肉鸡致病性大肠杆菌的分离与鉴定

实验研究　今日畜牧兽医　肉鸡致病牲大肠杆菌的分离与鉴定　崔华敏　，陈立功　，管艳庆。，史晓涛　，魏昆鹏　（１．河北农业大学动物科技学院，河北保定０７１００１；　２　河北省涿州市农村经济发展局畜牧办公室，河北涿州０７２７５０）　摘要：自保定博野发病肉鸡群分离到１株大　阿莫西林（以上药物由保定市冀农动物药业公司　肠杆菌。药敏试验结果显示，这株大肠杆菌分离物　提供）；注射用硫酸链霉素（１Ｏ０万ＩＵ／支）和硫酸　具有多重耐药性．仅对阿米卡星和黏菌素抗生素　庆大霉素注射液（２毫升，８万ＩＵ／支）为华北制药　极敏或高敏。动物试验结果表明．该大肠杆菌对小　股份有限公司生产。　白鼠具有高度致病性。　１．３实验动物健康１４日龄雏鸡２０只，购自　关键词：肉鸡：大肠杆菌；致病性；分离；鉴定　河北省保定市某肉鸡场。昆明系小白鼠（１８　２２　鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的一　克）购自河北大学医学部实验动物中心。　种鸡的细菌性疾病，包括大肠杆菌性败血症、肉芽　１．４分离与培养无菌钩取病料划线分别接种　肿、气囊炎、肿头综合征、腹膜炎、输卵管炎、滑膜　于营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板，３７￣Ｃ有氧培养　炎、全眼球炎及脐炎，卵黄囊感染。近来，鸡大肠杆　２４小时。　菌病在保定市养殖场及散养户中频繁发生，且有　１．５细菌纯化鉴别培养后，挑取单个菌落接　发病早、流行快、耐药性强、死亡率高及混合感染　种于麦康凯培养基上，３７℃培养２０小时．挑取单　等特点，为了有效控制该病的发生，最大程度地减　个菌落，经涂片染色，镜检，证实为纯培养物后，将　少经济损失．笔者对保定市博野肉鸡场疑似大肠　纯培养物置４℃冰箱中备用。　杆菌病例进行了病原分离与鉴定、药敏试验和动　１，６生化试验按常规方法对细菌分离株进行　物试验，现将结果报告如下。　三糖铁试验（ＴＳＩ）、葡萄糖、乳糖、麦芽糖等糖发酵　１材料与方法　试验、Ｖ—Ｐ试验、枸橼酸钠利用试验、硫化氢试验，　１．１病料无菌采取保定博野发病鸡场送检病　明胶液化试验。　鸡的心脏、肝脏、脾脏。　１．７药敏试验　１，２主要试剂　１，７．１纸片扩散法将麦康凯平板培养２０—２４　１．２，１培养基及生化试剂普通营养琼脂培养　小时的分离细菌的纯培养物作为菌种，取测试菌　基ｆ购自杭州天和微生物试剂有限公司１、麦康凯琼　种用“十”字划线法均匀涂布普通琼脂平板，每个　脂培养基ｆ购白北京双旋微生物培养基制品公司）、　平板放置６个不同的抗菌药敏片，做好标记后置　三糖铁琼脂培养基（购自杭州天和微生物试剂有　３７ｏ【＝培养１８—２４小时，测量抑菌圈。　善；　限公司）。葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、枸　１．７．２结果判定按抑菌圈直径大小作为判定　橼酸盐、硫化氢、明胶、尿素九种细菌生化微量鉴　敏感性的标准，２０毫米以上判为极敏；１５—２０毫米　萤　定管及Ｍ．Ｒ试剂、Ｖ—Ｐ试剂（甲液、乙液）等购自杭　判为高敏：１０—１４毫米判为低敏；１０毫米以下判为　莹　州天和微生物试剂有限公司。吲哚试验、动力实验　耐药。　所需培养基，吲哚试剂：由河北农业大学药理实验　１　８动物试验　室提供原料。　纯培养细菌用营养琼脂培养基增菌后选取单　１　２，２抗菌药物氟苯尼考、氧氟沙星、诺氟沙　个菌落，置３７℃恒温培养２４小时，刮取平板上所　星、培氟沙星、环丙沙星、新霉素、阿米卡星、泰乐　有菌落混于灭菌生理盐水中制成细菌悬液，按倾　菌素、阿奇霉素、替米考星、蒽诺沙星、利福平、强　注平板培养方法计算单位体积的活菌数量。　力霉素、粘菌素、青霉素、新诺明、红霉素、四环素、　将１４日龄健康雏鸡２０只，随机分成２组，每　一２００　８　…　‘～　～　～ｏ　ｎ　维普资讯 http://www.cqvip.com

今日畜牧兽医　组１Ｏ只。第１组雏鸡经口服接种博野株细菌悬　实验研究　接种后３小时第１组小鼠开始　液。Ｏ．２毫升／只（２．３２ｘ１０　ＣＦＵ／毫升），第２组口服　接种灭菌生理盐水，作试验对照。２组鸡隔离饲养，　表现昏睡、厌食、鼠毛蓬松、后肢无力、四肢瘫痪，　排稀粪。接种后１２～２４小时内死亡．死亡率为　１００％ｏ病死小鼠肺脏表面呈暗红色。表现不同程度　的瘀血：肝脏肿大・。表面呈黄褐色：可见明显的腹　壁肠管充血．肠黏膜可见弥漫性的出血点：部分小　鼠腹腔渗液和肠积液水肿．动物试验结果表明该　连续观察１周，观察记录其发病、死亡数和剖检病　变，并以心血作细菌分离、鉴定　７天后存活鸡扑　杀．观察病变并作细菌分离鉴定。根据鸡的死亡数　和病变程度确定分离株的致病性：（ａ）高致病株：　５０％以上的接种鸡死亡或产生严重病变（心包炎、　大肠杆菌分离物对小鼠具有高度致病性。　３结论与小结　肝周炎、气囊炎、肝坏死等）；（ｂ）中度致病株：接种　鸡不死亡，产生严重病变者不超过５Ｏ％：（ｃ）低致　病性分离株：接种鸡不死亡，仅在气囊上偶尔产生　病变。　将１Ｏ只小白鼠随机分成２组，每组５只，第１　组小鼠经腹腔注射接种博野株细菌悬液。Ｏ．１毫　升／只：第２组接种灭菌生理盐水。接种剂量和接　种途径与第１组同。２组小鼠分别隔离饲养。接种　后每天观察记录小鼠的精神、食欲、饮水、粪便、运　动及死亡情况，死亡小鼠及时进行病理剖检。　２结果　２．１细菌分离　从送检病料分离到１株　细菌分离物，经培养特性观察、染色镜检和生化鉴　定，分离菌属大肠杆菌。　２．２生化试验结果　本株细菌分离物能发酵　葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖；能产生吲哚。　不产生硫化氢．Ｍ．Ｒ试验呈阳性．Ｖ—Ｐ试验呈阴　性，不能利用枸橼酸盐，不分解尿素，不液化明胶。　细菌分离物在三糖铁培养基上斜面和底层产酸、　不产生Ｈ２Ｓ，不产气。生化试验结果符合大肠杆菌　的特征。　２．３药敏试验结果　本株细菌分离物有多重　耐药性，仅对阿米卡星极敏，对黏菌素高敏，对链　霉素低敏，而对其余药物全部耐药。　２．４动物试验结果接种大肠杆菌分离株鸡　均表现精神沉郁，呼吸困难，喘气，垂翅，竖毛。缩　颈，饮食欲下降或废绝，死亡高峰在接种后１２～３Ｏ　小时；此间病死鸡眼观病变主要为心包积液。气囊　浑浊和肝脏肿大、瘀血。接种５６小时后死亡鸡表　现典型病变，即纤素性心包炎、肝周炎、气囊上有　多量干酪样渗出物。接种后７天内。共死亡８只　鸡。从接种后死亡鸡或产生严重病变鸡体内均能　分离到接种菌，所测分离株为高致病性菌株。试验　对照组雏鸡全部健活，７天后剖检未见病变。　３．１本试验中．从肉鸡病料分离到１株细菌分　离物，根据培养特性观察、染色镜检和生化试验结　果和动物试验结果可将其判定为致病性大肠杆　菌。鸡场送检的病鸡剖检病变特征为心包膜浑浊、　增厚，心包膜及心外膜上有白色纤维蛋白附着：肝　脏表面有一层白色纤维蛋白附着：气囊浑浊，内有　黏稠的黄色干酪样分泌物：有的腹腔脏器表面还　覆盖一层淡黄色纤维素性渗出物。因此综合临床　剖检病变和微生物学诊断结果可以初步判定鸡场　存在混合型大肠杆菌感染病例。　３．２药敏试验结果表明。本株细菌分离物均有　多重耐药性，仅对阿米卡星和黏菌素极敏或高敏，　对氟喹诺酮类、青霉素类等药物产生了严重耐药　性。建议各地区治疗鸡大肠杆菌病时要定期轮换　用药，最好先进行药敏试验．选出敏感药物进行有　效治疗，避免因盲目用药造成经济损失。另外还应　采取综合防治措施．加强饲养管理。投药与应用大　肠杆菌多价疫苗相结合．能起到事半功倍的效果，　以尽量减少损失。　ｏ　参考文献（略）　Ｅ０　（上接第１０页）使用中药后，红细胞的感染率呈　明显下降趁势．可以认为使用中药后抑制了血液　中附红细胞体的繁殖或者是抑制了病原在动物　红细胞表面的粘附；而中药方剂使发病绵羊血液　中总胆红素含量的降低则直接表明在使用中药　后，由于红细胞破裂减少。使胆红素的生成减少。　对比试验中使用的中药方剂的三个剂量．中剂量　中药治疗组和高剂量中药治疗组对病原的作用　较明显，从用药量及成本等方面考虑．使用中剂　量中药治疗绵羊附红细胞体病较为可行。　参考文献（略）　１２　ｏ　２∞８年第１期