２０１０，４４（１０）：３７￣４１／陈文庆，等 中国兽药杂志 悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的比较分析 陈文庆，王建超，刘华杰，高飞，张韧 （北京清大天一科技有限公司，北京１０２２００） ［收稿日期］２０１０—０８一Ｏｌ【文献标识码］Ａ［文章编号］１００２—１２８０（２０１０）１０—００３７—０５［中图分类号］ＴＱ４６０．６ ［摘要］ 采用反应器全悬浮培养ＢＨＫ２１细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Ｖｅｒｏ细胞生产 狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析，比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产 效益。分析显示，与转瓶培养工艺相比，反应器悬浮培养工艺获得的细胞密度、病毒效价、产品的产 量和质量明显提高，生产时的能耗和劳动力需求明显降低。结果表明悬浮培养工艺的生产效益明显 高于转瓶培养工艺，适宜于国内生物制品工业化生产的升级换代。 ［关键词】 细胞培养；生物反应器；悬浮培养；微载体 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓ ｗｉｔｈ Ｉ ｌｌｅｒ Ｂｏｔｔｌｅ ＣＨＥＮ Ｗｅｎ—ｑｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｊｉａｎ—ｃｈａｏ，ＬＩＵ Ｈｕａ—ｊｉｅ，ＧＡＯ Ｆｅｉ，ＺＨＡＮＧ Ｒｅｎ （Ｂｅｌｉｔｎｇ Ｓｋｙｗｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２００；Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎ ｒｏｌｌｅｒ ｂｏｔｔｌｅｓ，ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｅｓ ｗｅｒｅ ｄｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｏｆ ｆｏｏｔ ａｎｄ ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ＢＨＫ２１ ｃｅｌｌｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｒｏｌｌｅｒ ｂｏｔｔｌｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ ｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｖｅｒｏ ｃｅｌｌｓ ｇｒｏｗｎ ｏｎ ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒｓ ａｎｄ ｒｏｌｌｅｒ ｂｏｔｔｌｅ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗｉｔｈ ｒｏｌｌｅｒ ｂｏｔｔｌｅ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｄｅｎｓｉｔｙ，ｑｕａｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ ａｒｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｎｅｒｇｙ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｗｏｒｋｅｒｓ ａｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｂｅｎｅｆｉｔｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎ ｒｏｌｌｅｒ ｂｏｔｔｌｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ；ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒｓ 细胞悬浮培养技术是指细胞在生物反应器中自 养工艺的经济效益等进行了比较和分析。 由悬浮于培养液内生长增殖的一种培养方法。根据 细胞是否贴壁，又分为全悬浮细胞培养和贴壁细胞 １全悬浮培养口蹄疫病毒与转瓶培养案例对比 高效、安全的病毒性疫苗是防止口蹄疫情发生 的最有效方法。ＢＨＫ２１细胞是繁殖ＦＭＤＶ的理想宿 主，早在１９６２年Ｃａｐｓｔｉｃｋ ＰＢ等就实现ＦＭＤＶ的悬浮 微载体培养。国际上该项技术发展较快，已趋向成 熟，是疫苗、抗体等生物制品生产的普遍生产工艺模 式。与转瓶培养技术相比，该工艺具有操作简单、产 率高、容易放大等优点。本文结合口蹄疫病毒和狂 犬病毒的生产，分别对细胞悬浮培养工艺与转瓶培 前国外（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ公司、Ｍｅｒｉａｌ公司）普遍已经采用 培养…。１９６５年Ｔｅｌｌｉｎｇ，Ｒ．Ｃ．等实现在不锈钢发酵 罐中悬浮培养ＢＨＫ２１细胞生产口蹄疫疫苗 Ｊ。目 作者简介：陈文庆（１９６４年一），男，工程师，从事动物细胞培养基的开发与动物细胞大规模培养技术的研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｅｎ— ｗｑｔｙ＠１６３．ｔｏｍ ・３８・ 中国兽药杂志 ２０１０，４４（１０）：３７－４１／陈文庆，等 ２０００－５０００ Ｌ反应器悬浮培养ＢＨＫ２１细胞生产口蹄 疫苗。本文就本公司自主研发的６５０ Ｌ生物反应器和 无血清培养基进行悬浮培养ＢＨＫ２１细胞生产口蹄疫 疫苗与转瓶培养工艺进行比较和分析。 １．１ 主要材料ＢＨＫ２１贴壁细胞株，中国兽医药 数，反应器全悬浮培养的ＢＨＫ２１细胞取样进行数 量和活率检测。培养条件和结果对比见表１。 表１ 转瓶培养和反应器全悬浮培养ＢＨＫ２１细胞对比 品监察所；毒株：ＦＭＤＶ—Ｏ型（某兽用疫苗企业）； 低血清ＭＥＭ培养基，产品代号ＭＤ６１１、ＢＨＫ２１细 胞无血清培养基，北京清大天一科技有限公司；特 级新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公 司；仪器：５ Ｌ反应器，德国贝朗；１２０ Ｌ和６５０ Ｌ ＣＬＡＶＯＲＵＳ￣生物反应器，北京清大天一科技有限 公司。 １．２ 实验方法 １．２．１ 转瓶培养ＢＨＫ２１细胞生产口蹄疫病毒 将复苏的ＢＨＫ２１细胞在１７５培养瓶中使用低血清 培养基（含５％牛血清）培养，连续传代扩增接种１５ Ｌ转瓶，３７ ｃＣ培养４８ ｈ，传代比例为１：８～１：１０，按 常规方法接种病毒及维持液，细胞病变９０％左右收 获病毒液。 １．２．２反应器全悬浮无血清培养ＢＨＫ２１细胞生 产口蹄疫病毒 （１）贴壁细胞悬浮驯化培养：用ＢＨＫ２１细胞无 血清培养基在恒温摇床或者方瓶中无血清驯化贴 壁ＢＨＫ２１细胞，可采用直接驯化或者逐级降低血 清驯化等方法，每代观察细胞数量和细胞活率，直 至ＢＨＫ２１细胞在无血清培养基中的生长增殖速率 正常，细胞活率达９５％以上，并可连续稳定传代，说 明细胞已适应无血清悬浮培养。 （２）反应器用种子细胞扩增：采用反应器罐倒 罐逐级放大技术，细胞从摇瓶一５ Ｌ反应器一ｌ２０ Ｌ 反应器— ５Ｏ Ｌ反应器进行逐级放大培养。细胞培 养方式为批培养，控制反应器各参数在正常范围： 温度３７．０ ｃＣ、ｐＨ７．２～７．４、溶氧（００）２０％～７０％、 搅拌转速５０～１５０ ｒ／ｍｉｎ。 （３）反应器培养口蹄疫病毒：待６５０ Ｌ反应器 中细胞达到一定密度，提高培养ｐＨ至７．５左右，按 一定比例直接接种口蹄疫病毒进行病毒维持培养， 控制温度、ｐＨ、ＤＯ、搅拌转速等参数在合适范围，在 线无菌间隔取样判断细胞病变情况并检测病毒毒 价（ＬＤ 。，ＴＣＩＤ 。），确定收获的最佳时间。 １．３ 细胞培养结果对比 分别对低血清培养基１５ Ｌ转瓶培养的贴壁ＢＨＫ２１细胞进行观察和细胞计 结果显示，转瓶培养的ＢＨＫ２１细胞，培养 ４８ ｈ显微镜观察成致密单层（图１），９６ ｈ细胞开 始出现脱落死亡；反应器无血清全悬浮培养 ＢＨＫ２１细胞４８ ｈ的细胞显微镜观察状态如图２， 生长至９６ ｈ细胞密度可达５．４×１０。／ｍＬ，活率维 持在９４％左右。从细胞数量比较，６５０ Ｌ反应器 培养一批的细胞数量相当于５００～７００个ｌ５ Ｌ转 瓶培养的细胞总量。 图１转瓶ＢＨＫ２１细胞低血清培养４８ ｈ，１００× 图２反应器全悬浮无血清培养４８ ｈ。１００× ２０１０，４４（１０）：３７～４１／陈文庆，等 中国兽药杂志 １．４病毒培养效果对比 两种不同培养工艺，细 胞在满足活力要求的基础上，以同等条件分别接种 价（ＴＣＩＤ 。和ＬＤ 。）检测不低于转瓶培养工艺。根 据反应器低血清悬浮培养ＢＨＫ２１细胞生产口蹄疫 完整病毒粒子（１４６Ｓ）检测较转瓶高１０倍左右的情 况 Ｊ，应用无血清悬浮培养工艺，杂蛋白含量更少， 口蹄疫完整病毒粒子和口蹄疫疫苗质量均提高。 １．５ 反应器和转瓶经济效益估算对比 依据培养 ＦＭＤＶ病毒，取样测定病毒毒价，结果见表２。 表２转瓶和反应器全悬浮培养ＢＨＫ２１细胞病毒毒价对比 ＢＨＫ２１细胞生产口蹄疫病毒工艺过程要求，从细胞 密度、病毒毒价、产品效力、资源环境、劳动力等方 面进行简单对比，借以一窥二者的经济效益差别 结果表明，无血清悬浮培养的口蹄疫病毒毒 （见表３）。 表３ 反应器无血清悬浮培养与转瓶培养ＢＨＫ２１细胞经济效益对比 按照反应器无血清悬浮培养一条生产线（５ Ｌ一１２０ Ｌ一６５０ Ｌ）、转瓶体积１５ Ｌ进行对比。 按照目前培养ＢＨＫ２１细胞生产口蹄疫病毒质 量要求，对悬浮无血清培养工艺的产能进行预估，一 条５ Ｌ一１２０ Ｌ一６５０ Ｌ的反应器生产线年生产病毒 公司。特级新生牛血清，杭州四季青生物工程材料 有限公司；微载体：Ｃｙｔｏｄｅｘ １，美国ＧＥＨＣ。 ２．２ 实验方法 量约为２．１亿毫升，生产疫苗量约为４．２亿毫升。 ２ 人狂犬病毒微载体培养与转瓶培养的对比 我国是受狂犬病危害最为严重的国家之一，近 年报告狂犬病年死亡人数均在２ ４００人以上，一直 位居我国各类传染病报告死亡数的前三位。根据 有关国家成功控制狂犬病的经验，世界卫生组织提 出倡议，到２０２０年消除人狂犬病 Ｊ。我国距此倡 ２．２．１ 转瓶培养Ｖｅｒｏ细胞生产狂犬病毒将复 苏的Ｖｅｒｏ细胞在１＿７５培养瓶中使用低血清培养基 （含５％血清）培养，连续传代扩增至１５ Ｌ转瓶，传 代比例１：４～１：５，每３ ｄ传代１次，培养细胞成良 好单层换病毒维持液，按一定比例接种狂犬病毒进 行维持培养，根据细胞病变维持情况进行连续收获 病毒液３～４次。 议目标还有大量工作要做，国内也对人用和兽用狂 犬病疫苗的生产做了大量研究工作。下面就１２０ Ｌ 反应器微载体培养Ｖｅｒｏ细胞生产狂犬病毒效果与 转瓶培养工艺和培养效果比较分析。 ２．１ 主要材料细胞株，Ｖｅｒｏ细胞株；毒株：ａＧ株 ２．２．２反应器微载体培养Ｖｅｒｏ细胞生产狂犬病毒 （１）种子细胞扩增：将复苏的Ｖｅｒｏ细胞在１’７５ 培养瓶中使用ＭＤ５０４培养基（含５％血清）培养３ 代，扩增至ｌ５ Ｌ转瓶。消化收集转瓶细胞，接种５ Ｌ反应器进行微载体培养，待微载体上细胞长满， 反应器在线消化细胞后接种１２０ Ｌ反应器进行微 载体低血清培养基（ＭＤ５０５，含５％血清）培养，工 作体积７Ｏ Ｌ，微载体浓度５ ｇ／Ｌ。培养方式为灌流 培养，控制反应器温度、ｐＨ、溶氧（ＤＯ）、搅拌转速、 灌流速率等参数，定期在线无菌取样，观察细胞生 （细胞株和毒株均来自某人用疫苗企业）；低血清 １９９培养基（产品代号ＭＤ５０４）、Ｖｅｒｏ细胞反应器培 养用培养基（产品代号ＭＤ５０５），均来自北京清大 天一科技有限公司。５ Ｌ反应器，德国贝朗；１２０ Ｌ ＣＬＡＶＯＲＵＳ￣生物反应器，北京清大天一科技有限 ・４０・ 中国兽药杂志 ２０１０，４４（１０）：３７～４１／陈文庆，等 长状况，细胞计数采用结晶紫一柠檬酸染色法 ｊ。 （２）反应器培养病毒：待１２０ Ｌ反应器微载体 细胞长满后按ＭＯＩ＝０．０２５～０．１的比例接种狂犬 病毒，控制反应器温度在３５ ｏＣ、ｐＨ在７．４～７．６、溶 氧（ＤＯ）在２０％～６０％、搅拌转速在３０～８０ ｒ／ｍｉｎ、 灌流速率在每天０．５～２罐体积等，隔天无菌取样， 观察细胞维持情况并留样检测病毒滴度（ＬＤ∞），以 确定维持液灌流速率及病毒收获方式。 ２．３ 细胞培养结果对比 １５ Ｌ转瓶和反应器微载 体培养Ｖｅｒｏ细胞，分别结合相应的低血清培养基， 在培养不同时间对细胞的状态和细胞的数量进行 观察，结果详见表４。 表４转瓶培养和反应器微载体培养Ｖｅｒｏ细胞对比情况 结果显示，转瓶培养的Ｖｅｒｏ细胞，培养７２ ｈ左 右显微镜下观察细胞成单层见图３，维持培养至 １４４ ｈ培养液ｐＨ值较低，培养液中出现部分漂浮细 胞；反应器微载体培养的Ｖｅｒｏ细胞，培养９６ ｈ，微 载体上细胞致密，轮廓清晰，显微镜观察照片见图 ４；维持培养６～７ ｄ，密度可达４．０×１０。／ｍＬ。 图３转瓶低血清培养７２ ｈ，１００× 图４反应器微载体培养９６ ｈ。１００ 单从细胞数量比较，１个反应器微载体培养（５ ｇ／Ｌ的Ｃｙｔｏｄｅｘ １，培养体积７０ Ｌ）的细胞数量约相 当于１５０～２５０个ｌ５ Ｌ转瓶的数量。 ２．４ 病毒培养效果对比 两种不同的培养工艺， 以同种条件分别接种狂犬病毒，转瓶培养的Ｖｅｒｏ 细胞，接种病毒３ ｄ左右开始进行第一次病毒液收 获，此后隔２ ｄ左右进行再次收获，共收获３次；反 应器培养细胞接毒２～３ ｄ开始收获病毒液，连续收 获１０ ｄ以上。收获取样测定病毒滴度见表５。 表５转瓶培养和反应器微载体培养Ｖｅｒｏ细胞 生产狂犬病毒滴度对比 结果表明，反应器微载体培养的狂犬病毒滴度 不低于转瓶培养工艺。本次实验转瓶收获体积为 ４．５～５ Ｌ／瓶，反应器微载体悬浮培养的收获体积 １ ０００ Ｌ左右，反应器收获病毒液的量相当于２００ 个ｌ５ Ｌ转瓶左右的生产量。 ２．５ 反应器和转瓶经济效益估算对比 采用两种 不同的培养工艺，反应器微载体培养和转瓶培养 Ｖｅｒｏ细胞狂犬病毒经济效益估算对比见表６（按照 一条５ Ｌ一１２０ Ｌ反应器微载体培养生产线与ｌ５ Ｌ 转瓶生产线进行对比）。 采用反应器微载体培养，可实现高细胞密度、 高病毒收获率、污染机会低、生产工艺可控性强，工 业应用效果与国内辽宁成大 相符。此外，中国医 学科学院李平忠等２００６年对反应器微载体和转瓶 培养Ｖｅｒｏ细胞生产狂犬病毒进行对比试验研究， 结果显示，每升培养体积，反应器工艺生产的疫苗 数量是转瓶工艺生产的１９倍，生产效率和产品质 量明显提高 。 ２０１０，４４（１０）：３７—４１／陈文庆，等 中国兽药杂志 ‘４１． ３讨论 浮培养技术研发单位加强合作，如合同制造外包 上述实验对比表明，与转瓶培养工艺相比，悬浮 （ＣＭＯ）和合同研发外包（ＣＲＯ）直接引进大规模生产 技术，抢占市场先机，规避研发风险，缩短产业化进 程，这是当前国际上生物制药研发快速实现产业化 的趋势。因此，在中国目前的生物制药环境下，新工 艺技术研发和应用更需要整合行业力量、包括上下 游力量，共同完成，避免重复性研究，提高竞争力。 ４展望 培养技术的最大优势在于：第一、单位体积内有效工 作细胞数量增加；第二、全密闭、管道化系统生产流 程及过程自动化监控、控制技术，不仅减少了污染细 胞的机会，而且在减轻劳动力强度的同时减少人为 操作因素影响；第三、生物反应器容积的扩大，提升 了终端产品的均一性，结合后期纯化工艺，不但产品 产量明显提高，产品的质量获得提高；第四、生产疫 苗所用劳动力和车间、水、电、原材料、能源等成本远 低于传统转瓶培养工艺，综合成本大大降低。 因其具有上述特点，国内悬浮培养工业化生产 虽起步较晚，但已显示出其明显的优势。新工艺技 术的应用，使企业在生产效益、产品质量和竞争力 等方面明显提高。在人用疫苗方面，辽宁成大引进 面对国内国际形势，对于疫苗生产企业，实现由 转瓶培养到生物反应器培养的工艺改革是必然的趋 势，也是我国生物疫苗行业发展的当务之急。这不 仅关系企业的核心竞争力，还决定着整个行业的科 学、可持续发展。国内生物制品行业面对国外的竞 争应该早日与国际接轨，快速实现行业升级和产业 进步，并早日实现新技术的引进、消化和吸收，最终 的微载体悬浮培养人用狂犬疫苗；在兽用疫苗方 面，金宇保灵采用自主的国产技术实现悬浮培养的 口蹄疫疫苗等。悬浮培养工艺开始在生物制药行 业引发一定的效应，疫苗生产企业已经开始并越来 越关注新工艺。此外随着人民生活水平、生活质量 的提高及近年来疫情的出现，国内生物制品市场出 进一步创新，提高我国生物制品行业的国际竞争力。 参考文献： ［１］Ｃａｐｓｔｉｃｋ Ｐ Ｂ，Ｔｅｌｌｉｎｇ Ｒ Ｃ，Ｃｈａｐｍａｎ Ｗ Ｇ．Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ａ Ｃｌｏｎｅｄ Ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｋｉｄｎｅｙ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｔｈｅ Ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｆｏｏｔ—ａｎｄ—Ｍｏｕｔｈ Ｄｉｓｅａｓｅ『Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，１９６２，１９５：ｌ１６３—１１６４． 现供不应求的现象，国内生物制药行业具有良好的 发展态势。但是，与此同时国内生物制品行业面对 较大的挑战，国外的大规模培养技术已广泛用于生 物制药生产，生物制药巨头开始通过合作或是收购 ［２］Ｄｏｅｌ Ｔ Ｒ．ＦＭＤ Ｖａｃｃｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，９１（１）：８１—９９． ［３］悬浮培养技术［ＥＢ／ＯＬ］．（２０１０—０７—２８）．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ． Ｊｉｎｙｕｂａｏｌｉｎｇ．ｔｏｎｉ．ｃｎ／ｇｓｄｔｎｒ／ｘｆｚｔ３．ｈｔｍ１． ［４］中国狂犬病防治现状［ＥＢ／ＯＬ］．（２００９—１２—０３）．ｈｔｔｐ：／／ ｗｗｗ．ｓｄａ．ｇｏｖ．ｃｎ／ＷＳ０１／ＣＬ０６１９／４３７６５．ｈｔｍ１． 等方式侵入中国，染指国内市场，与国内企业产生 不可避免的竞争。 面对机遇和挑战，国内疫苗生产企业要想在引 ［５］Ｈｕ Ｗ Ｓ，Ｍｅｉｅｒ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｄ Ｃ．Ａ Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｏｃｕｌｕｍ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ ｏｎ Ｍｉｅｒｏｃａｒｒｉｅｒ［Ｊ／ＯＬ］．Ｂｉｃｅｈｅｍ Ｂｉｏｅｎｇｔ，１９８５，２７：５８５—５９５． 进新工艺一悬浮培养产业化上确保成功率，快速实 现产业化，应该复制或学习国外通用模式。产业化 不同于科研的百花齐放，国内疫苗生产企业应与悬 ［６］ 查力，高军，侯剑英．生物反应器细胞培养制备人用狂犬病 疫苗［Ｊ］．中国生物制品学杂志，２００６，１９（３）：２８８—２９０． ［７］ 李平忠，沈伟，余芬．用微载体培养Ｖｅｏ细胞制备狂犬疫苗 ｒ［Ｎ］．第三军医大学学报，２００６，２８（２３）：２３７４—２３７６．
