ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵＡＮＧＸ ＭＥＤＩＣＡＬ ＵＮＩＩ ＶＥＲＳＩＴＹ Ｉ广 西 医 科大 学 学 报 ２。１７ Ｍ 。ａｙ；３４（５） ・ ６９５ ・ 青蒿琥酯对增生性瘢痕成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响 李５３００２１） 战 ，农晓琳 黎丁菱 ，李佳荃 ，（１．广西医科大学附属口腔医院口腔颌面外科，南宁 ５３００２１；２．广西医科大学医学科学实验中心，南宁 摘要 目的：研究青蒿琥酯（ＡＲＴ）对增生性瘢痕来源的成纤维细胞（ＨＦＢｓ）的Ⅲ型胶原（ＣＯＬＩＩＩ）蛋白表达的影响。方法：原代 培养人ＨＦＢｓ，分为空白对照组和ＡＲＴ干预组（分别用７５ Ｆｍｏｌ／Ｌ、１５０ Ｆｍｏｌ／Ｌ、３００／ｌｍｏｌ／Ｌ、６００ Ｆｍｏｌ／Ｌ ＡＲＴ干预２４ ｈ），荧 光定量ＰＣＲ（ｑ－ＰＣＲ）法检测Ⅲ型前胶原 １链（ｐｒｏＣＯＬ３Ａ１）的基因转录情况，ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测ＣＯＬＩＩＩ蛋白的表达，酶联 免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测基质金属蛋白酶１（ＭＭＰ一１）的含量。结果：与空白对照组比较，ＡＲＴ干预组的ｐｒｏＣＯ・Ｌ３Ａ１ ｍＲ— ＮＡ相对表达量明显降低，且不同浓度ＡＲＴ组间比较差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０１）。ＡＲＴ干预组ＣＯＬＩｌｌ蛋白表达水平明显 下降，细胞培养上清液中ＭＭＰ一１含量明显升高，且各浓度组间两两比较差异均有统计学意义（均Ｐ＜ｏ．０５或Ｐ＜Ｏ．０１）。结 论：ＡＲＴ能抑制人ＨＦＢｓ的ＣＯＬＩＩＩ的基因转录和蛋白水平，同时促进ＭＭＰ一１分泌增加，加速胶原降解，抑制细胞外基质沉积， 这可能是ＡＲＴ治疗增生性瘢痕的机制之一。 关键词增生性瘢痕；成纤维细胞；青蒿琥酯；Ⅲ型胶原；基质金属蛋白酶１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５—９３０Ｘ（２０１７）０５—０６９５－０３ 中图分类号：Ｒ２８５ Ｄ０Ｉ：１０．１６１９０／ｊ．ｃｎｋｉ．４５—１２１１／ｒ．２０１７．０５．０１４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅⅢｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ Ｌｉ Ｚｈａｎ ，Ｎｏｎｇ Ｘｉａｏｌｉｎ ，Ｌｉ Ｄｉｎｇｌｉｎｇ ，Ｌｉ Ｊｉａｑｕａｎ ．（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒａｌ ａｎｄ Ｍａｘｉｌｌｏｆａｃｉａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｔｈｅ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｈｏｏ１ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３００２１，Ｃｈｉｎａ；２． Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｍｅｄｉｃａ１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３００２１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ（ＡＲＴ）ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ （ＣＯＬⅢ）ｉｎ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＨＦＢｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＨＦＢｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｏｆ ｈｙ— ｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（７５，１５Ｏ，３Ｏ０ ａｎｄ ６００／￣ｍｏｌ／Ｌ）ｏｆ ＡＲＴ ｆｏｒ ２４ ｈ．Ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏＣＯＬ３Ａ１ ｗ３ｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ（ｑ—ＰＣＲ）．Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＯＬⅢｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＭＭＰ）１ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ ｗａｓ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ—ｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｐｒｏ— ＣＯＬ３Ａ１ ｍＲＮＡ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｔｈｅ ＣＯＬ Ｉｌｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １ｅｖｅｌ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ＭＭＰ一１ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ＡＲＴ ｇｒｏｕｐｓ ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜ ０．Ｏ１）．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ａｂｏｖｅ ｉｎｄｅｘｅｓ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＡＲＴ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ ＜Ｏ．０５ ｏｒ Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＡＲＴ ｍａｙ ｈａｖｅ ａ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｃｈａ— ｎｉｓｍｓ ｍａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一１ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＯＬ ｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒ；ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ；ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ；ｔｙｐｅ［ＩＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ；ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌ１ｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ一１ 皮肤增生性瘢痕是临床上常见的疾病之一，常 可不同程度地影响患者的容貌和功能，处理棘手。 在创伤愈合过程中，由多种原因所致，以成纤维细胞 为主的细胞成分增殖过度、以胶原为主的细胞外基 衍生物，临床广泛应用于治疗疟疾，近年来研究表明 其还具有抗肿瘤、抗纤维化等作用 刮。本研究通过 体外培养人皮肤增生性瘢痕标本的成纤维细胞，使 用ＡＲＴ干预，检测Ⅲ型胶原（Ｃ０Ｌｍ）及其降解因 子基质金属蛋白酶１（ＭＭＰ一１）的表达，以期为开发 质沉积过多，则可导致增生性瘢痕的形成Ｉ１］。青蒿 琥酯（ＡＲＴ）是由广西优势药材青蒿合成的水溶性 ＊基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．８１０６０１５６）； 广西自然科学基金资助项目（Ｎｏ．桂科青０４４７０３３）；广西科 学研究与技术开发计划资助项目（Ｎｏ．桂科能１４１２３００６—２）； 治疗瘢痕增生的中药提供理论依据。 １材料与方法 １．１主要试剂 ＡＲＴ（桂林南药公司）；ＤＭＥＭ培 养基、胎牛血清（美国Ｇｉｂｃｏ公司）；１ ０００ Ｕ／ｍＬ青 霉素一１ ０００ ｍｇ／Ｌ链霉素双抗、０．２５ 胰蛋白酶一 ＥＤＴＡ（北京碧云天公司）；ＲＮＡｉｓｏ Ｐｌｕｓ、逆转录试 广西中医药科技专项重点课题（Ｎｏ．ＧＺＫＺ１０—０１０） △通信作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｎｏｎｇ＠ｇｘｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 收稿日期：２Ｏ１７－０ｌ一２４ ・ ６９６ ・ 剂盒、ＰＣＲ试剂盒（口本Ｔａｋａｒａ公司）；兔抗人Ｃ（）Ｉ Ⅲ多克隆抗体（美国Ｎ（）ＶＵＳ公司）；鼠抗人Ｂ—ａｃｔｉｎ 单克隆抗体（上海康成生物Ｔ程有限公司）；ＭＭＰ １ 酶联免疫吸附试验（Ｅｌ ＩＳＡ）试剂盒（武汉博十德生 物Ｔ程有限公司）。 １．２标本来源 标本均来源丁广西医科大学第一 附属医院烧伤整形外科手术切除的增生性瘢痕（临 床及病理证实），病程３～６个月。纳入标准为近 ２年内未接受瘢痕治疗，无系统疾病者，取材前经患 者及其家属知情同意。 １．３ 原代培养 无菌条件下切取手术部位增生瘢 痕组织，组织块法进行原代培养。待细胞爬满瓶底 ３／４后，以０．２５ 胰蛋白酶一ＥＤＴＡ消化液消化，小 心仔细吹打使细胞脱壁，分瓶培养。反复传代过程 中不断纯化成纤维细胞，采用第３～５代细胞进行干 预。按５×１０ 个细胞／ｍＩ 接种于２５ ｃｍ：培养瓶中， 培养２４ ｈ后，实验共分５组：空白对照组为不含 ＡＲＴ的培养基，ＡＲＴ干预组为分别含７５／ｘｍｏｌ／Ｉ 、 １ ５０ ｆｌｍｏｌ／Ｉ 、３００ ｆｍｍｌ／Ｉ 、６００／，ｏｔｏｌ／Ｉ ＡＲＴ的培养 基，干预时问为２４ ｈ。 １．４实时荧光定量ＰＣＲ（ｑ－ＰＣＲ）测定Ⅲ型前胶原 ＆１链（ｐｒｏＣ（）Ｉ ３Ａ１）ｍＲＮＡ相对表达量 提取细胞 总ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ后进行ＰＣＲ扩增反应， ＰＣＲ反应条件：９５℃预变件３０ Ｓ，９５℃变性５ Ｓ， ６Ｏ℃退火、延伸３Ｏ Ｓ，共４０个循环；添加溶解Ｉ掬线。 用２△ 法计算ｐｒｏＣ（）Ｉ ３Ａ１基因的相对表达量。 由Ｔａｋａｒａ公司进行引物设计及合成（以ＧＡＰＩ）Ｈ为 内参），通过ＮＣＢＩ数据库行ＢＩ ＡＳＴ验证引物的特 异性，引物序列见表１。 表１ 基 引物序列 基冈 引物序列 （；ＡＰＤＨ 上游：５’（ （、Ａ【、（、（ Ｔ（、ＡＡ（ （ 【、ＴＧＡＧＡＡ（、３’ 游：５’ＴＧ（ Ｔ（ ＡＡ（；Ａ（、（ 【：【’Ａ（ Ｔ（；（ Ａ ３’ ｐ ｒ（】（、（）Ｉ ３Ａ１｝：游：５’ＡＴＧＡＡＧＧ ＦＧＡＡＩ、 ｌ、ＣＡＡＧＧ４＂Ｉ、（；ＡＡＧ ３ 下游：５’一ＣＣＡ４＂４７ＡＡｌ、Ｇ Ｉ、 ＡＴＡＧＧＧｑ、ＧＣＡＡＴＡ ３’ １．５ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测（：（）Ｉ Ⅲ的蛋白表达 每２５ ｃｍ 细胞加入蛋白裂解液２００ Ｉ ，冰上裂 解细胞３０ ｍｉｎ，离心（１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ，２Ｏ ｍｉｎ）收集总 蛋白，ＢＣＡ法测蛋白含量。进行聚丙烯酰氨凝胶电 泳、转膜，５ 牛奶室温下封闭２ ｈ，一抗（１：５００） ４℃孵育过夜，室温下孵育二抗（１：５ ０００）３０ ｍｉｎ。 ８一ａｃｔｉｎ（１：１０ ０００）作为内参对照。暗拳内进行 ＥＣＩ 化学发光、显影、定影。扫描胶片后使用Ｑｕａｎ— ｔｉｔｙ（）ｎｅ软件分析。 １．６ Ｅｌ ＩＳＡ检测细胞培养上清液中ＭＭＰ １的蛋 白水平 双抗体夹心ＥＩ ＩＳＡ检测上清液中ＭＭＰ １ 的蛋白浓度，具体操作严格按照Ｅｌ ＩＳＡ试剂盒说明 进行。用酶标仪检测４５０ ｎｍ处各孔吸光度（（）Ｄ） 值，根据标准品浓度绘制标准曲线（Ｃｕｒｖｅ Ｅｘｐｅｒｌ 广两医科大学学报２Ｏｌ７ Ｍａｙ；３４（５） １．４），绘制标准曲线，计算各组ＭＭＰ一１蛋白浓度。 １．７统计学方法 采用ＳＰＳＳ １６．０软件进行统汁 学分析，计量资料以均数±标准差（ ± ）表示，多 样本问比较采用完全随机设计单冈素方差分析，组 问两两比较采用ＳＮＫ（，检验，以Ｐ＜０．０５为筹异 具有统汁学意义。 ２ 结 果 ２．１ 细胞原代培养情况 经原代培养５～７ ｄ后， 即可 组织块边缘有长梭状细小贴壁细胞爬ｊｆＩ＇之 后梭形细胞迅速增殖，１ ５～２０ ｄ即可大致长满培养 瓶；经传代后３～５ ｄ可再次进行传代，传代３次后 即可获得较纯的增生性瘢痕成纤维细胞（结果已另 文报道 ）。 ２．２ ＡＲＴ对ｐｒｏＣ（）Ｉ ３Ａ１ ｔｕＲＮＡ表达的影响 各 干预组的ｐｒｏＣＯＩ ３Ａ１ ｍＲＮＡ基因卡Ｈ对表达量均明 显低丁空白对照组，且差异具有统计学意义（Ｐ＜ ０．０１）。其中 ＡＲＴ ７５ ｖｍｏｌ／Ｉ 组和 ＡＲＴ ３００／ｌｍｏｌ／Ｌ组，ＡＲＴ １５０ ｐｔｍｏｌ／Ｌ组与ＡＲＴ ６００／￣ｍｏｌ／Ｉ 组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）， 见表２。 表２ ＡＲ１、对ｐｒｏＣ（）Ｉ ３Ａ１ ｍＲＮＡ表达的影响 （， 一６，、 －± ） 组别 ＲＱ值 空Ｆ１对照组 １．０００ ＡＲＴ ７５ ｆ，ｍｏｌ／Ｉ 组 （）。６０３±０．０３３ ＡＲ～Ｉ ｌ ５０ １１ｔｏｏｌ／１ 组 ０．３５８±０．０２７ ＡＲＴ ３００ ｔｍｍＩ／１ 组 ０．２４１±０．０ｌ５ 、 ＡＲＴ ６００ ｔｍｌｏｌ／Ｌ组 Ｏ．１ ６６±０．０１１ 空白对照组比较， Ｐ＜０．０１；与ＡＲ一１ ７５／ｍｍｌ／ｌ 组比较，‘、Ｐ ｄ０．０１；与ＡＲＴ １５０ ｆ，ｍｏｌ／ｌ 组比较， Ｐ ｄ０．０１。 ２．３ ＡＲＴ对ＣＯｌ ＩＩＩ蛋白表达的影响 各ＡＲＴ十 预组ＣＯｌ Ⅲ蛋白均明 降低，且与窄ｒ｛对照组相比 较差异均有统计学意义（均Ｐ Ｇ０．０１）；且各干预组 之问两两比较，差异均有统计学意义（均Ｐ Ｇ０．０１）， 见图１、表３。 ２ ３ ４ ５ ＣＯＬ一Ⅲ １３８ ｋｕ ４３ ｋｕ ｌ：空 对照组；２：ＡＲＴ ７５ Ｉｌｍｏｌ／Ｉ 组；３：ＡＲＴ １５０ ｔ．￣ｍｏｌ／Ｌ组；４：ＡＲＴ ３００ ｔｚｍｏｌ／Ｉ 组；５：ＡＲＴ ６００／，ｍｏｌ／Ｉ 组。 Ｉ－Ｎ １ ｗｅｓｌｅｒｎ ｂｌｏｌｌｉｎｇ蛋ｎ电泳 ２．４ ＡＲＴ ｘ寸ＭＭＰ一１蛋白水平的影响 随着ＡＲＴ 浓度的增高，细胞分泌ＭＭＰ １逐渐增多，且除ＡＲＴ ７５／，ｍｏｌ／Ｉ 组外，其他各组ＭＭＰ—ｌ含量均较窄白对 李 战，等．青蒿琥酯对增生性瘢痕成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响 照组明显升高（均Ｐ＜０．０１）；各干预组间两两比较， 差异均有统计学意义（均Ｐ＜０．０５），见表４。 表３ ＡＲＴ对ＣＯＬＩ］Ｉ蛋白表达的影响（ 一３， ±ｓ） ・ ６９７ ・ 步研究ＡＲＴ对增生性瘢痕成纤维细胞的ＣＯＬⅢ蛋 白浓度及ＭＭＰ一１的蛋白分泌水平的影响。本研究 发现，ＡＲＴ能下调ｐｒｏＣＯＬ３Ａ１ ｍＲＮＡ的表达（Ｐ ＜Ｏ．０５），且随着ＡＲＴ浓度的上升，ＣＯＬⅢ蛋白蛋 白表达水平显著降低（Ｐ＜０．０５），并呈一定的浓度 依赖性。本研究同时发现，ＡＲＴ作用后，可ＭＭＰ一１ 分泌增加（Ｐ＜０．０５），且随着ＡＲＴ浓度的提高，促 进作用逐渐增强。从而推测ＡＲＴ可通过上调 ４ １ ６ ３ ７ ＭＭＰ～１蛋白分泌，加速ＣｏＬⅢ为代表的细胞外基 Ｏ ２ ９ １ ３ １ １ ２ ■ ● ● 组别 空白对照组ＡＲＴ ７５ ｂｔｍｏｌ／Ｌ组ＡＲＴ １５０ ｕｍｏｌ／Ｌ组ＡＲＴ ３００ Ｆｍｏｌ／Ｌ组ＡＲＴ ６００ ｕｍｏｌ／Ｌ组ＣＯＬＩＵ蛋白 ０．４８８±０．Ｏｌ８ ０．２７６±０．０１０ ０．１９８±０．００７ ０．１１７±０．００８ ０．０１１±０．００２ ‘ ● ６ ８ ２ ８ ７ ● ±质降解，±±＋一＋一进一步减少细胞外基质的沉积。 １ １ １ ２ ３ ● ● ■ ● ● 与空白对照组比较， Ｐ＜０．０１；与ＡＲＴ ７５／￣ｍｏｌ／Ｌ组比较， Ｐ＜０．０１；与ＡＲＴ １５０ ｕｍｏｌ／Ｌ组比较， Ｐ＜Ｏ．０１；与ＡＲＴ ６００ ｆｆｍｏｌ／Ｌ组比较， Ｐ＜Ｏ．０１。 表４ ＡＲＴ对ＭＭＰ一１蛋白水平的影响（ｎ一３，－１７±５） 组别 ＭＭＰ一１蛋白浓度／（ｕｇ／Ｌ） 空白对照组 ＡＲＴ ７５ ｕｍｏｌ／Ｌ组 ＡＲＴ １５０ ｆｆｍｏｌ／Ｉ 组 ＡＲＴ ３００ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ组 ＡＲＴ ６００ ｕｍｏｌ／Ｌ组 与空白对照组比较， Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；与ＡＲＴ ７５ Ｆｍｏｌ／Ｌ组比较， Ｐ＜Ｏ．０５；与ＡＲＴ １５０ ｂｔｍｏｌ／Ｌ组比较， Ｐ＜Ｏ．０５；与ＡＲＴ ６００ ｕｍｏｌ／Ｌ组比较， Ｐ＜０．０５。 ３ 讨 论 瘢痕是损伤组织修复的结果，是临床常见病与 多发病，是医学研究的重要课题之一。研究表明， ７Ｏ 的烧伤患者会发展成为增生性瘢痕ｒ４］。目前常 用治疗措施包括手术切除、硅胶膜制品贴敷、瘢痕内 注射激素类药物及激光等 ］，但总体来说疗效仍欠 理想。 成纤维细胞是组织创伤修复过程中细胞外基质 沉积的主要效应细胞［１］，其增殖异常或凋亡延迟均 可导致细胞外基质的分泌及降解失去平衡，从而导 致细胞外基质的过度沉积，并形成排列紊乱的胶原 结节。增生性瘢痕胶原结节处细胞功能活跃部分胶 原结节以Ｃ０ＬⅢ为主，而部分胶原结节以Ｉ型胶原 为主ｌ６］。人类增生性瘢痕标本中Ｉ、ＣＯＬⅢ含量与 正常皮肤相比较明显增高 ］，抑制ＣＯＬＵＩ的基因及 蛋白表达水平则可达到减轻瘢痕增生的目的＿８］。 Ｃ０ＬⅢ蛋白由３条相同的 １链构成，由对应的前胶 原基因编码。细胞外基质的降解又受到组织细胞所 分泌的基质金属蛋白酶类的。ＭＭＰ一１可特异 性松弛胶原中的三维螺旋结构，其含量多少及活性 高低直接影响细胞外基质的降解过程口］。研究表 明，在增生性瘢痕中ＭＭＰ一１的表达明显降低［ｇ］，药 物作用使ＭＭＰ一１水平升高后则可抑制瘢痕增 生 。 本课题组在前期实验已发现ＡＲＴ可抑制增生 性瘢痕成纤维细胞的增殖能力，并上调ＭＭＰ一１基 因表达 ］。因此，本研究在前期实验的基础上，进一 ３ ８ ４ ３ ７ ８ １综上，本实验证实了ＡＲＴ能通过下调ＣｏＬⅢ ７ ＊ ＊ ＊ 前胶原基因编码而减少ＣｏＬⅢ蛋白的合成；同时，△ ＃ ▲ ＡＲＴ通过上调ＭＭｆＬ１的表达，从而加速胶原的降 解，从而发挥抗瘢痕增生作用。然而，增生性瘢痕发 生发展所涉及信号通路错综复杂，ＡＲＴ是否可通过 调节某些信号通路而胶原合成或降解而抑制增 生性瘢痕，仍需通过基因芯片或蛋白芯片等高通量 筛选法进一步研究探索。 参考文献： １ １ １ ＤＡＲＢＹ ＩＡ，ＺＡＫＵＡＮ Ｎ，ＢＩＬＬＥＴ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｍｙｏｆｉ— ｂｒｏｂｌａｓｔ．ａ ｋｅｙ ｅｅｌ１ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅ— ｐａｉｒ［Ｊ￣．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２０１６，７３（６）：１１４５—１１５７． ［２３胥航，农晓琳，李异兴，等．青蒿琥酯对腺样囊性癌 ＮＡＣＣ细胞裸鼠移植瘤抑制效果的研究［Ｊ］．世界科学 技术中医药现代化，２０１３，１５（２）：２２２—２２７． ［３］李战，农晓琳，李佳荃，等．青蒿琥酯对增生性瘢痕成 纤维细胞的抑制作用及机制探讨［Ｊ］．中国药理学通 报，２０１４（７）：９４７—９５１． １ ４ Ｉ ＦＩＮＮＥＲＴＹ ＣＣ，ＪＥＳＣＨＫＥ ＭＧ，ＢＲＡＮＳＫＩ ＬＫ．Ｈｙ— ｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒｒｉｎｇ：ｔｈｅ ｇｒｅａｔｅｓｔ ｕｎｍｅｔ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ａｆｔｅｒ ｂｕｒｎ ｉ￣ｕｒｙＩ Ｊ １．Ｌａｎｃｅｔ，２０１６，３８８（１００５２）：１４２７—１４３６． －Ｉｓ］ ＲＡＢＥＬＬＯ ＦＢ，ＳＯＵＺＡ ＣＤ，ＦＡＲＩＮＡ ＪｕＮＩ（）Ｒ ＪＡ． Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ￣．Ｃｌｉｎｉｃｓ（Ｓａｏ Ｐａｕｌｏ），２０１４，６９（８）：５６５—５７３． ［６］刘英开，王西樵，宋菲，等．增生性瘢痕中胶原结节的 组织学特征Ｉ－Ｊ］．中华创伤杂志，２０１４，３０（４）：３０２—３０６． ［７３王成，荣艳华，沈余明，等．正常皮肤与增生性瘢痕中 Ｉ型和Ⅲ型胶原的含量与比例［Ｊ］．山东大学学报（医 学版），２０１６，５４（１１）：６４—６７． ［８］ＴＥＪＩＲＡＭ Ｓ，ＺＨＡＮＧ Ｊ，ＴＲＡＶＩＳ ＴＥ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ａｆｆｅｃｔｓ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ ｂａｌａｎｃｅ ｉｎ ｈｙｐｅｒ ｔｒｏｐｈｉｅ ｓｅａｒ［Ｊ］．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒａｓ，２０１６，２０１（２）：２９９—３０５． １９ ｌ ＬＥＥ ＤＥ，ＴＲ０ＷＢＲＩＤＧＥ ＲＭ，ＡＹ０ＵＢ ＮＴ，ｅｔ ａ１．Ｈｉ— ｇｈ—ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ ｐｒｏｔｅｉｎ一１，ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉ— ｎａｓｅｓ，ａｎｄ ｖｉｔａｍｉｎ ｄ ｉｎ ｋｅｌｏｉｄｓ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒｓ ［Ｊ］．Ｐｌａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ｓｕｒｇ Ｇｌｏｂ Ｏｐｅｎ，２０１５，３（６）：ｅ４２５． Ｊ１０｝ＬＩ Ｙ，ＫＩＬＡＮＩ ＲＴ，ＲＡＨＭＡＮＩ—ＮＥＩＳＨＡＢ００Ｒ Ｅ，ｅｔ ａ１． Ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏＤｒ０ｔｅｉｎａｓｅ—ｌ ａｎｄ一３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｓｃａｒｒｉｎｇ ｉｎ ｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２０１４， ］３４（３）：６４３—６５０． （本文编辑：周幸锴） Ｏ ２
