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5种外用制剂微生物限度检查法中菌落计数方法验证

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2008年第l7卷第22期 药物鉴定 5种外用制剂微生物限度检查法中菌落计数方法验证 李秋菲 ,唐振宏 ,徐长根 ,徐(1.陕西省食品药品检验所,陕西西安翔 710061) 710061; 2.陕西省医疗器械检测中心,陕西西安摘要:目的建立5种外用制剂的微生物限度检查方法。方法采用人工污染5种试验菌株测定其回收率,验证是否有抑菌作用。结果5种 外用制剂均有抑茵作用,其中肤疾洗剂、擦癣药水抑茵作用较弱,独活止痛擦剂、氯霉素擦剂和顽癣净抑茵作用较强。结论肤疾洗剂可采 用稀释法(0.5 mL/皿)和顽癣净可采用薄膜过滤法(300 mL/膜)进行细菌、霉菌及酵母茵检查;擦癣药水可采用常规法进行细菌检查,采 用稀释法(0.2 mL/- ̄-)进行霉菌及酵母菌检查;氯霉素擦剂可采用薄膜过滤法(200mL/膜)和独活止痛擦剂可采用薄膜过滤法(300 mL/膜) 进行细菌检查,采用常规法进行霉菌及酵母菌检查。 关键词:微生物限度检查;验证;抑茵作用 中图分类号:R927.1;R986 文献标识码:A 文章编号:1006—4931(2008)22—0039一O1 干、测定,结果见表1。 表1 样品微生物限度检查法验证试验茵回收率(%) 含抑菌成分的制剂的微生物限度检查,必须消除供试液抑菌 活性后,再依据2005年版《中国药典(二部)》…规定进行检查,同时 所用检查方法需要进行验证试验。为此,笔者对5种外用制剂的微 生物限度检查法的菌落计数方法进行了验证,报道如下。 1 材料 HTY一2000型智能集菌仪及一次性全封闭集菌器(杭州泰林 医疗器械厂)。肤疾洗剂(样品A,批号为061001,100 mL/瓶),独活 止痛擦剂(样品B,批号为061201,50mL/瓶),擦癣药水(样品C,批号 为061201,100 mL/瓶),顽癣净(样品D,批号为060701,100 mL/瓶), 均由陕西思壮药业有限公司生产;氯霉素擦剂(样品E,西安灵丹制 药有限公司,批号为20050802,20 mL/瓶)。改良马丁培养基、营养 肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、蛋白胨(中国 药品生物制品检定所),稀释液、冲洗液为pH=7.0无菌氯化钠一 蛋白胨缓冲液,以上培养基和冲洗液均按照2005年版《中国药典 (二部)》规定制备,采用高压蒸气灭菌法灭菌。金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26 003]、大肠埃希菌【CMCC(B)44 102]、枯草芽孢杆菌 【CMCC(B)63 501】、白色念珠菌【CMCC(F)98 001]和黑曲霉菌 【CMCC(F)98 003】均购于中国医学细菌保藏中心。 2 方法与结果 2.1 试验菌株菌液制备 取经35℃培养18~24 h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯 草芽孢杆菌的营养肉汤培养物1 mL;取经25℃培养24—48 h的 白色念珠菌改良马丁液体培养物1 mL;取经25℃培养1周的黑曲 注:方法I一Ⅳ分别为常规法、培养基稀释法一(1 mL加2个皿)、培养 基稀释法--(1 mL加5个皿)及离心薄膜过滤法。 3 讨论 由于中成药是含有多种成分的复方制剂,其中任何成分具有 抑菌作用均可影响微生物限度检查的准确性。2005年版《中国药典 (二部)》规定,应将5种阳性菌加入到样品中并测定其回收率。常 规法可用于抑菌作用弱的中成药。培养基稀释法可稀释药品中的 抑菌成分,从而消除其对细菌和霉菌生长的影响。如肤疾洗剂的细 霉斜面培养物,加0.9%氯化钠溶液3—5 mL洗脱孢子,取1 mL; 将以上各培养物分别加入到9 mL 0.9%氯化钠溶液中,10倍倍比 稀释制成50~lO0 cfu/mL的菌悬液备用。 2.2供试液制备 取供试品10 mL,加入到pH=7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲 液90 mL中,制备成1:l0的供试液。 2.3检查方法及验证 常规法:取2.2项下的供试液1 mL,分别加入上述5种试验菌 菌和霉菌(酵母菌)的回收率均高于70%,即取1 mL供试液加2个 平皿;擦癣药水霉菌(酵母菌)的回收率高于70%,即取l mL供试 液加5个平皿。对于强抑菌作用的中成药,应采用薄膜过滤法进行 微生物检查。用不同量的冲洗液冲洗可彻底消除其抑菌作用,使对 照菌的回收率高于70%,如顽癣净、氯霉素擦剂、独活止痛擦剂。 株1 mL,立即倾注15 20 mL适宜培养基,平行制备两个平皿,待 凝固后置规定的温度培养24—72 h,观察结果并计数,作为试验 本次试验发现,中成药对大肠埃希菌和白色念珠球菌的抑菌 作用较弱,而对金黄色葡萄球菌和枯草菌的抑菌作用较强,说明中 成药虽不像抗生素有明显的抗菌谱,但还是存在对不同菌种的抑 菌作用不同的特点。 参考文献: [1】国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)fM】.北京:化学工业出 版社.2005:89. 组。同法测定菌液本底数和供试品本底菌数,作为菌液对照组和供 试品对照组。依法计算菌回收率,结果见表1。 培养基稀释法:取1:10的供试液(0.5 mL和0.2 mE),分别加入 不同的试验菌株50 100 cfu,照2.3项下方法进行试验,结果见表1。 离心薄膜过滤法:取1:l0的上清供试液1 mL,加入到50 mL 稀释液中,过滤,用pH=7.0缓冲液200 mL和300 mL进行冲洗, 每次50 mL,在最后一次冲洗液中加入50—100 cfu的试验菌株,滤 (收稿日期:2008—02—20;修回日期:2008—09—03) ・中国药业China Pharmaceuticals 39・ 

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