生 ＬＥＴＴＥＲＳ ＩＮ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｖｏ１．２２ Ｎｏ．２ Ｍａｒ．，２０１ １ 物 技 术 通 讯 １７３ ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００９－０００２．２０１１．０２．００６ 研究报告 伤寒沙门茵和甲型副伤寒沙门茵分离株的外膜蛋白谱比较 张力，王瑞白，闫梅英，肖迪，阚飙 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，传染病预防控制国家重点实验室，北京１０２２０６ ［摘要］ 目的：比较伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌流行菌株的外膜蛋白谱差异。方法：运用二维蛋白电泳方法，对 我国伤寒沙门菌株ＸＪ９０和甲型副伤寒沙门菌株ＪＸ２００５—９２在实验室通用营养条件下培养提取的外膜蛋白进行分 离，比对其差异，对差异蛋白点进行质谱鉴定，对鉴定蛋白点的基因序列也进行比较。结果：菌株ｘＪ９０中发现２Ｏ个 特异蛋白点，质谱鉴定出１６个；菌株ＪＸ２００５—９２中发现２９个特异蛋白点，鉴定出１８个。在这些蛋白中，ＯｍｐＡ是数 目最多的同种差异蛋白。这些差异蛋白点中的大部分编码基因在２种细菌中序列高度相似或相同。结论：伤寒沙门 菌和甲型副伤寒沙门菌基因序列高度相似的外膜蛋白具有不同的修饰形式，提示其不同遗传背景在相同的环境条 件下表现出精细的功能差异。 ［关键词］ 外膜蛋白；二维电泳；伤寒沙门菌；甲型副伤寒沙门菌 ［中图分类号］Ｑ８１１．４；Ｑ５Ｏ３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］ １００９—０００２（２０１１）０２—０１７３—０５ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉ ａｎｄ Ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ Ｉｓｏｌａｔｅｓ ＺＨＡＮＧ Ｌｉ，ＷＡＮＧ Ｒｕｉ－Ｂａｉ，ＹＡＮ Ｍｅｉ－Ｙｉｎｇ，ＸＩＡ ０ Ｄｉ，ＫＡＮ Ｂｉａｏ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＯＭＰ）ｐｒｏｆｉｌｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉ ａｎｄ Ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｅｐａｒａｔｅ ｔｈｅ ＯＭＰ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉ ｓｔｒａｉｎ ＸＪ９０ ａｎｄ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ ｓｔｒａｉｎ ＪＸ２００５—９２，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｍｍｏｎ ｍｅｄｉａ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．Ｔｈｅ ＯＭＰ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｉｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｐｏｔｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ． Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｗｅｎｔｙ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｐｏｔｓ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉ ｓｔｒａｉｎ ＸＪ９０ ａｎｄ ２９ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ ｓｔｒａｉｎ ＪＸ２００５－９２ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ， ａｎｄ １６ ａｎｄ １ ８ ｓｐｏｔｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ ｔｏ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｗｉｔｈ ＭＳ． Ｍｏｓｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ ｃｏｄｅｄ ｂｙ ｔｈｅｉｒ ｓｈａｒｅｄ ｇｅｎｅｓ． Ｓｐｏｔｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ａｓ ＯｍｐＡ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｃｏｍｍｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｌｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＯＭＰ ｓｐｏｔｓ ｗｈｉｃｈ ｓｈａｒｅ ｔｈｅ ｈｉｇｈｌｙ ｓｉｍｉｌａｒ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ ｍａｙ ｈａｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｉｃａｔｆｉｏｎ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｅｌａｂｏｒａｔｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｉｆｆｅｒ— ｅｎｅｅ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓｈａｒｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉ；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ａ：２－Ｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ 伤寒是发展中国家威胁人群健康的重要公共 菌ＡＴＣＣ９１５０），说明它们有着非常相似的基因组。 卫生问题，每年导致近６Ｏ万人死亡口ｌ。近年来，甲型 副伤寒在东南亚出现并迅速流行，在我国一些省份 也超过伤寒成为优势菌型圜。伤寒沙门菌属于沙门 菌Ｄ血清群，而甲型副伤寒沙门菌属于Ａ群。虽然 分属不同的血清群，但二者均引起以人为惟一宿主 但是，我们在比较伤寒与甲型副伤寒的全菌蛋白质 组时，发现二者在蛋白表达谱上呈现很大的差异。全 菌蛋白包含的蛋白种类多，功能复杂，出现大的差异 不足为奇。外膜是各类细菌抵抗外界侵扰的屏障，亦 是实现外环境和细胞内部分子交流的通道，功能相 ［收稿日期］２０１０—１２—２９ ［基金项目］国家科技重大专项（２００８ＺＸ１０００４—００２） ［作者简介］张力（１９７６一），女，助理研究员；王瑞白（１９７３一），女 副研究员。二者为共同第一作者 ［通信作者］阚飙，（Ｅ—ｍａｉｌ）ｋａｎｂｉａｏ＠ｉｃｄｃ．ｃｎ 的疾病，临床症状难于区分，确诊只有通过病原分 离鉴定。比较两者已测序菌株的基因组发现，各菌 株独有蛋白编码基因只占各自蛋白编码基因的 ９．８％（伤寒沙门菌ＣＴ１８）和７．４％（甲型副伤寒沙门 １７４ 对一致，蛋白种类相对简单。而且，作为疏水蛋白， 外膜蛋白是良好的免疫原，其抗体不仅对机体有免 疫保护作用，而且在细菌的诊断中又可作为检测靶 标，亦是疫苗的良好备选成分。在本研究中，我们对 我国近年伤寒副伤寒流行期间的伤寒沙门菌分离 株和甲型副伤寒沙门菌分离株在实验室常用培养 条件下提取的外膜蛋白进行了蛋白质组比对分析， 发现二者的蛋白谱并无高度一致性，反而表现出较 大的差别，提示两者共有的外膜蛋白具有不同修饰 状态，在功能上可能有精细的差异。 １材料与方法 １．１ 材料 伤寒沙门菌株ｘＪ９０与甲型副伤寒沙门菌株 ＪＸ２０Ｏ５—９２均分离自近年我国伤寒副伤寒流行期间 病人，由本科室保存。 １．２ 菌株外膜蛋白提取及定量 将菌株分别用哥伦比亚血琼脂于３７℃培养ｌ６～ １８ ｈ，刮取菌苔，用预冷的低盐ＰＢＳ洗４次；用５０ ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．５的Ｔｒｉｓ—Ｃ１重悬菌体，定容至５ ｍＬ， 冰浴中超声５ ｍｉｎ（采用ＳＯＮＩＣＳ ＶＣ ７５０超声波 仪，大探头，最大功率的２５％，脉冲２ Ｓ，停２ Ｓ），使 菌体吸光度（Ｄ值）下降到初始值的１／１０；４℃、６０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ去除未破碎的菌体，取上清，加 入１０倍体积冰预冷的０．１ ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ ＣＯ３ （ｐＨ１１．０），冰浴中缓慢搅拌１ ｈ；４℃、１００ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心１ ｈ，弃上清，用５０ ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．５的Ｔｒｉｓ—Ｃ１ 重悬菌体，再次４℃、１００ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１ ｈ，弃上 清，用裂解液（含５ ｍｏｌ／Ｌ尿素、２ ｍｏｌ／Ｌ硫脲、２％ ＣＨＡＰＳ、２％ＳＢ ３—１０）充分溶解；用ＰｌｕｓＯｎｅ Ｑｕａｎｔ Ｋｉｔ（ＧＥ Ｈｅａｔｈｃａｒｅ公司）对提取物进行蛋白定量，分 装成小份，直接上样或一７０℃保存备用。 １．３二维蛋白电泳及凝胶染色 将２株菌各８００ ｇ外膜蛋白分别载入１７ ｃｍ ＩＰＧ胶条（ｐＨ３－１０，Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司），ＰＲＯＲＥＡＮ ＩＥＦ ＣＥＬＬ被动水化１２ ｈ，主动水化１２ ｈ，聚焦６０ ０００ ＶＨ，最大电压１０ ０００ Ｖ，最大电流５０ Ａ。聚焦完 成后的胶条分别用ＤＴｒ和碘乙酰胺平衡１５ ｍｉｎ。 双相电泳采用恒流方式，ｌ５℃循环水冷却，先１０ ｍＡ电泳２０ ｍｉｎ使蛋白进入ＳＤＳ—ＰＡＧＥ胶，再将电 流加大至３０ ｍＡ，当溴酚蓝刚刚迁移出凝胶底部时 终止电泳。用考马斯亮蓝Ｇ一２５０（含３４％无水甲醇、 １７％硫酸铵、３％的８５％正一磷酸、０．１％Ｇ一２５０）染 色，ｌ％乙酸溶液脱色。 通ＬＥＴＴＥＲ 技术讯１Ｔｒ Ｓ ＩＮＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ…Ｖｏ１．・…２ ２ Ｎｔｏ．・ 一２一一Ｍａｒ．，２・， …０１１ ｌ １．４差异点分析与质谱鉴定 染色的双向电泳凝胶经扫描保存图像（ＵＭＡＸ Ｐｏｗｅｒ ｌｏｏｋ ２１００ＸＬ扫描仪，透射扫描，光学分辨率 ３００ ｄｐｉ，对比度与亮度用软件默认值，蛋白图谱比 对用ＰＤＱｕｅｓｔ软件，人工修正）。取凝胶上的差异蛋 白质点，放人预先编号且加好５０ Ｌ脱色液（含２５ ｍｍｏｌ／Ｌ碳酸氢铵和５０％乙腈）的０．２５ ｍＬ离心管 中，室温放置３０ ｍｉｎ，吸去脱色液，更换３次脱色 液，直至胶块无色透明；抽真空离心干燥３０ ｍｉｎ左 右，至白色颗粒状；加入２ Ｌ溶于２０ ｍｍｏｌ／Ｌ碳酸 氢铵的胰蛋白酶（浓度为１０ ｎｇ／ Ｌ），４℃吸胀１ ｈ， 将管子倒置于３７℃恒温箱消化１３ ｈ左右；加入８ Ｌ ５％三氟乙酸，３７℃温育１ ｈ；将液体吸净转移至 一干净的离心管中，加入８ Ｌ ２．５％Ｚ氟乙酸／５０％ 乙腈，３０ 温育１ ｈ，吸出液体与前一次的提取液合 并；加入８ Ｌ １００％乙腈，室温放置１ ｈ，吸出液体 与前２次的提取液合并；抽真空离心干燥肽段提取 液；用２ ｐ．Ｌ ０．５％三氟乙酸充分溶解管壁上的沉 淀，即可用于质谱分析。质谱分析采用ＭＡＬＤＩ— ＴＯＦ／ＴＯＦ—ＭＳ。采用频率为２００ Ｈｚ的Ｎｄ：ＹＡＧ激光 器，波长３５５ ｎｍ，正离子模式采样，默认校准（误差 小于５０ｘ１０ ）。ＣＩＤ内采用空气碰撞，２０００次叠加。 利用４０００ Ｓｅｒｉｅｓ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．０软 件采集样品，从相对分子质量８００ｘ１０ 到４０００ｘ１０ 采集一级谱图，用ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ从高到低采集１０个 母离子。用ＧＰＳ工作站（ＧＰＳ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ ｖ３．６，ｍａｓｃｏｔ ｖ２．１）搜索ＮＣＢＩ的非冗余数据库及Ｓｗｉｓｓ—Ｐｒｏｔ数据 库。设置可变修饰Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ（Ｃ）、Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ（Ｍ）、 Ｐｈｏｓｐｈｏ（ＳＴ）、Ｐｈｏｓｐｈｏ（Ｙ）、Ｐｈｏｓｐｈｏ＋ＰＬ（Ｓ）、Ｐｈｏｓ— ｐｈｏ＋ＰＬ（Ｔ）、Ｐｈｏｓｐｈｏ＋ＰＬ（Ｙ），搜索母离子偏差设为 ０．３ｘｌＯ 、ＭＳ／ＭＳ片段偏差设为０．３ｘ１０ 。蛋白得分 ＣＩ％高于９５％，且至少有２个肽段得分大于５０或１ 个肽段得分大于６Ｏ。根据蛋白登录号在网站ｈｔｔｐ：／／ ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ检索蛋白对应基因、蛋白功能。 １．５ 序列比对 对鉴定出的伤寒沙门菌差异蛋白点的编码基 因，在ＮＣＢＩ库中运用ＢＬＡＳＴ工具比对其在甲型副 伤寒沙门菌ＡＴＣＣ９１５０和ＡＫＵ一１２６０１基因组中是 否有同源基因。同样，对鉴定出的甲型副伤寒沙门 菌差异蛋白点的编码基因，在伤寒沙门菌ＣＴＩ８和 Ｔｖ２基因组中寻找其有无同源基因。 ２结果 ２．１ 伤寒沙门菌ＸＪ９０和甲型副伤寒沙门菌 张力等：伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌分离株的外膜蛋白谱比较 １７５ ＪＸ２００５—９２外膜蛋白图谱的差异 上述差异蛋白分别属于外膜蛋白６大家族（表 ３）。在伤寒沙门菌中，蛋白点１、２、１３、１６为底物特 异的孔蛋白，蛋白点８、９、２０为一般孔蛋白，蛋白点 ７、１１、１２、１５为未知功能脂蛋白或外运蛋白，蛋白点 二维电泳图谱中，伤寒沙门菌ｘＪ９０外膜蛋白 共７６个点，甲型副伤寒沙门菌ＪＸ２００５－９２共８２个 点，这些点大多分布在偏酸性和中性区域。二者相 比较，ｘＪ９０有２０个特异蛋白点（表１，只列出鉴定 出的蛋白），ＪＸ２００５—９２有２９个特异蛋白点（表２， 只列出鉴定出的蛋白），分别占总数的２６％和３５％， 显示出两者较大的差异。 ２．２差异蛋白的质谱鉴定 ３、５、６、１０、１８为定位于细胞其他部位的蛋白质。甲 型副伤寒菌中，蛋白点２４为ＴｏｎＢ依赖的含铁转运 蛋白，蛋白点２５为磷脂酶Ａ家族蛋白，２９、３３、２８为 一般孔蛋白，蛋白点３２为未知功能脂蛋白，蛋白点 ４３为ＯｍｐＸ家族蛋白，蛋白点２７、４９、３１、４２、４７、４８ 表１伤寒沙门菌ＸＪ９Ｏ外膜蛋白特异点鉴定结果 表２甲型副伤寒沙门菌ＪＸ２００５—９２外膜蛋白特异点鉴定结果 表３伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌差异蛋白结构功能分类 张力等：伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌分离株的外膜蛋白谱比较 １７７ 为底物特异的孔蛋白，蛋白点３４、３５、３６、３７、４０为 ＯｍｐＡ蛋白。这些差异蛋白中，数量最多的同种差异 蛋白是ＯｍｐＡ。 ２．３ 差异蛋白编码基因的序列比对 根据质谱鉴定出的蛋白名称及序列号在ＮＣＢＩ 库中搜寻其在ＣＴ１８或ＡＴＣＣ９１５０中的基因序列， 然后在ＢＬＡＳＴ工具栏中输入其序列，搜寻其在对方 基因组中是否有同源基因。结果表明，在所鉴定的 蛋白质中，除伤寒沙门菌ＸＪ９０中的１个蛋白（蛋白 点１１，功能未明，在甲型副伤寒测序株ＡＴＣＣ９１５０ 和ＡＫＵ一１２６０１中均未搜到此蛋白编码基因）外，２ 株菌中其他所有鉴定出的蛋白质在对方中都有同 源基因，且基因相似度都在９０％以上。 ３讨论 本研究主要进行了伤寒沙门菌ＸＪ９０和甲型副 伤寒沙门菌ＪＸ２００５—９２外膜蛋白的比较。发现在基 因如此相似的基础上，它们的外膜蛋白图谱表现出 了很大的差异，这些差异可能是由于蛋白质转录后 的调节或修饰所致。蛋白质修饰在其应对外界信号 改变、发挥或调整功能方面非常重要，蛋白质的修 饰可以由其功能决定，亦可由环境因素决定。例如 差异点ＯｍｐＦ（孔蛋白），其不同的修饰可造成孔蛋 白的大小和孔径变化，相应引起蛋白质等电点和分 子量的微小差异。 在ＸＪ９０和ＪＸ２００５—９２菌株外膜蛋白差异蛋白 点中，ＪＸ２００５—９２中数量最多、表达量最高的单一差 异蛋白是外膜蛋白ＯｍｐＡ，它是肠杆菌科主要外膜 蛋白。ＯｍｐＡ是一类进化过程中高度保守的蛋白ｆ３＿， 在伤寒和甲型副伤寒测序株ＣＴ１８和ＡＴＣＣ９１５０中 的蛋白序列一致度达到９９％。ＯｍｐＡ在大肠杆菌和 其他肠杆菌科中具有多种功能，它的表达量很高， 而且转录后的调节很严格。它可以发挥黏附和侵袭 的功能，可以参与生物膜的形成，可作为免疫靶标， 又可作为免疫逃逸的对象［４１，还是一些噬菌体的受 体。基于转录后调节的修饰，只是某些氨基酸位点 的改变，其相对分子质量应该没有大的改变。但在 甲型副伤寒沙门菌的外膜蛋白图谱中，我们发现， 差异蛋白点３４和３５的分子大小没有大的差别，蛋 白点３６和３７没有大的差别，但这２组之间却表现 出分子量的明显差异，它们与蛋白点４ｏ的分子量 亦有很大差异，这种分子量的明显差异可能是由于 蛋白前期处理过程中肽段的断裂或编码基因不同 的转录产物造成。ＯｍｐＡ作为差异蛋白，在ＪＸ２００５— ９２中数量众多，在ＸＪ９０中却没有作为差异蛋白出 现，可能原因是它在ｘＪ９０中的表达与ＪＸ２００５—９２ 相同，或亦是差异蛋白，但没有鉴定到。这些提示 ＯｍｐＡ在伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌中有不同 的修饰形式，即便具有相同的培养条件，在其有差 异的遗传背景下，也显示了不同的功能适应性。 影响蛋白修饰的众多环境因素中，渗透压是造 成蛋白表达状况差异的原因之一。研究证明，ＯｍｐＦ 和ＯｍｐＣ（在差异蛋白中属于一般孔蛋白）即与渗透 压有直接关系。此外，生长温度、ｐＨ值等多种环境因 素也影响着ＯｍｐＦ和ＯｍｐＣ的表达［５１。因此，我们认 为，ＯｍｐＦ和ＯｍｐＣ这样的一般孔蛋白在伤寒沙门 菌ｘＪ９ｏ蛋白谱中的特异表现，除遗传因素外，更有 可能是由适应环境因素的略有差异的机制造成的。 主要外膜蛋白在细菌的生存、防御、毒力等过 程中承担着相似的任务，尤其在遗传背景相似的不 同细菌中，因此，它们的结构很相似。如ＯｍｐＡ、 ＯｍｐＣ、ＯｍｐＦ这些蛋白的全序列，在伤寒和甲型副 伤寒之间的相似度达到９０％以上。它们在结构如此 相似的基础上却表现出二维电泳图谱上的多样性， 提示它们在功能上有精细的差异。此外，我们对伤 寒沙门菌外膜蛋白和甲型副伤寒外膜蛋白图谱的 比较，亦为将来筛选诊断区分二者的蛋白抗原提供 了资料，如果能发展出针对不同修饰状态蛋白结构 域的抗体，可能会提高诊断的特异性，但还需要大 量的体内体外细菌蛋白表达分析的研究数据。 参考文献 【１］Ａｎｓｏｎｇ Ｃ，Ｙｏｏｎ Ｈ，Ｎｏｒｂｅｃｋ ＡＤ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｕｓａｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｔｙｐｈｏｉｄ ｆｅｖｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ，２００８，７ （２）：５４６—５５７． ［２］ 闫梅英，梁未丽，李伟，等．１９９５—２００４年全国伤寒副伤寒的流 行分析咖．疾病检测，２００５，２０（８）：４０１—４０３． １３１３ Ｊｅａｎｎｉｎ Ｐ，Ｍａｇｉｓｔｒｅｌｌｉ Ｇ，Ｇｏｅｔｓｃｈ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ（ＯｍｐＡ）：ａ ｎｅｗ ｐａｔｈｏｇｅｎ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎ ｔｈａｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ—ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，２００２，２０（Ｓｕｐｐｌ ４１：Ａ２３—２７． ［４］ Ｍｉｔｔａｌ Ｒ，Ｐｒａｓａｄａｒａｏ Ｎ Ｖ．Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ１ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｔｏ ｐｒｅｖｅｎｔ ｔｈｅ ｍａｔｕｒａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－１０ ａｎｄ ＴＧＦ—ｂｅｔａ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８，１８１（４）：２６７２－２６８２． ［５］ Ｍｉｚｕｎｏ Ｔ，Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ Ｓ．Ｓｉｇｎａｌ 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