第２卷增刊１ ２０１２年９月 中国无机分析化学 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏ１．２，Ｓｕｐｐ１．１ ３８，～３９ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－１０３５．２０１２．ｚ１．０１７ 离子色谱法测定尿液中磷酸类物质 何世伟 张婷婷。 叶明立。 梁立娜。 （１浙江大学化学系，杭州３１００２８；２赛默飞世尔科技有限公司上海实验室，上海２０１２０３） 摘 要 采用阴离子交换色谱柱ＩｏｎＰａｃ ＡＳ１６，以梯度变化的氢氧化钾作为淋洗液，流速１．０ ｍＩ ／ｍｉｎ， 抑制电导检测，快速、方便地测定了尿液中磷酸性尿结石抑制物——焦磷酸和植酸的含量。方法在 ０．Ｏ１～５．Ｏ０ ｍｇ／Ｌ范围内线性关系良好，回归方程的线性相关系数为０．９９９ ８，实际样品的加标回收率 在９６．０ ～１０２．０ ，结果令人满意。 关键词 离子色谱；焦磷酸；植酸；尿液 中图分类号：０６５７．７ ５；ＴＨ８３３ 文献标识码：Ａ 文章编号：２０９５—１０３５（２０１２）ｓｏ一００３８—０２ １ 前言 人体的尿液中含有一定量的焦磷酸和植酸，研 究发现其在尿液中的含量可作为一些疾病的预测指 示，如结石患者尿液中这两种物质的含量就偏低，因 萃取小柱后待测。 ３结果与讨论 ３．１离子色谱条件的选择 比较了文献中提到的测定植酸的离子色谱方 法，一种是在特殊阴离子交换色谱柱上，采用在线柱 后衍生紫外检测的方法进行测定，由于尿液样品中 此能准确测定尿液中焦磷酸和植酸的含量在临床的 检验中具有一定的参考价值 ］。采用离子色谱＿２。］ 的方法对尿液中的这两种磷酸性结石抑制物进行测 定，结果满意。 杂质较多，影响了植酸的测定；另一种采用ＫＯＨ梯 度洗脱的方法进行植酸的测定，植酸结构中含有６ 个磷酸根，在ＫＯＨ梯度淋洗条件下保留时间较长， 受到杂质干扰因素较少，因此选择ＫＯＨ洗脱方法。 ３．２ ＫＯＨ梯度分离条件的优化 ２ 实验部分 ２．１仪器、试剂与材料 ＩＣＳ一２１００离子色谱仪，Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ工作站（赛 默飞世尔科技有限公司），ＥＧＣ—ＫＯＨ在线淋洗液发 生器。超纯水（电阻率≥１８．２ ＭＱ・ｃｍ），焦磷酸和 植酸标准样品（Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ）。 ２．２色谱条件 植酸的６磷酸结构使其在阴离子交换色谱柱上 有较强的保留，因此选择柱容量相对较低的Ｉｏｎ Ｐａｃ ＡＳ１６作为分析柱，在此色谱柱上优化了ＫＯＨ的梯 度变化条件，当ＫｏＨ浓度变化条件如表１所示时， 焦磷酸、植酸和其它磷酸类物质以及样品中的杂质 分离得很好，不影响两种物质的定量分析（图１）。 表１ 时间和淋洗液浓度 时间／ｍｉｎ ＫＯＨ浓度／（ｍｍｏｌ・Ｌ ） 分析柱为ＩｏｎＰａｃ ＡＳ１６，流动相为ＫＯＨ为淋洗 液。ＫＯＨ梯度淋洗：０～７ ｒａｉｎ，３０ ｍｍｏｌ／Ｌ；７～ ２５ ｍｉｎ，３０～６５ ｍｍｏｌ／Ｌ；２５～３２ ｍｉｎ，６５ ｍｍｏｌ／Ｌ； ３２～３６ ｍｉｎ，３Ｏ ｍｍｏｌ／Ｌ。流速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，检测 方式为抑制型电导检测器，柱温３ｏ℃，进样体积 ２５ ｕＬ。 ２．３样品的制备与分析 准确移取５．０ ｍＬ尿液，用超纯水稀释２倍，将 样品溶液过０．２２ ｍ的滤膜和ＯｎＧｕａｒｄ ＲＰ固相 收稿日期：２０１２ ０７—１２ 修回日期：２０１２—０８ ０６ 作者简介：何世伟，男，工程师，主要从事离子色谱分离应用研究。Ｅｍａｉｌ：ｔｉｎｇｔｉｎｇ．ｚｈａｎｇ＠ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ＣＯＩｎ 增刊１ 何世伟等：离子色谱法测定尿液中磷酸类物质 ３９ 毒 曲 脚 图１ 焦磷酸和植酸的色谱图 ３．３ 方法的检出限、定量限和线性范围 在最优色谱条件下进行测定，以待测物的平均 色谱峰面积对其在溶液中的含量进行线性回归，焦 磷酸和植酸在０．０１～５ ｍｇ／Ｌ范围内具有良好的线 性，相关系数为０．９９９ ８。依据色谱峰的３倍信噪 比，得到焦磷酸和植酸的检出限（ＬＯＤ）和定量限 （Ｌ０Ｑ）分别为０．００３ ｍｇ／Ｌ和０．０１０ ｍｇ／Ｌ。 ３．４样品测定 用２．３节方法对尿液样品进行前处理，按２．２ 节色谱条件进行测定，外标法定量，重复进样１１次， 其中尿液样品中焦磷酸和植酸的加标回收率和相对 标准偏差较好。回收率范围为９６．０ ～１０２．０ ， 结果见表２。 ４ 结论 采用离子色谱法测定了尿液中焦磷酸和植酸的 含量，方法简单，测定结果满足要求。 表２尿液中焦磷酸和植酸的加标回收率 及其相对标准偏差（Ｈ＝１１） 参考文献 ［１］Ｍｕｎｏｚ Ｊｏｓｅ Ａ，Ｍｏｎｔｓｅｒｒａｔ Ｌ６ｐｅｚ—Ｍｅｓａｓ，Ｍａｎｕｅｌ Ｖａｌｉ— ｅｎｔｅ．Ｍｉｎｉｍｕｍ ｈａｎｄｌｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｕｒｏｌｉｔｈｉａｓｉｓ（ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｎｄ ｐｈｙｔｉｃ ａｃｉｄ）ｉｎ ｕｒｉｎｅ ｈｙ ＳＰＥ－ＩＣＰ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ［Ｊ］． Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２０１０，３８（４）：２０４—２０８． Ｅ２］张嘉捷，朱岩．柱后衍生离子色谱法分析米粉中植 酸［Ｊ］．浙江大学学报：理学版，２００５，３２（２）：２０１—２０３． ［３］ＣｈｉｅｒａｌＪｏｓｅｐｈ Ｍ，Ｆｉｎｅｒ Ｊｏｈｎ Ｊ，Ｇｒａｂａｕ Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ Ａ．Ｅｃｔｏｐｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｈｙｔａｓｅ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ＥＪ］．Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，５６：８９５—９０４．
