维普资讯 http://www.cqvip.com ２００３，３７（２）：５３－－５５／本刊编辑部 中国兽药杂志 ・ ５３ ・ 药品质量标准分析方法验证 本刊编辑部 ［文献标识码］Ｅ［文章编号］１００２—１２８０（２００３）０２—００５３—０３［中图分类号］Ｒ９２１．２ ［编者按］为证明采用的方法适合于相应的检测要求，需进行药品质量标准分析方法验证。编者 在编辑文章中常常注意到许多检测方法研究没有严格按照方法学的要求进行，使分析方法的可 信度大打折扣。为此，编者将《中国药典＞＞２０００年版附录中“药品质量标准分析方法验证”摘编于 下，供从事检测方法研究者参考。 药品质量标准分析方法验证的目的是证明采 表１检验项目和验证内容 用的方法适合于相应检测要求。在起草药品质量 标准时，分析方法需经验证；在药物生产方法变更、 制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量 标准分析方法也需进行验证。方法验证过程和结 果均应记载在药品标准起草或修订说明中。 需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量或 限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以 及制剂中其他成分（如降解产物、防腐剂等）的测 定。药品溶出度、释放度等功能检查中，其溶出量 等测试方法也应作必要验证。 验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中 间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线 性、范围和耐用性。视具体方法拟订验证的内容。 ①已有重现性验证，不需验证中Ｉ司精密度。 ②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。 ③视具体情况予以验证。 表１中列出的分析项目和相应的验证内容可供参 考。 １准确度 中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质 或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法 进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。如 不能测得杂质或降解产物的相对响应因子，则可用 原料药的响应因子。应明确证明单个杂质和杂质 总量相当于主成分的重量比（ ），或是面积比（ ）。 １．３数据要求 在规定范围内，至少用９次测定 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或 参考值接近的程度，一般以回收率（ ）表示。准确 度应在规定的范围内建立。 １．１ 含量测定方法的准确度 原料药可用已知纯 度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与 已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。 制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进 行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中 加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立 准确度的方法比较结果。 结果进行评价，例如制备３个不同浓度的样品，各 测定３次。应报告已知加入量的回收率（ ），或测 定结果平均值与真实值之差及其可信限。 ２精密度 精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀 样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。 精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表 示。 如该法已建立了精密度、线性和专属性，准确 度有时也能推算出来，不必再做。 １．２ 杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂 维普资讯 http://www.cqvip.com ・５４・ 中国兽药杂志 ２００３，３７（２）：５３～５５／本刊编辑部 在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果 可采用光二极管阵列检测和质谱检测，进行纯度 的精密度称为重复性；在同一个实验室，不同时间 检查。 由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度，称 ４检测限 为中间精密度；在不同实验室由不同分析人员测定 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低 结果的精密度，称为重现性。 量。常用的方法如下。 含量测定和杂质定量测定应考虑方法的精密 ４．１ 非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物， 度。 试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。 ２．１ 重复性 在规定范围内，至少用９次测定结 ４．２ 信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方 果进行评价，如制备３个不同浓度的样品，各测定３ 法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测 次，或把被测物浓度当作１００ ，用至少测定６次的 出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低 结果进行评价。 浓度或量。一般以信噪比为３：１或２：１时相应 ２．２ 中间精密度 为考察随机变动因素对精密度 浓度或注入仪器的量确定检测限。 的影响，应设计方案进行中间精密度试验。变动因 ４．３ 数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和 素为不同日期、不同分析人员、不同设备。 检测限结果。 ２．３ 重现性 当分析方法将被法定标准采用时， ５定量限 应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过 定量限系指样品中被测物能被定量测定的最 协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现 低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质 性结果均应记载在起草说明中。 和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量 ２．４ 数据要求 均应报告标准偏差、相对标准偏 限。 差和可信限。 常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为 ３专属性 １０：１时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。 专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅 ６线性 料等）可能存在下，采用的方法能准确测定出被测 线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中 物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均 被测物浓度直接呈正比关系的程度。 应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方 应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮 法予以补充。 备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供 ３．１ 鉴别反应 应能与可能共存的物质或结构相 试样品的方法进行测定，至少制备５份供试样品。 似化合物区分。不含被测成分的样品，以及结构相 以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观 似或组分中的有关化合物，均应呈负反应。 察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必 ３．２含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离方 要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归 法，应附代表性图谱，以说明专属性。图中应标明 计算。 诸成分的位置，色谱法中的分离度应符合要求。 数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性 在杂质可获得的情况下，对于含量测定，试样 图。 中可加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰， ７范围 并可与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。对 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性， 于杂质测定，也可向试样中加入一定量的杂质，考 测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 察杂质能否得到分离。 范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确 在杂质或降解产物不能获得的情况下，可将含 度、精密度结果和要求确定。原料药和制剂含量测 有杂质或降解产物的试样进行测定，与另一个经验 定，范围应为测试浓度的８０％～１２０ ；制剂含量均 证实了的或药典方法比较结果。用强光照射，高 匀度检查，范围应为测试浓度的７０ ～１３０ ，根据 温，高湿，酸、碱水解，或氧化的方法进行加速破 剂型特点，如气雾剂、喷雾剂，范围可适当放宽，溶 坏，以研究降解产物。含量测定方法应比对二法 出度或释放度中的溶出量测定，范围应为限度的± 的结果，杂质测定应比对检出的杂质个数，必要时 ２０％；如规定限度范围，则应为下限的一２０ 至上 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００３，３７（２）：５３～５５／本刊编辑部 中国兽药杂志 ・ ５５ ・ 限的＋２０ ；杂质测定，研究时，范围应根据初步实 条件要求苛刻，则应在方法中写明。典型的变动因 素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间等。 液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和 测，拟订出规定限度的±２０ 。如果含量测定与杂 质检查同时测定，用百分归一化法，则线性范围应 为杂质规定限度的一２０ 至含量限度（或上限）的 ＋２０ 。 ｐＨ值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱 温，流速等。气相色谱法变动因素有：不同厂牌或 ８耐用性 批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体、柱温，进 样口和检测器温度等。 耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结 果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。开 始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试 经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统 适用性试验，以确保方法有效。 核酸疫苗在动物疾病防治中的应用及其进展 减毒、灭活疫苗，被称为第一代疫苗。以后又 研制的亚单位疫苗被称为第二代疫苗。减毒、灭活 疫苗的潜在致病性和亚单位疫苗免疫反应的完全 用的研究报道不断增加，应用范围也逐渐扩大。在 动物疾病的预防和治疗方面，已经开发出抗绵羊和 牛蓝舌病毒的ＤＮＡ疫苗，加拿大和德国正在合作 开发用于鲑鱼、真鳟、甲壳纲动物和其它冷水鱼类 的ＤＮＡ疫苗，其中有５种疫苗已完成初期试验工 作。④核酸疫苗的优缺点。虽然ＤＮＡ疫苗可能会 给某些疾病防治带来一场根本性的变革。然而，还 有许多急待解决的问题，如疫苗的生产工艺、质量 性迫使人们继续寻找更为理想的免疫接种剂。于 是，被称为第三代疫苗的核酸疫苗应运而生。①核 酸疫苗产生的背景。所谓核酸疫苗，即把外源性基 因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒 ＤＮＡ直接注射到动物体内，使外源基因在活体内 表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，引发免疫 反应。②核酸疫苗的免疫机制。核酸疫苗可以引 标准、制剂、效用、安全性等。⑤核酸疫苗展望。核 酸疫苗的研究具有深远意义。可用于细菌、病毒、寄 发全面的免疫应答。近年来发现细菌ＤＮＡ本身也 是一种免疫佐剂，可有效地激活免疫效应细胞。③ 核酸疫苗在传染病防治研究中的应用。近年来有 关质粒ＤＮＡ疫苗在人类及动物产生预防和治疗作 生虫等多种疾病的防治，其多价、高效、廉价等优点 使其潜在的应用价值不可估量。东北农业大学动物 医学院的吕英等人撰文对以上内容进行了介绍。 摘自《畜牧兽医科技信息Ｘ２００２。１８（１）：１７～ｌ８ 药物对球虫感染鸡血液及生化指标的影响 浙江大学动物科学学院杜爱芳撰文，分析药物 对球虫感染鸡血液及生化指标的影响。将１日龄 感染不给药组的红细胞数显著低于其他各组（Ｐ＜ ０．０５），卵囊攻击后７ ｄ，血钾浓度显著高于其他各 组（Ｐ＜０．０５），血清白蛋白和血清总蛋白显著低于 艾维因肉鸡分为４个组，即中药组、马杜霉素组、感 染不给药组和不感染不给药组，每组２０只。中药 组从１日龄开始即投喂含０．１ 中草药复方制剂 （由绞股蓝皂甙、去油鸦胆子仁等组成）的饲料；马 杜霉素组从１２日龄起投喂含马杜霉素５ｍｇ／ｋｇ的 饲料。前３组于ｌ４日龄感染鸡柔嫩艾美耳球虫孢 子化卵囊。卵囊攻击前及攻击后４、７ ｄ分别采血， 其他各组（Ｐ＜０．０５）；卵囊攻击后７ ｄ，中药组血液 红细胞数显著低于不感染不给药组（Ｐ＜０．０５），但 显著高于感染不给药组（Ｐ＜０．０５）；马杜霉素组的 各项测定指标与不感染不给药组相比无显著差异 （Ｐ＞０．０５）；卵囊攻击后，各组间的血磷和血糖值无 显著差异（Ｐ＞０．０５）。结果提示，药物能抵抗球虫 感染，血液各项指标得以保持相对恒定。 摘自《中国兽医学报｝２００２。２２（１）：７３～７５ 测定血液红细胞数、血钾、血钠、血磷、血清白蛋白 和血清总蛋白含量。结果表明，卵囊攻击后４、７ ｄ，
