FDA食品动物用来自发酵的新兽药和饲料添加剂安全性评价指导原则

FDA食品动物用来自发酵的新兽药和

饲料添加剂安全性评价指导原则

萧惠来

(国家食品药品监督管理局药品审评中心,北京　100038)

[收稿日期]2008207210　[文献标识码]A　[文章编号]100221280(2008)0820051-04[中图分类号]S859.83

[摘　要]　美国食品药品监督管理局兽药中心1996年7月颁布了“评价食品动物用化合物安全性的一般原则”。本文是其中第Ⅵ部分“来自发酵的新兽药和饲料添加剂安全性评价指导原则”的译文,供我国对这类兽药、饲料添加剂的安全性评价参考。

GuidanceforNewAnimalDrugsandFood

AdditivesDerivedfromaFermentation

XIAOHui-lai

(CenterforDrugEvaluation,StateFoodandDrugAdministration,Beijing100038;China)

Abstract:TheCenterforVeterinaryMedicine,U.S.FoodandDrugAdministrationpublishedGeneralPrinciples

forEvaluatingtheSafetyofCompoundsUsedinFood-ProducingAnimalsonJuly27,2006.Thisarticleisthe

translationofits“VI.GuidanceForNewAnimalDrugsandFoodAdditivesDerivedFromAFermentation”.TheguidancemightshedthelightfortheevaluationofsafetyofsamenewanimaldrugsorfoodadditivesinChina.1　目的和适用范围

本指导原则介绍,来自发酵的新兽药和饲料添

加剂的申请者,如何在FDA批准用于食品动物之前,达到申请者说明化合物安全性的法规要求。本指导原则所述试验和评价标准适用于来自生产药品的发酵并以复杂混合物给与食品动物的新产品。FDA更关注那些微生物发酵产生的鲜为人知的新发酵物质的毒性。来自这些发酵的产品可能含有毒性成分,这些成分不易分离和识别并可能以可食用动物产品的残留物的形式存在。

除非新证据显示安全性同非特异性物质有关,FDA不会考虑这些试验和评价标准适用于现在作为复杂混合物合法给与食品动物的兽药,也不适用

于FDA7126.31遵守政策指南(FDACompliancePolicyGuide#7126.31)限定下的现在市场上销售的饲料成分。(来自管制的抗生素生产而不是作为药品上市的饲料成分;每吨饲料成分含抗生素2g

)以下;每吨成品饲料含饲料成分3磅以下。

FDA也不常规地考虑这些试验和评价标准用于

来自不生产药品的发酵企业的副产品的新饲料添加

剂,除非有证据表明这些产品中的非特异性物质同安全性有关。后面这组添加剂目前包括的产品有,干的或湿的啤酒糟或其浓缩残液、干的或浓缩的烧酒糟残液、来自酶或有机酸生产者的提取的发酵压榨饼或残液以及来自啤酒或淡色浓啤酒麦芽浆的酵母收获物(yeastharvestsfrombeeroralemash)。

作者简介:萧惠来(1939年2),男,教授,从事新药非临床药理毒理评价工作。E-mail:penglai8051@yahoo.com.cn

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2　指导原则的需求

FDA近几年批准了用于动物饲料的一些抗生

素,这些抗生素以未提纯或部分提纯的产品上市。这些产品的大多数在其纯抗生素进行的生物检定(bioassay),已认可了对它们的耐受性。这种管理方法假设抗生素是产品中最有毒的物质。FDA不再认为这种管理方法合适。这类产品的药品部分典型地含1%～25%,而其余75%～99%是非特异成份。非特异部分可能是正常的动物细胞成分(例如,醣、氨基酸、脂肪酸、核苷酸等)并认为是安全的。然而,众所周知微生物会产生毒素(1-4)。微生物既可以产生有益的产品,也可产生有害的毒素。这些物质的数量随培养条件的变化(例如,培养基、温度、pH、通风速率)和微生物遗传完整性的变化而不同。发酵可能发生被产生毒素的竞争的微生物污染。最终,为了销售进行的原料加工过程中,可能产生或引入毒性成分。

在这个系列的其他指导原则所述的标准和方法假定,申请者的产品大多数都有特点并且所有成分容易分离、鉴别和进行了所说的试验。然而,本指导原则所述的申请者的产品是复杂的混合物,可含有微生物、其细胞碎片和代谢产物以及残留的培养基和非培养基物质。本指导原则提供一个评价这类产品安全性的可接受的方法,然而可以选择其它方法(see21CFR10.90)。例如,申请者可以选取化学上有特点的产品,在检测引起毒性的成份之后,申请审批。3　申请产品的安全评价

申请产品的评价按照本指导原则包括:(1)用其他指导原则中所述的目前使用的标准进行纯药品的安全评价,(2)用本指导原则所述的方法进行申请产品非特异性部分的毒理学评价。A　非特异性部分的试验

申请者一般应对拟上市的产品进行这种试验。产品至少应来自于试验厂发酵的(最好来自生产厂发酵的)并且必须来自于同一批或同一合并批。鼓励申请者在开始试验前向FDA提交详细的方案,以便评审和提意见。

申请者可选择下列任何一个实验组合。组合1

3啮齿类动物(一般为大鼠)的180d饲喂研究。可接受的研究包括60和120d的连续宰杀。如果履行申请者显示产品安全性的法定责任是必

要的,当证据表明有迟发性毒性可能时,FDA可要求更长的饲喂研究。

3非啮齿类哺乳动物(一般为狗)90d饲喂研究。如果履行申请者显示产品安全性的法定责任是必要的,当证据表明有迟发性毒性可能时,FDA可要求更长的饲喂研究。

3致畸成份大鼠2代生殖毒性研究。如果同第一代比第二代毒性呈现低剂量、高发生率或高强度,那么研究应包括第三代。3有和没有代谢活化的水和有机溶剂提取物以及以最高实用剂量饲喂申请产品的食品动物(靶动物)尿中存在的残留物的遗传毒性试验。如果这项试验显示阳性反应,那么申请者必须在两种啮齿类动物进行慢性生物鉴定(chronicbioassays),以便解决致癌性问题和因而说明法律要求的安全性。组合2

3两种啮齿类动物致癌性慢性生物鉴定。3非啮齿类哺乳动物(一般为狗)90d饲喂研究。如果履行申请者显示产品安全性的法定责任是必要的,当证据表明有迟发性毒性可能时,FDA可要求更长的饲喂研究。

3致畸成份大鼠2代生殖毒性研究。如果同第一代比第二代毒性呈现低剂量、高发生率或高强度,那么研究应包括第三代。

在饲喂研究中,申请者使用的剂量应高到足以提供非特异性成分可能的毒性资料。如果使用的数个剂量的最高剂量引起纯药品的反应或者如果申请产品构成总日粮的10%而没有出现毒性,FDA认为符合这种要求。FDA认为申请产品要以超过国家癌症研究所推荐的非营养物质为日粮浓度5%的限度(5)饲喂,因为申请产品的许多成分是营养物;然而,FDA没有提出申请产品以推荐的营养物20%限度饲喂,以减少观察到营养或盐类失调的毒性反应的可能性。通常90d研究扩展到180d并且包括连续宰杀,以便增加鉴定的敏感性。

申请者可选择使用遗传毒性试验,评价申请产品中非特异性成份可能存在或生成成的致癌残留物。这些试验结果不能提供致癌性的直接证据,但是这些实验是有用的,因为化合物致遗传毒性试验不良数据的大小同在动物致癌性高度相关。在最低限度评估指导原则(GUIDANCEFORTHRESH2OLDASSESSMENT)中已讨论了推荐的试验。FDA将根据这些资料的总评价,而不是根据单一检测结

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果作出管理决定。

FDA常建议申请者对可食用组织中存在的每种残留物进行单独的遗传毒性试验。这种试验对这些申请产品不一定可行。逐个地试验申请产品的提取物和靶动物尿中的残留物是人可能摄入的残留物最可行而又直接的试验。通过试验尿中残留物已经检出致突变物(6-11)。如果有防碍提取物或尿样试验的技术原因,那么申请者应在两种啮齿类动物进行慢性生物鉴定(组合2),以便评价申请产品致癌的可能性并从而说明法律要求的安全性。

建议的提取物制备一般过程:步骤1　用水溶剂(过量水,最好是水-薄荷醇混合液)提取申请产品的样品匀浆。过滤或离心除去不溶物。减压蒸发除去溶剂。步骤2　用适当的有机溶剂(例如乙酸乙酯)提取水提取剩余的固体物。过滤或离心除去不溶物。减压蒸发除去溶剂。步骤3　将已知量的剩余物溶于适合试验系统的最少量溶剂中。每一份溶液除菌(建议滤器除菌)。

建议的尿样制备一般过程:步骤1　饲喂申请产品前,每6只动物至少有3只,收集24h尿样。合并样品作为阴性对照;阳性对照是加产生阳性反应的已知物的尿样。

步骤2　以高于推荐的产品剂量而低于引起毒性的剂量,饲喂动物两周。为避免假阳性,应注意保证日粮变数仅限于申请的产品。

步骤3　收集给药动物尿样。用酶(例如β-葡糖苷酸酶和芳基硫酸酯酶)处理合并的样品,以便释放结合物。样品减压蒸干。

步骤4　将已知量的剩余物溶于适合试验系统的最少量溶剂中。溶液除菌(建议滤器除菌)。B　结果评价

FDA比较纯药品和推荐上市产品的结果,确定所有毒性是否是纯药品所致。如果FDA断定数据没有证明非特异部分有任何其他毒性,FDA将用纯药品的试验结果,规定ADI(acceptabledailyintake,日允许摄入量)。

如果FDA断定,资料证明其他毒性来自申请产品的非特异部分,FDA可以使用该试验结果确定ADI。例如,假定纯药品试验的无作用剂量水平(no-observedeffectlevel,NOEL)确定为400ppm。还假定推荐上市产品试验的NOEL确定为100

ppm。这种结果可能提示非特异部分中存在另外的

有毒物质。在这种特殊情况下,FDA将用药品残留物作为其他有毒物质的标志并用100ppm计算ADI。如果进行了90d毒性研究,药品总残留的ADI将是0.1ppm(100ppm除以1000倍安全系数)。或者如果进行了长期毒性研究,则ADI为1ppm(100ppm除以100倍安全系数)。当采用这种方法时,如果必要,FDA将执行法定的申请者建立控制药品残留物检验的要求,以确保遵守任何药品使用的限制。

上述方法不适用于致癌物。在这种情况下,申请者开发安全产品可有下列选择:

3精制药品和丢弃发酵残渣,或

3再设计产品,减少与药物有关毒物的浓度并证明根据本指导原则,再设计的产品是安全的。或

3鉴别毒物和用足够的毒物试验,证实可以制订含有毒物产品的使用安全条件。FDA可以要求申请者提出控制毒物的检测方法,满足说明安全性的法定要求。C　质量控制

申请者必须提交产品说明及在生产中,为确定和维持产品性质、强度和质量,使用的方法及其管理的说明(21CFR514.1(b)(4)and(5))。FDA将评价这些资料,作为人食品安全性评价的一部分,以便确定这些方法足以防止毒性成分的形成,而无需前清除试验(pre-clearancetesting)。申请者必须遵守所述方法及其管理,除非补充的新兽药申请已获得批准(21CFR514.8)。申请者根据本指导原则条款要求,申请审批还必须提供:

3从原种培养到发酵所使用的微生物培养技术的说明,以便作出可能污染的评价以及评价所用检验的说明。

3为控制种菌遗传完整性所使用的方法的说明以及为保证维持这种完整性所使用的检验的说明。

3发酵所用培养基的说明,包括培养基成分容许的最大变化表。

3确定每批药物产量所用检验的说明以及允许偏离期望产量批次所用的标准。

如果检验结果和质量控制不符合NADA规范,这批产品不能以新兽药或饲料添加剂目的上市。必须保持生产纪录(21CFR226.102)。

作为批准条件,如果FDA认为其他试验和质量控制不足以维护申请产品的性质、强度和质量,

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(译自FDA.VI.GuidanceForNewAnimalDrugsandFoodAdditivesDerivedFromAFermentation,GeneralPrinciplesforEvaluatingtheSafetyofCompoundsUsedinFood-ProducingAnimals,RevisedJuly27,2006;http://www.fda.gov/cvm/Guidance/GFI003.htm)

可以要求申请者在质量控制过程中,采用细菌基因

突变试验。在评审所提交的资料之后,根据个体化分析原则可能作出这种决定。参考文献:

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口服活疫苗成野生动物疫病防控研究方向

　　新华网哈尔滨7月22日电(记者贾楠、范迎春)记者从日前在哈尔滨召开的“新出现及重新出现的动物传染病”学术研讨会上获悉,口服活疫苗研究已成为国际野生动物疫病防控研究的发展方向。

据中国工程院院士夏咸柱介绍,“口服活疫苗”指的是用基因工程的方法把病毒中致病性的基因进行突变、缺失,使其失去致病性从而作为疫苗使用;或者把保护性抗原基因(即有免疫作用的基因)用基因工程的方法,放在另外一个不致病的病毒或细菌里,研制成一个基因重组的活载体疫苗。

就口服活疫苗的优势而言,夏咸柱说,灭活疫苗是把疫苗中的病原微生物杀死后做成的,这种“死疫苗”只能通过注射进入动物体内后,才能发挥作用;而活疫苗可以口服,通过动物口腔进入机体,产生免疫,免疫效果比“死疫苗”好。“特别是对于不易捕捉的野生动物,只要把活疫苗放在特制的诱饵内,就可以使其通过采食实现免疫。”

他同时指出,要保证活疫苗安全有效,就要使含有疫苗的诱饵在动物口腔内能够待上一段时间,通过动物的咀嚼使疫苗进入机体。“如何避免动物一口吞掉这种饵料,还需要进一步研究。”据介绍,目前,狂犬病重组活载体疫苗在国际上已用于野生动物狂犬病的预防,例如表达狂犬病毒糖蛋白的重组痘病毒、重组人5型腺病毒疫苗在欧洲和北美已广泛用于狐、浣熊、臭鼬等野生动物免疫。

夏咸柱说,在中国,军事兽医研究所、哈尔滨兽医研究所、华南农业大学和华中农业大学等单位正在进行狂犬病口服弱毒疫苗株、“无毒”疫苗株和重组活载体疫苗等项研究。“以犬二型腺病毒作载体的口服活疫苗研究已经通过国家生物安全评价,目前正在进行临床试验,如果试验数据通过国家审评,则可以大规模使用。”

来源:新华网http://www.hlj.xinhuanet.com/xw/2008-07/22/content_13887265.htm[2008-07-28]

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