HPLC测定补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量

天津药学　ｒｉａｎｊｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２００７年２月第ｌ９卷第１期　２ｌ　对照品，精密称取２４．７７　ｍｇ置２５０　ｍｌ量瓶中，加５％　２．７回收率试验　分别精密量取已知含量的样品５　醋酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。　份，各精密加入一定量的对照品储备液，按“２．２．２”项　２．２．２供试品溶液取样品适量，超声处理１０　ｍｉｎ，　下方法制备溶液，照上述色谱条件分别进样２０　，结　摇匀；精密量取５　ｍｌ置５０　ｍｌ量瓶中，加５％醋酸溶液　果，吗啡的平均回收率为９９．４％，ＲＳＤ为１．９０％（ｎ＝　适量，超声处理２０　ｍｉｎ，加５％醋酸溶液至刻度，摇匀，　５）。见表１。　离心，取上清液作为供试品溶液。　２．３标准曲线绘制　分别精密量取对照品贮备液１、　２、５、ｌ０和ｌ５　ｒｎｌ置５０　ｒｎｌ量瓶中，加５％醋酸溶液至刻　度，摇匀，制得１．９８、３．９６、９．９１、１９．８２和２９．７２　ｍｇ／ｍｌ　表１回收率试验结果（ｎ＝５）　序号　样　量对鹬量　０．１８０２　０．１８０２　０．４５０５　０．４５０５　０．４５０５　０．１９８２　０．４９５４　０．ｏ９９ｌ　０．１９８２　０．４９５４　０．３８ｌ９　０．６６９ｌ　０．５５０２　０．６４６７　０．９３０３　１０１．７７　９８．６９　ｌ０ｏ．６ｌ　的系列溶液，分别照上述色谱条件进行测定，记录吗啡　峰面积。以吗啡对照品浓度（　ｇ／ｍ１）为横坐标，以峰　面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Ａ＝　６５　４７９　Ｃ＋３１７，ｒ＝０．９９９　９（ｎ＝５）。，结果表明，吗啡在　１．９８—２９．７２　ｇ／ｒｎｌ浓度范围内，线性关系良好。　２．４精密度试验取“２．３”项下浓度为９．９１　ｇ／ｍｌ　的对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样５次，得吗　啡平均峰面积为６４９　０５２，ＲＳＤ为０．１２％（ｎ＝５）。　２．５稳定性试验取同一批样品，按“２．２．２”项下方　９８．９９　９６．８５　２．８　样品测定　分别量取３批样品（ＣＨ１０１３１，　０６０１３２，０６０１３３），照“２．２．２”项下方法，分别制备样品　溶液。另精密量取吗啡对照品储备液５　ｒｎｌ，置５０　ｒｎｌ　的量瓶中，加５％醋酸溶液至刻度，摇匀，制成１．９８　ｇ／ｒｎｌ对照品溶液；在上述色谱条件下分别进样２０　进行测定，结果３批样品含量分别为０．０８９　７、０．Ｏ９Ｏ　１　法制得供试品溶液，在０、２、６、１２和２４　ｈ分别进样２０　和０．０８８　２　ｍｇ／ｍｌ。　记录吗啡峰面积，结果平均峰面积的ＲＳＤ为　３讨论　０．３０％，表明溶液在２４　ｈ内稳定。　曾分别采用水一甲醇一冰醋酸、水一乙腈、水一甲　２．６重现性试验取同一批样品（批号：０６０１３２）精密　量取５份，分别按“２．２．２”项下方法制得供试品溶液，　酸、水一乙腈一甲酸系统作为流动相试验。结果以水　乙腈一甲酸（８５：１５：０．０５）为佳。本实验建立的方　样品中吗啡的平均含量为０．０９０　１　ｍｇ／ｍｌ，ＲＳＤ为　法，可作为该制剂的含量测定方法。　１．６６％　，一ＨＰＬＣ测定补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量　王玉忠，陈延晶，张凤羽　（天津市静海县药品检验所，天津３０１６００）　摘要目的：建立补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素含量测定的ＨＰＬＣ分析方法。方法：色谱柱：Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　ＯＤＳ　ｃ。８柱（２５０　ｎｌｌ＇ｎｘ４．６　ｍｍ，５　ｍ），流动相：０．５％磷酸水溶液（三乙胺调节ｐＨ至３．５）一甲醇（４８：５２），检测波长：２４５岫。　结果：补骨脂素和异补骨脂素分别在４．２７—４２．６８　ｇ／ｒＩｌｌ及４．２３～４２．３２　ｐｃ／ｍ１范围内线性关系良好，平均回收率分别为　１００．３％及１００．６％，ＲＳＤ分别为０．４５％及０．４６％。结论：本法操作简便、快速，重现性好，可作为该制剂质控方法之一。　关键词补骨脂酊，补骨脂素，异补骨脂素，含量，高效液相色谱法　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６－５６８７（２０ｏ７）０ｌ一０ｏ２ｌ一０３　中图分类号：Ｒ９２７．２　Ｉ－ＩＰＬＣ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆｐｓｏｒａｌｅｎ　ａｎｄ　ｉｓｏｐｓｏｒａｌｅｎ　ｉｎ　Ｂｕｇｎｚｈｉ　ｔｉｎｃｔｕｒｅ　Ｗａｎｇ　Ｙｕｚｈｏｎｇ。Ｃｈｅｎ　Ｙａｎｊｉｎｇ。Ｚｈａｎｇ　Ｆｅｎｇｙｕ　（ＴｉａｎＪｉｎＪｉｎｇＨａｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ。Ｔｉａｎｊｉｎ　３０１６００）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆｐｓｏｒｌｅｎ　ａｎｄ　ｉｓｏｐｓｏｒａｌｅｎ　ｉｎ　Ｂｕｇｕｚｈｉ　ｔｉｎｃｔｕｒｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｎａｌａｙｓｉｓ　ｗａｇ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ｎ　ａＤｉａｍｏｎｓｉｌ　ＯＤＳ　Ｃｌ８　ｃｏｌｕｍｎ（２５０　ＩＢｍ　ｘ４．６　ｍｍ。５　ｍ）ｗｉｔｈ　ａ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆＯ．５％　・收稿日期：２００６－０９－１４　维普资讯 http://www.cqvip.com

２２　天津药学Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２００７年２月第ｌ９卷第１期　Ｈ３ＰＯ４ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｔｈｅ　ｐＨ　ｗａｓ　ａｄｊｕｓｔｅｄ　ｔｏ　３．５　ｂｙ　ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）一ｍｅｔｈａｎｏｌ（４８：５２），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　２４５　ａｍ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｐｓｏｒａｌｅｎ　ｗａｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｗｉｈｉｔｎ　ｈｅ　ｔｒａｎｇｅ　ｆ４．ｏ２７—４２．６８　ｇ／ｍｌ（ｒ：０．９９９　６）ａｎｄ　ｉｓｏｐｓｏｒａｌｅｎ　ｉｔｗｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｆ４．２３—４２．３２　ｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９９　ｏ８）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｆｏ　ｐｓｏｒａｌｅｎ　ｎｄ　ｉａｓｏｐｓｏｒａｌｅｎ　ｗｅｒｅ　１００．３％ａｎｄ　１００．６％，ｒｅ－　ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ＲＳＤ　ｗｅｒｅ　０．４５％ａｎｄ　０．４６％．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　Ｂｕｇｕｚｈｉ　ｔｉｎｃｔｕｒｅ，Ｐｓｏｒａｌｅｎ。Ｉｓｏｐｓｏｒａｌｅｎ，Ａｓｓａｙ，ＨＰＬＣ　补骨脂酊由补骨脂经加工制成的酊剂，补骨脂主　要含补骨脂素和异补骨脂素等有效成分。《天津市医　积。以对照品浓度ｃ、相应峰面积Ａ做线性回归，补骨　脂素、异补骨脂素回归方程分别为：Ａ＝１６２　５４８Ｃ＋　院制剂规范》（１９９８年版）未规定定量指标控制本品质　量。为有效控制本品质量，保证临床用药安全，本试验　采用反相高效液相色谱法测定补骨脂酊中补骨脂素、　异补骨脂素的含量¨－３　，操作简便、准确，可作为本品　质量控制的方法。　１仪器与试药　１．１仪器岛津Ｌｃ一２０１０Ａ　高效液相色谱仪，Ｌｃ—　ｓｏｌｕｔｉｏｎ工作站，ｕＶ一２４０１　ＰＣ紫外分光光度计。　１．２试药补骨脂素对照品（中国药品生物制品检定　所，批号１１０７３９—２００３１０）、异补骨脂素对照品（中国　药品生物制品检定所，批号１１０７３８—２００３０９）；补骨脂　酊（静海县医院制剂室，批号２００６０４２２、２００６０６０６、　２００６０７２５）；甲醇为色谱纯，磷酸、三乙胺为分析纯，水　为自制重蒸馏水。　２方法与结果　２．１供试品溶液的制备精取补骨脂酊１　ｍｌ，置５０　ｍｌ量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，即得。　２．２对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的补　骨脂素１０．６７　ｍｇ、异补骨脂素１０．５８　ｍｇ分置１００　ｍｌ　量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀、即得对　照品储备液。分别精密量取两储备液５　ｌ１１ｌ置２５　ｌ１１ｌ量　瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀、即得混合对照品溶液。　２．３检测波长的选择取对照品溶液，在２００—４００　ｎｍ波长范围内进行光谱扫描，结果在２４５　ａｍ、２９５　ａｍ　处分别有最大吸收，２４５　ｎｍ波长处的吸光更灵敏，吸　光值更大，故选定２４５　ｎｍ为检测波长。　２．４色谱条件及系统适应性试验　色谱柱：Ｄｉａｍｏｎ．　ｓｉｌＣｌ８柱（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５　Ｉｘｍ）；流动相：０．５％磷酸　水溶液（三乙胺调ｐＨ至３．５）一甲醇（４８：５２）；流速：　１．０　ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：３０　ｏＣ；检测波长２４５　ｎｍ；进样量：２０　ｌ。在此条件下，补骨脂素及异补骨脂素的理论塔板　数均不低于８　０００，分离度符合《中国药典》规定，色谱　保留时间分别为１４．２８和１５．９８　ｍｉｎ，见图１。　２．５线性试验精密量取补骨脂素及异补骨脂素两　储备液各１、３、５、７和１０　ｍｌ，一一对应置于２５　Ｉｌｌｌ容量　瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列混合对照品　溶液。按“２．４”项下色谱条件进样测定，记录色谱峰面　１８　２７６（ｒ＝０．９９９　６）和Ａ＝１５９　３０３Ｃ＋１３　３４１（ｒ＝　０．９９９　８）。结果表明，补骨脂素和异补骨脂素分别在　４．２７—４２．６８　ｇ／Ｉｌｌｌ、４．２３—４２．３２　Ｉｌｌｌ范围内线性　关系良好。　２．６空白试验按处方制备不含补骨脂素及异补骨　脂素的阴性样品，按“２．１”项下制备阴性空白对照溶　液，进样测定。结果空白样品色谱中，在与补骨脂素及　异补骨脂素相同保留时间处无吸收峰，阴性对照无干　扰，见图１。　Ｏ　５．Ｏ　ｌＯ．Ｏ　ｌ５．Ｏ　２Ｏ．Ｏ　ｔ／ｍｉｎ　Ａ　Ｏ　５．Ｏ　ｌＯ．Ｏ　ｌ５．Ｏ　２Ｏ．Ｏ　ｔ／ｒａｉｎ　Ｂ　Ｕ　ｂ，Ｕ　ＬＵ．Ｕ　Ｌｂ．Ｕ　ＺＵ．０　ｔ／ｍｉｎ　Ｃ　１．补骨脂素（ｐｓｏｒａｌｅｎ）２．异补骨脂素（ｉｓｏｐｓｏｒａｌｅｎ）　图１补骨脂素和异补骨脂素对照品（Ａ】　补骨脂酊样品（Ｂ）和空白样品（Ｃ）Ｉ－ＩＰＬＣ图谱　２．７精密度试验　取“２．２”项下对照品溶液，按　“２．４”项下色谱条件重复进样测定５次，结果补骨脂　素、异补骨脂素峰面积的ＲＳＤ分别为：０．２２％和　０．２３％，其精密度符合要求。　２．８稳定性试验取“２．１”项下供试品溶液，于１２　ｈ　内每３　ｈ进样测定１次，记录峰面积，结果补骨脂素、　维普资讯 http://www.cqvip.com

天津药学Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　２００７年２月　第ｌ９卷第１期　异补骨脂素峰面积的ＲＳＤ分别为０．３８％和０．５１％，表　２．１１样品测定依“２．１”项下方法制备样品溶液，并　明溶液在１２　ｈ内稳定性良好。　按“２．４”项下方法，分别测定３个批号的补骨脂酊中补　２．９重现性试验取同一批号样品（２００６０６０６）５份，　骨脂素、异补骨脂素的含量，结果见表２。　按“２．１”项下供试品溶液进行测定，补骨脂素、异补骨　表２样品含量测定结果（／７，＝３）　脂素峰面积的ＲＳＤ分别为０．６５％和０．７９％，表明方法　可行，重复性好。　２．１Ｏ加样回收率试验精密量取已知含量的样品　０．５　ｍｌ，分别准确加入“２．２”项下补骨脂素、异补骨脂　素储备液各４．０、５．０、６．０　ｍｌ，并分别置于５０　ＩＩｌｌ量瓶中　加甲醇稀释至刻度，摇匀。按“２．５”项下方法试验，以　３讨论　回归方程计算各自的回收率，得补骨脂素和异补骨脂　为了取得更好的分离效果，对流动相进行了选择。　素的平均回收率为１００．３％和１００．６６％；ＲＳＤ分别为　本试验曾对甲醇一水、乙腈一水、甲醇一１％醋酸和　０．４５％和０．４６％。结果见表１。　０．５％磷酸水溶液（三乙胺调ｐＨ　３．５）一甲醇等洗脱系　表１回收率试验结果　统进行考查，结果表明０．５％磷酸水溶液（三乙胺调　加入量（　）　测得量（　）　回收率（％）　补骨脂紊异补骨脂紊补骨脂紊异补骨脂紊补骨脂紊异补骨脂紊　ｐＨ　３．５）一甲醇（４８：５２）为流动相，峰形对称，分离效　４２６．８　４２３．２　４２５．９　４２５．３　９９．８　１００．５　果理想，且保留时间合适。本试验结果可靠，方法简单　４２６．８　４２３．２　４２６．４　４２５．７　９９．９　１００．６　易行，可作为补骨脂酊的质量控制方法。　４２６．８　４２３．２　４３０．６　４２７．４　１ｏ０．９　１０１．０　参考文献　５３３．５　５２９．０　５３７．８　５２７．９　１ｏ０．８　９９．８　１杨帆，金描真，宋凤兰，等．补骨脂提取工艺的比较研究．中国中药杂　５３３．５　５２９．０　５３３．０　５３０．６　９９．９　１００．３　志，２００５，３０（１６）：１２９０　５３３．５　５２９．０　５３４．６　５３４．９　１ｏ０．２　１０１．１　２　田金改，杜庆鹏，王慰新，等．Ｉ－ＩＰＬＣ法测定复康宝胶囊中补骨脂紊与　６４０．２　６３４．８　６３８．９　６３６．１　９９．８　１００．２　异补骨脂紊的含量．中药新药与临床药理，２００３，１４（１）：３９　６４０．２　６３４．８　６４４．７　６３９．９　１ｏ０．７　１００．８　３郑菁，陈华庭，徐楚鸿．反相高效液相色谱法测定强筋建骨胶囊中补　６４０．２　６３４．８　６４２．８　６４２．４　１ｏ０．４　１０１．２　骨脂紊及异补骨脂紊的含量．中国医院药学杂志，２００４，２４（５）：２７７　不同厂家盐酸二甲双胍片体外溶出度考查　姚秋燕，黄碧莹，黄伟侨，唐蕾，刘怡，林婉贞　（中山大学附属第一医院，广州５１ｏｏ８ｏ）　摘要　目的：对８个不同厂家的盐酸二甲双胍片进行体外溶出度考查，为临床合理用药提供依据。方法：《中国药　典）２００５年版规定的溶出度测定法。结果：各厂家产品的溶出参数ｍ除Ｄ、Ｆ厂与Ａ、Ｈ厂有显著性差异（Ｐ＜０．０５）外，其　余均无显著性差异；而　，Ｔｄ除Ｂ厂与Ｄ、Ｆ厂，Ｅ厂与Ｇ厂，Ｃ厂与Ｈ厂之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）外，其余均有显著　性差异（Ｐ＜０．０５）。结论实验结果为临床选药提供了参考。　关键词盐酸二甲双胍片，溶出度　中图分类号：Ｒ９２７．１１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６－５６８７（２００７）０１－００２３－０３　盐酸二甲双胍是双胍类口服降糖药，主要用于非　其内在质量，给临床选药提供信息，仅按溶出度测定　胰岛素依赖型糖尿病的治疗。该药可使患者血糖和糖　法－２　对８个不同厂家的盐酸二甲双胍片进行了体外溶　化血红蛋白降低，促进靶组织胰岛素受体增加，增加机　出度考查。　体对胰岛素的敏感性，减轻胰岛素抵抗及饭后高胰岛　１仪器与试药　素血症，对服用磺酰脲类降糖药无效的糖尿病病人亦　１．１仪器ＵＶ一１６０ＩＰ紫外分光光度计（日本岛津）；　有效…，在糖尿病的治疗中占有重要地位。为了考查　ＺＲＳ一８智能溶出实验仪（天津大学无线电厂），ＡＧ２４５　｝收稿日期：２００６－０７－２８