北方药学２０１４年第１１卷第６期 ６７ 小鼠急性酒精性肝损伤模型的制备及观察 林晓晖 黄 玲 王一铮 刘如玉（福建中医药大学中西医结合学院福卅ＩＩ ３５０１２２） 摘要：目的：建立小鼠酒精性肝损伤模型，并动态研究小鼠血清和肝脏的生化指标的变化。方法：将８０只清洁级ＩＣＲ小鼠随机分为 ８个组：４个模型组和４个空白组。模型组小鼠按１２ｍｌ・ｋｇ ｄ 胃灌注５２度白酒，空白组小鼠给予胃灌注等量蒸馏水，分别在灌胃 后２ｄ，４ｄ，６ｄ，８ｄ各取一组模型组和空白组小鼠，测定血清ＡＬＴ、ＴＧ，肝脏指数，肝组织ＳＯＤ和ＭＤＡ。结果：与同时段空白组比较， 造模６ｄ后，小鼠血清中ＡＬＴ和ＴＧ均显著升高（Ｐ＜０．０１），肝脏指数、肝组织中ＴＧ和ＭＤＡ显著升高（Ｐ＜０．０１），而ＳＯＤ活性显著下 降（Ｐ＜０．０１）。结论：本实验在短时间内成功建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，稳定性好，可应用于护肝药物保护机制的研究。 关键词：酒精性肝损伤动物模型 中图分类号：Ｒ５９５．６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１ ６７２—８３５１（２０１ ４）０６—００６７－０３ Ｔｈｅ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｃ０ｈｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｃｕｔｅ Ｌｉｖｅｒ Ｉｎｊｕｒｙ Ｍｏｄｅｌ ｉｎ Ｍｉｃｅ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｉｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ａｌｃｏｈｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｔｏ ｄｙｎａｍｉｃａｌｌｙ ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｅｘｅｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｅｉｇｈｔｙ ＩＣＲ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｅｉｇｈｔ ｇｒｏｕｐｓ，ｆｏｕｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｆｏｕｒ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ５２％（Ｖ／Ｖ）ａｌｃｏｈｏｌ ｗｉｔｈ １２ｍｌ。ｋｇ一 ｄ一 ｂｙ ｇａｓｔｒｉｃ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ．Ａｔ ２，４，６，８ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ａ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ａ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｓａｃｒｉｉｆｃｅｄ ｔｏ ｔａｋｅ ｓｅｒｕｍ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ＡＬＴ ａｎｄ ＴＧ ｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｉｎｄｅｘ，ＴＧ，ＳＯＤ ａｎｄ ＭＤＡ ｌｅｖｅｌｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｆｏｒ ６ ｄａｙｓ，ｓｅｒｕｍ ＡＬＴ ａｎｄ ＴＧ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１），ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｄｅｘ，ＴＧ ａｎｄ ＭＤＡ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１），ｗｈｅｒｅａｓ ＳＯＤ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｄｒｕｇ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｌｃｏｈｏｌ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ Ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ 随着现代人们交际应酬中酒的消耗量增多，酒精性肝病（ａｌ— 灌注白酒，检测不同灌注天数下小鼠血清和肝脏的生化指标的 为后续的护肝药物保护 ｃｏｈｏｌｉｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＬＤ）的发病率也在逐年增高，严重影响着 变化，构建小鼠急性酒精性肝损伤模型，国民的身心健康。由于肝脏是酒精代谢、转化的主要场所，长期 机制的研究奠定基础。 过量摄入酒精容易导致肝脏损伤及其并发症…。ＡＬＤ早期表现 １材料与方法 为脂肪肝，进而发展成为肝炎、肝纤维化及肝硬化ｐＩ。目前，对于 １．１实验动物及饲养条件：健康ＩＣＲ小鼠（清洁级）８０只，６～８周 雌雄各半，体重（２５￣２）ｇ，购自上海斯莱克实验动物有限公 ＡＬ１）的治疗手段主要是通过戒酒、营养支持和药物治疗口１。发现 龄，和筛选治疗药物需要大量的动物实验，而理想的动物模型是实 司，合格证号：０１ １８４２４。动物实验室环境及设施符合中华人民共 验的前提条件。国内外对酒精性肝损伤的造模方法主要有胃灌 和国国家标准ＧＢ １４９２５—２００１。 ２实验试剂：丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）试剂盒（北京北化康泰 注酒精和腹腔注射酒精两种 。由于腹腔注射死亡率较高，而胃 １．灌注酒精造模周期短、易复制、稳定性好，死亡率低，且符合人们 临床试剂有限公司）；甘油三酯（ＴＧ）测定试剂盒（浙江东瓯诊断 饮酒所导致的肝损伤的特点，对研究酒精性肝损伤的发病机制 产品有限公司）；丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、考马斯 ５２度白酒 和筛选药物起着关键作用。急性酒精性肝损伤模型与现代人豪 亮蓝蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；饮造成的肝损害相似，且以肝及血中的某些化学指标改变为主 （北京红星二锅头酒厂）。 要特征１５Ｉ，是研究急性酒精性肝损伤发病机制和后续保肝药物及 １－３实验仪器：ｕｖ一１ １００紫外可见分光光度计（上海美普达仪器 ＪＡ１２０３电子天平（上海精密科学仪器有限公司）； 保护机制研究的理想模型。但是，目前在急性酒精性肝损伤的造 有限公司）；ＴＧＬ一１６高速 模时间上存在较大差异，且缺少动态检测的数据。本实验通过胃 ＨＨ一８数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；［８］张建春，张华，施瑛．黄芩苷的研究近况［Ｊ１．时珍国医国药， 参考文献 ６（３）：２４７—２４９． ［１］Ｌｏｗｙ ＦＤ．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， ２００５，１【９］文敏，李雪，付守廷．黄芩苷药理作用研究新进展【ＪＪ．沈阳药科 １９９８，３３９（８）：５２０—５３２． ［２］任成山，赵晓晏．“超级细菌”的由来和未来［Ｊ］．中华肺部疾病杂 大学学报，２００８，２５（２）：１５８—１６２． 志（电子版）。２０１０（５）：３７８—３８３． 『１ ０］Ｂｕｂｅｃｋ Ｗａｒｄｅｎｂｕｒｇ Ｊ，Ｓｃｈｎｅｅｗｉｎｄ Ｏ．Ｖａｃｃｉｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａ— （２）：２８７—２９４． ｎｓｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ［Ｊ１．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２００８，２０５ 【３］Ｄｉｅｋｅｍａ ＯＪ，Ｃｌｉｍｏ Ｍ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ＭＲＳＡ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：ｆｉｎｄｉｎｇ ｉｔ ｇａｉｉｓ ｎｏｔ ｅｎｏｕｇｈ『Ｊ１．ＪＡＭＡ，２００８，２９９（１０）：１１９０—１１９２． １ １］Ｃｏｓｇｒｏｖｅ ＳＥ，Ｓａｋｏｕｌａｓ Ｇ，Ｐｅｒｅｎｃｅｖｉｃｈ ＥＮ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ 『４］Ｗｕｎｄｅｒｉｎｋ ＲＧ，Ｒｅｌｌｏ Ｊ，Ｃａｍｍａｒａｔａ ＳＫ，ｅｔ ａ１．Ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ ｖｓ 『ｔａｌｉｔｖ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ｍｅｔｈｉｅｉｌｌｉｎ— ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ：ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｗｏ ｄｏｕｂｌｅ—ｂｌｉｎｄ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｏｆ ｍｏｒｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｂａｃｔｅｒｅｍｉａ：ａ ｍｅｔａ—ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ１． Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００３，３６（１）：５３—５９． 『Ｊ】．Ｃｈｅｓｔ，２００３，１２４（５）：】７８９—１７９７， 【５】文敏，李雪，付守延．黄芩苷药理作用研究新进展［Ｊ１．沈阳药科 『１２］Ｃｏｎｔｉ Ｂ，Ｔａｂａｒｅａｎ Ｉ，Ａｎｄｒｅｉ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｆｅｖｅｒ ｌ Ｊ１． Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ，２００４，１（９）：１４３３—１４４９． 大学学报，２００８，２５（２）：１５８—１６２． １３］Ｂａｒｔｌｅｙ Ｊ．Ｆｉｒｓｔ ｃａｓｅ ｏｆ ＶＲＳＡ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｉｎ Ｍｉｃｈｉｇａｎ【Ｊ１．Ｉｎｆｅｃｔ 【６］张喜平，周田关，董晓勤，等．黄芩苷注射液体外抗菌作用实验 『Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｈｏｓｐ Ｅｐｉｄｅｍｉｏ１．２００２，２３（８）：４８０． 研究Ⅲ．医学研究杂志，２００６，３５（８）：３９—４１． 【７】宋立人．现代中药学大词典［Ｍ】．北京：人民卫生出版社，２００１： 】８６５－】８６９． △黑龙江省教育厅研究生创新科研项目。编号：ＹＪＳＣＸ２０１ １－２４６ＨＬＪｏ 通讯作者 ６８ 北方药学２０１４年第１１卷第６期 ２ｄ模型组和４ｄ模型组的ＳＯＤ活性无统 台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；ＥＸＬ８００酶标仪（美国ＢＩＯ— 与同时段空白组相比。ＴＥＫ公司）。 计学差异（Ｐ＞０．０５），６ｄ模型组和８ｄ模型组的ＳＯＤ活性有显著 下降（氏０．０１）。不同时段空白组小鼠肝匀浆中ＭＤＡ含量的组间 １．４实验方法 ０５），而与同时段空白组相比，２ｄ模 １．４．１分组与处理：小鼠适应性喂养２ｄ，正常饲喂，自由饮水。 比较均无统计学差异（Ｐ＞０．将８０只ＩＣＲ小鼠随机分为８个组，其中４个模型组（２ｄ模型 型组和４ｄ模型组的ＭＤＡ含量无统计学差异（Ｐ＞０．０５），６ｄ模型 组、４ｄ模型组、６ｄ模型组、８ｄ模型组），４个空白组（２ｄ空白组、 组和８ｄ模型组的ＭＤＡ含量有显著增加（Ｐ＜０．０１）。 ４ｄ空白组、６ｄ空白组、８ｄ空白组），每组均雌雄各半。分别为４ 个模型组小鼠胃灌注酒精体积分数为５２％的白酒，灌注量为 １２ｍｌ・ｋｇ Ｌｄ，灌胃持续时间分别为２ｄ、４ｄ、６ｄ和８ｄ。４个空白 组小鼠给予胃灌注蒸馏水，灌注量和持续时间与模型组相同。 模型组和空白组均于每天下午六点胃灌注１次。 １．４．２标本的采集：每组小鼠灌胃持续处理的时间结束后，禁食 （自由饮水）１６ｈ，称体重，摘眼球采血，３０００ｒ・ｍｉｎ 离心１０ｍｉｎ 分离血清，备测血清ＡＩＪＴ活性和ＴＧ含量。取血完毕后，立即处 死小鼠，取下肝脏，用４℃生理盐水冲洗，滤纸吸十，称重，计算 表２不同时段小鼠肝匀浆ＳＯＤ、ＭＤＡ的比较（Ｘ￣Ｓ） 注：与同时段空白组比较， 伙０．０１；与２ｄ模型组比较， Ｐ＜ ０ｌ。除２ｄ模型组ｎ＝９，８ｄ模型组ｎ＝８外，其余各组ｎ＝１０。 肝脏指数。取部分肝组织，以４℃生理盐水制成１０％肝匀浆，取 ０．４小鼠肝匀浆ＴＧ和肝脏指数的变化：见表３。结果显示，不同 ｌｍｌ肝匀浆于３５０＠・ａｒｉｎ 离心１５ｒａｉｎ，取上清，备测肝组织ＳＯＤ ２．时段空白组小鼠肝匀浆ＴＧ含量的组间比较无统计学差异，而 活性、ＭＤＡ含量。另取ｌｍｌ肝匀浆用氯仿／甲醇（２：１）抽提甘油 与同时段空白组相比，２ｄ模型组和４ｄ模型组的ＴＧ含量均无统 酯，备测肝脏ＴＧ含量１６］。 ６ｄ模型组和８ｄ模型组的ＴＧ含量有 著增加（Ｐ＜ １．４．３观察和生化指标的检测：实验过程中，观察小鼠的精神状 计学差异，０５或Ｐ＜０．０１），且于造模８ｄ后达到最大。不同时段空向－￣Ｈ／ｂ 态、活动情况和死亡情况等。采用改良赖氏法测定Ａ 活力；采 ０．用甘油激酶一甘油磷酸氧化酶一过氧化物酶偶联比色法测定ＴＧ 鼠肝脏指数的组间比较无统计学差异，除２ｄ模型组外，模型组 ０５或Ｐ＜０．０１）， 含量；采用亚硝酸盐法测定ＳＯＤ活性；采用硫代巴比妥酸 的肝脏指数与同时段空白组相比显著增加（Ｐ＜０． （ＴＢＡ）比色法测定ＭＤＡ含量；采用考马斯亮蓝法测定肝匀浆中 且于造模８ｄ后达到最大。表３不同时段小鼠肝匀浆ＴＧ和肝脏指数的比较（Ｘ＋Ｓ） 的总蛋白含量；肝脏指数＝肝脏重量（ｇ）／体重（ｇ）￣１００％。 空自组 模型组 １．４．４统计学处理：用ＳＰＳＳ １３．０统计软件分析，数据结果用均 造模时 问 ｒＧ（ｔｒｍｏｌ／ｇ Ｌｉｖｅｒ）肝脏指数（％） ｒＧ（ ｍ０１／ｇ ｌｉｖｅｒ）肝脏指数（％） 数４－标准差（ｘ４－ｓ）表示，组间差异比较用单因素方差分析，Ｐ＜０．０５ 为差异有统计学意义。 ２结果 ２．１一般情况：空白组小鼠状态良好，行动灵活，饮食正常。而模 型组小鼠在胃灌注酒精约１５ｒａｉｎ后出现醉酒状态，轻者动作迟 钝，行走不稳，重者醉倒嗜睡，ｌ～２ｈ后开始恢复常态。实验过程 中８０只小鼠中共有７７只完成实验，其中，２ｄ模型组有１只小 注：与同时段空白组比较， Ｐ＜０．０５，－ ０．ｏｌ；与２ｄ模型组比 较， Ｏ．０５，ａｐ＜０．０１。除２ｄ模型组ｎ＝９，８ｄ模型组ｎ＝８外，其余 鼠因酒精误灌人肺中而死亡，８ｄ模型组有２只小鼠不能耐受胃 各组ｎ＝１０。 灌注酒精而死 ，其余各组全部存活。 ３讨论 ２．２小鼠血清ＡＬＴ和ＴＧ的变化：见表１。结果显示，不同时段空 肝脏是酒精代谢转化的主要场所。酒精ｌ存体内主要是通过 白组小鼠血清中Ａ 活性的组问比较无统计学差异，而除２ｄ 微粒体乙醇氧化体系和乙醇脱氢酶乙醇氧化体系来代谢的。过 模型组外，４ｄ模型组、６ｄ模型组和８ｄ模型组小鼠血清Ａ 活 量酒精的摄人导致ＡＬＤ的发病机制较为复杂，目前尚不完全清 性与同时段空白组相比均有显著升高（Ｐ＜０．０１）。随着造模时间 楚，可能与酒精及其代谢产物对肝脏的毒性作 、氧化应激和脂 的增加，模型组ＡＬＴ活性逐渐升高，于造模６ｄ后达峰值，８ｄ后 质过氧化作用等有关，还有其他多种Ｌ犬ｊ素的叠加作用。 略有下降。不同时段空白组小鼠血清中ＴＧ含量的组间比较无 酒精在肝脏内的代谢时可产生大量自由基，过量的自南基 统计学差异（Ｐ＞０．０５），而模型组小鼠血清ＴＧ含量与同时段空 可引起肝细胞膜脂质生成过氧化产物，其代谢产生ＭＤＡ，自南 门组相比均有显著升高（Ｐ＜０．０１），且ＴＧ含量随造模时间的增 基和ＭＤＡ造成自由基清除酶ＳＯＤ的耗竭，同时，肝细胞膜和细 加而逐渐增加。 胞器结构被破坏导致大量肝内ＡＬＴ释放入血。此外，乙醇的氧 表ｌ 不同时段小鼠血清ＡＬＴ、ＴＧ的比较（ ±ｓ） 化使肝细胞质中ＮＡＤＨ／ＮＡＤ＋的比值升高，在细胞内二ｔ羧酸循 环受到抑制，导致甘油ｊ酯的分解减少而合成增加，从而使血清 和肝脏中的甘油＝三酯的含量增加。随着肝损伤的进一步加重， 甘油ｌ一酯在肝细胞内聚集，细胞脂肪变性，最后肿胀死亡 Ｉ。 本实验中，给实验小鼠胃灌注酒精体积分数为ｓ２％ｆｆ，ｊ 酒，灌注量为１２ｍｌ・ｋｇ。。ｄ，持续时问分别为２ｄ、４ｄ、６ｄ、８ｄ。 同 时段空白组比较，造模６ｄ后，小鼠血清中Ａ１ 和ＴＧ均显著升 注：与同时段空白组比较， 旬．０１；与２ｄ模型组比较，ｔＰ＜＝ｏ．０５， 高（Ｐ＜０．０１），肝脏指数、肝组织中ＴＧ和ＭＤＡ含量显著升高（Ｐ＜ “Ｐ＜０．０１。除２ｄ模型组ｎ＝９，８ｄ模型组ｎ＝８外，其余各组ｎ＝１０。 ０．０１），而ＳＯＤ的活性显著下降（尸＜Ｏ．０１）。模型组指标的改变反 ２．３小鼠肝匀浆ＳＯＤ和ＭＤＡ的变化：见表２。结果显示，不同时 映了酒精对肝脏造成了一定的损伤，小鼠急性酒精性肝损伤模 段空白组小鼠肝匀浆巾ＳＯＤ活性的组问比较无统计学差异，而 型建立成功。本实验造模方法简单方便，饲养成本较低，时间短， 北方药学２０１４年第１１卷第６期 ６９ 鼠疫抗体胶体金快速检验法在一起动物鼠疫检测中的应用 武全在 张利芬 田枝林 ０１００２０；２．内蒙古自治区地方病防治研究中心张大禹。（１．内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区疾病预防控制中心呼和浩特 呼和浩特０１００００） 摘要：目的：２００９年内蒙古鄂托克前旗与宁夏平罗县交界区发生了一起动物鼠疫流行，分析此次疫情发现的线索，研究实验室检测 方法。从发现线索到证实疫情存在，使用新的检测方法起到了关键作用，使疫情处理采取了及时相应的措施。方法：参照ＧＢ １６８８３－－１９９７鼠疫细菌学检查方法和ＧＢ １６８８２－－１９９７间接血凝试验对比分析胶体金检测方法。结果：此次疫情的发现是常规监 测工作中采用胶体金试纸条，细菌学检出鼠疫茵９株；胶体金检测方法为疫情的发现提供了线索。结论：胶体金检测新方法的使用 提高了检出率，是对传统检测方法的补充。及时发现了疫情线索，缩短了判定时间，便于采取治理措施。 关键词：鼠疫疫源地胶体金 中图分类号：Ｒ４４６．６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１ ６７２—８３５１（２０１ ４）０６—００６９—０１ 依照《全国鼠疫监测工作方案》的要求，２００９年４月鼠疫常 亚种１株、秃病蚤蒙冀亚种１株）均为自毙鼠及其寄生鼠体蚤。 规监测中，在内蒙古鄂托克前旗与宁夏平罗县交界地区的长爪 ３结论 沙鼠疫源地内，采集到１只子午沙鼠血清，使用胶体金检测方法 胶体金免疫层析法（ｇｏｌｄ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｖ ａｓｓａｙ，ＧＩ— 检验后呈现阳性结果，随即在进一步的调查中发现鼠间疫情流 ＣＡ）是一种较为成熟的监测方法，对于疑似材料的检测具有简 行，进行了必要的处理，现分析如下。 ｌ材料与方法 便、快速等检测优势。 ３．１使用胶体金检测，在初筛中能显著提高检出率。此次使用次 １．１材料：胶体金试剂盒由中国疾病预防控制中心传染病预防控 方法为鼠问疫情发现提供了线索，证实了该地区在间隔３０多年 制所国家重点实验室制备。胶体金免疫层析试纸条由北京庄笛 后再次发生鼠间鼠疫流行的现状。 浩禾生物有限公司提供。 鼠疫噬菌体、鼠疫间接血凝（ＩＨＡ）试剂盒、反向血凝试剂盒 （ＲＩＨＡ）由中国疾控中心鼠疫布氏菌病预防控制基地提供，有效 期内使用。培养基由本实验室制备，配方：胰蛋白胨１％，胰蛋白 ３．２鼠疫抗体胶体金方法是基于鼠疫抗体一抗原反应的方法，将鼠 疫Ｆ１抗原包被在试纸条上，当血清中有鼠疫抗体产生时，就会发 生抗体一抗原反应，再有显色剂出现能够肉眼可见的颜色。优点是 在鼠疫检测工作中速度快，操作简便，使用环境广泛，不受实验室 胨１％，牛肉膏０．３％，氯化钠０．５％，琼脂２％，ｐＨ ６．９～７．１。 条件限制，适合野外检测，灵敏度高，特异性好。不足之处是造价 １．２方法：试剂检测方法和结果判定。将待检测血清样品２００微 昂贵，保存期较短，用血清量较多，只能做定性判断。 升加入试剂的加样孔内，从滴加样品开始计时，１５ｍｉｎ内观察结 ３．３本次鼠问鼠疫疫情经过许多部门的协同配合，疫区得到了科 果。阳性结果为：可见两条紫红色条带，即质控线和检测线皆显 学处理，疫情得以及时控制。快速检测方法的使用，极大地提高了 色；阴性结果为：仅见一条紫红色条带，即只有质控线显色；无效 疫区处理的及时ｌ生，快速判断缩短了处理时间，提高了工作效率。 结果为：无条带出现或仅有检测线出现。 ３．４鼠疫是甲类一号传染病，传播快，病死率高，尤其是现在交 ２结果 通便利、人员流动频繁，使得处于潜伏期的鼠疫病人到达人口稠 鼠疫常规监测中捕获到一只长爪沙土鼠，使用胶体金快速 密地区威胁公共安全的事件成为可能。因此，发展一种快速、准 检测试纸检验血清，其中一只鼠血清呈现阳性。这一结果引起 确的鼠疫诊断方法是很有必要的。徐冬蕾等研究的鼠疫Ｆ１抗 了重视，对疫情的发现提供了线索，对该地区进行再次捕鼠，并 体胶体金检测试剂已经在全国的１４个省份的１７个鼠疫监测点 搜集自毙鼠。其中，捡到自毙鼠７只（长爪沙鼠５只、子午沙鼠１ 的４７８９份材料中进行了现场试验，作者认为，金标检测作为快 只、毛足鼠１只），调查样方３公顷，捕获鼠类１４只（子午沙鼠 速诊断方法有必要作为现有的抗体检测方法的完善和补充，在 １０只、ｉ趾跳鼠４只）；夜行鼠调查布鼠夹３００盘，捕获鼠类５２ 病例诊断和动物监测中使用，和现有的间接血凝试验同时使用， 只（子午沙鼠３５只、三趾跳鼠１３只、毛足鼠３只、黑线仓鼠１ 可互相弥补、对照和印证，可以用于鼠疫的快速诊断。 只）；拣获鼠体蚤９７匹、螨类３２匹。对获得的全部鼠类和体表昆 参考文献 虫进行实验室检验，鼠类共７３只；蚤类样本９７匹／３６组、螨类 『１１徐冬蕾，魏邵振，史献明，等．鼠疫Ｆ１抗体胶体金检测试剂的 研制和现场评价ｆＪ１．中国地方病防治杂志，２００７，２２（３）：５—７． ３２匹／２组，均进行了鼠疫四步检验。 ２１岳明祥．鼠疫耶尔森菌检测技术研究进展『Ｊ］＿中国地方病防治 本次鼠疫流行，共计分离出鼠疫菌９株。其中：鼠类７株 『（长爪沙鼠６株、子午沙鼠检出１株）；蚤类２株（同型客蚤指名 杂志，２００４，１９（６）：３４２—３４５． 在６ ８ｄ内即可初步建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，为研究 ２０１ｌ，８（５）：１８７—１８８． 酒精性肝病的发病机制和护肝药物的保护作用提供了一种较好 【５】曲相如，孙景春，卢秀花，等．实验性肝损伤动物模型的制备和 评价［Ｊ］．中国实验诊断学，２００９，１３（１０）：１４７７—１４７９． 的造模方法。 『６１王小燕．小鼠高脂晚餐对肝脏生物钟和脂质生成基因表达影 参考文献 ［１］张鸿，袁乐媛，王炳元．酒精性肝病与代谢综合征［ＪＪ．胃肠病学 响以及蛇床子素干预作用研究［Ｄ］．苏州大学，２０１３：６－７． ［７］邱萍，李相，孔德松，等．酒精性肝病发病机制研究的新进展［Ｊ１ ．和肝病学杂志，２０１３。２２（８）：８２６—８２９． ｆ２】中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组．酒精性肝 中国药理学通报，２０１４，２：１６０—１６３． ｆ８１许亚男，卿笃信酒精性肝病线粒体损伤分子机制的研究进展 病诊疗指南『Ｊ］．胃肠病学，２０１０，１５（１０）：６１７—６２１． Ｊ１．国际消化病杂志，２０１３，１：１７—２０． ｆ３１田晓娟．酒精性肝病的治疗进展ｆＪ］．中国医药指南，２０１３，１１ 『（２４）：５７—５９． 『９］Ｂｅｉｅｒ ＪＩ，？ＭｃＣｌａｉｎ ＣＪ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ 陶伦酒精性肝损伤实验动物模型研究进展［ＪＪ．中国医学创新， ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１０，３９１（１１）：１２４９—１２６４．
