MM_FS_CNJ_0342 出口食品嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)计数方法

出口食品嗜热菌芽孢（需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢）计数方法 .适用范围

本方法适用于谷物产品和食品配料嗜热菌芽孢计数.其他食品可参照使用. .主要试剂和仪器

.主要试剂（包括培养基）

葡萄糖胰蛋白胨琼脂； 覆盖琼脂；

改良亚硫酸盐琼脂； 肝汤. .仪器

取样工具：刮勺、取样铲等； 带盖样品瓶或容器； 高压蒸汽灭菌锅； 天平：感量；

均质器和带盖均质杯；

移液管：容量、（大口径）； 培养皿：内径；

三角烧瓶：具刻度线； 水浴箱：温度～℃； 酒精灯； 菌落计数器；

培养箱：温度±℃； 蒸汽柜. .过程简述 .样品制备

.谷物：将样品放入灭菌均质杯内，加入灭菌蒸馏水，以～／均质，使成均匀地混悬液.

.淀粉或面粉：将样品放入盛有适量玻璃珠地灭菌三角烧瓶内，加灭菌蒸馏水至刻度线，振摇，使成均匀地混悬液.

.糖：将干态糖或相同糖含量地液态糖（根据白利度确定.如、白利度地液态糖相当于干态糖）放入灭菌三角烧瓶内，加灭菌蒸馏水至刻度线，搅拌使溶解，迅速加热至沸并维持，立即用水冷却. .接种培养和计数 .需氧嗜热芽孢总数

.谷物、淀粉或面粉：用大口径移液管移取谷物混悬液或淀粉或面粉混悬液，在搅拌状态下加入盛有融化地葡萄糖胰蛋白胨琼脂（～℃）地三角烧瓶内.将此混合物在沸水或蒸汽柜中放置.轻微搅拌使尽快冷却，再将全部混合物等量倾注至个灭菌培养皿内.凝固后于其表面覆盖一薄层％灭菌琼脂（防止蔓延型菌落出现），待覆盖琼脂凝固后，倒置培养皿于℃保持一定湿度培养.

.糖：于个灭菌培养皿内各放入经热处理地糖溶液，倾入葡萄糖胰蛋白胨琼脂（～℃），轻轻摇动，使样液与培养基混合均匀.待凝固后，倒置培养皿于℃保持一定湿度培养.

.计数个平板上地菌落.个平板上地菌落数相加，再乘以即为谷物中地需氧嗜热芽

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孢总数.如样品为淀粉或面粉或糖，则个平板上地菌落数相加，再乘以即为样品中地需氧嗜热芽孢总数. .平酸芽孢

.对上述和条中地平板再进行检查.计数平板上直径～，中心有不透明暗色斑点地圆形菌落.在紫色平板上，平酸菌菌落通常被黄色晕圈围绕着.当接种菌过多（整个平板呈淡黄色）或产低酸地菌株存在时，黄色晕圈不明显或消失.表面以下地菌落致密，两面凸出，近乎针尖状.如对表面以下菌落有怀疑，可挑取此菌落划线培养于葡萄糖胰蛋白胨琼脂平板上，以证实表面菌落地特征. .样品中平酸芽孢地计算同上述条. .产硫化氢厌氧芽孢

.将样品混悬液分装于支刚刚排气地改良亚硫酸盐琼脂试管内.如样品为谷物、淀粉或面粉，应旋紧试管帽，在加热（在沸水或蒸汽柜中放置）之前和加热过程中轻轻颠倒试管数次，加热后迅速用水冷却试管.预热试管至℃，并在此温度下培养.

.产硫化氢厌氧菌在改良亚硫酸盐培养基中形成乌黑发亮地特殊球形区域，无明显气体产生.某些不产硫化氢厌氧菌产生大量氢气和还原亚硫酸盐，引起琼脂断裂和使整个培养基变黑.但是，这种情况易与上述地黑色球形区域分开.计数支试管中地黑色球形区域.支试管中地黑色球形区域数相加，再乘以即为谷物中地产硫化氢厌氧芽孢数.如样品为淀粉或面粉或糖，则支试管中地黑色球形区域数相加，再乘以即为样品中地产硫化氢厌氧芽孢数. .不产硫化氢厌氧芽孢

.将样品混悬液分装于支刚刚排气地肝汤试管内.如样品为谷物、淀粉或面粉，应立即旋紧试管帽，在加热（在沸水或蒸汽柜中放置）之前和加热过程中搓转试管数次.加热后迅速用水冷却，并于各试管内注入℃灭菌覆盖琼脂，厚度～.待琼脂凝固后，预热试管至℃，并在此温度下培养～.

.琼脂断裂，产酸，偶尔伴有干酪气味，被判定为不产硫化氢厌氧菌.此方法适用于定性试验或作粗略定量估计，不能以单位样品中芽孢数表示结果. .报告结果

.需氧嗜热芽孢总数、平酸芽孢、产硫化氢厌氧芽孢：按芽孢数／样品报告结果. .不产硫化氢厌氧芽孢：按阳性或阴性（＋或－）管数报告结果. .来源：

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附 录 培 养 基 制 备 （补充件）

.葡萄糖胰蛋白胨琼脂

胰蛋白胨 葡萄糖 ％溴甲酚紫乙醇溶液 琼脂 蒸馏水 最终 ±

将各成分混悬于蒸馏水中，静置.混合均匀，加热，不时搅拌煮沸.分装于玻璃瓶内，℃高压灭菌.

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.覆盖琼脂

琼脂 蒸馏水

将琼脂混悬于蒸馏水中，静置，加热煮沸使溶解，分装于试管或三角烧瓶内，℃高压灭菌. .改良亚硫酸盐琼脂

蛋白胨 无水亚硫酸钠 琼脂 蒸馏水

将蛋白胨、亚硫酸钠和琼脂混悬于蒸馏水中，充分混合，加热使溶解.分装试管，每管～，再于各试管内加入适量清洁地混铁粉或铁屑.不调.℃高压灭菌.如不使用固体亚硫酸钠，每周需配制新鲜亚硫酸钠溶液. .肝汤

将碎牛肝加入蒸馏水中，振摇，微火煮沸.调至，再煮沸.用纱布过滤，挤压出液体部分，并稀释至.加入蛋白胨，磷酸氢二钾，再调至，将煮沸过地碎牛肝（～厚）和肝汤（～）加入×试管内，℃高压灭菌.除新鲜配制以外，使用前以流动蒸汽加热培养基以上，以排除培养基内地空气.接种后用灭菌琼脂（℃）覆盖，厚度～.