吸光光度法

一、物质对光的选择性吸收

1、物质对光的选择性吸收2、朗伯-比尔定律适用于任何均匀、非散射的固液气体，作为检测手段时在适用于低浓度的溶液。Alg

I01

lgKbcbcItT

A：吸光度，T：透射比，K：吸收系数，b：溶液厚度，c：浓度，：摩尔吸收系数（单位是Lmol

1cm1）二、分光光度计及吸收光谱

1、分光光度计1光源：通常用钨丝灯，连续光谱在360~880nm2单色器：A、棱镜（用于可见光范围）B、光栅（适用波长范围宽，色散不改变波长，具有良好的分辨率）3吸收池：可见光用玻璃吸收池，紫外区用石英吸收池4检测器（光电转换器）：A、光电管（红敏光电管适用625~1000nm，紫敏光电管适用200~625nm）B、光电倍增管（由光电管改进而来，灵敏度是光电管的200多倍，适用167~700nm）2、吸收光谱（参比溶液的选择）1显色剂与试液都无色，用蒸馏水作参比2显色剂无色，试液有色（存在其他有色离子），用试液作参比3显色剂有色，4显色剂试液均有色，先掩蔽被测离子（时被测离子不与显色剂反应），再加入显色剂，一起作为参比5改变试剂加入顺序，使被测组分与显色剂反应，并以此作为参比三、显色反应及其影响因素

1、显色反应的选择1干扰少（或干扰易排除），灵敏度高（2有色化合物组成恒定，有一定的化学式3化学性质稳定4有色化合物与显色剂颜色差别要大（104）60nm）2、显色剂（有机）1磺基水杨酸：主要用于测定Fe

3，与Fe反应在pH=1.8~2.5呈红色，pH=4~83呈褐色，pH=8~11.5呈黄色2丁二酮肟：用于测定Ni

2，在氢氧化钠中，有氧化剂（如过硫酸铵）存在时与Ni2反应呈红色。31，10-邻二氮菲测量Fe

2较好的试剂，pH=5~6下反应呈橘红色（加入还原防止被氧化，如盐酸羟胺）4二苯硫腙：测定Cu

2,Pb2,Zn2,Cd2,Hg2等重金属离子，可加入掩蔽剂消除重金属离子间的干扰5偶氮胂Ⅲ（铀试剂Ⅲ）：在强酸中与Th6铬天青S：在pH=5~5.8下与4,Zr4,U4生成有色物质。Al3显色7结晶紫：用于测定Tl（Ⅲ），在HBr中与TlBr4显色3、多元化合物（P321）4、影响显色反应的因素1酸度：影响颜色、离子存在状态、络合物的组成等。2显色剂用量：用实验法确定显色剂合适的用量，当吸光度无明显增大时即可。3显色反应时间：实验法确定适宜反应时间4显色反应温度5溶剂：有机溶剂通常可降低有色化合物的解离度，从而提高反应灵敏度。6干扰离子的影响四、吸光光度分析误差及误差控制

1、波长的选择：吸收最大，干扰最小原则2、对朗伯-比尔定律的偏离1非单色光引起的偏离，以及浓度过高也会引起偏差2介质不均引起的偏离：如胶体溶液、乳浊液、悬浮液等会对光散射。3由于化学反应引起的偏离：A、解离B、络合反应C、其他反应4显色反应干扰消除的方法A、控制溶液的酸度B、加入掩蔽剂：测定汞离子时加入EDTA掩蔽Bi(Ⅲ)的干扰。C、改变干扰离子的价态：如铬天青S测Al

D、选择合适的参比E、增加显色剂用量F、分离3、吸光度测量的误差若绝对误差ΔT=±0.01，则有：3时，用抗坏血酸还原干扰的Fe

3Er

T1

100%%TlnTTlnT

是吸光度A在0.2~0.8（T在15%~65%）间才能保证相对误差较小，当A=0.434时（T=36.8），测量的相对误差最小。五、其他吸光光度法1、目视比色法2、示差吸光光度法1概述：示差吸光光度法用于测定浓度过高或过低的试液，采用比待测溶液浓度较低的标准溶液作参比，从而绘制ΔA-Δc曲线，在根据cxc0c求待测液浓度。2误差：参比溶液浓度越接近待测液浓度，误差越小，最小误差可达0.3%3、双波长光度分析法1双波长光度法的原理：该方法只用一个样品池，两个单色器产生1与2同时通过吸收池；若1与2相近，则可认为他们的背景吸收相等，有：AA1A2(12)bc

可见A与物质浓度成正比，且基本消除了样品背景的干扰。2双波长吸光光度法的应用A、单组分的测定：参比波长选择，等吸收点、显色剂吸收峰、有色化合物吸收曲线下端某一波长B、两组分的测定：要测定其中一个组分就必须要消除另一组分的干预，参比波长选择条件是，待测组分在两波长处的A要足够大，干扰组分在两波长出的吸光度相等。4、导数光度分析法1理论基础：吸光度对波长的n介导数值仍与吸收物浓度成正比，导分辨率随着数导介数增加而变高，通常使用二阶导数光谱即可。2优点A、分辨率大大提高，能分辨两个及以上严重重叠的吸收峰。B、能分辨吸光度随波长急剧上升处的弱吸收峰C、能确认宽阔吸收带的最大吸收波长3测量峰值的方法A、峰-谷法B、基线法C、峰-零法