HPLC测定净石灵片中淫羊藿苷的含量

HPLC测定净石灵片中淫羊藿苷的含量

【摘要】 目的 建立HPLC测定净石灵片中淫羊藿苷的含量的方法。方法 选用C

18(Φ4.6×250 mm，5μ)色谱柱；流动相：乙腈水(30：70)；流速：1.0 ml/min；

检测波长为270 nm。结果 淫羊藿苷进样量在0.3224~1.6120 μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系。结论 本法虽然有些耗时，但测定结果准确，适用于净石灵片中淫羊藿苷含量的测定。

【Abstract】 Objective HPLC determination ofjing shi lingtablet of icariin in.Methods C 18(4.6 × Φ 250 mm,5 μ)chromatography,mobile phase,acetonitrilewater(30:70), velocity:1.0 ml/min, detection wavelength for 270 nm.Results Icariin injection volume in 0.3224~1.6120 μg range,peak area and sampling rate was good linear relationship.Conclusion Although some of this timeconsuming,but the determination of results in a jing shi ling tablet of icariin.

【Key words】 HPLC; Jing shi ling tablet; Icariin

本品是由广金钱草、黄芪、淫羊藿、茯苓等十七味药材组成，主治症为肾虚引起的石淋、砂淋，淫羊藿为方中主药，起着至关重要的作用，其含量的多少关系着药品的疗效，故本品采用测定淫羊藿苷的含量以控制药品的质量。

1 方法

1.1 仪器与试药 岛津LC10A高效液相色谱仪(日本)；SPD10A检测器；淫羊藿苷对照品，(批号：07399709)，购自中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件的选择 色谱柱：KromonsilC

18(Φ4.6×250 mm，5μ)；流动

相：乙腈水(30：70)；流速：1.0 ml/min；检测波长为270 nm。

在选定条件下淫羊藿苷和样品中其他组分可基线分离。按淫羊藿苷峰计算，理论板数(N)为14000以上，参考药典中的有关规定，理论板数按淫羊藿苷峰计算，应不低于3000。测定波长的选择：取淫羊藿苷对照品加甲醇溶解并配制成适宜浓度的溶液，在UV2401PC紫外可见分光光度计上，于190~400 nm有最大吸收。参考《中国药典》中淫羊藿苷测定波长，故选择检测波长为270 nm。

1.3 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，即得。

1.4 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，研细，取1 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流5 h，提取液蒸干，残渣加水20 ml使

溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 ml，弃去乙醚液，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20 ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5 ml使溶解，通过已处理好的D101大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，长15 cm)，用水70 ml洗脱，弃去水液，再用70%乙醇180 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

1.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2 方法学考察

2.1 线性关系考察 标准曲线、回归方程、相关系数、线性范围精密吸取对照品溶液(80.6 μg/ml)4 μl、8 μl、12 μl、16 μl、20 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=(3.868e+0.2)X+(23066.658)，相关系数r=0.9998。结果表明，淫羊藿苷进样量在0.3224~1.6120 μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系，见附图1(图略)。

2.2 空白试验 取不含淫羊藿的阴性对照品与供试品溶液同法制备阴性对照品溶液。照高效液相色谱法试验，阴性对照色谱中，在与淫羊藿苷对照品相应的保留时间处无色谱峰，表明阴性对照无干扰，见附图2(图略)。

2.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，照质量标准草案方法分别于0、7、12、17、24 h进样测定淫羊藿苷峰面积积分值，结果分别为406714.0、403525.0、405710.0、401493.0、407532.0，平均值为404994.8，RSD=0.61%。试验结果表明淫羊藿苷含量在24 h内稳定性好。

2.4 精密度试验 取同一供试品溶液，照质量标准方法连续进样5次，测定峰面积，进行精密度试验，结果测得淫羊藿苷峰面积积分值分别为：406714.0、401132.0、409738.0、403317.0、405291.0。平均值为405238.4，RSD=0.81%。结果表明：精密度良好。

2.5 重现性试验 取同一批号供试品依法独立测定5次，测定结果为平均值X=1.89 mg/g，RSD=1.2%。结果表明：重现性良好。

2.6 回收率试验 精密称取已知含量的样品(含量0.89 mg/片)五份，每份约1.5 g，精密称定，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.42 mg/ml)5 ml，照质量标准草案方法测定含量，计算加样回收率，测定结果为:加样回收率平均值X=98.62%，RSD=0.8%。结果表明:回收率较高。

3 样品测定

依法测定样品三批，测定结果见表1。

测定结果显示，以陕西购进淫羊藿药材较好，并以本结果作为投料量参考值。

5 讨论

5.1 取本品5 g，二份，分别以甲醇超声提取和本法所述方法提取。淫羊藿苷测定结果表明，以正文所述方法提取效果较好。

5.2 本方中脂溶性成份含量较多，为减少脂溶性成份的干扰及对色谱柱的污染，先用乙醚脱脂后，分别以正丁醇和醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加甲醇0.5 ml使溶解。醋酸乙酯提取液中检出淫羊藿苷，但未达到基线分离；正丁醇提取液检出淫羊藿苷，也未达到基线分离。故采用D101大孔吸附树脂柱处理，用水洗脱，弃去水液，再用70%乙醇洗脱，可使淫羊藿苷达到基线分离。检验结果表明，采用本法所述方法可使淫羊藿苷提取完全并达到基线分离。

参 考 文 献

［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.一部,2000.

［2］ 姜 宁，刘晓鹏.淫羊藿中淫羊藿苷的快速提取及测定研究.中华中医药杂志，2008，23(1)：64.

［3］ 陈建平，廖和莲.RPHPLC法测定参龙补肾胶囊中淫羊藿苷的含量.中国药事，2007，21(2)：105.