第１３期 张彦青：分光光度法测定水样中孔雀石绿含量 ・６５・ 分光光度法测定水样中孔雀石绿含量 张彦青 （衡水学院化工学院，河北衡水０５３０００） 摘要：为了确保饮水和食品的卫生安全，孔雀石绿成为近年来水体污染和食用水产品卫生安全重点监控的有机污染物。因此，寻 找一种具有操作简单、快速、费用低、对环境友好等优点的检测方法有着很重要的现实意义。所用水样通过对甲醇、乙醇、乙腈、四 氢呋哺四种分散剂和二氯甲烷、四氯化碳、溴乙烷三种萃取剂进行优化选择，并对萃取时间和离心时闾进行选择得到最佳时间，进 而对水样中孔雀石绿的含量进行检测。在优化的萃取条件下，测得方法的线性范围为４～１ｌＯ０￣ｇ／Ｌ。对水样中孔雀石绿进行测 定，加标回收率在９５．９％～１０５．６％之间。因此，分散液液微萃取一分光光度法可用于环境水样中痕量孔雀石绿含量的测定。 关键词：孔雀石绿；水样；分散液液微萃取；分光光度法 中图分类号：０６５７．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８—０２１ｘ（２０１５）１３一ｏ０６５一ｏ３ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｍａｌａｃｈｉｔｅ Ｇｒｅｅｎ ｉｎ Ｗａｔｅｒ Ｓａｍｐｌｅｓ Ｚｈａｎｇ Ｙａｎｑｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｈｅｎｇｓｈｕｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｎｇｓｈｕｉ ０５３０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｎｓｕｒｅ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｆｏｏｄ，ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ｈａｓ ｂｅｃｏｍｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ ｗｈｉｃｈ ａｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ ｂｙ ｗａｔｅｒ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｄｉｂｌｅ ａｑｕａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ．Ｓｏ ｆｉｎｄｉｎｇ ａ ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ｌｏｗ ｃｏｓｔ，ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆｒｉｅｎｄｌｉｎｅｓｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ．Ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ａｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ｉｎ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ，ｅｔｈａｎｏｌ，ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ，ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒｎ ａｆｏｕｒ ｄｉｓｐｅｒｓａｎｔｓ ａｎｄ ｍ￣ｔｈｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｖｉｄｅ ａｎｄ ｂｒｏｍｏｅｔｈａｎｅ ｔｈｒｅｅ ｅｘｔｒａｃｔａｎｔｓ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ ｉｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｔｉｍｅ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ ｈｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｉｓ ４—１ １００ Ｌ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｉｏｎｓ．Ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｅｔｅｒｍｉｔｎｉｎｇ ｔｈｅ ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ｉｎ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ，ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｎｇｅ ｉｓ ９５．９％一１０５．６％．Ｓｏ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ ｉｎ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗｉｔｈ ｄｉｓｐｅｒｓｉｖｅ ｌｉｑｕｉｄ—ｌｉｑｕｉｄ ｍｉｃｒｏｅｘｔｒａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｍａｌａｃｈｉｔｅ ｇｒｅｅｎ；ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ；ＤＬＬＭＥ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ 近年来，随着水产养殖规模的扩大，养殖鱼业泛滥的现 象比较严重。孔雀石绿最早被发现于英国食品标准局对鲑 厂）；ＦＡ２２０４Ｂ电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。 孔雀石绿（北京化工厂）；甲醇（天津市大茂化学试剂 厂）；二氯甲烷（天津基准化学试剂有限公司），所有试剂均 为分析纯；实验用水为蒸馏水。 鱼体内成分的检测。之后，我国媒体也开展了调查，得出如 下结论：我国很多地方诸如河南和湖北等地的水产养殖业和 水产品贩运中，孑Ｌ雀石绿仍在普遍使用。据重庆市执法部门 称，他们在某水产交易市场执法查获了６００多只甲鱼，均含 有孔雀石绿；另有一些地区在鳗鱼制品中检出孔雀石绿。孔 雀石绿成为继瘦肉精、高毒农药、增白剂、保鲜剂、假酒、地沟 油、苏丹红之后，又一食品安全重大事件。 １．２ 实验方法 １．２．１标准溶液的配制 准确称取０．００５０ ｇ孔雀石绿颗粒置于烧杯中，用蒸馏水 溶解，转移至２５０ ｍＬ容量瓶中用蒸馏水定容，摇匀，得到质 量浓度为０．０２ ｇ／Ｌ的储备液。移取５ ｍＬ储备液转移至５００ ｍＬ容量瓶，定容至刻线，摇匀，得到２００ Ｌ质量浓度的孔 目前，高校分析实验室对孔雀石绿的检测方法主要是高 效液相色谱法（ＨＰＬＣ） －３１、分光光度法 Ｊ、气相色谱一质 谱法（Ｇｃ—Ｍｓ） 等，但除了分光光度法以外，其余方法或费 时费力，或成本不菲，或对实验操作人员及环境要求较高，很 难广泛应用。因此，寻找一种具有操作简单、快速、费用低、对 环境友好等优点的检测方法有着十分重要的现实意义。 雀石绿标准溶液，待用。 １．２．２实验条件的选择 １．２．２．１最大吸收波长 移取５ ｍＬ２００ ｇ／Ｌ孔雀石绿标准溶液于１０ ｍＬ锥形玻 璃离心管内，用注射器将２２０ ｔｘＬ二氯甲烷和１．５ ｍＬ甲醇快 速注入离心管中，震荡，静置２ｍｉｎ，放人离心机进行离心分 离，设置转速为３０００ ｒ／ｍｉｎ，离心时间为５ｍｉｎ。在４００—７００ ｎｍ范围内扫描，试剂空白不干扰测定。 １．２．２．２微萃取条件的优化 ｌ 实验部分 １．１ 仪器和试剂 ＴＵ一１９０１双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用 仪器有限责任公司）；８０—２离心机（上海浦东物理光学仪器 收稿日期：２０１５—０４—２１ 基金项目：河北省科技计划自筹经费项目（１３２２７５２８） 作者简介：张彦青（１９８２一），女，河北衡水人，讲师，主要从事分析光谱研究。 山・东化工 ６６・ ＳＨＡＮＤＯＮＧ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＩＮＤＵＳＴＲＹ ２０１５年第４４卷 （１）分散剂和萃取剂的优化。移取５ ｍＬ ２００ ／Ｌ孔雀 石绿标准溶液分别置于ｌ２支１０ ｍＬ锥形玻璃离心管内，再 分别加入１．５ ｍＬ的四种分散剂甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃 ２所示，在相同的条件下以二氯甲烷作为萃取剂、甲醇作为分 散剂时吸光度最高，所以实验选择萃取剂为二氯甲烷、分散 剂为甲醇。 中的一种和２２０ 三种萃取剂二氯甲烷、四氯化碳、溴乙烷 中的一种混合液快速注入离心管中，震荡，溶液形成乳浊体 系且较长时间不消失，静置２ｍｉｎ，以３０００ ｒ／ｍｉｎ的转速离心 ５ｍｉｎ，离心管底部形成有机相。用１００ 结果如图２所示。 （２）分散剂用量的优化。移取５ｍＬ ２００ Ｌ孔雀石绿 微量进样器抽取 下层有机相置于微量比色皿中，于６２５ ｎｎｌ处测定吸光度。 标准溶液于１０ ｍＬ锥形玻璃离心管内，用注射器将２２０ 萃取剂二氯甲烷分别和０．５、１．０、１．５、２．０、２．５ ｍＬ甲醇的混 合液快速注入离心管中，溶液形成乳浊体系且较长时间不消 失，静置２ｒａｉｎ，以３０００ ｒ／ｍｉｎ的转速离心５ｒａｉｎ，离心管底部 形成有机相。用ＩＯ０￣Ｌ微量进样器抽取下层有机相置于微 量比色皿中，于６２５ ｎｍ处测定吸光度。结果如图３所示。 （３）萃取剂用量的优化。移取５ ｍＬ ２００ Ｌ孔雀石绿 标准溶液于ｌＯｍＬ锥形玻璃离心管内，用注射器将１．５ ｍＬ甲 醇分别和１２０、１７０、２２０、２７０、３２０ 二氯甲烷的混合液快速 注入离心管中，溶液形成乳浊体系且较长时间不消失，静置 ２ｒａｉｎ，以３０００ ｒ／ｍｉｎ的转速离心５ｒａｉｎ，离心管底部形成有机 相。用１００ 微量进样器抽取下层有机相置于微量比色皿 中，于６２５ ｎｍ处测定吸光度。结果如图４所示。 （４）萃取时间的优化。移取５ ｍＬ ２００ ｇ／Ｌ孔雀石绿标 准溶液于１０ ｍＬ锥形玻璃离心管内，用注射器将１．５ ｍＬ甲 醇分别和２２０￣Ｌ二氯甲烷的混合液快速注人离心管中，溶液 形成乳浊体系且较长时间不消失，分别静置０…２ ４ ６、８ｍｉｎ 后，以３０００ ｒ／ｒａｉｎ的转速离心５ｍｉｎ，离心管底部形成有机相。 用１００ 微量进样器抽取下层有机相置于微量比色皿中， 于６２５ ｎｌｎ处测定吸光度。结果如图５所示。 （５）离心时间的优化。移取５ｍＬ ２００ Ｌ孔雀石绿标 准溶液于ｌＯｍＬ锥形玻璃离心管内，用注射器将１．５ ｍＬ甲醇 分别和２２０￣Ｌ二氯甲烷的混合液快速注入离心管中，溶液形 成乳浊体系且较长时间不消失，静置２ｒａｉｎ，以３０００ ｒ／ｒａｉｎ的 转速分别离心２…５ ８ １１、１４ｍｉｎ，离心管底部形成有机相。用 １００ 微量进样器抽取下层有机相置于微量比色皿中，于 ６２５ ｎｌｎ处测定吸光度。结果如图６所示。 ２结果与讨论 ２．１ 最大吸收波长的确定 经分析得到，孔雀石绿的最大吸收波长６２５ ｎｍ处，即出 峰位置。如图１所示。 ｌ睦长，ｎｍ 图１ 孔雀石绿的吸收光谱图 ２．２分散剂与萃取剂的确定 考察了四氯化碳、二氯甲烷、溴乙烷３种萃取剂及甲醇、 乙腈、丙酮和乙醇４种分散剂对萃取效率的影响。结果如图 分散剂一 取剂 图２不同分散剂一萃取剂对吸光度的影响 ２．３分散剂与萃取剂用量的确定 由图３、４表明固定甲醇体积不变的情况下，改变二氯甲 烷用量，１２０、１７０、２２０、２７０、３２０￣Ｌ，当二氯甲烷用量逐渐增大 时，吸光度增大，在２２０ 时达到最大，但进一步增加二氯 甲烷用量，吸光度又会下降。进而固定二氯甲烷用量为２２０ 的情况下，改变甲醇用量，０．５、１．０、１．５、２．０、２．５ ｍＬ，随 着甲醇含量的增加，萃取效果也改善，１．５ ｍＬ时萃取效果最 好，但甲醇用量继续增加，萃取效果又会降低。因此确定甲 醇用量为１．５ ｍＬ，二氯甲烷用量为２２０ 。 图３不同剂量的甲醇溶液对吸光度的影响 《 氯甲烷／ｌｌＬ 图４不同剂量的二氯甲烷溶液对吸光度的影响 第１３期 张彦青：分光光度法测定水样中孔雀石绿含量 ・６７・ ２．４ 萃取时间和离心时间的确定 由图５、６表明，萃取效率随着萃取时间的增加先升高后 减少，当萃取时间为２ｍｉｎ，离心５ｍｉｎ时候效果最佳，故选用 萃取时间为２ｍｉｎ，离心时间为５ｎｌｉｎ。 以孔雀石绿标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐 标，绘制标准曲线，如图７所示。线性方程为Ａ＝０．０００９７５ Ｃ＋０．３３６５４，线性范围为４～１ＩＯ０￣Ｌ，相关系数ｒ＝ ０．９９９５３。 ２．６水样中孔雀石绿含量的测定 应用实验方法测定本地区水样。取５ ｍＬ水样于离心管 中，加入１．５ ｍＬ甲醇和２２０ 二氯甲烷，震荡，静置２ｍｉｎ， 以３０００ ｒ／ｍｉｎ的转速离心５ｍｉｎ，然后取用下层有机相进行测 定。并对所测水样进行加标回收实验，计算相对标准偏差和 回收率。结果如表１所示。 表ｌ水样中孔雀石绿含量的测定ｎ＝６） 图５ 不同萃取时间对吸光度的影响 参考文献 ［１］高华鹏，李永夫，沈维军，等．高效液相色谱一串联质 谱联用测定鳗鱼中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残 留量［Ｊ］．理化检验（化学分册），２００８，４４（２）： ｌ０３—１０６． ［２］张莉，文红，王红．高效液相色谱法测定鱼类产品 中孔雀石绿及无色孔雀石绿的残留［Ｊ］．中国卫生检验杂 志，２００５，１５（１２）：１４８３—１４８４． 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ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｈｒｏｍｉｕｍ ＶＩ ｏｎ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ （本文文献格式：方邢有，邵秋荣，马 青，等．食品接触材料 有机涂层中六价铬溶出量测试［Ｊ］．山东化工，２０１５，４４（１３）： ６３—６４，６７．） ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ａｐｐｌ
