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实验动物屏障设施常用消毒方式比较研究

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医学动物防制2015年2月第31卷第2期J Med Pest Control,Feb 2015,Vo1.31,No.2 ・225・ doi:1 0.7629/yxdwfz20 1 502034 ・PCO论坛・ 实验动物屏障设施常用消毒方式比较研究 王慧,周星,苏丹,张一云 海南省药物研究所,海口570314 摘要:目的通过对多种消毒方式进行比较研究,对实验动物屏障系统消毒方式的选择提供参考依据。方法选取不 同测定时间点(消毒前及消毒后的30 min,2h、6 h、24 h、48 h、72 h),检查消毒完成前后实验室的沉降菌最大平均 浓度,比较各消毒方式最佳效果和持续时问;通过消毒剂在特定条件下对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌进行杀灭实验, 比较消毒剂的杀菌率;以及各种消毒方式的优缺点。结果两种用甲醛的消毒方式效果最好;臭氧、过氧乙酸最佳消 毒效果持续时间保持在48 h内;消毒泡腾片及84Ⅱ消毒液最佳消毒效果持续时间保持在24 h内;新洁尔灭消毒后沉 降菌最大平均浓度未符合相关国家标准的规定,且沉降菌最大平均浓度增长速度较快。各消毒剂对两种实验菌株的杀 菌率均在99%以上,但新洁尔灭对绿脓杆菌杀菌效果差。结论 甲醛适用于屏障系统启用前及可疑传染时的消毒, 臭氧、过氧乙酸适用于房间的整体消毒,消毒泡腾片、84Ⅱ消毒液、新洁尔灭适用于实验动物室维持常规消毒。 关键词:实验动物设施;消毒方式;沉降菌;消毒效果 中图分类号:R187;R一332 文献标识码:B 文章编号:1003—6245(2015)02—0225—04 Comparative study of laboratory animal barrier facility common disinfection methods WANG Hui,ZHOU Xing,SU Dan,ZHANG Yi—yun Hainan provincial institute ofpharmacology,Haikou 5703 14,China Abstract:Objective The different disinfection methods were compared studied,in order to provide a reference f0r the disinfection of laboratory animal barrier facilities.Methods Through chose different testing time (30min,2h,6h,24h,48,72h of before disinfection after disinfection),checked the maximum average con— centration of settlement bacteria before and after disinfected the laboratory,compare the best effect and the lasting time of disinfection methods;Under the speciifc conditions,did germicidal tests for pseudomonas aeruginosa and staphylococcus aureus by using sanitizer,to compare the rate of disinfection of sanitizer,and the advantages and disadvantages of all kinds of disinfection.Results The best effect of disinfection was 2 kinds of formaldehydes;ozone and peroxyacetic acid could keep in 48 h for disinfecting time;the time of disin— fecting effervescent tablets and 84 II liquid of disinfection could keep in 24h;the maximum average concentra— tion of settlement bacteria did not match the international standard After used bromo geramaine,and the maxi- mum average concentration growth rate of settlement bacteria was fast.the rate of killing 2 bacteria of every sanitizer were both above 99%,but bromo geramaine could not kill much pseudomonas aeruginosa.Conclu- sions Formaldehyde could be used for disinfection when the barrier system was opened and the suspicious in— fection was founded,Ozone and peroxyacetic acid could be used for room overall disinfection,disinfective el- fervescent tablets,84Ⅱliquid of disinfection and bromo geramaine could be used for maintain regular disin— fection on experimental animal room. Key words:Laboratory animal facilities;Disinfection method;Settlement bacteria;Disinfection effect 动物实验室空气中的细菌是影响实验动物环境控 标GB 14925—2010《实验动物环境及设施》 中对屏 制的一个重要因素,一般来说,对动物设施中细菌和 障环境沉降菌最大平均浓度有严格的规定。消毒方式 病毒的控制主要是通过化学消毒方法将细菌数量控制 的选择和应用则是控制细菌的重要手段,本实验选用 在一定的范围内,通常采用全面消毒和局部消毒。国 了实验室常见菌一一绿脓杆菌、金黄色葡萄菌进行定 量消毒效果观察,及通过对静态沉降菌的消除作用, 作者简介:王慧(1984一),女,研究实习员,研究方向:药理学 客观评价这些消毒方法的优缺点,对动物实验室消毒 ・226・ 医学动物防制2015年2月第31卷第2期J Med Pest Control,Feb 2015,Vo1.31,No.2 效果提供依据。 1材料和方法 m。放在可加热的容器中,计算酒精灯用量,点燃加 热。关闭门,用胶,密闭熏蒸30 min后通风至无味。 1.3.1.5 消毒泡腾片 取适量消毒片配制有效氯500 mg/L的稀释液,擦拭墙面、天花板、地板及台面,有 效氯2(100 mg/In 喷雾于空气中,作用30 min。 1.3.1.6 84Ⅱ消毒液1:50用于动物饲养室的空气 消毒,用量为10 ml/m 喷雾和擦拭,作用30 min。 1.3.1。7新洁尔灭(苯扎溴铵) 1:14用于动物饲 养室的空气消毒,用量为10 ml/m 喷雾和擦拭,作 1.1 试剂 甲醛溶液(甲醛含量40%),广东光华科 技股份有限公司生产,批号20121225;过氧乙酸,广 州化学试剂厂生产,批号131010;健之素牌消毒泡腾 片(主要成分为三氯异氰尿酸,每片含有效氯(250± 25)mg,北京长江脉医药科技有限责任公司,批号 140102;841I消毒液(主要成分为次氯酸钠,有效氯含 量4%~7%),南昌华鑫医药化工有限公司生产,批 号20131101;新洁尔灭(苯扎溴铵含量4.5%~ 5.5%),南昌华鑫医药化工有限公司生产,批号 140201;营养琼脂培养基,广东环凯微生物科技有限 公司,批号:3102287;肉汤蛋白胨培养基,广东环凯 微生物科技有限公司,批号:3102231;金黄色葡萄球 菌CMCC(B)26003,绿脓杆菌CMCC(B)10104一 W3—4,由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供。 需要配制或稀释的消毒液均用无菌硬水配制。 1.2仪器TLCF—G一3—120A型臭氧发生器,徐 州天蓝臭氧设备有限公司生产。 1.3 方法 J.3.1 检查沉降菌最大平均浓度 选5间面积及 环境大致相等的屏障系统实验室,将配好的灭菌营养 琼脂倾注灭菌平皿内(90 mm),37℃、24 h无菌培 养后备用,分别用以下几种消毒方式进行消毒完成, 在房间每5~10 Ill 设置1个测定点,放置灭菌营养 琼脂培养皿,打开盖,暴露30 min,然后盖上盖带 出,37℃恒温培养48 h,得到消毒前的沉降菌平均 菌落数。分别用以下消毒方式完成后,同样方法同样 测定点放置灭菌培养皿,消毒完成后分别于30 min、 2 h、6 h、24 h、48 h、72 h测定一次。 1.3.1.1 甲醛+高锰酸钾熏蒸 采用甲醛 (40%):高锰酸钾=20 ml/m :10 g/m 的比例,将 高锰酸钾置于反应容器中,再缓慢倒入40%甲醛溶 液,胶条密封门,作用48 h后在房间内放置20 ml/ m 氨水中和。24 h无味后方可进入。 1.3.1.2 甲醛加热熏蒸按20 ml/m 的用量将甲醛 放在可加热的容器中,计算酒精灯用量,点燃加热, 密闭熏蒸48 h后在房间内放置20 ml/m 氨水中和。 24 h无味后方可进入。 1.3.1.3臭氧熏蒸 采用臭氧充气消毒,臭氧产生 量120 g/h。关闭新风进口和回风排放口,使空气通 过净化系统风道形成内部循环,连续灭菌60 min。 1.3.1.4过氧乙酸熏蒸 按甲溶液:乙溶液=4:6 充分混合,静置24 h形成过氧乙酸溶液,按10 ml/ 用10 min。 1.3.2对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭作用 1.3.2.1 细菌悬液的培养 将活化的菌种分别接种 在肉汤蛋白胨培养基中,37℃,24 h无菌培养后备 用。 1.3.2.2 中和剂的配制根据医院消毒卫生标准GB 15982—1995,甲醛溶液中和剂采用0.3%甘氨酸的 无菌洗脱液,其它含氯、过氧化物消毒液中和剂采用 0.1%硫代硫酸钠无菌洗脱液。 1.3.2.3悬液定量杀灭试验将试验菌用含10 L 蛋白胨的0.03 mol/L磷酸盐缓冲液(pBs)制成菌悬 液(浓度为1.0 X 108 efu/m1),取0.5 ml菌悬液分别 加入4.5 ml不同消毒剂,消毒剂为产品使用说明书 中指定的最低浓度,混匀,反应至规定时间(为说明 书指定最短时间),然后取0.5 ml混合液加入4.5 ml 相应中和剂中和10 min,取1.0 ml样液进行活菌计 数,同时用磷酸盐缓冲液代替消毒液作为阳性对照, 计算杀灭率。平行实验重复3次,以鉴别该消毒液对 菌种的杀灭能力。杀菌率_5]=(阳性对照组一消毒 组)/阳性对照组X 100%。 2结果 2.1 消毒前后沉降茵最大平均浓度比较除新洁尔 灭以外的6种消毒方式在消毒完成后30 min、2 h两 个时间点进行检测,平均落下菌落数检查均小于3 CFU/0.5 h・90 mm平皿,消毒效果保持一致;臭 氧、过氧乙酸、消毒泡腾片、84Ⅱ消毒液4种消毒方 式在6 h、24 h、48 h、72 h 4个时间点检测中,沉降 菌最大平均浓度均呈不同程度上升趋势,其中消毒持 续消毒泡腾片及84Ⅱ消毒液在24 h后上升较快,熏 蒸灭菌最佳效果持续时间段为24 h内,平均菌落数 保持在7 CFU/0.5 h・90 mm平皿内;臭氧及过氧乙 酸在48 h后上升较快,熏蒸灭菌最佳效果持续时间 段为48 h,平均菌落数保持在5 CFU/0.5 h・90 mm 平皿内;两种甲醛的消毒方式最为持久,从消毒完成 后至消毒后72 h,平均落下菌落数检查各个时间点基 医学动物防制2015年2月第31卷第2期J Med Pest Control,Feb 2015,Vo1.31,No.2 ・227・ 本保持一致,均小于3 CFU/O.5 h・90 ITlln平皿。而新 洁尔灭消毒效果最差,从消毒完成后30 min平均菌落数 从消毒完成后至消毒后72 h,平均落下菌落数检查均 小于3 CFU/0.5h・90 mm平皿;臭氧及过氧乙酸熏 已达到5 CFU/O.5 h・90 nlln平皿,2 h后的各个检测时 蒸消毒持续效果次之,最佳效果持续时间段为48 h; 间点增长速度均保持较大的上升趋势,结果(见表1)。 表1 不同消毒方式消毒前后沉降菌最大平均浓度数据表 单位:(CFU/0.5h・90mm平皿) 时间 甲 甲醛臭氧兰差消 消8毒4液1 消毒前 35 32 29 30 32 39 35 消毒后30rain 0 0 l 0 1 2 5 消毒后2h O 0 1 l 2 2 5 消毒后6h 0 0 1 1 3 4 10 消毒后24h 0 1 2 2 6 7 16 消毒后48h l l 5 3 12 21 29 消毒后72h 1 1 l5 1O 21 3l 38 2.2 不同消毒剂对两种细菌杀菌率比较在说明书 规定作用时间内,使用说明书指定的最低浓度,平行实 验重复3次,5种消毒剂均能对金葡菌杀灭效果均达到 99.0%以上,其中甲醛、过氧乙酸、消毒泡腾片杀菌率 均达到99.8%以上;对绿脓菌的3次平行杀灭试验中, 新洁尔灭对绿脓杆菌的杀菌率均<25.0%,其它3种消 毒剂均能达到99.0%以上,结果(见表2)。 表2消毒剂杀菌率(%)比较 3讨论 消毒效果比较:本实验中的几种消毒方式均能达到 较好的消毒效果,除新洁尔灭外,其它几种消毒方式在 2 h内平均落下菌落数检查均小于3 CFU/0.5 h・90 lllnq 平皿,符合GB 14925—2010《实验动物环境及设施》 中对沉降菌最大平均浓度(3)的要求,但在消毒效 果持续上,两种甲醛的消毒方式消毒效果最持久 J, 消毒持续消毒泡腾片及84Ⅱ消毒液持续效果再次之, 最佳效果的时间段为24 h内;新洁尔灭消毒效果最 差,消毒完成后平均落下菌落数检查大于3,不符合 国标GB 14925—2010《实验动物环境及设施》规定, 最佳持续时问仅维持在2 h内,以后各个时间点平均 菌落增长速度很快。在对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌 的杀灭作用实验中,在说明书规定作用时间内使用说 明书指定的最低浓度,平行实验重复3次,各消毒剂 均能对细菌达到很好的杀菌效果(99.0%),但新洁 尔灭对绿脓杆菌的杀菌率<25%,也亦有报道称新洁 尔灭对绿脓杆菌等革兰氏阴性菌的作用差 。 优缺点比较:甲醛加热消毒和甲醛+高锰酸钾反 应方法原理一致,主要通过加热或化学反应,产生热 量使甲醛以气体释放的原理进行消毒,但是在实际操 作中发现甲醛+高锰酸钾反应过快,短时问内会使甲 醛快速挥发 ,不利于实验人员的安全退出,建议选 择甲醛+酒精灯加热的方式;甲醛消毒 是所有消毒 效果中最好的一种方式,但是由于消毒周期长、有强 致癌性,适用于屏障环境使用前环境消毒,或适用于 动物实验室受到可疑病菌或传染病污染时,但在消毒 时候必须要将房间密封完整,不然气体泄漏就不能达 到消毒目的。过氧乙酸 u一对细菌、芽孢、真菌、病 毒等有高效的消毒效果,但是配合使用喷雾才能杀灭 空气中的浮游菌和沉降菌,而且过氧乙酸对实验动物 粘膜有强刺激性,对金属和软木有腐蚀性,适用于局 部房问的熏蒸消毒及实验室角落的喷洒消毒,不适用 于直接对金属笼具或设备消毒。臭氧几乎对所有细 菌、病毒、真菌及原虫、卵囊具有明显的灭活效果, 杀菌彻底,臭氧¨ 为气体,短时间内在密闭房间可 以迅速弥漫到整个灭菌空间,灭菌无死角,分解产物 为氧气及单个氧分子,对室内人工污染细菌和自然菌 都具有较强的杀灭效果,是一种无污染的消毒剂 , 而且只有在高浓度下才会对人体产生影响(0.5 ppm),不考虑经济成本情况下可以长期作为氯消毒 的替代方法。健之素消毒泡腾片与84Ⅱ消毒液均为 含氯消毒剂,杀菌快速、毒性较低,84Ⅱ消毒液¨ 急性经口毒性属无毒,有效氯不稳定,较易挥发,高 浓度腐蚀性强,但消毒泡腾片较传统次氯酸盐类(如 84Ⅱ消毒液)氯分子更加稳定,刺激性较低,片剂使 用更为方便。新洁尔灭为季铵盐类消毒液,无刺激 性,低腐蚀性,但是杀菌谱较窄,对新洁尔灭对绿脓 杆菌等革兰氏阴性菌的作用差,对结核杆菌和细菌芽 ・228・ 医学动物防制2015年2月第31卷第2期J Med Pest Control,Feb 2015,Vo1.31,N0.2 胞基本无效。配合轮换含氯消毒剂使用更好,根据各 种消毒剂的杀菌原理及杀菌谱不同,可以避免重复使 用使微生物产生耐受性,具有更好的杀菌效果。但此 [6]佟颖,安伟,邓小虹.醛类消毒剂及其发展[J].中国消毒学 杂志,2011,28(5):611—612. [7]张玮,朱玉玲,孙燕晓,等.复方新洁尔灭消毒剂杀菌效果及毒 性试验观察[J].医学动物防制,2004,20(12):720—724. 类消毒剂(含氯消毒剂、季铵盐类消毒剂等)均不 建议用于环境的彻底消毒,可作为日常动物实验室房 问与笼器具的喷雾或擦拭消毒等日常环境维护。有报 道称过氧化氢灭菌技术效果较好¨ ,但由于设备 成本较高,未进行比较探讨。 参考文献 [8]郭亚华.甲醛用于空气消毒时浓度的探讨[J].中国药师, 2000,3(4):245—246. [9]艾艳,周娟,薛国文.消毒剂甲醛对人体健康危害的研究进展 [J].中国消毒学杂志,2005,22(1):95—96. [10]沈建中,赵国良,李茂全,等.过氧乙酸复方消毒剂杀菌效果 及腐蚀性试验观察[J].中国消毒学杂志,2001,18(1):11 —16. [11]徐燕,谈智,孙俊,等.臭氧空气消毒器对空气中微生物杀灭 [1]国家标准化管理委员会.GB 14925—2010实验动物环境及设施 [S].北京:中国标准出版社,2010. 效果的研究[J].中国消毒学杂志,2007,24(11):26—28. [12]米本中,黄倩妮,张平,等.SPF级实验动物屏障环境常用消毒 方法及应用[J].重庆中草药研究,2014,57(1):17~2O. [13]李排兵,李秀安,刘南.某84消毒液杀菌效果及毒性实验观察 [J].预防医学情报杂志,2008,24(5):395—398. [14]王朋.过氧化氢消毒灭菌技术介绍[J].医药工程设计,2012, 33(6):46—48. [2]温志杰,潘宝进,刘军义.三种常用消毒剂对出口实验动物检疫 隔离环境喷雾消毒效果试验[J].现代农业科技,2008,37 (19):267—269. [3]宗阿南,董婉维,张艳华.动物实验室房间消毒方法的研究[J]. 中国比较医学杂志,2003,13(6):381—383. [4]谢明杰,李化强,姜华,等.实验室常用消毒剂杀菌效果研究[J]. 辽宁师范大学学报(自然科学版),2006,29(4):483—484. [5]施慧,许文军,刘琴,等.几种常用消毒剂的杀菌效果比较[J]. 中国动物检疫,2006,23(5):29—31. [15]顾仁儿.过氧化氢等离子低温灭菌临床应用观察[J].中国消 毒学杂志,2007,24(2):186—187. (收稿日期:2014—09—03) (上接224负) 余弦相似度检验相比距离度量,更加注重两个向 量在方向上的差异,而非距离或长度上。本文分析认 为,在均不进行灭蟑的时段所获得的监测数据,其相 似程度高于灭蟑时段所获取的。但前文Wileoxon检 验结果并不支持存在于这两个可比较的子序列间的相 似度差异,是由密度数值的大小不同导致的。 从Mann—Kendall统计量曲线图可知,自2007 年9月一2008年11月,某市主城区的蟑螂密度监测 数值存在上升趋势,其趋势的显著性大于 .05水 学出版社,1994:375—378. [3]王芸,李国太,火照宏,等.兰州市蟑螂密度监测和现场灭蟑效 果研究[J].中华卫生杀虫药械,2009,16(2):150—152. [4]余樟有,方春福,王炜,等.衢州市市区蟑螂季节消长情况分析 [J].浙江预防医学,2008,20(11):30,36. [5]韩晓莉,黄钢,李红艳,等.河北省不同地区蟑螂密度监测结果 分析[J1.中华卫生杀虫药械,2009,16(2):136—138. [6]傅桂明,龚震宇,杨天赐,等.浙江省2009年蟑螂监测结果分 析[J].中国卫生检验杂志,2010,20(11):2953—2954. [7]刘博,雒淑丽,裴建云.2010年包头市蟑螂密度监测结果分析 [J].中国保健营养,2012,23(6):674. [8]王伟,姜洪荣,赵勇进,等.2010—2012年青岛市蟑螂种群密度 监测结果[J].预防医学论坛,2013,19(11):833—834. [9]魏清明,鲜红,周道兴,等.2009—2011年绵竹市蚊、蝇、鼠和 蟑螂密度监测[J].职业卫生与病伤,2013,28(1):22—25. 平。2011年3月一2012年12月统计期末,城区蟑螂 密度也处于升势,且此趋势差异具有统计学意义。 大力开展全民爱国卫生运动,为市民提供健康、 宜居的生活工作环境,是执政为民、建设规范化服务 型政府的重要举措。怎样更加科学有效地防制城市有 [1O]杜强.SPSS统计分析从入门到精通[M].北京:人民邮电出版 社,2009:134—136. 害生物是摆在人们面前的一个重要课题。本文研究认 [11]Dietmar Jannach,Markus Zanker,Alexander Felfemig,等.Dietmar 为,某市统一灭蟑对该市国家病媒监测的蟑螂密度没 有产生差异有统计学意义的改变,灭效评估,应采用 其它方法进行。 参考文献 Jannaeh推荐系统[M].蒋凡,译.北京:人民邮电出版社,2013: 11一l4 [12]魏风英.现代气候统计诊断与预测技术[M].2版.j 京:气 象出版社,2007:63—66. [13]曾艳,李桂花,庄刘.完全随机设计两样本的Wileoxon检验与K—S 检验功效比较[J].中国卫生统计,2011,28(4):372—374. [1]李朝品.医学昆虫学[M].北京:人民军医出版社,2007:364~365. 【2]全国爱国卫生运动委员会办公室.除四害指南[M].北京:科 (收稿日期:2014—02—14) 

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