墨眶狙圉宦曩圈同２０１３年６月第１ １卷第１７期 ・实验研究・４９７ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｔｈｅ ｆａｓ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］＿Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０００，２７５（３１）： ２３８０７—２３８１３． ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＨＰ—Ｉ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２００２，７ １（２ １）：２４９９— ２５０８． 【６】Ｙａｏ ＰＭ，Ｔａｂａｓ Ｉ．Ｆｒｅｅ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｓ ａｓｓｏ— ｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ 【１ ０］Ｔａｂａｓ Ｉ．Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｂａｓｉｃ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２００２， １ １０（７）：９０５—９１ １． ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００１，２７６ （４５）：４２４６８—４２４７６． ［１ １］Ｆｅｎｇ Ｂ，Ｙａｏ ＰＭ，Ｌｉ ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｉｓ ｔｈｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００３，５（９）：７８ １—７９２． ［７］ 李方明，郭毅 圣刚，等．游离胆固醇激活未折叠蛋白反应诱导 巨噬细胞凋亡【Ｊ］．中国动脉硬化杂志，２００７，１５（１２）：８９３—８９５． 【８］ 李方明，郭毅 圣刚，等．ＪＮＫ信号通路在游离胆固醇诱导巨噬 细胞凋亡中的作用［Ｊ］ｌ卒中与神经疾病，２００８，１５（２）：１０６—１０９． ［９］Ｉｎａｇａｋｉ Ｙ，Ｙａｍａｇｉｓｈｉ Ｓ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ｇａｍｍａ—ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ［１ ２］Ｇｕｍｉｒｅｄｄｙ Ｋ，Ｒｅｄｄｙ ＣＤ，Ｓｗａｍｙ Ｎ．Ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ ｍｅｄｉａｔｅｓ ＤＢＰ—ｍａｆｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ＲＡＷ ２６４．７ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ…．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００３，９０（１）：８７—９６． 高效液相色谱法测定人血浆中头孢吡肟的血药浓度 史玉红 （辽宁中医药大学附属第四医院，辽宁沈阳１１０１０１） 【摘要】目的建立测定人血浆中头孢吡肟的高效液相色谱法。方法采用ＨＰＬＣ法，内标为喷昔洛韦，色谱柱为Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃ （２５０ｍｍＸ ４．６ｍｍ，５ ｍ），流动相：Ｏ．０２ｍｏ１／ＬＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．０）一甲醇一乙腈（９４．９：５：Ｏ．１），检测波长：２５４ｎｍ，柱温：３０℃，流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。结 果头孢吡肟血药浓度在０．５０￣２００．４０ｍｇ／Ｌ范围内与峰面积比有良好的线性关系，ｒ＝０．９９９８，回收率为９７．２Ｏ％～１ｌ２．１５％，日内ＲＳＤ＜２．７４％（ｎ＝６）， 日间ＲＳＤ＜４．８６％（ｎ＝６）。结论本法稳定，简便，准确，快速，为头孢吡肟的血药浓度监测提供了分析方法，可用于头孢吡肟的血药浓度测 定及其药代动力学研究。 【关键词】头孢吡肟；高效液相色谱法；血药浓度 中图分类号：Ｒ９ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１—８１９４（２０１３）１ ７－０４９７－０２ 头孢吡肟是布迈．施贵宝公司（ＢＭＳ）开发的新型头 ２．２．１头孢吡肟对照品溶液的制备 精密称取头孢吡肟１００．２０ｍｇ，用水溶解后定容于１０ｍＬ量瓶中， 配成含头孢吡肟１ ０．０２ｍｇ／ｍＬ的对照品储备液。置冰箱４℃保存。临用 前精密量取１．０ｍＬ于ｌＯｍＬ量瓶中，配成含头孢吡肟Ｉ．００２ｍｇ／ｍＬ的水溶 液，并将其稀释成２．５１、５．０１、２５．０５、５０．１０、２５０．５０、５０１．００ ｇ／ｍＬ 孢菌素类药物，１ ９９３年首次在法国和瑞典上市，商品名为马斯平 （Ｍａｘｉｐｉｍｅ）。其抗菌谱广，对绝大多数革兰阳性球菌及革兰阴性杆 菌，包括多数耐氨基糖苷类或第三代头孢菌素的菌株均有效。具有抗 菌谱广，高效及对ｐ．内酰胺酶稳定等特点 】。目前该药已用于临床治 疗多种细菌感染性疾病。本文旨在建立一种简便、灵敏、快速的高效 液相色谱法测定头孢吡肟的血药浓度，为调整临床用药方案及其药动 学研究提供依据 】。 的水溶液，备用。 ２．２．２喷昔洛韦储备液的制备 精密称取喷昔洛韦１ ００．１ ８ｍｇ用水溶解后定容于１ ００ｍＬ量瓶中，配 １仪器与试药 Ａｇｉｌｅｎｔ １１００高效液相色谱系统，包括Ｇ１３Ｉ１Ａ型四元泵，Ｇ１３１６Ａ 柱温箱，Ｇ１３１４Ａ型紫外检测器，Ａ．０８．Ｏ３化学工作站（美捷 司）；ＸＷ－８０Ａ型涡旋混合器（上海医科大学仪器厂）；ＫＱ－１００型超 声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ＴＧ１６一ＷＳ高速离心机（上海 金溪仪器有限公司）；ＦＡ２１０４Ｎ型电子分析天平（上海精密科学仪器有 限公司）；微量移液器（芬兰大龙）。 头孢吡肟对照品（中美上海施贵宝公司，批号：１０１２２０），喷昔 洛韦（武汉生物化学制药有限公司，批号：１１０２１ ８），磷酸二氢钾 （分析纯，汕头市西陇化工厂有限公司），三氯乙酸（分析纯，郑州中 天实验仪器有限公司），甲醇、乙腈（色谱纯，天津市康科德科技有限 成含喷昔洛韦１．００ｍｇ／ｍＬ的内标储备液。置冰箱４ ０Ｃ保存。临用前精密 量取１．０ｍＬ于ｌＯＯｍＬ量瓶中，配成含喷昔洛韦１０．ｏ０ ｇ／ｍＬ的水溶液。 ２．３血浆样品处理 取血浆０．４ｍＬ，加蒸馏水０．１ｍＬ，加ｌ０．０ｏ ｕ ｇ／ｍＬ的内标溶液０．２ｍＬ 以及１５％三氯乙酸０．２ｍＬ涡旋ｌｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ，离 ￣，１０ｍｉｎ，取上清 液２０ Ｌ进样。 ２．４标准曲线的制作 取空白血浆０．４ｍＬ］Ｊ［１人０．１ｍＬ不同浓度的头孢吡肟对照品，使血浆 中含有头孢吡肟０．５０、１．００、５．０１、１０．０２、５０．１０、１００．２０、２００．４０ｍｇ／Ｌ。 按“２．３血浆样品处理”项下操作。以头孢吡肟浓度为横坐标，头孢 吡肟峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程 公司），实验用水均为去离子水。 ２方法与结果 ２．１色谱条件 ｙ＝０．０２９８ｘ一０．００８６，，＝０．９９９８。头孢吡肟０．５０￣２００．４０ｍｇ／Ｌ浓度范围内线 性关系良好。 ２．５回收率和精密度 取健康人混合空白血浆加入不同浓度的头孢吡肟对照品配成低、 色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃｌ８（２５０ｍｍＸ４．６ｍｍ，５ ｍ，依利特），流 动相：０．０２ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．０）一甲醇一乙腈（９４．９：５：０．１）；检测 波长：２５４ｎｍ；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３０＂Ｃ；进样量：２Ｏ Ｌ；内 标：喷昔洛韦，见图１。 中、高三种浓度分别为１．００，１０．０２，１５０．３０ｍｇ／Ｌ的标准血浆样品，按 “２．３血浆样品处理”方法操作。在标准曲线上求得的浓度与实际浓度 相比得到方法回收率，以血浆标本测得的头孢吡肟与内标峰面积的比 ２．２对照品及内标储备液的配制 与对照品与内标峰面积比之比得到提取回收率。将上述浓度的含药血 ４９８・实验研究・ Ｊｕｎｅ ２０１３，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．１７ 兔，ｂＮ复苏后经腹腔诱导亚低温的实验分析 李本楠 （长春医学高等专科学校，吉林长春１３００３１） 【摘要】目的探讨免心肺复苏后经腹腔诱导亚低温的方法，并评价其安全性。方法选择４Ｏ只新西兰大白兔，先进行预实验，筛选出鼓膜 温度下降迅速而稳定的一组，进行腹腔灌流维持亚低温并进行复温；然后采用交流电致颤的方式建立心肺复苏模型，ＲＯＳＣ后向腹腔内灌 注低温液体维持亚低温，观察血浆生化指标的变化。结果兔腹腔内灌注８０ｍｇ／ｍＬ时鼓膜温度下降迅速而稳定；ＣＰＲ后通过腹腔灌流装 置诱导亚低温，能稳定维持亚低温和缓慢复温，并且没有出现生化指标的紊乱和肝、肾、肠等脏器损伤。结论兔心肺复苏后经腹腔灌注 低温液体来诱导亚低温 安全快速，值得推广应用。 【关键词】免心肺复苏；腹腔诱导；亚低温；实验分析 中图分类号：Ｒ－３３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１ ９４（２０１３）１ ７－０４９８－０２ 心肺复苏（ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ，ＣＰＲ）技术不断得到发 展，使心源性猝死患者的自主循环恢复率有了极大提高，但是过度的 炎症反应导致总的存活率仍然较低，近年的研究表明亚低温可以提 用。因此探索更加安全有效的亚低温治疗方法一直是临床研究的重要 工作。腹腔具有最重要的产热器官肝脏，以及肾脏和大血管等脏器， 是实施热交换的理想部位。因此本研究观察了兔心肺复苏后经腹腔诱 高ＣＰＲ患者的出院存活率，并且改善其神经功能，因为低温能够显著 抑制炎症反应，町以减轻缺血再灌注后组织损伤。亚低温治疗（ｍｉｌｄ ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ），是一种神经内科疾病治疗手段，能够调节脑 Ｊ血流，改善细胞能量代谢，降低脑氧代谢率，促进细胞问信号传导的 恢复和减少脑梗死的面积等…。临床上常用的亚低温治疗方法主要有 血管内降温法和体表降温法，但是单用一种降温方法不是难以达到目 标温度就是出现过低温，且血管内降温法价格十分昂贵，难以推广应 导亚低温的实验，阐明ＣＰＲ后经腹腔降温的优势，为该方法进入临床 奠定理论基础，现报道如下。 １资料与方法 １．１一般资料 ４０只健康成年新西兰大白兔，雌雄各半，由中山大学动物实验中 心提供，所有实验均经中山大学动物实验伦理委员会批准。将兔随 机分为两组，每组各２０只，各组动物之间的基本生理数据没有显著差 浆分别在同１ｄ内测定６次和每天１次测定６ｄ，计算日内和日间精密度， 结果见表１，表２。 ４ｈ、 ２０￣Ｃ冷冻４周、冻融４次的ＲＳＤ分别为７．９２％，６．３７％，４．５５％。表 明血浆样品在上述条件下稳定。 ３讨论 本法采用０．０２ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ ＰＯ （ｐＨ７．０）一甲醇一乙腈（９４．９：５：０．１）为 流动相，实验证明，采用此流动相得到的峰形较好，头孢吡肟、喷昔 洛韦与血浆中内源性物质分离效果好且保留时间合适。 选择内标时曾试过头孢他啶 、头孢氨苄等结构与头孢吡肟相似 图１头孢吡肟在血浆中的高效液相色谱图［图（Ａ）为空白血浆色谱图，图（Ｂ） 的药物，因喷昔洛韦色谱行为与头孢吡肟相似，保留时间与头孢吡肟 接近且与各峰分离良好而被选为内标。本法使用浓度为１５％的三氯乙 酸为蛋白沉淀剂，无杂质峰干扰，提取回收率高。 本法稳定，简便，准确，快速，为头孢吡肟的血药浓度监测提供 了分析方法，可用于头孢吡肟的血药浓度测定及其药代动力学研究。 为含药血浆色谱图，其中１为内标物质喷昔洛韦，２为头孢吡肟对照品］ 表１血浆中头孢吡肟的回收率（ｎ＝６） 参考文献 ［１］唐建国．头孢吡肟的药代动力学［Ｊ］．国外医药抗生素分册，１９９６， 表２头孢吡肟血药浓度测定的精密度（Ｉ１＝６） １７（３）：９６—１００． ［２］胡婕慧，谢林，肖大为，等．高效液相色谱法测定人血浆中头孢吡 肟浓度及其药动学［Ｊ】．中国现代应用药学杂志，２００７，２４（１）：５３—５６． ［３】Ｂｒｅｉｌｈ Ｄ，Ｅａｖａｌｌｅｅ Ｃ，Ｆｒａｔｆａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｍｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅ￣ｐｉｍｅ ａｎｄ ｃｅｆｒｌｉｗｍｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａ— ｔｏｇｒａｐｈｙ ｕｓｉｎｇ ａｎ ｕｌｔｒａｆｉＩｔｒａｆｉｏｎ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｓｅｒｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ２．６稳定性试验 ［Ｊ］．Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ｂｉｏｍｅｄ Ｓｅｉ Ａｐｐｌ，１９９９，７３４（１）：１２１． 取适量头孢吡肟对照品溶液加人健康人混合空白血浆中，配 成浓度为１Ｏ．０２ｍｇ／Ｌ的头孢吡肟血浆样品，分别考察其在室温放置 ［４］ 沈凯，鲁亚苏，于作华，等．人体血液及脑脊液中头孢吡肟浓度的 ＨＰＬＣ￣定方法研究［Ｊ］．药物分析杂志，２００５，２５（３）：２６３—２６６．
