血清钙测定影响血清谷丙转氨酶测定结果的观察

西部医学２００８年３月第２Ｏ卷第２期Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｍａｒｃｈ　２００８，Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．２　３８７　血清钙测定影响血清谷丙转氨酶测定结果的观察　龚见习　，宋万英。，黄乾吉　（１．德阳市第二人民医院，四川德阳６１８０００Ｉ２．四川省交通厅公路局医院，四川成都６１００４１）　【摘要】目的　了解生化分析仪测定血清钙（Ｃａ”）是否对测定血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）结果有影响及其影响因素，　从而改进测定策略，以保证结果的准确性。方法对采用定值血清直接测定ＡＬＴ（对照组）和先测血清Ｃａ”再测ＡＬＴ　（检测组）的结果进行比较，再设定避免试剂针和试剂交叉污染的方法以及改变测定顺序来观察对结果的影响情况。结果　检测组与对照组ＡＬＴ值比较差异有显著性，试剂针和试剂均存在交叉污染现象，影响检测结果。结论序，可保证结果的准确性。　全自动生化仪　具有微量、快速、精密度好的特点，但存在检测项目阐的交叉污染，适当改变项目的分析顺序和设定避免交又污染的程　【关键词】血清钙；　血清ＡＬＴ交叉污染　【中图分类号】Ｒ４４６．１１”　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７２—３５１１（２００８）０２—０３８７—０２　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ＧＯＮＧ　Ｊｉａｎ—ｘｉ　・ＳＯＮＧ　Ｗａｎ—ｙｉｎｇ　・ＨＵＡＮＧ　Ｑｉａｎ—ｊｉ　（１，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ｄｅｙａｎｇ，Ｄｅｙａｎｇ　６１８０００，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ　１　２．Ｔｈｅ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｈｉｇｈｗａｙ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｆ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００４１，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ａｓｃｅｒｔａｉｎ　ｗｈｅｔｈｅｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｈａｓ　ｓｏｍｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ，ｓｏ　ｔｈａｔ　ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｔｅｇｙ　ａｎｄ　ｅｎｓｕｒｅ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ＡＬＴ　ａｓｓａｙ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｇｏｔ　ｆｒｏｍ　ｄｉｒｅｃｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ　ｔｈａｔ　ａｆｔｅｒ　ｓｅｒｕｍ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ）．Ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ａｖｏｉｄ　ｃｒｏｓｓ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｔ　ｎｅｅｄｌｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｒｄｅｒ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔＷＯ　ｇｒｏｕｐｓ　ｈａｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｂｏｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｔ　ｎｅｅｄｌｅｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｃｒｏｓｓ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｈａｔ　ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｃｃｕｒａｃｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｒｏｓｓ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｍｏｎｇ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ．Ｔｈｅ　ｃｒｏｓｓ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｂｅ　ｏｂｖｉａｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｇｕａｒａｎｔｅｅｄ　ｂｙ　ｃｈａｎｇｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｒｄｅｒ　ａｎｄ　ｓｅｔｔｉｎｇ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｓｅｒｕｍ　ｃａｌｃｉｕｍ；　Ｓｅｒｕｍ　ＡＬＴ；　Ｃｒｏｓｓ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　全自动生化分析仪具有微量、快速、多项、安全等　１．２方法①观察试剂针交叉污染：将定值血清直接　优点，但诸多文献报道其测定过程中项目间存在着交　测定ＡＬＴ５０次（对照组）；再先测Ｃａ。　后测ＡＬＴ（检　叉污染的问题，如尿酸对测定血清钾的交叉污染［　；还　有ＡＬＴ、Ｔｒｉｇ、ＣＯ２对镁ＭＴＢ法测定的影响［２］。我们　在使用生化分析仪也发现血清钙（Ｃａ件）对谷丙转氨酶　（ＡＩ　Ｔ）、谷草转氨酶（ＡＳＴ）测定有一定的影响。我们　测定项目顺序为ＡＩ　Ｔ—ＡＳＴ—ＴＢ—ＤＢ—ＴＰ—ＡＬＢ　—ＢｕＮ—Ｃｒ—Ｃａ抖，当有两项以上标本同时测定时，就　存在先测钙后测ＡＬＴ的循环。因此，我们进行了血清　测组），重复此操作，共５０次。②观察试剂的交叉污染：　设定以蒸馏水代替Ｃａ抖试剂Ｒ１，进行先测Ｃａ抖后测　ＡＬＴ５０次；再以蒸馏水代替Ｃａ抖试剂Ｒ２，再重复以上　测定５０次。⑧设定避免试剂交叉污染的程序：用罗氏　公司提供的０．１　９，６的碱性洗液，将定值血清先测定一　次Ｃａ抖，试剂针在每次吸完Ｃａ抖试剂之后，将０．１　９，５　的碱性洗液分别放在仪器设定的某３个实验项目的样　品位和试剂位上，达到清洗３次的目的，再次测定　ＡＬＴ（检测组），同样，将定值血清直接测定ＡＬＴ５０次　Ｃａ。　和血清ＡＬＴ交叉污染实验，现将结果报告如下。　１材料和方法　１．１　材料①试剂：Ｃａ抖测定试剂、ＡＬＴ测定试剂均　（对照组）。④试剂针连续测定，观察交叉污染：将定值　血清先测１次Ｃａ抖后，连续１５次测定ＡＬＴ值，同时　购自四川省迈克科技有限责任公司。②仪器：日本东芝　ＴＢＡ一４０ＦＲ全自动生化分析仪。⑧质控血清：由罗氏　用蒸馏水代替定值血清同样操作。⑤改变测定项目的　顺序：把ＡＬＴ调到Ｃａ抖之前测定，即以Ｃａ抖一ＴＰ—　公司提供，ＡＬＴ的参考值为１００ｕ／Ｌ。　维普资讯 http://www.cqvip.com

西部医学２００８年３月第２Ｏ卷第２期Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ．Ｍａｒｃｈ　２００８，Ｖｏ１．２０．Ｎｏ．２　ＡＬＢ—ＡＬＴ顺序测定。　１．３统计学方法采用ｔ检验，以ａ一０．０５为检验水　准。　２结果　２．１试剂针交叉污染结果见表１。经统计学处理叫，　结果显示差异有显著性（￡一４４．２４，Ｐ＜０．００１）。　表１测定Ｃａ　后测ＡＬＴ结果　Ｔａｂｌｅ　１　ＡＬＴ　ｖａｌｕｅ　ａｆｔｅｒ　ｓｅｒｕｍ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　对照组　检测组　ＡＬＴ（ｕ／Ｌ）　９９　１００　１０１　例数　２　４１　４　；（ｕ／Ｌ）　１００．１６　ＳＤ　０．５８　１．２．２　试剂的交叉污染　以蒸馏水代替Ｃａ。　试剂　Ｒ１，进行先测Ｃａ。　后测ＡＬＴ　５０次，结果　一１００．０８，　ＳＤ＝０．５２；以蒸馏水代替Ｃａ。　试剂Ｒ２，再重复以上测　定５０次，结果　一９５．５３，ＳＤ＝０．９８，说明可能主要是　由Ｃａ。　试剂Ｒ１影响ＡＬＴ的结果。　１．２．３设定避免试剂交叉污染的程序结果见表２，　两组结果差异有显著性（￡一３０．９３，Ｐ＜０．００１）。　表２利用清洗程序后ＡＬＴ值　Ｔａｂｌｅ　２　ＡＬＴ　ｖａｌｕｅ　ａｎｅｒ　ｗ￣ｈｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　对照组　检测组　ＡＬＴ（ｕ／Ｌ）　例数　Ｘ（ｕ／Ｌ）　ＳＤ　１．２．４试剂针连续测定，观察交叉污染结果显示，　两者均在第６次测定恢复到直接检测ＡＬＴ的水平。　１．２．５　改变测定项目的顺序　①把ＡＬＴ调到Ｃａ。　之前测定，测定结果　一１００．１０，ＳＤ＝０．５０，ｒ：１．０。②　以Ｃａ。　一ＴＰ—ＡＬＢ—ＡＬＴ顺序测定，其结果为　一　１００．０６，ＳＤ＝０．４５，ｒ一１．０，结果显示这两种方法都可　以避免Ｃａ。　对ＡＬＴ的影响。　３讨论　由试剂针交叉污染的结果可知，测定血清Ｃａ　后　对ＡＬＴ的测定产生很大的影响。交叉污染造成ＡＬＴ　明显下降，偏差值为７．５２ｕ／Ｌ，偏差率达７．５１　，且重　复性差。手工操作进行空白实验，也说明Ｃａ。　对ＡＬＴ　测定造成污染。其原因可能如下：酶促反应最适条件尽　量与人血清中该酶一致［３］，而人血清ＡＬＴ在ｐＨ　７．２　～９．１间呈对称性峰，ｐＨ　７．６～８．０之间几乎呈平　台Ｌ４　。而血ｃａ。　的测定在碱性条件下（ｐＨ　１１）进行的。　本研究也证实，影响ＡＬＴ最主要的原因是由测定　Ｃａ。　的Ｒ１缓冲液（ｐＨ一１０．６）引起的。根据酶促反应　的过程如ｐＨ、温度、底物浓度等一定条件下测得的酶　活性大小，才能真实代表酶含量的多少，由此可知，ｐＨ　对反应的动力学会有影响，吸光度值可能不是最大值。　因此而影响ＡＬＴ值测定，反之，则不影响血Ｃａ。　值。　全自动生化仪具有微量、快速、结果可靠等优点，　但实验中它是一根探针吸取试剂，项目之间仅用蒸馏　水清洗，一般难以洗净，容易将少量的血清和试剂残留　在探针上。我们设定避免交叉污染的程序后，启动清洗　程序，其结果还存在４．６４　ｕ／Ｌ的偏差值，偏差率　４．６４　，说明不能完全避免交叉污染，但偏差率已明显　下降。该操作繁锁，不适宜大批量样本的检测，也增加　成本和工作量。　本研究中测血清Ｃａ。　后连续测定ＡＬＴ，前几次　都有不同程度的残留，直到第６次才恢复到正常水平，　可见污染难以消除，值得重视；并且实际工作中不可能　采取这种办法来避免交叉污染。因此，我们为避免交叉　污染，改变了测定顺序就不存在Ｃａ　对ＡＬＴ的影响　了。值得一提的是，工作中要测试许多项目，也要注意　相邻项目的污染问题，调整实验项目的测试循环也是　避免污染的好办法。本着实践经验和借签文献的推荐，　我室对项目的测试循环进行排列；ＴＰ—ＡＬＢ—ＡＬＴ—　ＴＢ　ＤＢ　ＡＳＴ　ＢｕＮ　Ｇｌｕ　ｕＡ　Ｃｒ　Ｃａ　，此循　环虽然出现Ｃｒ—Ｃａ。　一ＴＰ—ＡＬＢ循环，但由于测Ｃｒ　为苦味酸法，和ＴＰ的测定都为碱性环境，相互间有缓　冲作用，并且ＴＰ、ＡＬＢ均为单试剂，测试对其没有影　响，经测定室内质控和患者标本各检测项目结果均良　好。　因此，为避免交叉污染，在平时工作中应仔细观察　邻近项目之间是否存在干扰或被干扰的现象，由此确　定各项目的分析顺序，一旦确定不可随意改变。在每次　测试标本后要启动清洗程序，全面清洗，定期维护保养　仪器，同时，提供使用新的方法学来避免某些试剂对某　些项目的影响，从而保证检测结果的准确性。　【参考文献】　［１］邹德勇，崔云龙，胡红淼，等．尿酸对酶法测定血清钾的交叉污染　分析口］．临床检验杂志，２００１，１９（２）：１３．　［２］陈晓婷，徐俊荣，马建锋．几种试剂对镁ＭＴＢ法自动分析的影响　［Ｊ］．临床检验杂志，２０００，１８（５）：２９４．　［３］安乙敏．生化检验学［Ｍ］．第１版．四川：四川科学技术出版社，　１９９０：１３９．　［４］崔玲燕，庞晓黎，赵海，等．苦味酸影响胆红素结果的观察［Ｊ］．　宁夏医学杂志，２００７，２９（３）：２５１—２５２．　（收稿日期：２００７—１１—３１Ｉ编辑：何兴华）