赤参水提物对人肝癌细胞株HepG2细胞的影响

第４ｌ卷第１期　华中师范大学学报（自然科学版）　Ｖ０１．４ｌ　Ｎ０．１　２００７年３月　ｊｏＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＨＵＡＺＨＯＮＧ　ＮＯＲＭＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．）　Ｍａｒ．２００７　文章编号：ｉ０００一ｉ１９０（２００７）０１—００９１－０４　赤参水提物对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２细胞的影响　胡　盛，陈世敏，杨光忠，梅之南　（中南民族大学生命科学学院，武汉４３００７４）　摘　要：探讨了赤参水提物对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２细胞的影响．采用体外培养的人肝癌细胞　ＨｅｐＧ２细胞株，接种入９６孔板，２４　ｈ后加入赤参水提物，ＭＴＴ（ｍｅｔｈｙｌ　ｔｈｉａｚｏｌｙｌ　ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）法，计　算肝癌细胞生长存活率；Ａｃｒｉｄｉｎｅ　ｏｒａｎｇｅ／ｅｔｈｙ１ｅｎｅ　ｄｉｂｒｏｍｉｄｅ（ＡＯ／ＥＢ）荧光染色法，检测细胞形态　学变化；ＲＴ—ＰＣＲ法检测细胞Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ、ｐ５３基因表达变化．结果表明，赤参水提物可剂量一时间依　赖性地抑制ＨｅｐＧ２细胞增殖；１．０　ｍｇ／ｍＬ赤参水提物处理ＨｅｐＧ２细胞２４　ｈ后，细胞荧光染色出　现了明显的凋亡细胞；赤参水提物处理ＨｅｐＧ２细胞后，Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ表达量剂量依赖性地减少，而　Ｂａｘ和ｐ５３　ｍＲＮＡ表达量剂量依赖性地增加．　关键词：ＨｅｐＧ２细胞；丹参；赤芍；细胞凋亡　中图分类号：Ｑ５９３．１　文献标识码：Ａ　我国肝癌防治形式相当严峻，肝癌在我国已经　品；其余试剂为国产分析纯．　上升到恶性肿瘤的第二位．近年来，实验与临床研　１．２细胞系及细胞培养　究均表明丹参和赤芍治疗肝病及防治肝纤维化、肝　人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２细胞（武汉中国典型物　癌方面确有明显效果．丹参的水溶性提取物能明显　保藏中心）．ＨｅｐＧ２细胞培养于含ｌＯ％小牛血清、　抑制人的肝癌细胞ＨｅｐＧ２细胞的增殖，引起细胞　青霉素１００　Ｕ／ｍＬ和链霉素１００　ｐ．ｇ／ｍＬ的ＤＭＥＭ　形态的改变，最终导致癌细胞的凋亡口　］．赤芍水　培养液中，在３７℃、５　Ａ０ＣＯｚ的细胞培养箱内传代　提物可以通过ｐ５３蛋白依赖性途径诱导肝癌细胞　培养．　ＨｅｐＧ２凋亡，从而达到抑制其生长的作用　］．本课　１．３细胞生长抑制　题组研究发现，通过提取赤芍中有效部位芍药总苷　取处于对数生长期的ＨｅｐＧ２细胞接种于９６　和丹参中丹酚总酚酸，并以３：７的比例配伍而成　孔培养板中（细胞数为每孔ｌ×ｌＯ　个），每孔　的赤参水提物（ＣＳＥ）对肝纤维化有很好的防治效　１００　Ｌ培养１２　ｈ后，加入不同浓度的赤参水提物，　果．现探讨该提取物诱导人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２细　每个浓度设平行孔４个，于３７℃，５％ＣＯ。培养箱　胞的影响．　中继续培养ｌ２、ｌ８、２４和３６　ｈ，每孔加入５　ｍｇ／ｍＬ　１材料与方法　ＭＴＴ　２Ｏ　Ｌ，继续培养４　ｈ后，加入１５０　Ｌ　ＤＭＳＯ　溶解，于酶标仪４９２ｎｍ处检测ＯＤ值，计算药物的　１．１药物与试剂　体外生长细胞存活率／％一（各实验组ＯＤ值／对照　赤参水提物由赤芍总苷和丹参总酚酸以３：７　组ＯＤ值）×１００％．　的比例组成，溶解于ＰＢＳ中，０．２２　ｍ微孔滤膜过　１．４细胞形态学分析　滤除菌，４℃冰箱保存，临用前用完全ＤＭＥＭ培养　取处于对数生长期的ＨｅｐＧ２细胞接种于９６　基稀释至所需浓度．ＤＭＥＭ培养基、小牛血清：　孔培养板中（细胞数为每孔ｌ×ｌＯ　个），每孔　ＧＩＢＣＯ公司产品；碘化丙啶（ＰＩ），吖啶橙（ＡＯ）、溴　１００　Ｌ培养１２　ｈ后，加入浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ的赤　化乙啶（ＥＢ）：ｓｉｇｍａ公司产品；Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒、　参水提物，对照组不加药物，培养至２４　ｈ后分别加　ＭＭＬ－Ｖ逆转录酶、Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶：Ｐｒｏｍａｇｅ公　入胰酶，每孔２Ｏ　Ｌ，待细胞脱落后，立即吸出２５　Ｌ　司产品；１００　ｂ　ＰＤＮＡ　ｍａｋｅｒ：华美生物工程公司产　细胞悬液于载玻片上，加入１　Ｌ混合荧光染色　收稿日期：２００６—０９—１０．　基金项目：武汉市青年晨光计划（２００３５００２０１６～２７）．　＊通讯联系人．Ｅｍａｉｌ：ｍｅｉｚｈｉｎａｎ＠１６３．ｃｏｍ．　维普资讯 http://www.cqvip.com

９２　华中师范大学学报（自然科学版）　第４１卷　液——１Ｏ０　ｔ，ｇ／ｍＬ吖碇橙（ＡＯ）和１００　ｔ＊ｇ／ｍＬ嗅　乙啶（ＥＢ）混匀，压上盖玻片，荧光显微镜下观察凋　亡细胞形态．　１．５　ＲＴ－ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ）检测Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ和ｐ５３　ｍＲ－　ＮＡ表达变化　各组分别于药物诱导后２４　ｈ收集细胞，ＰＢＳ　洗两遍，按Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒说明提取总ＲＮＡ．用紫外　分光光度仪测定Ａ　。／Ａ　。，比值在１．８～２．０之　间，计算ＲＮＡ含量．引物按表１所示设计，逆转录　反应按试剂盒操作．ＰＣＲ反应总体积５０　Ｌ、　０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ、０．１　Ｕ／ｕＬ　Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶、　１　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣ１　缓冲液、１０×ＰＣＲ缓冲液、上下　游引物各０．３／，ｍｏｌ／Ｌ　ｃＤＮＡ模板．扩增条件为：　９５℃，５ｍｉｎ－－￣９４℃，１　ｍｉｎ；６１℃，１　ｍｉｎ；７２℃，２ｍｉｎ；　３２个循环一７２℃，１０　ｍｉｎ．Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ、ｐ５３和ＧＡＰ—　ＤＨ基因的扩增产物分别为３０１　ｂｐ，１１４　ｂｐ，３１６　ｂｐ　和３８７　ｂｐ．取５　Ｌ扩增产物进行１．０　琼脂糖凝胶　电泳，并用成相系统拍照．　表１　逆转录用的基因特异性引物　Ｔａｂ．１　Ｇｅｎｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ＲＴ　ＰＣＲ　Ｇｅｎｅ　ｎａｍｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｂｃｌ一２。Ｇｅｎｅ　Ｂａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ　０００６５７；Ｂａｘ，　Ｇｅｎｅ　Ｂａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ　１３８７６５；ｐ５３，Ｇｅｎｅ　Ｂａｎｋ　ａｃ一　ｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ　０００５４６；ＧＡＰＤＨ，Ｇｅｎｅ　Ｂａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｏ．ＮＭ　００２０４６．　１．６统计学处理　采用ＳＰＳＳ１０．０软件包进行单因素方差分析．　２结果　２．１赤参水提物对ＨｅｐＧ２细胞的生长抑制作用　用不同浓度的赤参水提物分别处理ＨｅｐＧ２　细胞１２，１８，２４和３６　ｈ，实验组存活细胞明显低于　对照组，并且有一定的时效和量效关系．浓度为　０．２５　ｍｇ／ｍＬ的赤参水提物作用ＨｅｐＧ２细胞１２　ｈ　后，对ＨｅｐＧ２细胞生长抑制作用不明显，但随着　作用时间的延长及作用浓度增加，细胞生长抑制效　应逐渐增强，呈时效、量效关系（图１）．　图１　赤参水提物对ＨｅｐＧ２细胞增殖的影响　Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＣＳＥ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　Ｎ一４，ｉ±Ｓ，　Ｐ＜Ｏ．０５与对照组比较　２．２赤参水提物对ＨｅｐＧ２细胞细胞形态学观察　赤参水提物作用于ＨｅｐＧ２细胞后，细胞经　ＡＯ／ＥＢ染色，荧光显微镜下观察．阴性对照组无　明显凋亡细胞（见图２Ａ）．当１．０　ｍｇ／ｍＬ赤参水提　物作用ＨｅｐＧ２细胞２４　ｈ后，出现了早期凋亡细胞　与晚期凋亡细胞，前者表现为细胞核为ＡＯ染色呈　黄绿色荧光，浓聚成新月形或颗粒状，位于细胞的　一侧；后者表现为细胞核为ＥＢ染色呈桔红色，细　胞坏死时，细胞体积增大，呈不均匀的橙红色荧光，　轮廓不清，已解体或接近解体（见图２Ｂ）．　１＿一　图２　赤参水提物对ＨｅｐＧ２细胞形态学的影响　Ａ：对照组；Ｂ：赤参水提物（１．０ｍｇ／ｍＬ）作用２４　ｈ　Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＣＳＥ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｎ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　２．３赤参水提物对ＨｅｐＧ２细胞Ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ、Ｂａｘ　和ｐ５３ｍＲＮＡ的表达　ＲＴ—ＰＣＲ图像分析结果显示，分别用０．２５，　０．５，１．０，２．０　ｍｇ／ｍＬ的赤参水提物处理ＨｅｐＧ２　细胞，随着药物浓度的增加，Ｂｃｌ一２　ｍＲＮＡ表达量　逐渐减少，各给药组之间有差异显著性意义（Ｐ＜　０．０５）．Ｂａｘ和ｐ５３　ｍＲＮＡ的表达量逐渐增加（图　３），各给药组之间有差异显著性意义（Ｐ＜０．０５）．　３讨论　细胞凋亡是为维持内环境稳定、由基因控制的　细胞自主有序性的死亡，具有重要的生物学意义．　恶性肿瘤的发生发展与肿瘤细胞的无限增殖及凋　亡受阻有关，因此，诱导肿瘤细胞凋亡是一种有效　的肿瘤治疗手段，也成为筛选抗肿瘤药物的一个重　要指标．ＭＴＴ法通常被用于体外肿瘤药敏试验，　它不能鉴别凋亡与坏死细胞，不能检测对机体毒性　维普资讯 http://www.cqvip.com

第ｌ期　胡　盛等：赤参水提物对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２细胞的影响　反应．因此作者认为在药敏试验中观测肿瘤凋亡率　比抑瘤率更有价值．ＡＯ／ＥＢ双重染色后荧光显微　镜下检测，对正常细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细　胞、坏死细胞作出明确判断，被认为是反映细胞凋　亡的一个定性定量指标Ｌ５］．ＡＯ能进入胞膜完整的　细胞（包括正常细胞和早期凋亡细胞），与ＤＮＡ结　合后发绿色荧光，ＥＢ只能进入胞膜受损的细胞　（包括晚期凋亡细胞和死亡细胞），与ＤＮＡ结合后　发橙红色荧光，可见浓缩的ＤＮＡ碎片或凋亡小　体．因此，正常细胞，早期凋亡细胞，晚期凋亡细胞，　死亡细胞之间的区别主要是通过细胞核形态变化　来判断的．在本实验中，作者发现赤参提取物可使　ＨｅｐＧ２细胞存活率下降，并存在时间一剂量依赖性　（图１）．细胞形态学检测发现，当１．０　ｍｇ／ｍＬ的赤　参水提物处理ＨｅｐＧ２细胞２４　ｈ后，出现了明显的　橙红色凋亡细胞，而正常细胞则发出绿色荧光（图　２）．　凰１　２　３　４　５　ＧＡ　圈１　２　３　４　５　Ａ　Ｂ　ｐ５３　ＧＡＰＤＨ　Ｃ　图３赤参水提物对ＨｅｐＧ２细胞　Ｂｃｌ一２（Ａ），Ｂａｘ（Ｂ）和ｐ５３（Ｃ）ｍＲＮＡ表达的影响　Ｌａｎｅ　ｌ：对照组，Ｌａｎｅ　２：０．２５ｍｇ／ｍＬ组，Ｌａｎｅ　３：０．５　ｍｇ／ｍＬ组，Ｌａｎｅ　４：１．０ｍｇ／ｍＬ组，Ｌａｎｅ　５：２．０ｍｇ／ｍＬ组　Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＣＳＥ　ｏｎ　Ｂｃｌ一２（Ａ），Ｂａｘ（Ｂ）ａｎｄ　ｐ５３（Ｃ）　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓ　ｏｆ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　Ｂｃｌ一２为抑制凋亡基因，Ｂａｘ为促进凋亡基因，　这两种基因编码的蛋白可以形成同二聚体，也可以　相互作用形成异二聚体来凋亡．Ｂｃｌ与Ｂａｘ的　比值，是决定细胞凋亡与否的主要因素．Ｍａａｓｅｒ　等［６　认为细胞对死亡信号的敏感性取决于胞内　Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ竞争性的二聚体化过程．Ｂａｘ同二聚体　形成便可诱导凋亡；随Ｂｃｌ一２蛋白表达量的上升，　越来越多的Ｂａｘ二聚体分开，与Ｂｃｌ一２形成比Ｂａｘ－　Ｂａｘ更稳定的Ｂａｘ－Ｂｃｌ二聚体，则细胞不发生凋　亡．ｐ５３是一个肿瘤抑制蛋白，其功能是诱导细胞　凋亡和细胞生长停滞，在细胞的Ｇ１期监视细胞基　因组的完整性，如ＤＮＡ遭到破坏，ｐ５３便与之结　合，直到损伤的ＤＮＡ得到修复为止Ｌ７］．本实验作　者用ＲＴ—ＰＣＲ法研究了赤参提取物对Ｂｃｌ一２，Ｂａｘ　ｍＲＮＡ和ｐ５３　ｍＲＮＡ表达水平的影响，随着药物　浓度的增加，Ｂｃｌ一２　ｍＲＮＡ表达水平不断降低，而　Ｂａｘ和ｐ５３　ｍＲＮＡ表达水平不断上升，说明Ｂｃｌ一２，　Ｂａｘ和ｐ５３在赤参水提物的诱导凋亡中起着重要　作用．　综上所述，赤参水提物能抑制人肝癌ＨｅｐＧ２　细胞的生长，引起ＨｅｐＧ２细胞形态发生变化，出　现了明显的凋亡细胞，其凋亡诱导机制可能与　Ｂｃｌ一２　ｍＲＮＡ表达水平的下降和Ｂａｘ，ｐ５３　ｍＲＮＡ　表达水平的提高有关．本研究为赤参水提物进一步　开发成抗肝癌药物提供了理论基础．　参考文献：　［１］Ｉ　ｉｕ　Ｊ，Ｓｈｅｎ　Ｈ　Ｍ，Ｏｎｇ　Ｃ　Ｎ．Ｓａｌｖｉａ　ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏｍａ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　ＥＪ３．Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔ，２０００，１５３：８５—９３．　Ｅ２３　Ｌｉｕ　Ｊ，Ｓｈｅｎ　Ｈ　Ｍ，Ｏｎｇ　Ｃ　Ｎ．Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｔｈｉｏｌ　ｄｅｐｌｅ—　ｔｉｏｎ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｌａｌ　ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　Ｓａｌｖｉａ　ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏｍａ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　ＥＪ３．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，２００１，６９：１　８３３—１　８５０．　ｒ３］Ｌｅｅ　ＳＭ　Ｙ，Ｌｉ　Ｍ　Ｌ　Ｙ，Ｔｓｅ　Ｙ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．ＰａｅｏｎｉａｅＲａｄｉｘ，ａ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂａｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｈｅｐａｔｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｂｙ　ｉｎ—　ｄｕｃｉｎｇ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ａ　ｐ－５３　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ。２００２，７１（１９）：２　２６７－２　２７７．　［４］　Ｋａｔａｙａｍａ　Ｋ　Ｉ，Ｍａｓａｋｉ　Ｕｅｎｏ，Ｈｉｒｏｆｕｍｉ　Ｙａｍａｕｃｈｉ，ｅｔ　ａ１．　Ｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｎｅｕｒａｌ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｆ—　ｔｅｒ　Ｓ－ｐｈａｓｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｐ５３一ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ［Ｊ］．　Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ　Ｄｉｓ，２００５，１８：２１８－２２５．　Ｅ５３　Ｗａｎｇ　Ｙ　Ｋ，Ｈｕａｎｇ　Ｚ　Ｑ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｃａｒｉｉｎ　ｏｎ　ｈｕ—　ｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｖｅｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＨｚＯｚ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ＥＪ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，５２：１７４—１８２．　Ｅ６］　Ｍａａｓｅｒ　Ｋ．Ｓｕｔｔｅｒ　Ａ　Ｐ，Ｓｃｈｅｒｔｉｂｌ　Ｈ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｍｉｔｏ—　ｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ－ｂｙ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ　ｒｅ—　ｃｅｐｔｏｒ　ｌｉｇａｎｄｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ＥＪ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉ—　ｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００５，３３２　（３）：６４６—６５２．　［７３　Ｓｈｉ　Ｍ　Ｘ，Ｃａｉ　Ｑ　Ｆ。Ｙａｏ　Ｌ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐ—　ｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｏｖａｒｉａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２００６，３０（３）：２２１—２２６．　维普资讯 http://www.cqvip.com

９４　华中师范大学学报（自然科学版）　第４１卷　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｃｈｉ—Ｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔ（ＣＳＥ）ｏｎ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ　ＨＵ　Ｓｈｅｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｓｈｉｍｉｎ，ＹＡＮＧ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｎｇ，ＭＥＩ　Ｚｈｉｎａｎ　（ＤｅＤａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｏｕｔｈ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｗｕｈａ“４３００７４）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｈｅＰａｔｏｃｅｌｌｕ１ａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｃｈｉ—Ｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆ　ＣＳＥ）ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ—ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｏｆ　Ｓａｌｖｉａ　ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　ａｎｄ　Ｐａｅｏｎｉａｅ　ｒｄｄ　’　ＭＴＴ　ａｓｓａｖ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘａｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＣＳＥ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏ—　ｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ（ＨｅｐＧ２）．ＣＳＥ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｈ　ＰＧ２　ｃｅｌｌ　Ｄｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｄｏｓｅ＿ａｎｄ　ｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．　Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｉ　ａｐ—　ｏＤｔｏｓｉｓ　ｂｙ　ＣＳＥ　ｉｎ　ＨｅｐＯ２　ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｗｉｔｈ　ＡＯ／ＥＢ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｔａｍ．ＣＳＥ　ｒｅａ　一　ｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｏ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｘ　ａｎｄ　ｐ５３　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓ　ｏｎ，ａｎｄ　ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ一２　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ｄｏｓｅ—ｄｅＰｅｎｄｅｎｔｌｙ・　Ｋｅｖ　ｗ０ｒｄｓ：ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ；Ｓａｌｖｉａ　ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ；Ｐａｅｏｎｉａｅ　ｒａｄｉｘ；ａｐｏｐｔｏｓ　＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋　＋“＋“＋”＋＊＋一＋“＋”＋　＋”＋　＋“＋¨＋“＋”＋”＋　＋　＋”＋”＋‘　＋“＋　＋　＋　．　（上接第７７页）　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｎｏｓｉｚｅｄ　ＷＯ３　ｐｏｗｄｅｒ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ—ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　ｍｉｘｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ＣＨＥＮ　Ｙａｎｄａｎｌ，ＨＵＡＮＧ　Ｍｉｎｇｊｉｅ　，ＨＵＡＮＧ　Ｂｉａｏ　，ＬＩＮ　Ｓｈｕｊｉｎ　（１．ｃ。ｌｌｅｇｅ。ｆ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｆｕｊｉａｎ　Ａｇｒｉｃｕ１ｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　ＵｎｉＶｅｒｓｉ　ｙ，Ｆｕｚｈ。ｕ　３５ＯＯＯ２　２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣｈｅｍｉｓｔｒＹ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅ“ｃ。　，　Ｆｕｊｉａｎ　ＡｇｒｉｃｕＩｔｕｒｅ　ａｎｄ　ＦｏｒｅｓｔｒＹ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００２）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎａｎｏｓｉｚｅｄ　ＷＯ３　ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ＣＴＡＢ／Ｃ４　Ｈ９　ＯＨ／Ｃ６　Ｈ１２／ａｑ　。　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｎａ２　ＷＯ４　ｏｒ　ＨＣ１　ｕｎｄｅｒ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｒｏｃｅｓｓｍｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．　１　ｈｅ　ｇｒａｉｎ　ｓｉｚｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｐｈａｓｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｍｏｒｐｈｏ【ｏｇＹ　ｏｔ　ＷＯ３　ｐｏｗｄｅｒ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ＸＲＤ，ＴＧ—ＤＴＡ　ａｎｄ　ＴＥＭ・Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃａｌｃｉｎａｔｉｏｎ　ｔｅｍＤｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ＷＯ３　ｐｏｗｄｅｒ　ｗａｓ　ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ・ＸＲＤ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ＷＯ　ｉｓ　ｍｏｎｏｃｌｉｎｉｃ　ａｎｄ　ｗｅｌｌ　ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅｄ．ＴＥＭ　ｉｍａｇｅｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇＹ　ｏｔ　ｕｌｔｒａ—　ｆｉｎｅ　ＷＯ３　ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｉｓ　ｓｐｈｅｒｏｉｄａ１．Ｔｏ　ｃａｌｃｉｎｅ　ｔｈｅ　ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ　ａｔ　５００￣Ｃ　ｆｏｒ　３　ｈ，ａｎ　ａＶｅｒａｇｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ＷＯ３　ｐｏｗｄｅｒ　ｉｓ　ａｂｏｕｔ　４０　ｎｍ．Ｔｈｅ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｓｉｚｅ　ａｕｇｍｅｎｔｓ　０ｈｓｅｒＶａｂｌＹ　ｗｈｅｎ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃａｌｃｉｎａｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ・　Ｋｅｖ　ｗＯｒｄｓ：ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ；ｔｕｎｇｓｔｅｎ　ｔｒｉｏｘｉｄｅ　ｎａｎｏｓｉｚｅｄ　ｐｏｗｄｅｒ