程园园等骨关节炎大鼠心、肺功能变化与ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ的相关性分析第３期 ・２２７・ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－－４８４Ｘ．２０１３．０３．００１ ・基础免疫学・ 骨关节炎大鼠心、肺功能变化与ＣＩＭ ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ的相关性 分析① 程园园刘健②冯云霞刘磊万磊③ （安徽中医学院，合肥２３００３１） 中国图书分类号Ｒ３９２．１１ 文献标识码Ａ 文章编号１０００－４８４Ｘ（２０１３１０３－０２２７－０６ ［摘要］ 目的：通过观察骨关节炎（Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＯＡ）大鼠、心肺功能的变化，及其与外周血ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ 表达量变化，探讨骨关节炎中心、肺功能的异常与ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ的关系。方法：２０只大鼠随机分为正常对照组 （ＮＣ）和模型对照组（ＭＣ），每组各１０只。ＭＣ组大鼠采用关节腔注射木瓜蛋白酶（Ｐａｐａｉｎ）和Ｌ一半胱氨酸（Ｌ．ｃｙｓｔｉｎｅ）方法制成 骨关节炎大鼠模型。采用Ｍａｎｋｉｎ评分标准对关节软骨进行评分。用超声诊断仪检测大鼠心功能，用动物肺功能仪检测大鼠 肺功能，采用ＥＬＩＳＡ法检测血清细胞因子ＩＬ．１７和ＩＬ－４，采用流式细胞术检测大鼠外周血ＣＩＭ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ的表达。结 果：与正常组大鼠比较，ＯＡ大鼠关节软骨Ｍａｎｋｉｎ评分明显升高，ＯＡ大鼠部分肺功能及心功能参数出现异常，分别占所选指 标的６０％和２Ｏ％，血清细胞因子ＩＬ一１７明显升高，ＩＬ－４明显降低，外周血ＣＩＭ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ表达降低（Ｐ＜０．Ｏ１或Ｐ＜ ０．０５）。结论：骨关节炎大鼠在发生关节软骨病变的同时，伴有心、肺功能下降，而外周血ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ的表达降 低，并与Ｍａｎｋｉｎ评分、ＩＬ一１７、ＩＬ４呈相关性，说明Ｔｒｅｇ调节作用减弱，引起免疫失衡，加重炎症反应，导致关节和心、肺组织细 胞损害，最终出现心肺功能降低。 ［关键词］骨关节炎；心、肺功能；调节Ｔ细胞；白介素 Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＯＡ ｒａｔｓ ＣＨＥＮＧ Ｙｕａｎ—Ｙｕａｎ，ＬＩＵ Ｊｉａｎ，ＦＥＮＧ Ｙｕｎ—Ｘｉａ，ＬＩＵ Ｌｅｉ，ＷＡＮ Ｌｅｉ．Ａｎｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｈｅｆｅｉ ２３００３ｌ，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ ｉｎ Ｏｓ－ ｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ（ＯＡ）ｒａｔｓ，ｔｈｕｓ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｔｈａｔ ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ ｐｌａｙｅｄ ｉｎ ｄｅｃｌｉｎｅ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｏｆ ＯＡ ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈ－ ｏｄｓ：２０ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ２ ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ（ＮＣ）ａｎｄ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（ＮＣ），１０ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ．Ｒａｔｓ ｉｎ ＭＣ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｏ ＯＡ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｉｎｊｅｃｔｉｎｇ ｐａｐａｉｎ ａｎｄ Ｌ—ｃｙｓｔｉｎｅ ｉｎｔｏ ｉｒｇｈｔ ｋｎｅｅ ｊｏｉｎｔ．Ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｌｅｓｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｓｃｏｒｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｏｄｉｉｆｅｄ Ｍａｎｋｉｎ Ｓｃａｌｅ；ｃａｒｄｉａｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｕｌｔｒａｓｏｎｏｇｒａｐｈｙ；ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｐｉｒｏｍｅｔｒｙ；ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ（ＩＬ）・ｌ７，４ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ；ｔｈｅ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＮＣ ｇｒｏｕｐ，Ｍａｎｋｉｎ ｓｃｏｒｅｓ ｉｎ ＭＣ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ；ｐａｒｔ ｏｆ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｃｈａｎｇｅｄ，ａｎｄ ａｃｃｏｕｎｔｓ ｆｏｒ ６０％ａｎｄ ２０％ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｉｎｄｅｘｅｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬ一１７ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ａｓｃｅｎｄ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－４ ａｎｄ ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｓｃｅｎｄ（Ｐ＜０．０１ ｏｒ Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｈｉｌｅ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｌｅ． ｓｉｏｎｓ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｉｎ ＯＡ ｒａｔｓ，ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ＣＩＭ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｄｅｃｌｉｎｅｄ， ａｎｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｍａｎｋｉｎ ｓｃｏｒｅｓ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－１７，ＩＬ４，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｉｍｍｕｎｅ ｉｍｂａｌａｎｃｅ ａｎｄ ａｇｇｒａｖａｔｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａ． ｔｏｒｙ ｄｕｅ ｔｏ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ（Ｔｒｅｇ），ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ ｊｏｉｎｔ，ｃａｒｄｉａｃ ａｎｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｉｎｊｕｒｙ，ｆｉｎａｌｌｙ ｃａｕｓｉｎｇ ｃａｒ－ ｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｅｃｌｉｎｅｄ． ・［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ；Ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ；Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ；Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ①本文受国家自然科学基金（Ｎｏ．８１１７３２１１）、国家中医药重点学科中医痹病学建设项目（国中医药发［２００９］３０号）、安徽省科技厅科研计划项 目（０９０２０３０４０４６）、安徽省卫生厅中医药科研项目（２００９ＺＹ０５）和安徽中医学院科技创新团队项目（２０１０ＴＤ００５） ②安徽中医学院第一附属医院．合肥２３００３１ ③湖北中医药大学，武汉４３００６５ 作者简介：程园园（１９８６年一），女，在读硕士，主要从事中医药防治风湿病方面的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇｙｕ ｙｕａｎ０９１２＠１６３．ｃ０ｍ： 通讯作者及指导教师：刘健（１９６４年一），男，博士，教授，主任医师，ｔｇ￣￣Ｎ，主要从事中医药防治风湿病方 的研究，Ｅ．ｍａｉＩ： ｌｉｕｊｉａｎａｈｚｙ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ 风湿病是侵害结缔组织和不同器官系统组织的 一组疾病。心、肺两脏因富含血管、结缔组织，常易 被累及，导致心、肺功能下降，严重影响患者预后及 生活质量。由于其发生率和病死率均较高，已成为 医学界的研究热点。骨关节炎亦是风湿病的一种， 现代医学认为它是力学与生物学因素相互作用．关 节软骨细胞、细胞外机制和软骨下骨三者合成和降 解失调的结果ｆＪ Ｊ。常严重影响患者生活质量，我国 ５０岁以上男性无法工作的原因中，ＯＡ居第二位，仅 次于缺血性心脏病＿２］。通过临床观察发现，骨关节 炎患者在出现关节症状的同时。常伴有心慌、胸闷等 表现。且随着骨关节炎严重程度的增加而愈加明显。 ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ 调节性Ｔ细胞（Ｔｒｅｇ）是一群重 要的负性调节细胞，在维持自身免疫耐受和负向调 节免疫应答中发挥重要的作用。参与自身免疫病、移 植等多种疾病。ＩＬ．１７、ＩＬ＿４是一对重要的细胞因 子，在疾病的炎症过程中发挥着重要的调节作用。 本文旨在通过观察骨关节炎大鼠心、肺功能、外周血 ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ、血清细胞因子ＩＬ一１７、ＩＬ一４ 表达量的变化及进行相关性分析，从而初步探讨 ＯＡ大鼠心、肺功能变化的机制。 １材料与方法 １．１动物清洁级（ＳＰＦ）雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２０只， 鼠龄５ ６月，体质量（２００±２５．５）克，由南京医科 大学实验动物中心提供，许可证号：ｓｃｘＫ（苏）２０１１— ０００６。随机分为正常对照组（ＮＣ）和模型对照组 （ＭＣ），每组各ｌ０只。清洁级标准饲养，供试前常规 饲养７天，２４小时明暗周期为１２小时／１２小时，观 察无异常者入组实验。 Ｉ．２ 材料 木瓜蛋白酶、Ｌ．半胱氨酸：由美国 ＭＥＲＫ公司产品提供。ＩＬ一１７、ＩＬ４ ＥＬＩＳＡ试剂盒 （批号：１２０２９６３，１２０２１５６）、异硫氢酸莹光素 （ＦＩＴＣ）标记的ａｎｔｉ—ｒａｔ ＣＩＭ单抗（批号：１１－００４０． ８１）、藻红蛋白．青色素染料（ＰＥ．Ｃｙ５）ａｎｔｉ．ｒａｔ ＣＤ２５ （批号：１１－００４０－４５）、藻红蛋白（ＰＥ）标记的ａｎｔｉ．ｒａｔ Ｆｏｘｐ３单抗（批号：１１－００４０－７６）购自美国ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ 公司。 １．３设备动物呼吸机ＡｎｉＲｅｓ２００３动物肺功能分 析系统：由北京贝兰博科技有限公司生产。超声诊 断仪（美国ＧＥ ＶＩＶＩＤ ７，探头频率为９ ｍＨｚ）。台式 高速冷冻离心机（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ，型号：Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ５４１７Ｒ）。流式细胞仪（美国Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ公司 Ｅｐｉｃｓ ｘＬ流式细胞仪）。光镜：日本产ＯＬＹＭＰＵＳ光 学显微镜。 中国免疫学杂志２０１３年第２９卷 １．４方法 １．４．１ 膝骨关节炎模型复制ｌ３］ 分别于第１、３、７ 天向模型组大鼠右膝关节注射４％木瓜蛋白酶溶液 与０．０３ ｍｏｌ／Ｌ Ｌ一半胱氨酸溶液混合液２０ ｌ，制成 膝骨关节炎模型。 １．４．２病理观察模型复制第４９天，动物处死后， 切开膝关节，肉眼大体观察标本，观察关节有无积 液、滑膜有无肿胀，软骨表面情况、光泽及光滑度。 根据情况分别取３～６个不同病变部位的膝关节软 骨标本，所取部位分别为胫骨内侧、胫骨外侧，软骨 已全部磨损的部位未取得标本。所取标本全部 以Ｉ４，５ １００ ｍｌ／Ｌ中性福尔马林溶液固定７２小时，于 １００ ｍｌ／Ｌ硝酸混合液（１００ ｍｌ／Ｌ硝酸＋１００ ｍｌ／Ｌ中 性福尔马林＋６００ ｍｌ／Ｌ双蒸水）中脱钙４８小时，常 规脱水，石蜡包埋，５ ｍ厚连续切片。分别采用ＨＥ 染色方法，并根据改良的Ｍａｎｋｉｎ关节软骨病理评分 标准＿６］进行分级评定。结构：正常０分，表层破坏１ 分．血管翳及表层破坏２分．浅层裂隙形成达移行层 ３分，裂隙局限性深达骨质辐射层４分，深达骨质钙 化层缺损负重区５分，全层软骨缺损６分。细胞：正 常０分，细胞过多、紊乱１分，细胞成簇２分，细胞少 ３分。ＳＯ／ＦＧ染色：正常０分，轻度失染１分，中度 失染２分，重度失染３分，完全失染４分。潮线的完 整性：完整０分，不完整、有血管通过１分。总分 ０～１４分。正常（０～２分），轻度病变（３～７分），中 度病变（８ １１分），重度病变（１２～１４分）。由２位 独立的观察者按Ｍａｎｋｉｎ评分原则为切片评分，取两 者平均值作为Ｍａｎｋｉｎ得分。 １．４．３肺功能检测模型复制第４９天，用动物肺 功能仪测定肺功能。测定指标有用力肺活量 （ＦＶＣ）、一秒用力呼气容积（ＦＥＶ，）、２５％肺活量的 最大呼气流量（ＦＥＦ， ）、５０％肺活量的最大呼气流 量（ＦＥＦ轴）、７５％肺活量的最大呼气流量（ＦＥＦ ）、 最大呼气中期流量（ＭＭＦ）、用力最大呼气流量 （ＰＥＦ）。 １．４．４无创血流动力学心功能的测定模型复制 第４９天。各组随机取１０只大鼠，大鼠称质量，乌拉 坦０．１７ ｇ／ｋｇ腹腔麻醉。仰卧位固定，胸部２０％硫 化钠脱毛备皮，用线阵探头对大鼠进行心功能检查。 探头置于其左胸，在取得满意的胸骨旁左心室长轴 二维图像后，于标准心尖四腔切面检测舒张期二尖 瓣血流频谱，获得左室内径（ＬＶ）、室间隔厚度 （ＩＶＳ）、左室后壁厚度（ＬＶＰＷ）、每搏输出量（ＳＶ）、 舒张早期峰值流速（Ｅ）、舒晚期峰值流速（Ａ）、舒张 早期峰值流速／舒张晚期峰值流速（Ｅ／Ａ），并采用改 程园园等骨关节炎大鼠心、肺功能变化与ＣＩＭ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ的袒 堑箜 塑 良ｓｉｍｐｓｏｎ法测量左室收缩末期内径、左室舒张末 期内径，计算射血分数（ＥＦ）及左心室短轴缩短率 （ＦＳ％），所有指标均连续测量３次，取平均值，超声 加入１００ ｌ细胞混悬液混匀，室温避光孵育１５—２０ ａ 分钟固定细胞。加入３ ｍｌ ｒａｔ Ｆｏｘｐ３ Ｂｕｆｆｅｒ Ａ混匀， 室温避光孵育１０ １５分钟破膜。各管分别加入 检查的操作及分析均由专人完成。 １．４．５ ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ．１７、ＩＬ４具体流程如下： Ｆｏｘｐ３ Ｂｕｆｆｅｒ Ｃ工作液１ ｍｌ，漩涡混匀，室温避光孵 育２０～３０分钟。加入ＰＥ标记的ａｒｉｔｉ—ｒａｔ Ｆｏｘｐ３ ２０ 冲液，１ ５００ ｒ／ｍｉｎ低速离心，洗涤细胞后，用５００ ｌ ①向已包被有特异抗体的塑料板凹孔内加５０ ｌ血 清；②加５Ｏ ｌ生物素标记的第二抗体，室温下孵育 ｌ，室温避光孵育２５～３０分钟。各管加３ ｍｌ ＰＢＳ缓 一一一～～～～盯 Ｅ Ａ叭１ ２小时，用洗板机洗３次；③加１００ Ｉｘｌ链亲合素 ＰＢＳ缓冲液重悬细胞。上流式细胞仪检测ＣＤ４ 标记的辣根过氧化物酶，室温下孵育０．５～１小时， ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ 占ＣＩＭ Ｔ细胞中比率。 用洗板机洗３次；④加１００ ｔｘｌ终止液，室温下孵育 １．５统计学处理采用ＳＰＳＳ１１．５进行统计学处 ｍ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５０．５～１小时：⑤用酶标仪测量光密度，换算为抗原 理，连续性变量用ｘ±ｓ表示，样本符合正态性分布， 的含量。 正常组和模型组组间比较采用独立样本ｔ检验；相 １．４．６流式细胞术检测大鼠外周血ＣＤ４ ＣＤ２５ 关性分析采用Ｓｐｅａｒｍａｎ分析，以Ｐ＜０．０５为有统计 Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ取大鼠新鲜血液２ ｍｌ，密度梯度离心 学意义 法分离．调配成密度为１０ 外周血单个核细胞（ＰＢ． ＭＣ），取上样管，分别标记为正常对照组管、模型对 ２ 结果 照组管．各管加入抗体Ｐｅｒ ＣＰ标记的ａｎｔｉ．ｒａｔ ＣＤ４ ２．１ 一般情况观察 模型复制６小时后，ＭＣ组 ２０ Ｉｘｌ，ＦＩＴＣ标记的ａｎｔｉ．ｒａｔ ＣＤ２５ １０ Ｉｘｌ。各管分别 大鼠右膝关节出现明显肿胀，局部伴有溃烂，步态异 表１ ２组ＯＡ大鼠心、肺功能参数与大鼠体质量、ＩＬ－１７、ＩＬ－４、Ｔｒｅｇ比较 Ｔａｂ．１ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｂｏｄｙ ｍａｓｓ，ｓｅｒｕｍ ＩＬ＇１７，ＩＬ－４。Ｔｒｅｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ １５８．８±２２．８３ １５０．７±ｌ７．７６ ２４３．５０ ４－２０．０９ ２２３．５０±２０．０９ ） ４．２ ４－０．３ ５．３±Ｏ．８７ ２．２７土０．４５ ２．１７±０．３ｌ １．９０±０．１ １．９７±０．２９ ８９．６７±３．５１ ８５．１±２．７６ ５２．６７±２．５２ ４８．８ ４－３．３６ ０．１９士Ｏ．Ｏ２ ０．３６ ４－０．１６ １．２２士Ｏ．２２ ０．６６±０．０５１） Ｏ．９Ｏ±Ｏ．２１ １．１１土Ｏ．２７ １．３６±０．０７ ０．６１±０．１１１） ０．４９ ４－０．３１ Ｏ．３７±０．０３７ Ｏ．３２±Ｏ．０８ ０．１８±０．０９ ） ３．８７ ４－１．２５ ２．８１士０．６２ ４．１９土１．Ｏ６ ２．５６±０．８８１） ３．６８士１．６１ ２．０１±１．１５１） ４．Ｏｌ ４－０．９５ ２．８４±１．０４ ５．７１ ４－１．５９ ３．６３±１．４２１） ２２４．０５±４３．４８ ２８０．７６±２６．０１１） ｌ２Ｏ．２４±３６．８２ ８５．３２±Ｉ３．０５１） Ｎｏｔｅ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＮＣ ｇｒｏｕｐ，１）Ｐ＜０．０５，２）Ｐ＜０．０１ 程园园等骨关节炎大鼠心、肺功能变化与ＣＩＭ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ的相关性分析第３期 表２骨关节炎大鼠心、肺功能参数与Ｍａｎｋｉｎ评分、ＩＬ－７、ＩＬ－４及Ｔｒｅｇ的相关性分析 Ｔａｂ．２ Ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｍａｎｋｉｎ ｓｃｏｒｅｓ，ｓｅｒｕｉｎ ＩＬ－１７，ＩＬ４，Ｔｒｅｇ ｉｎ ＯＡ ｒａｔｓ ３讨论 破坏。ＩＬ．１７是由活化的ＣＤ４细胞分泌的Ｔｈｌ细胞 因子，是一种重要的前致炎因子。研究发现ＩＬ一１７ 木瓜蛋白酶关节内注射可诱导狗、兔、豚鼠、大 与ＯＡ中的炎症和破坏过程有关［１ 。ＩＬ．１７可促进 鼠等动物髋关节或膝关节骨关节炎。其特点是发病 一氧化氮（ＮＯ）合成及释放；还可诱导基质金属蛋 速度快、重复性好、与人类骨关节炎类似 ］。而左 白酶（ＭＭＰｓ）表达，破坏软骨组织。ＩＬ．４是一种抑 旋半胱氨酸通过激活木瓜蛋白酶活性．可以分解软 制性细胞因子，可通过阻碍破骨细胞的生成而实现 骨基质中的蛋白多糖，使其从软骨中丢失，而这与人 抑制骨吸收的作用，并能抑制软骨降解蛋白酶的 类骨关节炎软骨早期发生的显著变化：水分的增加 ｍＲＮＡ的表达，还能抵御分解性细胞因子的某些作 和蛋白多糖的减少相类似，因此采用木瓜蛋白酶和 用ｎ 。在本研究同样发现，ＭＣ组大鼠血清细胞因 左旋半胱氨酸复制的骨关节炎模型符合本次研究的 子ＩＬ．１７明显升高，ＩＬ４明显降低。 疾病特点。 ＯＡ滑膜中Ｔ细胞寡克隆群是诱发、维持ＯＡ关 在本次研究中我们发现，模型复制第４９天，对 节中的慢性炎症反应的条件［１３，１４］。免疫机制的紊 膝关节软骨进行评分．ＭＣ组Ｍａｎｋｉｎ评分明显低于 乱，尤其是Ｔ细胞在ＯＡ的发病和进展中起着重要 正常组。为进一步观察ＯＡ大鼠心、肺功能变化的 作用。Ｔｒｅｇ是一群具有免疫调节功能的Ｔ细胞亚 情况，我们对相关指标进行检测。通过对心功能检 群，能抑制自身反应性Ｔ细胞的过度活化．在维持 测．结果发现，模型对照组大鼠心功能参数指标如Ｅ 外周免疫功能稳态中起着至关重要的作用［１５，１６］。 峰、Ｅ／Ａ较正常组明显下降，Ａ峰有所升高，提示左 ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔｒｅｇ可对多种免疫细胞发挥抑制效应． 室松弛性下降，即左室舒张功能有所下降。通过对 对机体天然免疫、获得性免疫均具有调节作 肺功能检测结果发现，肺功能部分指标如ＦＥＦ 用＿１ 。 。其表面标志物Ｆｏｘｐ３基因可特异性表达于 ＦＥＦ， 、ＰＥＦ等较正常组明显减低。说明ＯＡ大鼠不 ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔｒｅｇ上，与Ｔｒｅｇ发育和功能维持密切 仅出现关节炎症反应，而且伴有肺功能降低。肺功 相关 本组研究发现，模型组大鼠外周血ＣＩＭ 能参数中ＦＥＦ孙ＦＥＦ ＦＥＦ 主要反映小气道的状 ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ的表达降低；心、肺功能参数如 态，ＦＥＶ 可反映通气功能，ＯＡ大鼠中ＦＥＦ ＦＥＦ… Ｅ峰、Ｅ／Ａ、ＦＥＦ 与Ｍａｎｋｉｎ评分、ＩＬ．１７呈明显相关 ＦＥＦ， 降低，说明肺功能降低特点是以通气功能降低 性。提示ＩＬ．１７升高，ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ表达 为主，且伴有一定程度的小气道障碍。 量下降参与了膝骨关节炎大鼠关节软骨的病变及 ＯＡ的发生跟单核细胞（ＭＮＣ）的浸润有 心、肺功能的变化。ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｆｏｘｐ３ Ｔｒｅｇ表达 关＿８ ，ＯＡ患者的关节滑膜中存在ＭＮＣ的浸润，包 量的减少，可降低其抑制其他效应Ｔ细胞的活性或 括Ｔ细胞和巨噬细胞。ＭＮＣ浸润或呈弥漫性或呈 功能，引发细胞因子网络平衡失调，导致ＩＬ．１７升 血管周围结节状。ＭＮＣ浸润可能跟Ｔｈｌ异常分泌 高，ＩＬ－４降低，并由此激发产生基质降解的多种酶、 有关。研究发现ＯＡ患者的滑膜中主要是Ｔｈｌ细胞 氧自由基（如ＮＯ）及炎症因子（如ＰＧＥ２）等，从而促 介导的免疫应答的因子模式。Ｔｈｌ细胞因子可独立 进炎症发展、进一步加重免疫功能紊乱，导致关节局 或相互协同诱导刺激软骨细胞和滑膜产生ＭＭＰｓ、 部及心、肺病变（心、肺功能下降） 。 ＮＯ、前列腺Ｅ２（ＰＧＥ２）等物质，加重炎症反应，促进 骨关节炎既往对细胞因子、氧化应激等发病机 软骨基质的降解，诱导软骨细胞凋亡，从而介导软骨 （下转第２３５页） 杨慈清等鸡胚发育过程Ｎ．Ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ在登赞中共 箜 塑 ・２３５・ 究表明，脊髓损伤后神经丝蛋白阳性神经元的数量 及神经元胞体着色的程度与脊髓神经功能恢复情况 ４参考文献 １ Ｕｃｈｉｄａ Ｋ，Ｂａｂａ Ｈ，Ｍａｃｚａｗａ Ｙ ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｎｅｕ— ｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ－４３ ｉｍｍｕｎｏｒｅａｅｔｉｖｉ－ ｔｉｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｐｉｎａｌ ｈｙｅｒｏｓｔｏｔｉｃ 关系密切，所以神经丝蛋白染色不仅能显示神经元 的形态．也能反映其执行功能的状态＿３］。 研究结果中。很清楚可以看到Ｎ—Ｃａｄｈｅｒｉｎ和ＮＦ 的表达呈波动性变化，发育早期表达较弱，中期达到 高峰表．到胚胎发育后期又呈现低表达水平，从鸡胎 发育的过程来看，在胚胎发育的Ｅ５一Ｅ８是脊髓中大 量神经元发生并向特定区域迁移形成特殊结构的时 ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｓｐｉｎｅ，２００２；２７（５）：４８０－４８７． ２杨慈清，石晓卫，胡阿珍ｅｔ ａ１．应用鸡胚活体电转ＧＦＰ示踪技术 观察脊髓左右两侧神经元纤维投射［Ｊ］．中国免疫学杂志，２０１２； ２８（２）：１４２－１４６． ３沈正祥，吕红斌，李小明ｅｔ ａ１．川Ｉ芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型 间．因此．此阶段明显的看到脊髓中Ｎ Ｃａｄｈｅｒｉｎ和 ＮＦ的表达较强（图２），Ｎ．Ｃａｄｈｅｒｉｎ和ＮＦ的表达在 许多区域重叠化，因此也说明，Ｎ．Ｃａｄｈｅｒｉｎ不但在胞 膜上表达．更重要的是在纤维上表达．这种表达模式 提示。其在细胞的迁移中具有一定的作用，对于Ｎ． Ｃａｄｈｅｒｉｎ是通过胞外结构域通过细胞黏着作用影响 细胞的迁移还是通过胞内结构域通过改变细胞骨架 蛋白影响细胞的迁移，有待于更深入的研究。 致谢：感谢德国耶拿大学Ｒｅｄｉｅｓ教授在实验过 程中给予Ｎｃｄｈ和ＮＦ抗体的馈赠和实验的指导！ （上接第２３１页） 制研究较多，而免疫学机制相对欠缺．且多局限于关 节局部，而对全身研究相对较少。本次实验发现ＯＡ 大鼠出现关节损坏时，伴随有心、肺功能下降，并与 Ｔｒｅｇ、ＩＬ．１７、ＩＵ４有相关性，其机制可能与Ｔｒｅｇ调节 作用减弱，导致免疫失衡，加重炎症反应，导致心肌 细胞、肺组织损伤有关，但其具体发生机制则有待于 进一步研究。 ４参考文献 Ｈｅｉｊｉｎｋ Ａ，Ｇｏｍｏｌｌ Ａ Ｈ，Ｍａｄｒｙ Ｈ ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｅａｌ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｋｎｅｅ［Ｊ］．Ｋｎｅｅ Ｓｕｒｇ Ｓｐｏｒｔｓ Ｔｒｎａｍａｔｏｌ Ａｒｔｈｒｏｓｃ，２０１２；２０（３）：４２３－４３５． ２ 邱贵兴．骨关节炎流行病学和病因学新进展［Ｊ＿．继续医学教育， ２００５；１９（７）：６８－６９． 尹明，熊辉，贺荔枝．用木瓜蛋白酶和Ｌ一半胱氨酸建立大鼠膝 关节骨关节炎模型的研究［Ｊ］．中国科技论文在线精品论文， ２００９；２（２３）：２４７４－２４７９． 王超华，张子博，朱梅ｅｔ ａ１．Ｗｎｔ／ｔＢ—Ｃａｔｅｎｉｎ信号通路与骨关节 炎发病机制的研究［Ｊ］．天津医药，２０１ｌ；３９（６）：４８３－４８６， 刘建湘。杜靖远，杨述．大鼠实验性骨关节炎模型的建立及病理 特征［Ｊ］．华中科技大学学报（医学版），２００９；３８（１）：９８．１０２． Ｍａｎｋｉｎ Ｈ Ｊ．Ｄｏｒｆｍａｎ Ｈ．Ｌｉｐｐｉｅｌｌｏ Ｌ ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｆｒｏｍ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃ ｈｕｍａｎ ｈｉｐｓ『Ｊ］． Ｂｏｎｅ Ｊｏｉｎｔ Ｓｕｒｇ，１９７１；５３（３）：５２３－５３７． ７ Ｋｏｐｐ Ｓ．Ｍｅｊｅｒｓｊｏ Ｃ．Ｃｌｅｍｅｎｓｓｓｏｎ Ｅ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ｋｎｅｅ ｂｙ ｐａｐａｉｎ［Ｊ］．Ｏｒｌａ Ｓｕｒｇ Ｏｒａｌ Ｍｅｄ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌ， １９８３；５５（３）：２５９－２６６． Ｓａｋｋａｓ Ｌ Ｉ．Ｐｌａｔｓｏｕｓ Ｃ Ｄ．Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｔ ｃｅｉｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏ． ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［１ｅｔｔｅｒ］［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，２００２；４６（１１）：３１０２－３１１４． ９ Ｌａｚａｒｏｓ Ｉ Ｓａｋｋａｓ．Ｃｈｒｉｓ Ｄ Ｐｌａｔｓｏｕｃａｓ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏ－ ｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｊ Ｊ】．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，２００７；５６（２）： ｃａｓｐａｓｅ．３和ＮＦ表达的影响［Ｊ］．中南大学学报（医学版），２００８； ３３（８）：６９３－６９８． ４ Ｊｕｌｉｅｎ Ｊ Ｐ．Ｎｅｕｍｆｉｌａｍｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ［Ｊ］．１９９９；９（５）：５５４－５６０． ５ Ｕｃｈｉｄａ Ｋ，Ｂａｂａ Ｈ，Ｍａｃｚａｗａ Ｙ ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｎｅｕ— ｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ－４３ ｔｉｅｓ ａｔ ｔｈｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｐｉｎａｌ ｈｙｅｒｏｓｔｏｔｉｃ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｓｐｉｎｅ，２００２；２７（５）：４８０－４８７． ６ Ｕｃｈｉｄａ Ａ，Ｂｒｏｗｎ Ａ．Ａｒｒｉｖａｌ，ｒｅｖｅｒｓａｌ，ａｎｄ ｄｅｐａｒｔｕｒｅ ｏｆ ｎｅｕｒｏｆｉｌａ— ｍｅｎｔ ａｔ ｔｈｅ ｔｉｐｓ ｏｆｇｒｏｗｉｎｇ ａｘｏｎｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ，２００４；１５（９）： ４２１５－４２２５． 『收稿２０１２－０７－２９修回２０１２－０８－２４ １ （编辑许四平） ４０９－４２４． １０ Ｉｓｈｉｉ Ｈ，Ｙｏｓｈｉｎｏ Ｓ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｈ ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｔｈｌ／Ｔｈ２一ｔｙｐｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｙｎｏｖｉｕｍ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，２００１；１０（４）：２７７－２８１． １１ ＡＪｅｘａｌｌｄｅｒ Ｌ Ｇ，Ｂｅｖｅｒｌｅｙ Ｆ，Ｃｈｒｉｓｔｉｎａ Ｆ ｅｔ ａ１．ＩＬ－１，ＩＮＦ ａｎｄ ＩＬ一１７ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ Ｎｏ ａｎｄ ＰＧＥ２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｈｕ— ｍａｎ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｋｅｅｎ ｍｅｎｉｓｃｉ［Ｊ］．Ａｎｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，２００１；４４（９）： ２０７８－２０８３． １２ Ｈｅｇｅｍａｎｎ Ｎ，Ｗｏｎｄｉｍｕ Ａ，Ｋｏｈｎ Ｂ ｅｔ ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｆｉｌｅ ｉｎ ｃａｎｉｎｅ ｉｍｍｕｎｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｏｌｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｖｅｔ Ｃｏｍｐ Ｏｒ－ ｔｈｏ Ｔｍｕｍａｔｏｌ，２００５；１８（２）：６７＿７２． １３ Ｈａｙｎｅｓ Ｍ Ｋ，Ｈｕｍｅ Ｋ Ｌ，Ｓｍｉｔｈ Ｊ Ｂ．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｅ ｓｙｎｏｖｉｕｍ ａｎｄ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｆｌｕｉｄｓ ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２；１０５（３）：３１５－３２５． １４宋维亚，厉小梅，李向培．Ｔ细胞在骨关节炎发病机制中的作用 ［Ｊ］．安徽医药，２０１０；１４（４）：４７６－４７８． １５ Ｊｉａｎｇ Ｈ．Ｃｈｅｓｓ Ｌ．Ａｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｖｉｅｗ ｏｆ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓｉｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉ０ｎ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２００４；１１４（９）：ｌ１９８—１２０８． １６ Ｂａｃｈ Ｊ Ｆ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｕｎｄｅｒ ｓｃｒｕｔｉｎｙ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００３；３（３）：１８９・１９８． １７ ＨＵ Ｓｈａｏｘｉａｎ，ＸＩＡＯ Ｗｅｎｚｅ，ＫＯＮＧ Ｆａｎｇ ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅＥ￥ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒｌａ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ， ２００８；２８（５）：５４９－５５２． １８ ＨＵ Ｚｈｅｎｐｉｎｇ，ＬＩ Ｄａｚｈｕ，ＨＵ Ｙｉｎｇｆｅｎｇ ｅｔ ａ１．Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＣＩＭ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｃｕｔｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ， ２００７；２７（５）：５２４－５２７． １９ Ｚｏｒｎ Ｅ．ＣＤ４ ＣＤ２５ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ，２００６；１６（２）：１５０－１５９． ２０刘健，曹云祥，黄传兵ｅｔ ａ１．佐剂性关节炎大鼠心功能及心肌 ＭＭＰ－９、ＴＩＭＰ一１变化［Ｊ］．中国免疫学杂志，２０１２；２８（３）： ２５】＿２５６． ［收稿２０１２－０７．２２修回２０１２－０９．１７］ （编辑张晓舟）
