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细胞培养用具的清洗、消毒方法

来源:意榕旅游网
细胞培养用品的清洗与消毒

一、清洗

1、玻璃类

V2.0

流程:浸泡-刷洗和烘干-浸酸-冲洗

要求:清洗后的玻璃器皿干净透明无油迹,水滴不成股流下 具体操作:

新买:5%稀盐酸浸泡过夜1—自来水冲洗—洗洁精刷洗2—自来水冲 洗(晾干或烘干50C)—浸酸(一天一夜)3~4—自来水冲洗25遍 -蒸馏水洗5次-双蒸水洗3次(或再用单蒸水冲洗5次)-干热 灭菌(将温度升至150C后关闭烘箱密闭3h,待冷却至常温)6-待 使用

已用:用后马上浸入洗洁精中浸泡一天7 (带毒应浸入消毒水)—洗 涤剂刷洗后自来水冲洗(晾干或烘干 50C)—浸酸(一天一夜)— 自来水冲洗25遍-蒸馏水洗5次-双蒸水洗3次(或再用单蒸水冲 洗5次)-干热灭菌(将温度升至150C后关闭烘箱密闭3h,待冷 却至常温)-待使用

1. 新的初次使用的玻璃器皿,在生产及运输过程中,玻璃表面带有大量的干固的灰尘,且 玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等 ,用5%稀盐酸液浸泡过夜,以中和其中 的碱性物质

2. 刷洗要适度,过度会损害器皿表面光泽度

3. 清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用,而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。浸泡时器 皿要充满清洁液,勿留气泡或器皿露出清洁液面 4.

浸泡时间:一般为过夜,不应少于 6小时

5. 最好用洗涤装置如用手工操作需流水冲洗十次以上,每次水须灌满及倒干净,然后用蒸 馏水清洗3-5次,晾干(或烘干)备用

6. 或高压蒸汽灭菌(湿热法),容器水分烘干-牛皮纸包内、报纸包外将容器口扎紧- 121 C, 30min高压灭菌—待使用

7. 用后立即浸入水中,要求完全浸入,不能留有气泡或浮在液面

2、塑料类

具体操作:

新买:一次性无菌塑料制品打开包装即可使用

已用:用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡 3小时后刷洗(用纱布或 棉签)—自来水冲洗—5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸 2~3次 (10min/次)-包装烘干(50C)-待使用

3、橡胶类 具体操作: 新买/已用:用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡 3小

时后刷洗(用纱 布或棉签)T自来水冲洗T 5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸

2~3次

10min/次)—包装烘干(50C)—待使用

4、 镊子、剪刀

具体操作:

洗涤剂刷洗—自来水冲洗5~6次—75%医用酒精浸泡3小时—酒精 棉球1擦拭—待使用 注意 : 1.酒精棉球应用双蒸水配置

5、 不锈钢除菌滤器

具体操作:

洗涤剂刷洗滤器—流水冲洗15min—蒸馏水冲洗2~3次(或浸泡 24h)—三蒸水冲洗2~3次(或24小时)—干燥—备用

6、 金属滤网

具体操作:

自来水冲洗—蒸馏水冲洗—三蒸水冲洗—干燥—备用

二、消毒

1•紫外线:用于空气,操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培 养器

皿。消毒时间:30~60min (至少)

2. 高压蒸气灭菌法(湿热):15磅,121C, 20min

培养用液、橡胶制品 布类、玻璃制品、金属器械等

10磅lOmin 15磅20min

3. 干烤:160C, 2h (适用于玻璃器皿等)

注意:消毒后不要立即打开箱门,以防止冷空气骤然进入引起玻璃炸裂,影响消毒效

果。

4.75%酒精:主要用于操作者的皮肤,操作台表面及无菌室内的壁面 处理,

一般要求为70%~75%的乙醇,用蒸馏水配制

5.抗生素:主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。

常用的抗生素:青霉素(浓度是1OO^gml)

链霉素(100卩/ml)

附酸液配制:

酸液配制:重铬酸钾(g):浓硫酸(ml):蒸馏水(ml)

强清洁液 63: 1000 : 200 次强清洗液 120: 200: 1000 弱清洁液(常用) 100 : 100 : 1000

(危险!请勿单独配制此溶液)

具体以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下操作: 1.先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水 8000ml,

2称取1000g重铬酸钾,用玻璃棒搅拌直至溶解(可加热以辅助溶 解), 3.待重铬酸钾液冷却后,缓慢加入 1000ml浓硫酸,边加边用玻璃棒 搅动,

以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。 4•配好后倒入洗液缸中备用。 要求:

1新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过久,清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时,应弃 去(深埋地下),配制新的。

2配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口,一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸 塑料制品。 1•配制时应注意安全,须穿戴耐酸手套和围裙,并要保护好面部及身体裸露部分

2•配制过程中可使重铬酸钾溶于水中,然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌,使产 生的热量挥发, 3•配制溶液应选择塑料制品 4•配成后清洁液一般为棕红色

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