中国当代医药２０１５年６月第２２卷第ｌ７期 ・肿瘤医学・ ＥＢＥＲ显色原位杂交技术在口腔颌面部 淋巴上皮癌中的应用体会 顾挺 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科上海市口腔医学重点实验室．上海２０００１ １ ［摘要】目的探讨ＥＢＥＲ显色原位杂交技术（ＣＩＳＨ）在口腔颌面部淋巴上皮癌中特有的操作与改进方法。方法 应用ＣＩＳＨ技术，荧光素标记的寡核苷酸探针ＥＢＥＲ原位杂交检测试剂盒对４０例疑为口腔颌面部淋巴上皮癌的 病例进行ＥＢＥＲ检测。结果ＥＢＥＲ阳性率为９５％；阳性信号主要定位在肿瘤上皮细胞巢的细胞核上，呈棕黄色， 周围淋巴细胞及正常组织未见明显着色；信号定位准确，染色结果清晰易辨，无背景干扰。结论简化操作ＥＢＥＲ 原位杂交检测试剂盒能够节省时间、增强信号强度和提高工作效率等。 【关键词】ＥＢＥＰ，．；显色原位杂交技术；淋巴上皮癌；ＥＢ病毒 【中图分类号】Ｒ７３９．８ ［文献标识码】Ａ ［文章编号】１６７４—４７２１（２０１５）０６（ｂ）一００５５—０３ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｏｆ ＥＢＥＲ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｃｈ－ ｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｏｒｏｍａｘｉｌｌｏ－ｆａｃｉａｌ ｒｅｇｉｏｎ ＧＵ Ｔｉｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ｎｉｎｔｈ Ｐｅｏｐｌｅ Ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００１ １，Ｃｈｉｎａ ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＥＢＥＲ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙ— ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＣＩＳＨ）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｏｒｏｍａｘｉｌｌｏ－ｆａｃｉａｌ ｒｅｇｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＣＩＳＨ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－ｌａｂｅｌｅｄ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｒｏｂｅ ＥＢＥＲ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ，ａｎｄ ４０ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｌｙｍｐｈ０ｅｐｉｔｈｅｌｉａ１ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｏｒｏｍａｘｉｌｌｏ－ｆａｃｉａｌ ｒｅｇｉｏｎ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ＥＢＥＲ ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ＥＢＥＲ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ９５％；ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｉｇｎａｌ ｗａｓ ｍａｉｎｌｙ ｌｏｃａｔｅｄ ａｔ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｕｓ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｎｅｓｔ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａＳ ｂｒｏｗｎｉｓｈ ｙｅｌｌｏｗ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｅｅｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｃｏｌｏｒｉｎｇ；ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ａｃｃｕ— ｒａｔｅ，ｃｏｌｏｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｃｅｒｎｉｂｌｅ，ｎｏ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅ－ ＢＥＲ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ＢｉｏＧｅｎｅｘ）ｉｓ ａｂｌｅ ｔｏ ｓａｖｅ ｔｉｍｅ，ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎ ｓｉｎｇａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｗｏｒｋ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ－ｅｎｃｏｄｅｄ ＲＮＡ；Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｉｎ ｓｉｉｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｌｙｍｐｈｏｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ＥＢ ｖｉｒｕｓ ＥＢＥＲ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ－ｅｎｃｏｄｅｄ ＲＮＡ）为ＥＢ 断，近两年来。本科室对疑为淋巴上皮癌的病例进行 病毒的表达产物，是ＥＢ病毒编码的ｍＲＮＡ，在细胞 ＥＢ病毒感染的检测。现把操作体会总结如下。 核中以高拷贝数存在［１ｌ。人感染ＥＢ病毒与鼻咽癌的 １．１材料与方法 发生有密切关系 。在全身其他肿瘤性疾病（传染性 １．１标本收集 单核细胞增多症、多发性硬化症、伯基特淋巴瘤等）中 收集２０１２年９月～２０１３年１２月上海交通大学 也有一定比例的ＥＢ病毒感染嘲。部分发生于口腔颌 医学院附属第九人民医院口腔病理科疑为淋巴上皮 面部的肿瘤如淋巴上皮癌、结外ＮＫ／Ｔ细胞淋巴瘤 癌的石蜡标本共４０例，其中男性２１例，女性１９例， 中 ，ＥＢＥＲ的表达情况可以作为辅助诊断的手段。为 年龄２３～８５岁，中位年龄５１．５岁。发病部位：腮腺１８ 肿瘤诊断提供必要依据。ＥＢＥＲ显色原位杂交技术 例，腭部８例，颌下７例，舌根３例，颈部和颊各２例。 （ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＣＩＳＨ）是检测ＥＢＥＲ １０％中性甲醛固定２４ ｈ，石蜡包埋，切片厚３ ｐ，ｍ。 是否表达的技术之一．其原理是利用ＥＢＥＲ特异性探 １．２杂交试剂与设备 针与标本中ＥＢＥＲ靶序列互补、杂交后。通过ＤＡＢ显 杂交所用试剂盒为荧光素标记的寡核苷酸探针 色技术，确定标本中是否存在ＥＢ病毒感染，该方法 ＥＢＥＲ原位杂交检测试剂盒（Ｂｉｏ Ｇｅｎｅｘ）；玻片为 具有极高特异性和灵敏性，可用于石蜡和冷冻切片的 ＡＰＥＳ胶处理片；杂交仪为ＤＡＫＯ的Ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｒ；电热 检测。目前，ＣＩＳＨ已应用于鼻咽癌等肿瘤的辅助诊 恒温水浴箱为上海精宏实验设备有限公司的ＤＫ— ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２２ Ｎｏ．１７ Ｊｕｎｅ ２０１ ５嗣嘲 ・肿瘤医学・ 中国当代医药２０１５年６月第２２卷第ｌ７期 能完成整个化疗周期。提高化疗的疗效，降低肿瘤的 的不良反应，值得临床推广应用。 【参考文献】 ［１】Ｊｅｍａｌ Ａ，Ｓｉｅｇｅｌ Ｒ，Ｗａｒｄ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．ＣＡ 中国癌症杂志，２００７，１７（１０）：７７０—７７２． ８】林万隆，陈强．奥沙利铂的药理作用及临床应用［Ｊ］．中国 复发和远处转移，延长生存时间，并且没有增加药物 ［肿瘤临床，２０００，２７（１１）：８７２—８７４． 【９】陈治宇，许立功．抗肿瘤新药——培美曲塞［Ｊ］．中国新药 与临床杂志，２００５，２４（２）：１４３—１４７． 【１０］Ｓｕｎ ＪＦ，Ｗｕ ＲＲ，Ｎｏｒｒｉｓ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｏｗ—ｄｏｓｅ ｅａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ ａｓ 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［１１】李琳，田玉旺，朱红艳，等．应用ＥＢＥＲ原位杂交检测 ［１８］周伟，耿建祥，韩惦梅，等．原位杂交ＨＰＶ ＤＮＡ检测技 ＥＢ病毒的体会［Ｊ】＿诊断病理学杂志，２０１１，１８（４）：３１１— ３１２． ［１２】倪灿荣，宝建中．固定条件对ｃＲＮＡ探针原位杂交检测 （收稿日期：２０１５—０１—１９本文编辑：许俊琴） ■一ＣＨＩＮＡ ＭＯＤＥＲＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２２ Ｎｏ．１７ Ｊｕｎｅ ２０１ ５
