．三种血清尿索测定方法的比较［Ｊ］．重庆　医学。１９９７，２６（４），２４６—２４７．　时间和煮沸时液体蒸发量的影响而引起结果　［４］杜忠斌．用ＮａＯＨ滴定法测定血清尿索［Ｊ］．上海　误差。ＮａＯＨ滴定法线性范围宽，与二乙酰　医学检验杂志。１９９５，ｌｏ（２），１０６．　维普资讯 http://www.cqvip.com

６　甘肃畜牧兽医　２００６年４（总１８９）期　移植后受体牛受胎率的高低。一直是技术人　在１．５　ｃｍ以上。质地软硬适中，触模感觉如　员关注的焦点。影响胚胎移植受胎率高低的　猪肝，与卵巢衔接好，有排卵点；Ｂ级为黄体　因素很多，如受体因素、胚胎因素及技术人员　直径在１—１．５　ｃｍ之间，质地稍软或稍硬，与　的技术水平和经验等等。笔者主要是通过探　卵巢连接痕迹隐性，黄体与排卵点∥明显，卵　讨影响黄体好坏的因素对胚胎移植后受体牛　巢基础薄弱；Ｃ级为黄体过小，与卵巢连接痕　受胎率的影响，为今后胚胎移植技术的推广　迹明显，有小卵泡或卵巢基础过差。Ｃ级不　提高牛移植受胎率提供参考。　能作为黄体移植，视为废弃，Ａ、Ｂ级分别进行　１材料与方法　胚胎移植。　１．１冷冻胚胎的来源　１．５胚胎移植　冷冻荷斯坦胚胎来源于金牛生物股　根据发情稳定时间，以发情当天为０天，　份有限公司，其母本为澳大利亚进口荷斯坦，　第６—８天实施胚胎移植，先作好受体牛消毒　采用乙二醇为冷冻液，通过液氮容器运回保　工作；再将装有胚胎的冷冻细管从液氮当中　存，根据移植需要运达移植地点用于移植。　取出，然后投入３３—３５℃的温水ｒ　１０—１５　ｓ　１．２受体牛选择　左右（乙二醇冷冻胚胎一步法解冻），取出擦　一般选择符合以下条件的牛作为受体：　干。用７０％酒精棉擦拭细管，然后轻轻向棉　①年龄在２　８岁之间，经产牛分娩后９０　ｄ以　塞段甩几下使冷冻液与保存液混合剪去细管　上，恢复较好、发育正常、体格较大。②拥有　封Ｉ：１端，装入移植（ＦＨＫ，日本）外装专用硬　正常的发情周期、无繁殖疾病，经检疫无传染　外套及无菌软外套最后用非手术法将胚胎植　病、无流产史、健康、膘情六成以上。③易于　入有黄体一侧的子宫角的上１１３—１１２处，５—　饲养、适应性强。④产犊性能好，哺乳能力良　８　ｍｉｎ完成。　好，乳量多。⑤人工受精超过两次不孕的牛　１．６妊娠检查及妊娠母牛的饲养管理　不能选用。　　．认真做好胚胎移植记录，在６０ｄ后用直　１．３受体牛的同期发情处理与发情观察　检法进行妊检，经直检确诊妊娠的受体母牛，　同期处理一般采用ＰＧ　（氯前列烯醇；　分群饲养管理，供给充足的饲料以保证满足　上海）２次注射法进行。即根据牛体格大小　胎儿和母牛的营养需要。防止顶撞、滑倒等，　间隔１１　ｄ　２次肌肉注射，每次０．４—０．５　ｌＩＩｇ，　预防流产；保持舍内和牛体的清洁卫生。　第二次注射４８ｈ后观察发情。对同期处理　１．７结果统计分析　发情牛群和自然发情牛群每天６：００—２２：００　以受体牛黄体合格率和受胎率为技术指　进行不少于ｌ０次的发情观察，每次至少　标，用生物统计学方法进行分析，得出研究　１５ｍｉｎ以上，以稳定站立接受其他牛的爬跨　结果。　为发情标准，并准确记录开始稳定接受爬跨　２结果统计　时间和基本结束时间（以小时为单位记录）。　２．１饲喂全价饲料和单纯性饲料形成黄体　Ｊ．４子宫、卵巢的检查及黄体等级的判定　合格率的结果　用直肠检查法依次检查子宫颈、左右两　以黄牛为受体，通过对饲喂全价饲料的　侧子宫角、卵巢的发育情况，对符合条件的受　牛场和饲喂单纯性饲料的农户饲养的黄牛做　体牛同时要检查卵巢的黄体，根据黄体大小、　同期发情处理，分别为６０头和６５头，黄体合　质地软硬、卵巢基础和有无排卵点分为Ａ、Ｂ、　格为３７头和２３头，形成黄体合格率为　ｃ三级。Ａ级为正常，卵巢基础好，黄体直径　６１．７％和３５．４％，二者之间差异极显著（Ｐ＜　维普资讯 http://www.cqvip.com

Ｖｏ１．３６．Ｎｏ４　研究报告　７　小尾寒羊羔羊育肥试验　连　强　（甘肃省定西市安定区畜牧局，甘肃定西　７４３０００）　中国图书分类号：Ｓ　８２６．６文献标识码：Ａ文章编号：１００　＿７９９Ｘ【２０ｏ６）ｏ４—０００ｒ７—０２　小尾寒羊是我国优良地方绵羊品种，具　快、繁殖率高和肉裘品质好，主要缺点是产肉　有多种稳定遗传性状的优秀基因，数量性状　性能较低，不善于爬山游走，不适应高寒丘陵　和质量性状突出。主要优点是：体格大、生长　山区大群放牧饲养。本试验利用小尾寒羊生　０．０１）。　柔软、有弹性且卵巢表面无滤泡的受胎率高；　２．２不同等级黄体的移植后受胎率结果　也有人认为黄体体积大一些、质地硬一些、卵　以黄牛为受体，Ａ、Ｂ级黄体受体移植头　巢表面有滤泡的也可以移植；我们以黄牛为　数分别为５７头和６ｌ头，６０ｄ受胎头数分别　受体，Ａ、Ｂ级黄体受胎率分别为７１．７％、　为４ｌ头和３９头，受胎率分别为７１．７％、　６３．９％，二者之间差异不显著（Ｐ＞０．０５），这　６３．９％，二者之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。　与以前的一些报道相一致，在实际工作中关　３分析与讨论　于黄体的判定，笔者认为有以下几方面的问　３．１　营养因素对黄体合格率的影响　题：①黄体大小相对而言，不同品种、个体之　能量负平衡与产后第一次排卵的时间存　间会有差异，内含、外露的黄体很难掌握其大　在着相关，是否供给全价饲料和单一饲料，对　小。②黄体大小因个人手感不同有差异，软　黄体的形成差异很明显；饲喂全价饲料和单　硬、质地、形状也因人的手感而异，Ａ、Ｂ级黄　一饲料黄体合格率为６１．７％和３５．４％，二者　体没有明显的界限。③技术人员的直检经验　之间差异极显著（Ｐ＜０．０１），主要是饲喂全　也很重要，在受体合格和保证胚胎质量的前　价饲料除了营养的平衡外，还添加了ＶＡ、　提下，经验就成了主要因素。　ＶＤ、ＶＥ，增强免疫力，促进生殖系统的发育。　３．３关于受胎率的其他影响因素　这一点在农户移植时使用ＶＡ、ＶＤ、ＶＥ添加　除了上述原因，胚胎早期死亡是影响胚　剂后，黄体合格率是比较明显的。　胎移植受胎率的一个因素：①内因：包括母体　３．２受体牛黄体等级对胚胎移植受胎率的　遗传因素异常，胚胎自身的生殖激素和识别　影响　信号空白的失调，由于亲缘关系受到母体免　受体牛黄体等级对胚胎移植受胎率影响　疫排斥，母体免疫识别失败使异源胚胎死亡。　的报道很多，结果各抒己见。有人认为黄体　②外因：包括母体营养不良和激素失调，尤其　的体积越大，受胎率越高；也有人认为黄体有　是ＶＡ、ＶＥ的缺乏，医疗上用药不当或过量、　弹性、柔软的受胎率高。关于黄体的大小和　移植前后注射疫苗及热应激导致的胚胎营养　弹性与受胎率的关系，国内外专家的观点也　不足，都是影响胚胎移植受胎率的因素。　不尽一致。有人认为黄体体积大一些、质地