植物体叶绿素含量的测定实验报告

植物体叶绿素含量的测定

摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿

体色素，叶绿素a，叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm、649nm和470nm。根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。

实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a，叶绿素b和类胡萝卜素最

大吸收峰的波长分别是665nm、649nm和470nm。

根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色

素含量。

实验目的：掌握分光光度计法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜

素总浓度测定和计算的方法。

实验材料：

生物材料：菠菜叶片0.25g，自己培养的全素番茄苗叶片0.2g，缺磷

番茄苗叶片0.2g；

试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙；

仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、10ml

量筒、50ml容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。

实验步骤：

1.叶绿体色素的提取

取新鲜菠菜叶片0.25g，擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许石英砂和CaCO3，再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆，再加95%乙醇10ml，静置10min，用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣至无色；用容量瓶定容至50ml。 2.吸光度的测定

取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和470nm下测定吸光度。 3.结果计算

依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a、B的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。

Ca（叶绿素a）=13.95A665 – 6.8A649 Cb（叶绿素b）=24.96A649 – 7.32A665 CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16A649 + 6.63A665

Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470 – 2.05Ca-114.8Cb)/248

叶绿体色素含量 =

色素浓度（mg/L）提取液体积（L）稀释倍数

样品鲜重（g）

实验结果：

菠菜叶片提取液吸光值：

1 2 3 波长/组别 平均 665nm 0.706 0.704 0.699 0.703 649nm 0.296 0.291 0.288 0.292 470nm 0.835 0.831 0.825 0.830 全素培养番茄叶片提取液吸光值： 1 2 3 波长/组别 平均 665nm 0.302 0.306 0.300 0.303 649nm 0.132 0.132 0.131 0.132 470nm 0.359 0.358 0.352 0.356 缺磷培养番茄叶片提取液吸光值： 1 2 3 波长/组别 平均 665nm 0.261 0.265 0.263 0.263 649nm 0.136 0.136 0.138 0.137 470nm 0.326 0.331 0.331 0.329 根据以上数据及计算公式可得： 材料（g）/ 浓叶绿素a 叶绿素b 叶绿素总浓度 类胡萝卜素总度（mg/L） 浓度 7.82 2.14 9.96 2.29 菠菜 3.33 1.08 4.41 0.91 全素番茄 2.74 1.50 4.24 0.609 缺磷番茄 材料（g）/ 色叶绿素a 叶绿素b 叶绿素总含量 类胡萝卜素总素含量（mg） 含量 1.564 0.428 1.992 0.458 菠菜 0.83 0.27 0.11 0.23 全素番茄 0.548 0.3 0.848 0.122 缺磷番茄 实验讨论： 1、测定叶绿素 ab为什么选用红光波长？

叶绿素吸收红光和蓝紫光，故有两个吸收峰，光合色素还有类胡萝卜素，只吸收蓝紫光，所以不能选蓝紫光区测定，否则被类胡萝卜素干扰，只能用红光。