BCA测蛋白浓度

来源：意榕旅游网

BCA法测蛋白浓度

蛋白标准（μl） 0 1 2 4 8 12 16 20 标准品稀释液（μl） BCA工作液（μl） 20 19 18 16 12 8 4 0 200 200 200 200 200 200 200 200

1、取0.8ml蛋白标准液配制液加入到一管蛋白标准（20mg BSA）中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃长期保存。 2、取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20μl 25mg/ml蛋白标准，加入980μl稀释液即可配制成0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释，也可以用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。

3、根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室温24h内稳定。

4、将标准品按0，1，2，4，8，12，16，20μl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20μl。

5、加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液到20μl。

6、各孔加入200μl BCA工作液，把酶标板放在振荡器上振荡30s，37℃放置30min。也可以室温放置2h，或60℃放置30min。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

7、上机检测，测定A562，0-595nm之间的波长也可以接受。

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