2013—2017年大理州手足口病患儿病原学分析

文章编号：1673-8640（2019）07-0583-04 中图分类号：R725.1 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2019.07.002

2013—2017年大理州手足口病患儿病原学分析

段飞云， 陈晓明， 陈 冉

（大理州疾病预防控制中心，云南 大理 671000）

摘要：目的 了解2013—2017年大理州手足口病患儿病原学特征，为手足口病防控提供依据。方法 收集2013—2017年大理州各医疗机构手足口病患儿的流行病学数据及其咽拭或粪便样本2 873份，按照年度、样本类型、患儿性别及年龄和检出地区及月份分组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测临床样本中的肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A16型（CoxA16）及其他肠道病毒（EV）。结果 2 873份临床样本中，各组EV71、CoxA16、其他EV比较差异均有统计学意义（χ2值分别为893.68、121.18、41.07、354.25、240.33，P<0.05）。3～5岁组EV71和CoxA16检出率最高，分别为25.1%和23.3%。EV71主要在春季被检出，而CoxA16、其他EV则集中在夏季被检出；男性与女性患儿之间其他EV、EV71和CoxA16检出率差异均无统计学意义（χ2=2.66，P>0.05）。结论 强化病原监测是防控手足口病的科学手段。

关键词：手足口病；实时荧光定量聚合酶链反应；肠道病毒71型；柯萨奇病毒A16型

Etiological analysis of children with hand，foot and mouth disease in Dali Prefecture from 2013 to 2017 DUAN Feiyun，CHEN Xiaoming，CHEN Ran. （The Centers for Disease Control and Prevention in Dali Prefecture，Dali 671000，Yunnan，China）

Abstract：Objective To understand the etiological characteristics of children with hand，foot and mouth disease in Dali Prefecture from 2013 to 2017，and to provide a reference for its prevention and control. Methods The epidemiological data and the clinical specimens of 2 873 children with hand，foot and mouth disease from medical institutions in Dali Prefecture were collected from 2013 to 2017. All the subjects were classified according to years，specimen types，sex，regions，months and ages. Enterovirus 71（EV71），coxsackievirus A16（CoxA16） and other enteroviruses（EV）were determined by real-time fluorescence quantitation polymerase chain reaction（PCR）. Results There was statistical significance for EV71，CoxA16 and other EV classifying according to years，specimen types，ages，regions and months（χ2=893.68，121.18，41.07，354.25 and 240.33，P<0.05）. The determination rates of EV71 and CoxA16 in 3-5-year-old group were the highest among age groups，which were 25.1% and 23.3%，respectively. EV71 was determined mainly in spring，and CoxA16 and other EV were determined mainly in summer. There was no statistical significance for the determination rates of other EV，EV71 and CoxA16 between males and females（χ2=2.66，P>0.05）. Conclusions Strengthening pathogen surveillance is a scientific means on preventing and controlling hand，foot and mouth disease.

Key words：Hand，foot and mouth disease；Real-time fluorescence quantitation polymerase chain reaction；Enterovirus 71；Coxsackievirus A16

手足口病是全球性儿童传染病，主要由小RNA病毒科肠道病毒属引起，以肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）和柯萨奇病毒A16型（coxsackievirus A16，CoxA16）较为常见。大多数病例症状较轻，主要以发热和手、足、口

部位出现皮疹或疱疹为主要症状，少数病例可出现无菌性脑膜炎、脑炎、心肌炎、急性驰缓性麻痹和神经性水肿等，可通过消化道、呼吸道和密切接触等途径传播，主要传染源为患者及隐形感染者，多发生于学龄前儿童，尤以3岁以

作者简介：段飞云，男，1983年生，学士，主管技师，主要从事疾病监测相关工作。通信作者：陈晓明，E-mail：dljkcxm@126.com。

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下儿童发病率最高[1-2]。1957年，加拿大首次报道手足口病例，我国1981年由上海首次报道该病例，1982年深圳首次分离到EV71，2007年以来我国手足口病流行日趋严重[3-5]。2008年，手足口病被纳入《中华人民共和国传染病防治法》中丙类传染病管理。本研究回顾分析2013—2017年大理州手足口病患儿病原学流行情况，对大理州辖区内12县市疾病预防控制中心送检的手足口普通病例进行病毒核酸检测，确定其病原学特征，以期为本地区手足口病的科学防控提供依据。1 材料和方法1.1 样本来源

收集2013—2017年大理州辖区内各级医疗机构临床诊断为手足口普通病例的咽拭或粪便样本2 873份（患儿男性1 691例、女性1 182例），其中咽拭样本969份，粪便样本1 904份。每月最少随机采集5份首次就诊普通病例的咽拭或粪便样本，当月病例少于5例时全部采样。采集患儿发病3 d内的临床样本。按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》中B类感染性物质运输要求运送至大理州疾病预防控制中心，存于-70℃冰箱，备检。1.2 仪器与试剂

Stratagene Mx3000P实时荧光PCR仪（美国安捷伦科技公司）, HERAEUS FRESCO17型高速冷冻离心机（美国Thermo公司）, SSNP-2000A型全自动核酸提取仪（江苏硕世生物科技有限公司）。EV通用型、CoxA16和EV71实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）试剂盒购自江苏硕世生物科技有限公司。1.3 样本处理

将粪便样本放置于固定容器内，自然解冻，在生物安全柜内取2 g溶于粪便样本处理液中，剧烈震荡20 min，用冷冻离心机1 500×g离心20 min，吸取上清液用于核酸检测。粪便样本处理液内含10 mL磷酸盐缓冲液（内含2%青链霉素）、1 g玻璃珠和1 mL氯仿。咽拭样本处理方法为直接吸取病毒采样管上清液用于核酸检测。1.4 方法

PCR反应体系：核酸扩增反应液7.5 μL、酶混合液5 μL、CoxA16/EV71/通用型三重反应液4 μL、去RNA酶水3.5 μL、RNA模板5 μL；反应总体系25 μL。循环参数：逆转录反应50 ℃

30 min；预变性93 ℃ 5 min ；退火、延伸及检测荧光95 ℃ 10 s、55 ℃ 40 s，45个循环。FAM通道为CoxA16，VIC通道为EV71，ROX通道为通用型EV，CY5通道为内标对照。1.5 结果判断

设置阴性对照和阳性对照（来自试剂盒）。若FAM通道Ct>35.3或undet或无典型S型曲线，VIC通道Ct>35.3或undet或无典型S型曲线，ROX通道Ct>35.3或undet或无典型S型曲线，检测结果为阴性，则判断为非EV感染；若FAM通道Ct>35.3或undet或无典型S型曲线，VIC通道Ct>35.3或undet或无典型S型曲线，ROX通道Ct<35.5，则判断为其他EV感染；若FAM通道Ct>35.3或undet或无典型S型曲线，VIC通道≤35.3，ROX通道Ct<35.5，则判断为EV71感染；FAM通道Ct≤35.3，VIC通道Ct>35.3或undet或无典型S型曲线，ROX通道Ct<35.5，则判断为CoxA16感染。1.6 统计学方法

采用SPSS 21.0软件对数据进行描述性分析，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2 结果

2.1 2013—2017年大理州手足口病病毒核酸检测结果

其他EV、EV71、CoxA16检出率差异有统计学意义（χ2=893.68，P<0.05）。粪便与咽拭样本其他EV、EV71、CoxA16检出率差异有统计学意义（χ2=121.18，P<0.05）。粪便样本检出率（60.3%）明显高于咽拭样本（39.7%）。见表1。

表1　2013—2017年其他EV、EV71、CoxA16检出率

（%）年份粪便样本咽拭样本其他EVEV71CoxA16其他EVEV71CoxA16

2013年1.513.75.03.88.44.62014年

9.4

48.513.05.822.312.92015年33.56.738.719.62.67.82016年13.026.040.44.86.539.22017年21.033.716.120.217.521.0合计

14.9

23.7

21.8

11.0

11.5

17.2

2.2 2013—2017年大理州手足口病患儿病毒核酸检测性别分布

男性患儿3种病毒检出率（54.0%）略高于女性患儿（52.5%），但差异无统计学意义

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（χ2=2.66，P>0.05）。

2.3 2013—2017年各年龄组EV71、CoxA16及其他EV检出率的比较

病毒检测阳性患儿年龄最小者为5个月，3～5岁患儿3种病毒检出率略高于其他年龄组，各年龄组检出率比较差异有统计学意义（χ2=41.07，P<0.05）。见表2。2.4 手足口病病原学地区分布

大理州辖区内共有1市11县，所有辖区均有手足口病例被检出，洱源县EV71检出率

100检出率（%）80604020

表2　2013—2017年3种病毒患儿年龄分布

（%）组别<1岁组1～3岁组3～5岁组5～14岁组合计

样本数1 0161 2294381902 873

EV7117.219.425.120.519.6

检出率CoxA1616.722.023.321.120.3

其他EV17.012.98.910.013.6

最高（41.8%），云龙县CoxA16检出率最高（39.5%）。各地区3种手足口病毒检出率差异有统计学意义（χ2=354.25，P<0.05）。见图1。

县市源县庆县川县渡县涧县山县云县濞县平县永宾大洱鹤剑弥南巍祥漾地区

注： 阴性； EV阳性； EV71阳性； CoxA16阳性

图1　大理州手足口病地区分布

2.5 手足口病检出时间分布

CoxA16在3月后检出率开始上升，5～7月检出率较高，8月以后开始下降；EV71的检出主要集中在4～6月，以后逐渐下降，9

4035检出率（%）302520151050

月略有上升；其他EV检出率1～5月缓慢上升，6月达到最高，7月后逐渐下降。3种病毒各月检出率差异有统计学意义（χ2=240.33，P<0.05）。见图2。

1月 2月 3月 4月 5月 6月 7月 8月 9月 10月 11月 12月

月份

注：

CoxA16；

EV71；

其他EV

图2　手足口病检出时间分布

3 讨论

本研究结果显示，2013—2017年大理州手足口病患儿主要病毒类型为EV71和CoxA16。手足口病优势病毒在不同时期和不同地区有变化。有研究结果表明，EV71对脊髓前角细胞具有组织嗜性，是重症病例和死亡病例的危险因素[6]。大理州的手足口病防控形式比较严峻。粪便样本3种手足口病病毒检出率较高，可能与肠道病毒在粪便中可留存数周有关。因此，强化病原监测是防控手足口病的科学手段。

本研究结果表明，大理州1～5岁普通手足口病患儿EV71和CoxA16检出率随着年龄的增长

云龙县0

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有升高的趋势，而其他EV则呈下降趋势，手足口病病毒检出者中以3～5岁患儿为主，可能与该年龄段儿童活动量较大，暴露在病毒环境中的时间较长有关。杨洪等[7]发现儿童出生后会得到母体一部分抗EV抗体，出生1个月后抗EV抗体水平逐渐下降，2～5岁每年提高12%，5～6岁血清抗体水平达到稳定，故1～3岁儿童最易受EV攻击。<1岁患儿EV71检出略高于其他EV和CoxA16，提示感染EV71概率较大。EV71感染好发于婴幼儿，多数患儿可完全治愈，但少数患儿会留下神经后遗症，应引起重视。1～3岁患儿EV71和CoxA16检出率略高于<1岁患儿，这与幼儿期儿童活动量明显增加、过多的暴露有关；3～5岁患儿病毒的主要检出类型也是EV71和CoxA16，其检出率高于幼儿期，可能与其进入幼儿园后集体生活使暴露病毒环境的时间增多有关，因此应重点关注，加强晨检制度，发现患儿应及时令其就诊或居家观察。大理州幼儿园、托儿所等儿童聚集地仍是手足口病的高发地，防控形势仍然严峻。5～14岁患儿手足口病病毒类型仍以EV71和CoxA16为主，但其他EV检出率较其他各年龄组略高，可能与5岁后EV71的血清抗体达到稳定水平，而CoxA16血清抗体随年龄增长逐渐升高有关[8]

。3种手足口病毒检出率男性患儿多于女性患儿，可能与男性患儿活动量大，有更多机会暴露在病毒环境中有关，但二者差异无统计学意义，与其他研究结果基本一致[9-10]。

大理州各地区3种手足口病毒检出率有差异，南涧县送检样本非EV检出率高于EV，可能与送检样本均是咽拭样本有关。永平县其他EV检出率高于EV71和CoxA16。2013—2017年3种手足口病病毒中EV71检出主要集中在大理市以北（洱源县和鹤庆县）和同一纬度（宾川县、大理市、漾濞县）的地区，CoxA16检出主要集中在大理市以南（祥云县、弥渡县、巍山县），但剑川县和云龙县除外，剑川和云龙是白族聚居地，可能与白族饮食和高原季风气候有关。气象和纬度与手足口病有一定的相关性 [11]

。上述地区经济和地理位置都相对较好，人口密度较大，是大理旅游的主要地区，增加了病毒传播和扩散的机会。

大理州全年均检出了EV71和CoxA16，EV71检出主要在春季，而CoxA16和其他EV检出集中在夏季，有明显的季节性，与文献报道一致[12]。建议在春夏季到来前，加强手足口病的预防宣传工作。鉴于目前无手足口病特效疫苗，故应注重科学监测手足口病病原，掌握流行情况，及时预警，加强托幼机构和学校对手足口病的防控。对散居儿童的家长和监护人进行健康教育，提高个人卫生和外环境消毒意识，以科学预防和控制手足口病。

（致谢：对大理州十二县市疾病预防控制中心参与流行病学调查的人员致以感谢）

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（收稿日期：2018-02-06）

（本文编辑：李 欣）