番石榴叶治疗小儿病毒性腹泻的临床研究

番石榴叶治疗小儿病毒性腹泻的临床研究

姓名：张学森申请学位级别：硕士专业：中西医结合内科指导教师：周迎春

20060520

硕士学位论文番石榴叶治疗ｄ，ＪＬ病毒性腹泻的临床研究硕士研究生：张学森指导教师：周迎春摘要研究背景：自１９７２年发现诺瓦克病毒后，已相继发现和确立了以下几种能引起腹泻的病毒，即轮状病毒、诺瓦克样病毒、肠腺病毒、星状病毒、肠道冠状病毒及细小病毒等。金玉等２００３－－２００４期间对兰州地区婴幼儿病毒性腹泻病原体进行了流行病学调查研究，证实了轮状病毒与诺瓦克样病毒是小儿秋季腹泻最常见的病原体。病毒性腹泻已经给患儿、家庭及社会都带来很大的影响，目前，病毒性腹泻尚无特异的抗病毒药物，而中医药呈现出独特的优势。陈宝田教授长期临床工作中，通过对大量中草药的筛选，研制出急泻停胶囊（以番石榴叶为主药，其它中药为辅，组成番石榴叶复方），目前急泻停胶囊已完成国家三期临床试验，经过长期临床医疗实践证明对轮状病毒性腹泻疗效确切。大量的研究证实番石榴叶与急泻停胶囊对轮状病毒性腹泻有较好的疗效，但二者之间临床疗效是否有差异尚不明白。番石榴叶对轮状病毒体外及体内都有较好的抗病毒作用，是否对诺瓦克样病毒是否有同样效果，此研究将初步回答。目的：评价番石榴叶及急泻停胶囊治疗婴幼儿病毒性腹泻病的ｌ临床疗效并初步探讨作用机理。探讨广州地区诺瓦克样病毒性腹泻的发病情况，同时观察番石榴叶对其治疗效果。方法：１、将２００４年９月～２００５年２月、２００５年１０月南方医院门诊腹泻患儿３１０中文摘要例中ＥＬＩＳＡ检测轮状病毒抗原阳性的１８６例腹泻患儿，采用单盲随机对照的方法，分为番石榴叶组（治疗组Ａ）５８例、急泻停胶囊组（治疗组Ｂ）６５例与思密达组（对照组）６３例三组，观察三组临床疗效、轮状病毒抗原转阴情况及粪Ｎａ＋、粪糖浓度的改变以及中医证型分布情况：２、２００４年１０月～２００５年１月、２００５年１０月～２００６年１月在南方医院儿科就诊的临床诊断为病毒性腹泻的患儿腹泻标本４２０例，采用半套式反转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）法检测诺瓦克样病毒，用序贯试验法设计试验，按就诊顺序对ＮＶＬｓ腹泻患儿口服番石榴叶颗粒，２．０９．ｄ～，一次服用，连续服用３ｄ，观察至２０例患儿时，试验中止。结果：ｌ、治疗７２ｈ后，番石榴叶组、急泻停胶囊组和对照组分别有３８、３９、１３例患儿大便成形，呕吐、腹泻、发热症状消失。统计处理结果示三组患儿的临床疗效间差异有显著性（Ｈ＝５２．３７，Ｐ＝０．０００），Ｎｅｍｅｎｙｉ法两两比较示番石榴叶组、急泻停胶囊组与对照组间有显著差异（Ｐ－－０．０００），番石榴叶与急泻停胶囊组间无明显差异（Ｐ＝Ｏ．９３７），可以认为番石榴叶与急泻停胶囊疗效优于思密达，番石榴叶与急泻停胶囊间临床疗效无差异。治疗组Ａ抗原转阴４７例，转阴率为８１．０３％；治疗组Ｂ转阴５３例，转阴率为８１．５４％；对照组转阴３０例，转阴率为４７．６％。三组粪ＨＲＶ抗原转阴率比较，差异有显著性（Ｘ２＝２２．４６４，Ｐ＝０．０００）；治疗组间ＨＲＶ抗原转阴率比较，无明显差异（ｘ２＝ｏ．０５０，Ｐ＝０．９４３）。提示番石榴叶及急泻停胶囊有促进患儿粪便ＨＲＶ抗原转阴的作用，同时显示二者促进抗原转阴的作用无明显差异。当控制治疗前Ｎａ＋、粪的影响后，协方差分析显示治疗前后Ｎａ＋差值有显著差异（Ｆ＝１０４．７７，Ｐ＝０．０００），治疗前后粪糖差值有显著差异（Ｆ＝２４３．２６，Ｐ＝０．０００），表明经番石榴叶及急泻停胶囊治疗后粪糖、粪Ｎａ＋浓度较治疗前明显降低，与对照组有显著差异；提示番石榴叶及急泻停胶囊能促进ＨＲＶ腹泻患儿肠道对粪便中Ｎａ＋和葡萄糖的吸收。硕士学位论文２、４２０份粪便标本中检测出ＮＬＶｓ阳性３ｌ例，阳性率为７．４％；番石榴叶对ＮＬＶｓ腹泻有效率为８０．Ｏ％。结论：ｌ、番石榴叶及急泻停胶囊对轮状病毒腹泻疗效较好，二者间临床疗效无明显差异；２、ＮＬＶｓ感染可能是广州地区婴幼儿腹泻的重要原因之一；番石榴叶对ＮＬＶｓ腹泻疗效较好。关键词：轮状病毒诺瓦克样病毒ｄ＇Ｊｈ腹泻番石榴叶ＩＩＩ硕士学位论文ＣｌｉｎｉｃａｌＳｔｕｄｙｏｎＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬｉｎＴｒｅａｔｉｎｇＩｎｆａｎｔｉｌｅＶｉｒｕｓＤｉａｒｒｈｅａＮａｍｅ：ＺｈａｎｇＸｕｅ－ｓｅｎＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＺｈｏｕＹｉｎｇ－ｃｈｕｎＡＢＳＴＲＡＣＴＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ：Ｔｈｅｆｏｕｒｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓ（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ．Ｎｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｏｎｅｖｉｒｕｓ，ＡｄｅｎｏｖｉｍｓａｎｄＡｓｔｒｏｖｉｒｕｓ）ｗｅｒｅｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄａｎｄａｎｏｔｈｅｒａｆｔｅｒｔｈｅＮｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓｗａｓｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｉｎ１９７２．Ｊｉｎ—ｙｕｅｔｃｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｏｔａｖｉｒｕｓａｎｄＮｏｒｗａｌｋ－ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｗｅｒｅｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｌｙｅｎｃｏｕｎｔｅｒｅｄｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓｉｎａｌｌｏｆｃｈｉｌｄａｕｔｕｍｎｄｉａｒｒｈｅａ，ｉｎＮａｎｚｈｏｕｄｕｒｉｎｇ２００３ａｎｄ２００４．Ｔｈｅｖｉｒｕｓｄｉａｒｒｈｅａｈａｓｔａｋｅｎｇｒｅａｔｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｃｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈｄｉａｒｒｈｅａ，ｆａｍｉｌｙｔｏａｎｄｓｏｃｉｅｔｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅａｒｅｎｏｔａｎｙｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉ—ｖｉｒｕｓ—ｄｉａｒｒｈｅａ－ｄｒｕｇｓｕｎｉｑｕｅＩｎｂｅｅｎｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｔｏｔｈｅｃｏｎｔａｒｙ，ｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｈａｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｉｎｔｒｅａｔｉｎｇｖｉｒｕｓｄｉａｒｒｈｅａ．ｐｒａｃｔｉｃｅｐｒｏｆｅｓｓｏｒＣｈｅｎＢａｏ—ｔｉａｎｄｅｖｅｌｏｐｅｄｔｈｅＪｉｘｉｅｔｉｎｇｌｏｎｇｃｌｉｎｉｃａｌＣａｐｓｕｌｅ（ｔｈｅｍａｊｏｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｉｓＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬ、．ＭａｎｙｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｌａｂｏｒａｔｏｒｙｓｔｕｄｉｅｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＰｓｉｄｉｕｍｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆｇｕａｊａｖａａＬａｎｄＪｉｘｉｅｔｉｎｇＣａｐｓｕｌｅｃｏｕｌｄｃｕｒａｔｉｖｅｉｎｅｆｆｅｃｔｏｎａｎｔａｇｏｎｉｚｅｃａｕｓｅｄｔｈｅｂｙｒｏｔａｖｉｒｕｓ，ａｎｄｈａｄａｌｅｇｏｏｄｄｉａｒｒｈｅａｒｏｔａｖｉｒｕｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｉｆｔｈｅｒｅｄｕｇｓ，ａｎｄｉｆＰｓｉｄｉｕｍｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｃｌｉｎｉｃａｌａｆｆｅｃｔｏｎｅｆｆｉｃａｃｙｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｕａｊａｖａＬｈａｓｔｈｅｓａｍｅＮｏｒｗａｌｋ－ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｔｈａｔｉｔａｎｔａｇｏｎｉｚｅｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆｒｏｔａｖｉｒｕｓ．Ａｂｏｖｅａｌｌｏｆｔｈｅｑｕｅｓｔｉｏｎｓｗｉｌｌｂｅａｎｓｗｅｒｅｄｉｎｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈ．ＡＩＭ：１．ＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆＰｓｉｄｉｕｍ２．ＴｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆｇｕａｊａｖａＬａｎｄＪｉｘｉｅｔｉｎｇＣａｐｓｕｌｅ．ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅＮｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｅｓ（ＮＬＶｓ）ａｎｄ荚叉摘要ｃｕｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬ．ＭＥＴＨＯＤＳ：１．Ｅｎｒｏｌｌｅｄ１８６ｒｏｔａｖｉｒｕｓｄｉａｒｒｈｅａｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｒａｎｄｏｍｌｙ，５８ｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬ（ｔｒｅｗｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐＡ），６５ｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＪｉｘｉｅｔｉｎｇＣａｐｓｕｌｅ（ｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐＢ）ａｎｄ６３ｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＳｍｅｃｔａ（ｃｏｎｔｒｏｌ２．Ｓｅｍｉ—ｎｅｓｔｅｄｅｍｐｌｏｙｅｄｆｏｒｒｅｖｅｒｓｅｇｒｏｕｐ）．ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）ｗａｓｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔＮＬＶｓｔＯｄｅｃｔｅｃｔｉｏｎ．ＴｈｅｍｅｔｈｏｄＬａｒｅｗａｓａｄｏｐｔｅｄ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｈｅｖｉｓｉｔｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｆｏｒａｌｌｐａｔｉｅｎｔｓ，Ｐｓｉｄｉｕｍｎｏｔｇｕａｊａｖａｇｉｖｅｎ２．０ｇ．ｄ—ｏｒａｌｌｙｆｏｒｔｈｒｅｅｄａｙｓ．ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｐａｔｉｅｎｔｔｏｏｋＰｓｉｄｉｕｍＲＥＳＵＩ』ＴＳ：ｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｕｎｔｉｌｔｈｅｔｗｅｎｔｉｅｔｈｇｕａｊａｖａＬ．１．ＴｈｅｒｅａｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｅｆｆｅｃｔａｍｏｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐＡ、Ｂａｎｄｃｏｎｔｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０００）．ＴｈｅｒａｔｅｏｆｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｒｏｔａｖｉｒｕｓｉｎｓｔｏｏｌｏｆｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐＡｗａｓ８１．０３％．ａｎｄｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐＢｗａｓ８１．５４％，ｔｈｅｙｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ４７．６％（Ｐ＝０．ｏｏｏ）．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｓｏｄｉｕｍａｎｄｇｌｕｃｏｓｅｉｎｓｔｏｏｌｗａｓｒｅｄｕｃｅｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐＡａｎｄｇｒｏｕｐＢ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｗｅｒｅｓｕｐｅｒｉｏｒｔＯｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｉｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ，ｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓｇｒｏｕｐｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＝０．０００）．２．３１ｃａｓｅｓｏｆＮＬＶｓｗｅｒｅｄｅｒｅｃｔｅｄｉｎ４２０ｒａｔｅｓｔｏｏｌｓａｍｐｌｅｓ，ｗｉｔｈａｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆＬ７．４％．Ａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｗａｓ８０．０％．ｏｆＩｎｆａｎｔｉｌｅＮＬＶｓｄｉａｒｒｈｅａｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＣｏＮＣＬＵＳＩＯＮ：１．ＴｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈＰｓｉｄｉｕｍｅｆｆｅｃｔｏｎｇｕａｊａｖａＬｏｒＪｉｘｉｅｔｉｎｇＣａｐｓｕｌｅｈａｓｇｏｏｄｃｕｒａｔｉｖｅｉｎｆａｎｔｉｌｅｒｏｔａｖｉｒｕｓｄｉａｒｒｈｅａ，ａｎｄｔｈｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｅｆｆｉｃａｃｙｂｅｗｅｅｎＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬａｎｄＪｉｘｉｅｔｉｎｇＣａｐｓｕｌｅ．硕士学位论文２．ＴｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆＮＬＶｓｍｉｇｈｔｂｅｄｉｒａｒｒｈｅａａｍｏｎｇｉｎｆａｎｓｉｎｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｆａｃｔｏｒｓｔｈａｔｌｅａｄｔＯＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｉｔｙ．Ａｎｄ，ＴｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈＰｓｉｄｉｕｍｏｎｇｕａｊａｖａＬｈａｓｇｏｏｄｃｕｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｉｎｆａｎｔｉｌｅＮＬＶｓｄｉａｒｒｈｅａ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ，Ｎｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｅｓ，Ｉｎｆａｎｔｉｌｅｄｉａｒｒｈｅａ，ＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬ．硕士学位论文前言一、轮状病毒和诺瓦克样病毒是病毒性腹泻的主要病原体自１９７２年发现诺瓦克病毒后，已相继发现和确立了以下几种能引起腹泻的病毒，即轮状病毒、诺瓦克样病毒、肠腺病毒、星状病毒、肠道冠状病毒及细小病毒等。金玉等２００３－－２００４期间对兰州地区婴幼儿病毒性腹泻病原体进行了流行病学调查研究，证实了轮状病毒、诺瓦克样病毒与星状病毒是ｄ，ＪＬ秋季腹泻最常见的病原体【ｌ】。轮状病毒（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ，ＲＶ）感染是婴幼儿急性胃肠炎最常见的病原体，ＲＶ属于呼肠病毒科ＲＶ属，于１９７３年由澳大利亚学者Ｂｉｓｈｏｐ从腹泻儿童肠活检上皮细胞内发现，纯化的病毒在电子显微镜下呈球状，具有双层衣壳，其中内膜衣壳子粒围绕中心呈放射状排列，类似辐条状，病毒外形类似车轮，所以称为轮状病毒。Ｒｖ有很高的传染性，ＲＶ感染全年均有发病，我国以秋冬季节多见，不同地区发病高峰期略有不同【２】。全世界每年大约有１００万儿童患轮状病毒性腹泻，约２５％是因严重的轮状病毒感染而致死口】。在发展中国家每年能引起大约８７００００婴幼儿及儿童死亡；５岁以下儿童发生中度至重度腹泻的约为１８０００００００ｔ＊Ｊ。在我国方肇寅等于１９９６～１９９７年及１９９８～１９９９年对１１３０例腹泻病例的流行病学调查研究中证实有２９６例（２６．２％）为轮状病毒感染【５】。ＲＶ主要经粪一口或口一口传播，亦可通过水源传播或以气溶胶形式经呼吸道传播。由于ＲＶ在环境中比较稳定，不易自然灭亡，也可通过生活密切接触传播，医院里可通过护理人员造成ＲＶ感染的传播。患者及无症状带毒者是主要的传染源，患者急性期粪便中有大量病毒颗粒，病后可持续排毒４～８天，极少数可长达１８～４２天。人群普遍易感，感染后免疫力短暂，主要感染６～２４个月的儿童，到３岁时，几乎所有的儿童都已感染过ＲＶ【６】。意大利的一项调查显示，虽然ＲＶ感染也常发生于小婴儿和２～３岁的儿童，但主要见于６～２４个月的婴幼儿”】。中国的前言一项研究则发现，几乎所有的Ｒｖ感染都发生于＜ｌ岁的儿童吲。ＲＶ感染主要引起婴幼儿腹泻，潜伏期一般为１～４ｄ［”。典型表现为早期有短时轻度上呼吸道感染症状后迅速出现发热、呕吐、腹泻。多数患儿在病初即发生呕吐，常先于腹泻，有时呕吐与腹泻同时出现。大便为水样和蛋花汤样，无臭味，每天排便数次至ｌＯ余次，常出现腹痛、腹胀和肠鸣，腹泻重者可出现脱水症状，多为一般脱水。重度脱水者伴有电解质紊乱、酸中毒。本病亦可呈暴发型，迅速发展为脱水、衰竭而死亡。诺瓦克样病毒（Ｎｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｖｉｒｕｓ，ＮＬＶｓ）是世界范围内最常见的引起人类非菌性胃肠炎暴发的病原微生物，属杯状病毒科（ＨｕＣＶ），上世纪９０年代以来，逐渐确定了ＮＬＶｓ在散发性腹泻中的病原作用，并进一步证实，ＮＬＶｓ同样是散发性急性腹泻的重要病原，其作用仅次于轮状病毒。ＮＬＶｓ可在所有年龄段、不同场所（幼儿园、学校、餐馆、夏令营、医院、护婴室、养老院、航海舰队和单位等）引起暴发。美国疾病控制中心（ＣＤＣ）曾经估计，９６％的非细菌胃肠炎暴发与ＮＶｓ有关。在美国，每年约有２３，０００，０００诺瓦克样病毒引起的胃肠炎患者，其中超过５０，０００人需要住院治疗，并造成约３００人死亡【ｌｏ】。我国ＮＬＶｓ的研究起步较晚，直到发现该病毒的２７年后（１９９５年）方肇寅才在我徽腹泻患儿粪便中检出一例ＮＬＶｓ感染，上世纪９０年代后期，靖宇、钱渊等在我国北京和太原进行研究中发现该两地区婴幼儿血清抗ＮＶｓ抗体阳性率即达８０％以上并随年龄而上升。陈冬梅２００２年在北京地区２３３名腹泻婴幼儿的粪便标本中检出５８份（阳性率２４．９％）ＮＬＶｓ，并且基因型较复杂多样。谢华萍等对１９９８—２００１年间长春儿童医院５岁以下腹泻患儿的１２６４份粪标本中检出ＨｕＣＶ２０２份，阳性率为１６％ｕ１。３１。同时，戴迎春（２００３年）等也证实了在广州地区存在ＮＬＶｓ的散发和暴发㈣。病毒性腹泻已经给患儿、家庭及社会都带来很大的影响，目前，病毒性腹泻尚无特异的抗病毒药物，多采用维持水电解质及酸碱平衡，对症及支持疗法。而中医药呈现出独特的优势，在治疗小儿腹泻病方面积累了丰富的临床经验并硕士学位论文取得了很好的疗效，但对中医药的作用机理及ｌ临床疗效科学的评价有待进一步探讨。二、祖国医学对腹泻的认识祖国医学对腹泻的称谓较多，如《素问・气交变大论》：“岁水太吐，……湿气变物，病反腹满，肠鸣，溏泄，食不化。…岁木太过，风气流行，脾土受邪，民病飧泄。…岁水不及，湿乃大行，民病腹满，身重、濡泄。～‘岁木不及，燥乃大行，……民病中清，怯胁痛，少腹痛，肠鸣，溏泄。”“岁火不及，寒乃大行………‘病鹜溏腹满，食饮不下，寒中肠呜泄注。”将腹泻称为“飧泄”、“溏泄”、“濡泄”、“鹜泄”、“滑泄”、“洞泄”、“注下”等。汉唐以后将之包括在“下利”中，唐宋以后统称为“泄泻”，其含义与现代医学的腹泻相同，可见于多种疾病，凡属消化器官发生功能或器质性病变都可导致腹泻。（一）祖国医学对腹泻的病因病机总体认识可归结为：：１、感受外邪：以暑、湿、寒、热较为常见，其中又以感受湿邪致泻者最多，《医学心悟・泄泻》：“湿多成五泻。……然有湿热、有湿寒、有食积、有脾虚、有。肾虚，皆能致泻，宜分而治之。”《杂病源流犀烛・泄泻源流》“湿胜则飧泄，乃独由湿耳，不知风寒湿虚，虽皆能为病，苟脾强无湿，四者均不得而干之，何自成泻？是泄虽有风寒湿虚之不同，要未有不原于湿者也。”以上均表明湿邪侵袭致泻泄的重要性。２、饮食所伤：饮食停滞、过食肥甘厚味、过食生冷以及饮食不洁等导致脾胃损伤，化生食滞、寒湿、湿热之邪，致运化失职，升降失调，而发生泻泄。如《景岳全书・泄泻》日“若饮食失节，起居不时，以致脾胃受伤，则水反为滞，精华之气不能输化，乃至合污下降而泻痢作矣。”３、情志失调：《景岳全书・泄泻》日“凡遇怒气便作泻泄者，必先以怒时夹食，致伤脾胃，故但有所犯，即随触而发，此肝脾二脏之病也。盖以肝木克土，脾气受伤而然。”烦恼郁怒，肝气不舒，横逆克脾，脾失健运，升降失调；或忧郁思虑，脾气不运，，土虚木乘，升降失职；或素体脾虚，逢怒进食，更伤前言脾土，而致泻泄。４、脾胃虚弱：长期饮食不节，饥饱失调，或劳倦内伤，或久病体虚，或素体脾胃虚弱，不能受纳水谷、运化精微，聚水成湿，积谷为滞，湿滞内生，清浊不分，混杂而下，遂成泻泄。如《景岳全书・泄泻》曰“泄泻之本，无不由于脾胃。”５、命门火衰：或年老体弱，肾气不足；或久病之后，肾阳受损；或房事无度，命门火衰，脾失温煦，运化失职，水谷不化，而成泻泄。且肾为胃之关，主司二便，若肾气不足，关门不利，则大便下泄。如《景岳全书・泄泻》日“肾为胃之关，开窍于二阴，所以二便之开闭，皆肾脏之所主，今肾阳气不足，则命门火衰，而阴寒独盛，故于子丑五更之后，当阳气未复，阴气盛极之时，即令洞泄不止也。”以上各种致病因素导致脾虚湿盛，使脾胃升降功能失调，而致小肠不能分清泌浊，从而发生腹泻，其病位在肠，但其关键病变脏腑在脾胃。（二）治疗原则：由于泄泻是以湿为主要病理因素，其脾虚湿盛是发病的关键，在治疗上以运脾化湿为主。在不同时期历代医家对泻泄的治疗总结出了有效的方法，张仲景创立六经辨证，并与八纲辨证巧妙结合运用到泄泻中，如《伤寒论》：“太阳与少阳合病，自下利者，与黄芩汤。～‘伤寒四五日，腹中痛，若转气下趋少腹者，此欲自利也。”“少阴病，下利脉微者，与白通汤。利不止，厥逆无脉，干呕烦者，白通加猪胆汁汤主之。服汤脉暴出者死，微续者生。”“少阴病，下利清谷，里寒外热，手足厥逆，脉微欲绝，……其人面色赤，或腹痛，或干呕，或咽痛，或利止脉不出者，通脉四逆汤主之。…下利清谷，里寒外热，汗出而厥者，通脉四逆汤主之。”明代张景岳提出治疗泄泻应注意利小便，《景岳全书・泄泻》日：“泄泻之病，多见小水不利，水谷分则泻自止，故日：治泻不利水，非其治也。”，后来“利小便以实大便”作为了中医治疗泻泄的一大法则。三、番石榴叶抗病毒性腹泻的临床研究４硕士学位论文番石榴（ＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬｉｎｎ，ＰＧ），属于桃金娘科（Ｍｙｒｔａｃｅｓ），别名番稔、红心果和番桃等，其叶性平、味甘涩，具有收敛止泻、消炎止血的功效，广西、广东、海南以及美洲民间常用它治疗腹泻、痢疾等病。主要成分含蓄苷、槲皮素、番石榴酸、石榴苷等ｍ１，此外还含有大量鞣酸及挥发油㈣。研究表明番石榴叶具有抗病毒、降血糖、抑菌等作用［１７－１８ｌ。陈宝田教授长期临床工作中，通过对大量中草药的筛选，研制出急泻停胶囊（以番石榴叶为主药，其它中药为辅，组成番石榴叶复方），临床证实番石榴叶治疗ＲＶ肠炎有比较好的疗效［１９１０体外实验亦证实番石榴叶及其有效成分能提高ＭＡ一１０４细胞对轮状病毒的耐受，降低其毒力，破坏轮状病毒颗粒的外壳和内核‘２０１。而后，进行了番石榴叶抗轮状病毒性腹泻有效成分及其机理的研究，分离了番石榴叶的有效成分如挥发油、槲皮素和熊果酸等，发现不同的成分针对引起腹泻的不同机制，多途径发挥止泻作用。如挥发油具有镇痛、抗炎性能：槲皮素能抑制肠道收缩，缓解肠道痉挛，还可减少肠道水分和电解质的分泌：番石榴酸能杀灭轮状病毒Ⅲ一矧。进一步研究表明，番石榴叶较好的抗Ｒｖ作用源于槲皮素和２ｎ一羟基熊果酸等有效成分㈣。目前急泻停胶囊已完成国家三期临床试验，经过长期临床医疗实践证明对轮状病毒性腹泻疗效确切、安全可靠，毒副作用小，质量容易控制，卫生学指标能够达到要求；番石榴叶的临床及实验室研究也表明对轮状病毒腹泻有较好的疗效，二者临床疗效是否有差异？在探讨ＮＬＶ致病机制中有一Ｒｖ和ＮＬＶ受体共用假说，既然番石榴叶对轮状病毒性腹泻有效，那么是否对诺瓦克样病毒性腹泻同样有效？因此，本临床研究拟解决上述问题，为开发出新的抗病毒中药新药奠定基础。番石榴叶治疗轮状病腹泻的临床观察第一章番石榴叶治疗轮状病毒腹泻的临床观察资料与方法（一）临床资料２００４年９月～２００５年２月、２００５年１０月南方医院门诊腹泻患儿３１０例，均有有大便次数增加，大便呈水样或蛋花样，伴或不伴发热、呕吐等症状，大便标本检出ＲＶ阳性１８６例。采用随机表法将患儿随机分为３组。治疗组Ａ５８例，男２９例，女２９例，年龄（１１．４１４４－５．１０２）月，病程（３０．４６６４－１４．１５１）ｈ，伴发热２９例、呕吐３６例；治疗组Ｂ６５例，男３８例，女２７例，年龄（１２．１３９４－６．７４０）月，病程（３２．１０７±１４．６５６）ｈ，伴发热３５例、呕吐４２例；对照组６３例，男３０例，女３３例，年龄（１２．８６５４－６．３６５）月，病程（３３．２３８４－１６．１９８）ｈ，伴发热２５例、呕吐３３例。三组在性别、年龄、病程以及伴发症上差异无显著性，具有可比性（Ｐ＞ｏ．０５）。（二）病例诊疗标准１、诊断标准（１）西医诊断标准参照《儿科学》【２６】：①起病急，常伴有发热及上呼吸道症状，可伴呕吐；②大便次数增多，呈黄稀水样或蛋花样，一般无脓血，无腥臭味；③大便常规可见脂肪滴，及少量白细胞；④大便细菌培养阴性；⑤大便轮状病毒ＥＬＩＳＡ检查呈阳性。（２）中医辨证分型诊断标准：参照《中医儿科学》标准田】，①风寒型：大便稀烂，色淡夹泡沫，气味无臭味或稍臭，每日数次，便前便时肠鸣，鼻流清涕，咽瘁，口不渴，舌淡，苔薄白。②湿热型：大便水样，或如蛋花样，泻下急迫，量多，日行十余次，气味臭秽，纳差食少，身倦乏力，口渴引饮，烦躁，或伴泛恶，发热或不发热，６硕士学位论文小便短黄，苔黄腻。③脾虚泻大便稀溏，多于食后作泻，色淡不臭，时轻时重，面色萎黄，形体消瘦，神疲倦怠，舌淡，边有齿印，苔白。２、纳入病例标准符合以上诊断标准患儿；年龄３—３６个月龄；病程在７２ｈ内；近一月内未患其他感染性疾病：病程中未使用过抗生素、抗病毒、止泻药物治疗。３、排除病例标准对有并发症如重度营养不良、肺炎、肝炎、肝肾功能异常等及对所用药物过敏者；拒绝加入本研究者。４、疗效判定标准参照１９９８年５月全国腹泻病防治学术研讨会通过的急性腹泻病的疗效判定标准哪！①显效：治疗７２ｈ内大便性状、次数均恢复正常，全身症状消失，大便常规化验正常；②有效：治疗７２ｈ大便次数、性状均明显好转，全身症状改善，大便常规化验好转：⑨无效：治疗７２ｈ大便性状、次数及全身症状均无好转甚至恶化。（三）研究方法１、观察方法采用单盲随机对照试验，病例按就诊入选先后程序编号，以ＳＰＳＳｌ０．０ｆｏｒＷｉｎｄｏｗｓ制定随机表（见附表一），查随机表将纳入患儿随机分为治疗组Ａ、治疗组Ｂ、对照组：治疗组全部病例均按中医辨证分型标准进行分型。２、样本容量的估计经预临床试验观察３０例轮状病毒度腹泻患儿，每组ｌＯ例，得治疗组Ａ临床有效率为９０％，治疗组Ｂ有效率为７０％，对照组有效率为４０％，经公式ｌ一１例每组需要样本量为４９例。，ｌ＝２２／（２ｓｉｎ。扣ｉ一２ｓｉｎ。扣ｉ）２（１－１）预观察已知Ｐ。。：０．９，Ｖ＝３—１＝２，Ｐｖａ。－－０．４，ａ＝０．０５，１３＝Ｏ．１，查表得九＝１２．５，将各值代入公式得：番石榴叶治行轮状病腹泻的临床观察ｎ＝２×１２．５／（２ｓｉｎ－１√ｏ．９—２ｓｉｎ一√ｏ．４）２＝４９３、治疗方法治疗组Ａ予口服用番石榴叶颗粒（广东一方制药有限公司生产，批准文号：０３１２１０７）按２．０９／ｄ，一次服用；治疗组Ｂ予口服急泻康停囊（第一军医大学中医系研制，临床批件号２０００ＺＬ０９９）２粒，次，３次，ｄ；对照组予以思密达（法国博福一益普生制药集团生产）剂量：ｌ岁以内，１∥次；１岁～２岁，ｌ～５９／次，均３次，ｄ。以上三种药均连续服用三天。三组患儿均根据脱水情况给予口服补盐液（ｏＲｓ）补液或静脉补液治疗。根据血清电解质及血气分析的结果，合理补充相应成分以纠正酸碱失衡及电解质紊乱。所有病例，在治疗期间不使用抗生素、抗病毒及收敛止泻药，进食清淡易消化的食物，以乳食为主的婴儿可换无乳糖的乳制品，呕吐频繁者可暂禁食不禁水。有其它情况的给予常规的对症处理。４、观察内容（１）临床症状及体征：于治疗后每天观察大便的次数、颜色、性状及量；患儿的体温、呕吐、食欲、精神状态等的变化惰况。（２）试验检测指标的观察：①大便轮状病毒抗原：分别于治疗前及治疗后７２ｈ用ＥＬＩＳＡ法检测大便轮状病毒抗原（试剂盒由兰州生物制品研究所提供，严格遵照说明书上要求的步骤操作）；②粪Ｎａ＋、粪糖浓度：于治疗前及治疗７２ｈ后采集新鲜大便样本，取ｌｇ加入２ｍｌ蒸馏水，充分搅匀，普通３０００ｒｍｐ离心３分钟，取上清液测试；Ｎａ＋浓度用生化仪上的电极法测定；葡萄糖浓度以氧化酶法测定（试剂盒由北京北化康泰临床试剂有限公司提供，操作步骤按说明书进行）（３）毒副作用的观察：①观察服用后有无原有症状加重及皮疹等出现症状；②在治疗组Ａ、治疗组Ｂ中各随机抽查２０例患儿，检测治疗前及治疗５天后的肝。肾功能，主要包括血清丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、尿素氮（ＢＵＮ）、肌酐（Ｃｒ）５、统计处理方法全部资料输入计算机，应用ＳＰＳＳｌ０．０ｆｏｒｗｉｎｄｏｗｓ软件进行Ｋｒｕｓｋａｌ—Ｗａｌｌｉｓ硕士学位论文检验、样本率的卡方检验、协方差分析、卡方分割法；应用ＮｏＳＡ２．３０软件（第四军医大学卫生统计教研室研制）行秩和检验的两两比较Ｎｅｍｅｎｙｉ法检验。计量资料数据以均数士标准差（一Ｘ±Ｓ）表示。结果（一）三组疗效比较：治疗７２ｈ后，治疗组Ａ、治疗组Ｂ和对照组分别有３８、３９、１３例患儿大便成形，呕吐、腹泻、发热症状消失。如表１－ｉ所示三组患儿的临床疗效间差异有显著性（Ｈ＝５２．３７，Ｐ＝０．ｏｏｏ），治疗组组Ａ、治疗组Ｂ与对照组间有显著差异（Ｐ－－Ｏ．０００），治疗组Ａ与治疗组Ｂ间无明显差异（Ｐ＝Ｏ．９３７），可以认为番石榴叶与急泻停胶囊疗效优于思密达，番石榴叶与急泻停胶囊间ｌ临床疗效无差异。表１－Ｉ番石榴叶、急泻停胶囊及思密达的疗效’Ｉ些！！！：！！垒竺！竺翌！堡！！！垒生！！！鱼！望堕』！！！！！！翌ｇ堡璺巳！竺！！组别例数显效有效无效平均秩次总有效率注：Ｋｒｕｓｋａｌ—Ｗａｌｌｉｓ检验Ｈ＝５２．３７，Ｐ＝００００；ＮｅⅢｅｎｙｉ法两两检验：治疗组Ａ与治疗组Ｂ问Ｐ＝０９３７，治疗组Ａ与对照组间Ｐ＝００００，治疗组Ｂ与对照组间Ｐ＝０．０００。（二）三组止泻、止吐、退热的效果比较见表：从表１—２中可以看出两治疗组２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ止泻率高于对照组，三组止泻率有显著差异（ｘ２＝２７．８７５，Ｐ＝０．０００；Ｘ２３８．２５４，Ｐ＝０．０００：Ｘ２－－３７．１２２，Ｐ＝０．０００）；两治疗组间２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ止泻率无显著差异（Ｘ２＝ｏ．２８４，Ｐ＝０．５９４；Ｘ２＝２．１８９，Ｐ＝０．１３９：Ｘ２＝２．３５３，Ｐ＝０．１２５）。从表１—３中可以看出两治疗组２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ止吐率高于对照组，三组间有显著差异（ｘ２＝２６．４６５，Ｐ＝０．０００：Ｘ２＝３４．４５０，Ｐ＝０．０００；Ｘ２＝３５．２４９，Ｐ＝０．０００）；治疗组Ｂ４８ｈ、７２ｈ止吐率高于治疗组Ａ，两组间有显著差异（Ｘ２－－４．８６５，Ｐ＝０．０２７９番石榴叶治疗轮状病腹泻的临床观察Ｘ２＝６．５５４，Ｐ＝０．０１０）。表１－２三组患儿不同时间段的止泻有效率【ｎ（％）】Ｔａｂｌｅ１－２ＴｈｅｒｅｌｉｅｖｉｎｇｄａｒｒｈｅａｅｆｆｅｃｔｉｖｅｒａｔｅｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅＥｎ（％）】注：Ａ２４ｈ治疗组Ａ与治疗组Ｂ比较ｘ２＝００４９，Ｐ＝０８２６：＃４８ｈ治疗组Ａ与治疗组Ｂ比较ｘ２＝４８６５，Ｐ＝００２７：※７２ｈ治疗纽Ａ与治疗组Ｂ比较Ｘ２－－６５５４，Ｐ＝００１０。从表ｌ＿４中可以看出两治疗组４８ｈ、７２ｈ退热率高于对照组，三组间有显著差异（ｘ２２３．９５６，Ｐ＝０．０００；Ｘ２２９．２９３，Ｐ＝０．０００）；治疗组Ｂ７２ｈ退热率高于０硕士学位论文治疗组Ａ，两组问有显著差异（ｘ２＝９．５１１，Ｐ＝０．０２）。表１－４三组患儿不同时间段的退热有效率【ｎ（％）】Ｔａｂｌｅ１－４Ｔｈｅｄｅｆｅｒｅｓｃｅｎｃｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｒａｔｅｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅ［ｎ（％）】注：Ａ２４ｈ治疗组Ａ与治疗组Ｂ比较ｘ２＝ｌ０１０，Ｐ＝Ｏ３１５＃４８ｈ治疗组Ａ与治疗组Ｂ比较ｘ２＝３５１３．Ｐ＝０１８６＂※７２ｈ治疗组Ａ与治疗组Ｂ比较Ｘ２－－－９５１Ｉ，Ｐ＝００２。（三）各组中医证型分布及治疗组中医不同证型的疗效分析：表ｌ一５表明在所分三型中湿热型最多，其次为风寒型，最少为脾虚型，三组间卡方检验显示Ｐ值明显大于０．０５，说明三组间中医证型分布无明显差异。表１－６结果表明，治疗组Ａ各证候间疗效无明显差异（Ｈ＝４．６０２，Ｐ＝Ｏ．１００）；治疗组Ｂ各证候问疗效有显著差异（Ｈ＝９，０５０，Ｐ＝Ｏ．０１０），两两比较无显著差异。可以认为番石榴叶及急泻停胶囊对ｄ，ＪＬ腹泻常见三种中医证型均有较好疗效。表１－５中医证型分布及所占比例Ｔａｂｌｅ１－５ＴｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｙｎｄｒｏｍｅｓ番石榴叶治疗轮状病腹泻的，临床观察表１－６治疗组中医证候疗效比较Ｔａｂｌｅ１－６ＴｈｅｃｕｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆＰＧａｎｄｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔＣｈｉｎｅｓｅＪｉｘｉｅｔｉｎｇＣａｐｓｕｌｅＭｅｄｉｃａｌＳｙｎｄｒｏｍｅｓ无效平均秩次Ｈ值Ｐ值组别证候显效有效注：Ｎｅｍｃｎｙｉ法两两检验：治疗组Ｂ风寒型与湿热型比较Ｐ＝０１２７，风暴型与脾虚型比较Ｐ＝０湿热型与脾虚型比较Ｐ＝０３６９８５１，（四）三组治疗后对粪Ｎａ＋和粪葡萄糖的影响：表ｌ一７、１．８，当控制治疗前Ｎａ＋、粪的影响后，协方差分析显示治疗前后Ｎａ＋差值有显著差异（Ｆ＝１０４．７７，Ｐ＝０．０００），治疗前后粪糖差值有显著差异（Ｆ＝２４３．２６，Ｐ＝０．０００），表明经番石榴叶及急泻停胶囊治疗后粪糖、粪Ｎａ＋浓度较治疗前明显降低，与对照组有显著差异；治疗组间治疗前后粪Ｎａ＋和粪糖差值无显著差异。提示番石榴叶及急泻停胶囊能促进ＨＲＶ腹泻患儿肠道对粪便中Ｎａ＋和葡萄糖的吸收；番石榴叶与急泻停胶囊促进ＨＲＶ腹泻患儿肠道对粪便中Ｎａ＋和葡萄糖的吸收功效相当。表１．７治疗后粪便中Ｎａ＋浓度的改变（ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｘ±Ｓ）Ｔａｂｌｅ１－７Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｓｏｄｉｕｍｉｎｓｔｏｏｌａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ｍｍｏＦＬ，ｍｅａｎｊ：ＳＤ）注：三组治疗前后差值比较Ｆ＝１０４７７，Ｐ＝００００；＃治疗组Ａ与对照组比较Ｐ＝００００；－ｋ治疗组Ｂ与对照组比较Ｐ－－００００；※治疗组Ａ与治疗组Ｂ比较Ｐ＝０９０８１２硕士学位论文表１－８治疗后粪便中葡萄糖浓度的改变（∞ｏｌ，Ｌ，ｉ±ｓ）Ｔａｂｌｅ１－８Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅｉｎｓｔｏｏｌａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ｍｍｏｌ／Ｌ，ｍｅａｎ：ｅＳＤ）注：三组治疗前后差值比较Ｆ＝２４３２５６ｔＰ＝００００；＃治疗组Ａ与对照组比较Ｐ－－００００ｉ★治疗组Ｂ与对照纽比较Ｐ－－００００：※治疗组Ａ与治疗组Ｂ比较Ｐ＝０．１１２（五）治疗７２ｈ后轮状病毒抗原转阴情况：治疗组Ａ抗原转阴４７例，转阴率为８１．０３％；治疗组Ｂ转阴５３例，转阴率为８１．５４％；对照组转阴３０例，转阴率为４７．６％。三组粪ＨＲＶ抗原转阴率比较，差异有显著性（ｘ２＝２２．４６４，Ｐ＝０．０００）；治疗组间ＨＲＶ抗原转阴率比较，无明显差异（ｘ２－－０．０５０，Ｐ＝０．９４３）。提示番石榴叶及急泻停胶囊有促进患儿粪便ＨＲＶ抗原转阴的作用，同时显示二者促进抗原转阴的作用无明显差异。（六）治疗组不良反应结果：治疗全过程中未发现不良反应症状出现，治疗组按顺序抽样２０例监测治疗前后肝肾功能结果，治疗前后肝肾功能比较无显著性差异。讨论（一）中医病因病机引起小儿腹泻的其病因主要有感受外邪、饮食不当和正虚因素等。小儿稚阴稚阳，脏腑娇嫩，形气未充，卫外功能不固，适应气候变化的能力差，若喂食不慎，保护不周，易受外邪侵袭，小儿病毒性腹泻临床常伴有发热、咳嗽、流涕等呼吸道症状，腹泻为黄色或黄白色清水样便，臭气不甚，多发生于秋冬两季。当夏去秋来之时，气候骤冷，外邪很容易从口鼻而入，侵犯肺卫，出现表证。而在此之前的盛暑季节，小儿恣食生冷，护理不当，至使暑热伤气，暑湿番石榴叶治疗轮状病腹泻的临床观察困脾，脾胃已伤，至秋冬寒冷之季，寒湿之邪乘虚而入，使脾胃更伤，运化无权，从而导致泄泻；同时，当感受外邪以后，外邪来表，内蕴之暑湿不得清解散越，下迫大肠而泄泻，并致脏腑功能失调，清浊不分，升降失常而呕吐。小儿为稚阴稚阳之体，其患病易寒易热，易虚易实，故易入里化热生湿热之证或惑受非时之湿热邪气而生湿热之证；易损伤脾气成虚实夹杂之证。正邪相搏，则发热；邪客于肾胃气失和，逆于上，则呕吐；外感之邪居于肺卫，鼻窍失灵，则流涕。脾虚湿盛，清阳不升，水走大肠；或脾弱不运，津液不生，吐泻频作，津液亡失，而出现口渴，唇干，眼窝凹陷；甚至出现虚脱貌。（二）西医发病机理ＲＶ感染主要累及十二指肠和空肠，少数可以累及胃、回肠和盲肠。过去多认为ＲＶ与上皮细胞的作用主要是通过结构蛋白ＶＰ４与上皮细胞表面的ＲＶ受体（含唾液酸残基）结合而起作用，现证明ＲＶ与受体的结合可以不依赖唾液酸残基，而在ＶＰ４上可能另有结合位点，一个位于胰酶裂解处，另一个位于３９３氨基酸区域‘３０１。ＲＶ进入细胞时通过ＶＰ４的ＤＥＧ序列与整合素Ⅱ２Ｂｌ亚基结合口１ｌ。ＲＶ脱壳和穿入的关键是包涵体内Ｃａ２＋浓度下降口２】。病毒在溶酶体内脱壳后，在细胞质内发育和组装成单壳颗粒趋向内质网，在内质网腔成熟并积聚，以细胞的方式将病毒释放。传统认为，ＲＶ感染引起腹泻首先是因为小肠黏膜的破坏，上皮细胞功能降低，吸收面积变小，导致肠吸收不良；其次是乳糖酶的缺乏导致肠道乳糖吸收障碍，此外细胞对乳糖的分解，产物堆积造成肠腔渗透压的升高，也是产生腹泻的原因。但是对于早期肠道黏膜未出现损伤者或者病理检查无肠道病理损害者出现的腹泻不能用上诉理论解释。近年研究证明，这与ＮＳＰ４的作用有关。ＮＳＰ４是ＲＶ的一种非结构蛋白，现被证实是一种肠毒素。其机制可能为：＠ＮＳＰ４引起Ｃａ２＋升高可导致氯离子分泌，引发腹泻∞】；ＱＮＳＰ４可特异性破坏细胞间隙，改变丝状肌动蛋白分布，在上皮细胞间紧密连接形成过程中阻止相关蛋白ＺＯ一１锚定，影响紧密连接和极化上皮形成【３”；③ＮＳＰ４肽段对小肠刷状缘膜的Ｎａ＋耦合的葡萄糖和Ｌ一亮氨酸同向转运有直接抑制作用，可造成钠１４硕士学位论文吸收不良１３５１。ＮＳＰ４在腹泻机制中的作用有待进一步明确。而ＲＶ引起肠道外感染的发病机理尚不清楚。ＲＶ侵入导致的病理变化：主要是小肠钻膜近端上皮细胞受累，绒毛缩短变平，绒毛顶部的柱状上皮细胞丧失，其正常的刷状缘为隐窝部无刷状缘的立方形细胞迅速更新。刷状缘破坏造成双糖酶、Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡｒＰ酶活性、Ｎａ泵功能均减弱，葡萄糖与载体蛋白的亲和力下降，是Ｎａ＋和葡萄糖吸收减少的主要原因。肠黏膜对碳水化合物及电解质吸收障碍，肠腔渗透压增高，导致渗透性腹泻，大量水电解质从粪便中丢失。ＲＶ感染后的免疫防御：婴幼儿感染ＲＶ后先出现肠道粘膜的免疫反应，随后才渐有全身免疫反应。第１次感染时，机体无特异性抗体，因此ＲＶ进入胃肠道后．如患儿胰酶不能抑制ＲＶ的增生即可致病。小肠上皮特别是小肠粘膜上的绒毛发生坏死如断裂，由此进入粘膜下层，然后走向孤立淋巴腺和集合淋巴腺引起炎症，使蛰伏在淋巴腺中的Ｔ、Ｂ淋巴细胞接触，首先是Ｔ细胞致敏，分泌多种细胞因子，刺激Ｂ细胞成熟分化，向前浆细胞及浆细胞发展的同时产生了血清型特异性中和抗体（ＳＳＮＡ），发挥抑止病毒复制等抗感染作用。ＲＶ感染后，活化细胞产生的各种细胞因子对病理损伤及抗病毒的作用：①几一２是入细胞分泌的一种调节免疫应答的重要介质，具有诱导Ｔｎ细胞和Ｔｃ细胞增殖，激活Ｂ细胞产生抗体，活化巨噬细胞，增强ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞活性，诱导干扰素生成等效应。ＲＶ腹泻患儿，细胞免疫功能下降。有入报告ＲＶ肠炎急性期外周血ＣＤ３＋、ＣＤ４＋明显降低，ＣＤ２＋变化不显著ＣＤ３＋，ＣＤ４＋比值下降，表明细胞免疫受到抑制。产生ＩＬ－２减少，从而导致其间接的抗病毒效应减弱。如影响Ｂ细胞活化产生特异性抗体，巨噬细胞活化及ＩＮＦ的生成。②ＩＬ一６主要由单核细胞，巨噬细跑分泌，Ｔ细胞、Ｂ细胞及成纤维细胞、骨憎基质细胞、角化细胞和内皮细胞也可分泌。几一６具有抗病毒活性，主要发挥间接抗病毒作用，其机制可能为增强ＣＴＬ细胞、ＮＫ细胞功能，促进特异性抗体形成，现一般将ＩＬ一６作为前炎症因子。ＩＬ一６在一定程度上反应机体的免疫功能状态。研究证实番石榴叶治疗轮状病腹泻的临床观察肠道上皮细胞也可表达ＩＬ一６ｍＲＮＡ和分泌ＩＬ一６ｔ３６，３７］。适量的ＩＬ一６对维持肠道黏膜屏障功能有重要意义，但高水平的ＩＬ一６会造成细胞因子动态调节网络的功能障碍，参与ＲＶ腹泻病的发病和抗病毒作用。③ＩＩＪ一８是由多种细胞（单核，巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞）活化后分泌的细胞因子，是体内重要的白细胞趋化因子。ＩＩＪ一８趋化和激活中性粒细胞、Ｔ淋巴细胞和嗜碱性粒细胞，并可诱导它们浸润到炎症局部释放炎症介质，引起炎症反应。正常的小肠上皮细胞可规则表达ＩＬ一８ｍＲＮＡ，并分泌少量几一８，体外实验证实ＲＶ感染的肠上皮细胞可分泌高水平的ＩＬ－８，表明几一８可能参与ＲＶ腹泻病的发病。可能有以下作用；ａ、ＲＶ感染后，固有层单核性细胞浸润（巨噬细胞、淋巴细胞及几一８可能与ＲＶ感染后肠粘膜淋巴细胞和中性粒浆细胞）和中性粒细胞浸润，细胞浸润相关，中性粒细胞活化，产生活性氧自由基，可造成肠粘膜细胞损伤。ｂ、ＩＬ一８是上皮内淋巴细胞最有力的化学趋化因子，ＲＶ感染后产生的ＲＶ特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）主要是肠上皮内淋巴细胞。因此，几一８可能还可通过趋化ＣＴＬ发挥其效应以清除ＲＶ，也与肠粘膜病理损害有关。另外，可减弱干扰素尤其是ＩＮＦａ抗ＲＮＡ病毒的活性。（三）番石榴叶、急泻停胶囊ｌ临床疗效及疗效机制探讨（１）番石榴叶药理作用：研究表明番石榴叶具有抗病毒、降血糖、抑菌等作用［１４－１５】，急泻停胶囊对大黄冷浸液引起的小鼠腹泻有明显的拮抗作用，对炭末在小鼠小肠内的推进率有抑制作用，亦能对抗新斯的明所致的小肠运动亢进，并能促进小肠对水份及Ｃｌ一的吸收ｍｌ；对志贺氏菌、产肠毒素大肠杆菌、霍乱弧菌以及轮状病毒具有体外杀灭的效果ｍ】：进一步研究发现，番石榴叶复方在体外能降低轮状病毒的毒力，破坏其颗粒的外壳和内核【４０１。（２）番石榴叶对婴幼儿ＲＶ腹泻的ｌ晦床疗效：番石榴叶颗粒及急泻停胶囊对婴幼儿ＲＶ腹泻有很好的治疗效果，通过随机对照试验，表明二者效果优于思密达治疗效果，番石榴叶颗粒与急泻停胶囊二者在临床疗效问无明显差异（见表卜１）。同时发现，番石榴叶与急泻停胶囊发挥了较好的止泻、止吐、退热功１６硕士学位论文能，明显缓轻了患儿的症状；止吐方面急泻停胶囊优于番石榴叶与思密达组（见表卜２～３）。（３）番石榴叶具有收涩止泻及祛邪的功效：本次研究ＲＶ腹泻的中医证型以湿热证最多，风寒证次之，脾虚证最少，研究结果表明番石榴叶与急泻停胶囊对三种证型都有疗效，各证候间疗效无明显差异。番石榴叶及急泻停胶囊对三种不同中医证型都有较好临床疗效，验证了其具有收涩止泻的功效，现代药理研究表明番石榴叶具有抗轮状病毒的作用，轮状病毒的感染可以理解为中医的外邪入侵，所以番石榴叶还有祛邪的功能，故在对三种中医证型发挥止泻的同时不会出现“闭门留寇”的现象。由于番石榴叶对ＲＶ腹泻最常见的中医证型都有较好疗效，故可在ＲＶ腹泻的治疗中推广。（４）番石榴叶有抗ＲＶ作用：轮状病毒主要感染２岁以下患儿，具有自限性，病程约３—８天，本实验检测治疗后３天的轮状病毒抗原避开了其自限时间，实验室结果表明，治疗组分别在治疗３天后检测大便ＲＶ抗原阳性率明显低于对照组，说明番石榴叶颗粒及急泻停胶囊发挥了很好的抗轮状病毒作用。（５）番石榴叶有降低粪便中Ｎａ＋和葡萄糖浓度的作用：肠道Ｎａ＋和葡萄糖吸收减少，肠腔渗透压增高，是导致轮状病毒性腹泻的重要原因。本研究表明番石榴叶能促进ＲＶ腹泻患者Ｎａ＋和葡萄糖的吸收，可能为番石榴叶发挥收涩止泻功效之机制。诺瓦克样病毒的检测第二章诺瓦克样病毒的检测及番石榴叶治疗诺瓦克样病毒性腹泻的临床观察第一节诺瓦克样病毒的检测对象和方法一、对象２００４年１０月～２００５年１月、２００５年１０月２００６年１月在南方医院儿科就诊的临床诊断为病毒性腹泻的患儿，共收集腹泻标本４２０例。二、检测方法（一）ＮＬＶｓ的检测流程见图２一ｌ图２－１ＮＬＶｓ的检测流程图硕士擘位论天（二）制备１０％的粪便悬液：１．１０ｍｌ的试管中加入粪便ｌｍｌ，然后加入上述Ｈａｎｋｓ（含庆大霉素４００Ｕ／ｍ１）液至５ｍｌ。在振荡器上剧烈晃动ｌｍｉｎ。２．在４℃下３０００ｒｐｍ离心２０ｍｉｎ。３．取上清，一７０℃保存备用（三）轮状病毒的检测：轮状病毒的检测使用轮状病毒ＥＬＩＳＡ检测试剂盒，操作按说明书进行，主要步骤如下：１．将待测标本５０ｕｌ加入包被反应板中，井设阴性对照２孔、阳性对照２孔及空白对照孔。２．每孔加入５０ｕｌ酶结合物，空白对照除外。３．振荡反应板，使板孔中的液体充分混匀，放置于３７。Ｃ，３０ｒａｉｎ。４．甩去板中的液体，用酶标洗液注入孔中，放置ｌｍｉｎ。甩去酶标洗液并在纸上拍干，反复５次。５．每孔加入５０ｐｌ底物Ａ及５０ｕｌ底物Ｂ，振荡均匀，暗处３７。Ｃ，１０ｍｉｎ，每孔加入５０ｕｌ终止液振荡混匀。６．使用３１８ＭＣ型酶标仪读取ＯＤ４５０，结果判断标准为：ＯＤ４５０／＞０．５为阳性，ＯＤ４５０＜０．５阴性。７．将轮状病毒检测结果为阴性的标本，进入下一步实验。（四）粪便ＲＮＡ的提取：１．将１００ｕｌ的１０％的粪便悬液加入ＥＰ管中，然后加入３００ｕｌ的ＰＢＳ缓冲液。高速摇晃至少３０ｓｅｃ。２．４。Ｃ下１２０００ｒｐｍ离心５ｍｉｎ。３．取１５０ｕｌ的上清夜置于另一ＥＰ管中。４．用５００ｕｌ的Ｔｒｉｚｏｌ对上清夜进行处理。剧烈摇晃后，在室温下静置５ｍｉｎ。１９诺瓦克样病毒的检测５．每个ＥＰ管中加入ｌＯＯｕｌ氯仿，剧烈摇晃，在室温下静置５ｍｉｎ。６．４０Ｃ下１２０００ｒｐｍ离心１５ｍｉｎ。７．取上清液置干另一ＥＰ管中。８．每个ＥＰ管中加入等量的异丙醇，混匀。室温下１５ｍｉｎ，或一２０℃３ｈ或过夜。９．４＂Ｃ下１２０００ｒｐｍ，离心ｌＯｍｉｎ。ｌＯ．弃上清，离心ｌｍｉｎ，取剩余液体弃去，再次离心，用微量吸头吸取痕量液体弃去。１１．用２０ｕｌＤＥＰＣ处理的去核酸水溶解ＲＮＡ，一７０℃保存。（５）ＲＴ－ＰＣＲ检测采用引物ＪＶＩ３Ｉ／ＪＶｌ２Ｙ两步法检测ＮＶＳ，ＪＶＩ３Ｉ／ＪＶｌ２Ｙ引物是针对ＲＮＡ聚合酶区扩增，其序列见表２—１，由上海生工生物工程技术服务公司合成。表２－１寡核苷酸ＪＶＩ３Ｉ／ＪＶｌ２Ｙ序列Ｔａｂ．２－１ＯｌｌｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅＪＶＩ３Ｉ／ＪＶｌ２ＹＲＴ－ＰＣＲ步骤：Ｉ．ＲＴ１０×ＰＣＲ６ｂｕｆｆｅｒ１．５ｕｌ１＿５ｕｌ１．０ｕｌ２．０ｕｌｄＮＴＰ（ＩＯｍＭｅａｃｈ）ＡＭＶ－ＲＴ（５Ｕ／ｕ１）ＪＶｌ３Ｉ（１０ｐｍｏｌ／ｕ１１ＲＮＡｓｉｎ（３０Ｕ／ｕ１）０．２ｕｌＤＥＰＣｄｄＨ２０６．３ｕｌ２．５ｕｌ１５ｕｌＲＮＡ模板ＴｏＴＡＬ硕士学位论文４２℃温育６０ｍｉｎＩＩ．ＰＣＲ反应ｌＯ×ｂｕｆｆｅｒ５．ＯｕｌｄＮＴＰ（１０ｍＭｅａｃｈ）０．５ｕｌＪＶｌ２Ｙ（１０ｐｍｏｌ／ｕ１）１．５ｕｌＴａｑＰｏｌ（２Ｕ／ｕ１）１．５ｕｌｄｄＨ２０３６．５ｕｌＲ１二Ｍｉｘ５．０ｕｌＴｏＴＡＬ５０．０ｕ１ⅡＩ．循环温度和时间９４℃３ｍｉｎ９４℃３０ｓｅｃ３７℃ｌｍｉｎ３０ｓｅｃ４０ｃｙｃｌｅｓ７４℃７２℃７ｍｉｎⅣ．目的片断大小ＪＶｌ３Ｉ／ＪＶｌ２Ｙ可以检测出ＮＶＳ，目的片断为３２７ｂｐ。６、凝胶电泳：ＰＣＲ产物采用１．５％的琼脂糖凝胶电泳，分子量标准采用１００ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒＭａｒｋｅｒ。结果广州南方医院收集婴幼儿病毒性腹泻标本４２０份，轮状病毒阳性２５０份，阴性１７０份。１７０份轮状病毒阴性标本中，ＲＴＰＣＲ检测阳性者３１份，阳性率为７．４％。ＲＴ－ＰＣＲ产生的电泳图谱见图２—２，产物的位置与理论值３２７ｂｐ一致。２１诺瓦克样病毒的检测图２－２ＮＶＬ￥电泳结果ＭａｒｋｅｒＦｉｇ．２－２ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆＮＬＶｓｓｐｅｃｉｍｅｎｓＭ：１００ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒ讨论１９７２年，Ｋａｐｉｋｉａｎ等…１在美国Ｎｏｒｗａｌｋ镇爆发的一次急性胃肠炎患者粪便中检测到一种直径约２７ｎｍ病毒样颗粒，命名为Ｎｗａｌｋｖｉｒｕｓ（ＮＶ）。此后，世界各地陆续报道以发现地命名的，自患者粪便中分离出多种形态与之相似而抗原性稍异的病毒颗粒，统称为ＮＬＶｓ。现已证实，ＮＬＶｓ可在所有年龄段、不同场所（幼儿园、学校、餐馆、夏令营、医院、护婴室、养老院、航海舰队和单位等）引起暴发。我们通过ＲＴ—ＰＣＲ法对２００４年１０月～２００５年１月、２００５年１０月～２００６年１月南方医院儿科非轮状病毒感染的患儿粪便进行检测，进一步证实了ＮＬＶｓ是导致婴幼儿腹泻的重要病因之一。硕士学位论文第二节用序贯试验法观察番石榴叶对婴幼儿诺瓦克样病毒腹泻的疗效资料及方法ｌ、病例入选及排除标准：年龄为３个月～２岁，病程＜７２ｈ，大便为水样或蛋花汤样。就诊前２４ｈ有４次以上稀便或水样便，粪常规检查无侵袭性改变，就诊前均未经过抗生素和微生态药物治疗，粪便标本病毒核酸ＲＴ－ＰＣＲ检测ＮＬＶｓ阳性者为本研究的纳入对象。患儿有重度营养不良，或伴有其他全身性疾病者；或合并有心血管、肝、肾和造血系统严重疾病者；或凡未按规定用药，无法判断疗效或资料不全者，拒绝加入本研究者，均不纳入本研究。２、治疗方法：治疗组患儿服用番石榴叶颗粒（广东一方制药有限公司生产，批准文号：０３１２１０７）２．Ｏｇ／ａ，１次，ｄ，连续服用３ｄ；给予相应口服ＯＲＳ，并指导饮食。３、疗效判定标准：参照１９９８年５月全国腹泻病防治学术研讨会通过的急性腹泻病的疗效判定标准阱】：（１）显效：治疗７２ｈ内大便性状、次数均恢复正常，全身症状消失，大便常规化验正常；（２）有效：治疗７２ｈ大便次数、性状均明显好转，全身症状改善，大便常规化验好转；（３）无效：治疗７２ｈ大便性状、次数及全身症状均无好转甚至恶化。４、试验设计：由于诺瓦克样病毒性腹泻发病率低，病毒检测时间长，在临床疗效上我们选用开放型单向质反应序贯试验ｍ】。（１）试验标准：试验有效率Ｐ≤Ｐｏ＝４５％，拒绝试药试验有效率Ｐ≤Ｐｌ＝９０％，接受试药假阳性率Ⅱ＝Ｏ．０１，假阴性率１３＝Ｏ．０１（２）根据试验标准Ｐｏ、Ｐ１、ａ、ｔ３的４个值查表可以定出两条直线方程：用序贯试验法观察番石榴叶对婴幼儿诺瓦克样病毒腹泻的疗效Ｕ：Ｙ２１．９２＋０．’７ｌｎ：Ｌ：ｙ＝一１．９２＋０．７１ｎ：ｕ称为上界代表接受试药的界限，Ｌ称为下界代表拒绝试药的界限。横坐标ｒｌ代表试验病例数，纵坐标Ｙ代表治疗有效的病例数，参见图。（３）试验进程：如果第一个受试者服用番石榴叶后有效，则从原点０起划一向东北方的斜对角线段，终点在ｎ－１；若第二受试者无效，则从第一受试者终点为起点起划一格向正东方的水平线段，终点在ｎ＝２，依次类推。于是在试验中各线段就连接成一条试验线。当实验线触及上界ｕ时，接受番石榴叶，试验终了：当实验线触及下界Ｌ时，拒绝番石榴叶，试验也终了；当实验线不触及Ｌ、下界之一时，不作接受或拒绝番石榴叶的决定，试验还需继续进行。图２—２番石榴叶对ＮＬＶｓ腹泻疗效的序贯试验图Ｆｉｇ．２－２ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｗｉｔｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆＮＶｌＳｔｒｅａｔｅｄＰｓｉｕｍｇｕａｊａｒａＬ８６４２Ｏ８摹＼嚣睾较忙６４２ＯＯ５ｌＯ编例／例１５２０２５接受试药２４硕士学位论文结果如图２—２所示，试验到第２０例时，试验线接触Ｕ，试验结束，因此接受有效的假设。可认为番石榴叶对ＮＶＬｓ腹泻有治疗作用。其中有效１６例，无效４例，说明该药治疗ＮＶＬｓ腹泻有效率可达８０％，误认为有效的概率不超过Ｉ％。讨论序贯试验的特点不似一般的试验方法把病人或试验对象分配到几个试验组去分别进行试验，而是每试验一个对象后及时分析总结，一旦可下结论时，立即停止试验。这样既可避免盲目加大试验样本数而造成浪费，又不由于试验个数少而得不到应有的结论。其另一特点是，预先规定试验所容许的假阳性率与假阴性率。由于诺瓦克样病毒缺乏组织培养系统，无合适的动物感染模型，以及ＮＶＬｓ检出率较低，所以至今对诺瓦克样病毒性腹泻的治疗研究尚很少。基于以上原因，本试验试图通过较少的病例数对番石榴叶的疗效进行观察，以筛选出有效的抗ＮＶＬｓ中药。由于缺乏组织培养系统，以及无合适的动物感染模型，尽管对研究了３０年，ＮＬＶｓ的原型ＮＶ的复制及发病机制知道的并不多。大部分对Ｎｖ的了解都源自于爆发的流行病学研究和对志愿者的免疫学试验研究。对志愿感染ＨｕＣＶｓ者进行空肠活检发现有组织学损伤，虽然粘膜本身是完整的，小肠近端的绒毛却变宽、变平，还可见单核细胞浸润、核胞浆内空泡形成。电镜下见上皮细胞完整但微绒毛变短，未发现粘膜上皮细胞内有病毒。在发病者的胃基底部、幽门窦和直肠粘膜未发现组织损伤。目前对诺瓦克样病毒制病机制研究中，发现ＮＬＶｓ能识别人组织血清抗原（ｈｕｍａｎｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓＨＢＧＡｓ）为受体与之结合ｍ４６１，ＮＬＶｓ结合到人ＡＢＯ、Ｌｅｗｉｓ、ｓｅｃｒｅｔｏｒ型ＨＢＧＡｓ上有四种不同方式［４４】，ＶＬＰｓ能与ｓｅｃｒｅｔｏｒ型抗原显性的胃十二指肠上皮细胞、唾液相结合，提示胃十二指肠上皮细胞可能为ＶＬＰｓ的受体‘４７１。最近用序贯试验法观察番石榴叶对婴幼儿诺瓦克样病毒腹泻的行效研究发现ＶＬＰｓ的Ｐ：域与ＨＢＧＡｓ结合有关（４８１。２００１年Ｔａｍｕｒａ等人首次利用ｒＵＥＶＶＬＰｓ（Ｕｅｎｏｖｉｒｕｓ，ＮＶｓＧＩＩ）对Ｃａｃｏ一２细胞进行了ＵＥＶ与细胞之间相互作用受体方面的研究，并提出一１０５ｋｄ的细胞结合蛋白可能是ＵＥＶ的作用受体［４９】。可喜的是Ｋａｒｓｔ等在２００３年的研究中首次发现小鼠诺瓦克病毒（ＭＮＶ—１），对ＭＮＶ—ｌ和人类ＮＬＶｓ的比较揭示出它们在基因序列、结构和基因组总体的安排上存在诸多相似点。更令人兴奋的是，２００４年ＷｏｂｕｓＣＥ等从具先天免疫系统缺陷的小鼠中获得树突状细胞（ＤＣ）和巨噬细胞体外培养ＭＮＶ一１成功，成为首个能在体外培养的诺瓦克病毒，研究中提示整合素可能在ＭＮＶ一１进入肠道后与Ｄｃ表面受体结合并被摄取而进入肠下皮组织致病起着一定的作用，这也为研究人类的ＮＬＶｓ的致病机制提供一定的依据ｍ’５１１。我们的临床观察得出番石榴叶叶对ＮＶＬｓ腹泻有效，究竟是以何种机理进行的，ＮＶＬｓ又是以何种机理感染致病的，我们的研究是否证实了ＲＶ和ＮＬｓ受体共用假说的正确性，都须进一步研究，明确其机理。硕士学位论文全文小结结论综合上述临床研究结果，可以得出以下结论：１、番石榴叶及急泻停胶囊（番石榴叶复方）具有抗轮状病毒的作用，对小儿轮状病毒性腹泻的三种主要中医证型有较好的疗效，二者在临床疗效上无明显差异，在今后治疗轮状病毒性腹泻中可以番石榴叶单味药为主或在辩证的基础上加用番石榴叶发挥其收涩止泻及祛邪的功效；在抗病毒性腹泻的中药研究方面可以番石榴叶为主，率选其有效部位。２、运用ＲＴ—ＰＣＲ法检测进一步证实了诺瓦克样病毒是引起小儿腹泻的重要病因之一，在临床中应引起重视，同时应加强中医药治疗的研究，番石榴叶对其较好的疗效，但其作用机制需进一步研究。存在不足１、由于诺瓦克样病毒性腹泻发病率较低，临床观察样本量不大，本临床观察只能初步说明番石榴叶对其有效，其ｌ临床作用机制需进一步探讨。２、由于目前人诺瓦克样病毒无法在体外培养以及无合适的动物模型，故实验室研究未展开。设想为进一步探明番石榴叶治疗诺瓦克样病毒性腹泻的作用机制，拟进行一下研究：１、以小鼠诺瓦克样病毒（ＭＮＶ一１）替代人诺瓦克样病毒研究其发病机制。２、筛选番石榴叶抗诺瓦克样病毒的有效部位，明确其主要成分。参考文献参考文献【ｌ】１金玉，黄湘，方肇寅，等．兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的分子流行病学研究［Ｊ］．中国实用儿科杂志，２００６，２１（１）：１５—１８【２］ＷａｎｇＢ，ＷａｎｇｉｎｆａｎｔｓＮ，ＪｉｎＨ，ｅｔａｌ．ＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｙｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｎｒｏｔａｖｉｒｕｓｂｏｒｎｅｄｉａｒｒｈｅａｉｎＬｉｕＸｉｎｇＢｉｎｇＸｕｅＺａａｎｄｃｈｉｌｄｒｅｎａｒｅａｓ【Ｊ】ＺｈｏｎｇｈｕａＺｈｉ，２００４，２５（９）：７３７－－４０［３［Ａｎｎ，ＣｈｉｓｔｉｎｅＮｙｑｕｉｓｔ．ＲｏｔａｖｉｒｕｓＶａｃｃｉｎｅ［Ｊ［．ＰｅｄｉａｔｒｉｃｓＡｎｎａｌｓ，１９９９，２８（８）：５３３—５３９．【４】ＯｓａｍｕＮｉｓｈｉｏ，ＫｉｙｏｈｉｋｏＭａｔｓｕｉ，ＴｏｍｏｈｉｒｏＯｋａ，ｅｔａｌ．ＲｏｔａｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｍｏｎｇｉｎｆａｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｒｒｈｅａｉｎＰａｋｉｓｔａｎ［Ｊ［．ＰｅｄｉａｔｒｉｃｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０００，４２：４２５－４２７．【５】ＦａｎｇＺｈａｏｙｉｎ，ＹａｎｇａｃｕｔｅＨｕｉ，ＺｈａｎｇＪｉｎｇ，ｅｔａｌ．ＣｈｉｌｄｒｏｔａｖｉｒｕｓＩｎｆｅｅｃｔｉｏｎｉｎｇａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓｉｎｔｗｏＣｈｉｎｅｓｅｓｅｎｔｉｎｅｌｈｏｓｐｉｔａｌｓ［Ｊ［．ＰｅｄｉａｔｒｉｃｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０００．４２：４０１－４０５．【６】ＨａｆｆｊｅｅＩＥ．Ｔｈｅｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆｒｏｔａｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：ａｇｌｏｂａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ［．ＪＰｅｄｉａｔｒＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＮｕｔＬ１９９５．２０（３）：２７５—８６．【７】ＲｕｇｇｅｒｉＦＭ，ＤｅｃｌｉｃｈＳ．ＲｏｔａｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｍｏｎｇｃｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈｄｉａｒｒｈｏｅａＩｔａｌｙ［Ｊ［．ＡｃｔａＰａｅｄｉａｔｒＳｕｐｐｌ．１９９９，８８（４２６）：６６－７１．【８】ＱｉａｏＨ，ＮｉｌｓｓｏｎＭ，ＡｂｒｅｕＥＲ，ＨｅｄｌｕｎｄＫＯ，ｅｔｃ．ⅥｒａｌｄｉａｒｒｈｅａｉｎｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎｉｎＢｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ［Ｊ［．ＪＭｅｄＶｉｒ０１．１９９９Ａｐｒ；５７（４）：３９０—６．【９】ｏｆｆｉｔＰＡ．Ｈｏｓｔｆａｃｔｏｒｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｒｏｔａｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ：ｔｈｅｓｋｉｅｓａｒｅｃｌｅａｒｉｎｇ【Ｊ】．ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，１９９６，１７４（ＳｕＰＰ１１）：Ｓ５９—６４．【１０】Ｋｏｏｐｍａｎｓ，Ｍ．ｅｔａ１．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｔｈｅｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆｈｕｍａｎｅｎｔｅｒｉｃｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓｉｎＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ［Ｊ［．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２０００；１８１，￥２６２一￥２６９．ｅｔ［１１】ＪｉｎｇＹ’ＱｉａｎＹ’ＨｕｏＹｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓｉｎａ１．ＳｅｒｏｐｒｅｖａｌｅｎｃｅａｇａｉｎｓｔＮｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｈｕｍａｎｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ【Ｊ】．ＪＭｅｄＶｉｒｏｌ，２０００，６０（１）：９７—１０１．２Ｒ硕士学位论文【１２】谢华萍，方肇寅，王光，等．长春市儿童医院１９９８～２００１年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究【Ｊ】．病毒学报，２００２，１８（４）：３３２～６．【１３］陈冬梅，张又，钱渊，等．北京地区婴幼儿人类杯状病毒感染状况及型别分析【Ｊ】．中华儿科杂志，２００２，４０（７）：３９８—４０．［１４】戴迎春，聂军，刘翼，等．广州地区人类杯状病毒感染的初步研究【Ｊ】第一军医大学学报，２００４，２４（３）：２９０—２９２【１５】李吉来，罗佳波，陈飞龙．番石榴叶挥发油成分的Ｇ材，１９９９，２２（２）：７９－－８０．［１６１李泳．轮状病毒腹泻的免疫学研究概况【Ｊ】．国外医学・儿科分册，１９９２，１９：１３５—１３７．ＣＭＳ分析【Ｊ】中药【１７】王波，刘衡川，鞠长燕．攀枝花地区野生番石榴叶不同提取物降血糖作用研究【Ｊ】．四川大学学报（医学版），２００５：３６（６）：８５８－－８６１【１８】程天印，朱深海，韦显凯，等．番石榴叶止泻机制的初步研究【Ｊ】．畜牧与兽医２００５，３７（２）：１３—１５［１９１魏练波，陈宝田，李智军，等．番石榴叶治疗轮状病毒肠炎的临床研究【Ｊ】．中国中西医结合脾胃杂志，２０００，８（１）：１ｌ一１３【２０】陈国宝，陈宝田．番石榴叶提取物体外抗轮状病毒的实验研究【Ｊ】．中国医药学报．２００２，１７（８）：５０２－－５０４［２ｌ】赵云燕，徐雯，肖达民，等．番石榴叶对婴幼儿轮状病毒肠炎粪中ＳＩｇＡ含量的影响［Ｊ】．中国中西医结合杂志，２００３，２３（３）：２３０—２３１［２２１赵云燕，谢炜，陈宝田，等．番石榴叶治疗轮状病毒肠炎的实验研究【Ｊ】．安徽中医学院学报．２００３．２２（５）：４４—４６【２３】张文举，陈宝田，王彩云，等．槲皮素止泻机制研究田．第一军医大学学报．２００３，２３（１０）：１０２９—１０３１【２４】魏练波，吕瑞和，陈宝田．番石榴叶的体外抗轮状病毒作用【Ｊ】．世界华人消化杂志，１９９９，７（１０）：８９５—８９７ｌ参考文献［２５】张文举，陈宝田，朱全红，等．番石榴叶中提取的槲皮素和２体外抗人轮状病毒作用［Ｊ】中草药．２００５，３６（１）：７６—７９【２６】王慕逖主编．儿科学【Ｍ】．第５版．北京：人民卫土出版社，２６７Ｑ羟基熊果酸２００２：２６３一【２７】王萍芬主编．中医儿科学【Ｍ】．上海：上海科学技木出版社，１９９７：５４【２８】腹泻病学术研讨会组委会．中国腹泻病诊断治疗方案ｆＪ】．中国实用儿科杂志，１９９８，１３（６）：３８１［２９］时景璞．临床研究中样本量的估计方法［Ｊ］．中国临床康复，７（１０）：１５６９—１５７１［３０】ＭｅｎｄｅｚＥ，ＡｒｉａｓＣＥＬｏｐｅｚＳ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｓｕｒｆａｃｅｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｒｏｔａｖｉｍｓｍａｙａｌｔｅｒｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅｖｉｒｕｓ【Ｊ】ＪＶｉｒｏｌ，１９９６，７０（２）：１２１８－－２２［３１１ＧｒａｈａｍＫＬ，ＨａｌａｓｚＰ，ＴａｎＹ，ｅｔａｌＩｎｔｅｇｒｉｎ—ｕｓｉｎｇｒｏｔａｖｉｒｕｓｅｓｂｉｎｄａｌｐｈａ２ｂｅｔａｌｉｎｔｅｇｒｉｎａｌｐｈａ２ＩｄｏｍａｉｎｖｉａＶＰ４ＤＧＥｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｒｅｃｏｇｎｉｚｅａｌｐｈａＸｂｅｔａ２ａｎｄａｌｐｈａＶｂｅｔａ３ｂｙｕｓｉｎｇＶＰ７ｄｕｒｉｎｇｃｅｌｌｅｎｔｒｙ【Ｊ】ＪＤＪ，ＳａｌｏｒｄＶｉｒｏｌ，２００３，７７（１８）：９９６９－－７８ｏｆ【３２】ＮｕｓｓｂａｕｍＪＲ，ＲｉｍｍｅｌｅＤＤ．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌａｔｅｘａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＣｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，ＥｃｏｌｉＫ９９，ａｎｄｒｏｔａｖｉｒｕｓｉｎｃａｌｆｆｅｃｅｓ［Ｊ】．ＪＶｅｔＤｉａｇｎＩｎｖｅｓｔ，１９９９，１１（４）：３１４－－８【３３】ＤｏｎｇＹ，ＺｅｎｇＣＱ，ＢａｌｌｉｎＪＭ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｒｏｔａｖｉｒｕｓｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎＮＳＰ４ｍｏｂｉｌｉｚｅｓｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｏｓｉｔｏｌｈｕｍａｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｃｅｌｌｓｂｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ—ＮａｌａｃｅｄＳｃｉ１，４，５一ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．［Ｊ】ＰｒｏｃＵＳＡ，１９９７，９４（８）：３９６０－－５【３４］ＴａｆａｚｏｌｉＥＺｅｎｑＣＱ，ＥｓｔｅｓＭＫ，ｅｔａｌ．ＮＳＰ４ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｏｆｒｏｔａｖｉｒｕｓｉｎｄｕｃｅｓｐａｒａｃｅｌｌｕａｒｌｅａｋａｇｅｉｎｐｏｌａｒｉｚｅｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ【Ｊ］ＪＶｉｒｏｌ，２００１，７５（３）：１５４０－－６【３５】ＨａｌａｉｈｅｌＮ，ＬｉｅｖｉｎＶ，ＢａｌｌＪＭ，ｅｔａｌ．ＤｉｒｅｃｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｒｏｔａｖｉｒｕｓＮＳＰ４（Ｉ１４—１３５）ｐｅｐｔｉｄｅｏｎｔｈｅＮａ（＋）一Ｄ—ｇｌｕｃｏｓｅｓｙｍｐｏｒｔｅｒｏｆｒａｂｂｉｔｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｂｒｕｓｈｂｏｒｄｅｒ硕士学位论文ｍｅｍｂｒａｎｅ．［Ｊ】ＪＶｉｒｏｌ，２０００，７４（２０）：９４６４－－７０［３６】ＪｏｎｅｓＳＣ，ＴｒｅｊｄｏｓｉｅｗｉｃｚＬＫ，ＢａｎｋｓＲＥ，ｅｔａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一６ｂｙｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ．ＪＣｌｉｎＰａｔｈ０１．１９９３Ｄｅｃ；４６（１２）：１０９７—１００．【３７】ＳｈｉｒｏｔａＫ，ＬｅＤｕｙＬ，ＹｕａｎＳＹ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一６ａｎｄｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒａｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｈｕｍａｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．ＶｉｒｃｈｏｗｓＡｒｃｈＢＣｅｌｌＰａｔｈｏｌＩｎｃｌＭｏｌＰａｔｈ０１．１９９０；５８ｒ４）：３０３—８．［３８１周小祝，莫志贤，郑有顺．急泻停对小肠功能的影响［Ｊ］．中药药理与临床，２０００，１６（１）：３６—３７【３９】吴敏，聂军，陈清，等．“急泻停”对４种腹泻病原微生物体外杀灭效果［Ｊ］．第一军医大学学报，１９９５，１５（１）：５７［４０］魏连波，吕瑞和，陈宝田．中药急泻停体外抗轮状病毒的作用．世界华人消化杂志，２０００：８（２）：２２６—２２７【４１】ＫａｐｉｋｉａｎＡＺ，ＥｓｔｅｓＭＫ，ＣｈａｎｏｃｋＲＭ．Ｎｏｒｗａｋｌｇｒｏｕｐｏｆｖｉｒｕｅｓ．Ｉｎ：ＦｉｅｌｄｓＶｉｒｏｌｏｇｙ．［ＭｌＦｉｅｌｄｓＥＮ，ＫｎｉｐｅＤＭ，ＨｏｗｅｌｙＰＭ，ｅｄｓ．３ｒｄ．Ｆｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：ＬｉｐｐｉｎｏｃｔｔＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９６：７８１—８１０［４２］徐端正．医学序贯试验［Ｍ］．第１版．上海：上海科学技木出版社，１９７９：４，１６—２３【４３】Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＥＲ．，Ｌ．Ｌｉｎｄｅｓｍｉｔｈ，ｅｔａｌ．ＢｉｎｄｉｎｇｏｆＮｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｔｏＡＢＨｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓｉｓｂｌｏｃｋｅｄｂｙａｎｔｉｓｅｒａｆｒｏｍｉｎｆｅｃｔｅｄｈｕｍａｎｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙｖａｃｃｉｎａｔｅｄｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｒ０１．７６：１２３３５—１２３４３．［４４】Ｈｕａｎｇ，ＥＷ，ＴＦａｒｋａｓ，ｅｔａｌ．ＮｏｒｏｖｉｒｕｓｅｓｂｉｎｄｔｏｈｕｍａｎＡＢＯ，Ｌｅｗｉｓａｎｄｓｅｃｒｅｔｏｒｈｉｓｔｏ・・ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｄｉｓｔｉｎｃｔｓｔｒａｉｎ・－ｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｔｅｒｎｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８８：１９—３１．【４５】Ｈｕｔｓｏｎ，Ａ．Ｍ．，Ｒ．Ｌ．Ａｔｍａｒ，ｅｔａｌ．ＮｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｄｉｓｅａｓｅｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＡＢＯｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｔｙｐｅ［Ｊ］．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８５：１３３５—１３３７．【４６】Ｈｕｔｓｏｎ，Ａ．Ｍ．，Ｒ．Ｌ．Ａｔｍａｒ，ｅｔａｌ．Ｎｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｂｙ３ｌ参考文献ｂｉｎｄｉｎｇｔｏｈｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｒ０１．７７：４０５Ｊ，１５．ＶａｉｄｙｅＢ，ｅｔａｌ．Ｎｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓｂｉｎｄｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｔｏ【４７】ＭａｒｉｏｎｎｅａｕｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐＳ，ＲｕｖｏｅｎＮ，ＬｅＭｏｕｌｌａｃｏｎｈｉｓｔｏ—ａｎｔｉｇｅｎｓｐｒｅｓｅｎｔｇａｓｔｒｏｄｕｏｄｅｎａｌｓｅｃｒｅｔｏｒｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００２．１２２（７）：１９６７—１９７７．［４８】Ｔａｎ，Ｍ．，ＥＨｕａｎｇ，Ｊ．Ｍｅｌｌｅｒ，ｅｔａｌ．ＭｕｔａｔｉｏｎｓｃａｐｓｉｄａｆｆｅｃｔｂｉｎｄｉｎｇｔｏｗｉｔｈｉｎｔｈｅＰ２ｄｏｍａｉｎｏｆＮｏｒｏｖｉｒｕｓａｈｕｍａｎｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｂｉｎｄｉｎｇｐｏｃｋｅｔ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｒ０１．７７：１２５６２—１２５７１．［４９】ＴａｍｕｒａＭ，ＮａｔｏｒｉＫ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＭ，ｅｔａ１．ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＶｉｒｕｓＮｏｒｗａｌｋＰａｒｔｉｃｌｅｓｗｉｔｈｔｈｅ１０５一ＫｉｌｏｄａｌｔｏｎＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ，ａＣａｎｄｉｄａｔｅＲｅｃｅｐｔｏｒＭｏｌｅｃｕｌｅｆｏｒＶｉｒｕｓＡｔｔａｃｈｍｅｎｔ［Ｊ］．ＪＶｉｒ０１．２０００，７４（２４）：１１５８９—９７．ＣＥ，Ｌａｙ［５０】ＫａｒｓｔＳＭ，ＷｏｂｕｓＭ，ｅｔａ１．ＳＴＡＴＩ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｎａｔｅｉｍｍｕｎｉｔｙｔｏａＮｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｖｉｒｕｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００３，２９９（５６１２）：１５７５—８．ＣＥ，ＫａｒｓｔＳＭ，ＴｈａｃｋｒａｙＬＢ，ｅｔａ１．ＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＮｏｒｏｖｉｒｕｓｉｎｃｅｌｌａ【５１】Ｗｏｂｕｓｃｕｌｔｕｒｅｒｅｖｅａｌｓｔｒｏｐｉｓｍｆｏｒｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓａｎｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＢｉ０１．２００４，２（１２）：ｅ４３２．Ｅｐｕｂ２００４Ｎｏｖ３０．硕士学位论文综述诺瓦克样病毒性腹泻机理的研究进展诺瓦克样病毒（Ｎｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｅｓ，ＮＬＶｓ）是世界范围内最常见的引起人类非菌性胃肠炎暴发的病原微生物，属杯状病毒科（ｈｕｍａｎｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ，ＨｕＣＶ），上世纪９０年代以来，逐渐确定了ＮＬＶｓ在散发性腹泻中的病原作用，并进一步证实，ＮＶｓ同样是散发性急性腹泻的重要病原，其作用仅次于轮状病毒。ＮＬＶｓ可在所有年龄段、不同场所（幼儿园、学校、餐馆、夏令营、医院、护婴室、养老院、航海舰队和单位等）引起暴发。美国疾病控制中心（ＣＤＣ）曾经估计，９６％的非细菌胃肠炎暴发与ＮＬＶｓ有关。在美国，每年约有２３，０００，０００诺瓦克样病毒引起的胃肠炎患者，其中超过５０，ＯＯＯ人需要住院治疗，并造成约３００人死亡…。为此国内外学者在流行病学、分子生物学、免疫学以及致病机制方面进行了深入研究，取得了重要进展，显综述如下：１．ＮＬＶｓ的病原生物学和分子生物学特征ＮＬＶｓ于１９７２年在美国俄亥俄州诺沃克城胃肠炎患者粪便中经免疫电镜发现，是一个具有抗原和遗传多样性的病毒组。该病毒在粪便样本内的浓度低，排毒时间短，目前尚无合适的细胞培养系统和动物模型，因此，阻碍了对该病毒的许多研究。ＮＬＶｓ病毒基因组为单股正链ＲＮＡ病毒，基因组大小为７６２４个碱基（不包括长约ｌｌＯ个碱基的ｐｏｌｙＡ尾巴），包括３个开放阅读框（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｓ，ＯＲＦｓ），ＯＲＦｌ编码一个大的具有保守序列的多聚酶非结构蛋白，ＯＲＦ２编码一种分子量约为５６ＫＤａ的衣壳蛋白。ＯＲＦ３编码一种约为２２５ＫＤａ的微小结构蛋白。ＮＬＶｓ的核酸同源性分析表明，世界不同地区、不同时间流行的ＮＬＶｓ基因组ＯＲＦｌ的ＲＮＡ多聚酶区相对保守，核苷酸、氨基酸序列同源性高于６０％，有的达到９０％以上，基因组其它区域变异相对较多。根据其ＲＮＡ多聚酶区的核苷综述酸序列或其所编码氨基酸序列的相似性，将ＮＬＶｓ分为２个基因组，即（１）基因型Ｉ（Ｇ），代表株为ＮＶ，包括Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎｖｉｒｕｓ、ＤｅｓｅｒｔＳｈｉｅｌｄｖｉｒｕｓ等；（２）基因型ＩＩ（ＧＩＩ），代表株为ＳｎｏｗＭｏｕｎｔａｉｎｖｉｒｕｓ，包括Ｈａｗａｉｉｖｉｒｕｓ、Ｍｅｘｉｃｏｖｉｒｕｓ等。ＮＬＶｓ的共同特征有：（１）直径为２６～３５ｎｍ的小圆结构病毒，无包膜；（２）分离自非菌性急性胃肠炎病人的粪便；（３）不能在细胞或组织中培养；（４）在Ｃｓｃｌ密度梯度中的浮力密度为（１．３６～１．４１）ｇ／ｃｍ３；（５）基因组为单股正链ＲＮＡ；（６）电镜下缺乏显著的形态学特征。２．流行病学ＮＬＶｓ是肠道病毒，存在多种传播途径，如人人传播、食物性传播、水源性传播等，其中以食物污染最常见，如牡蛎、冰、鸡蛋、色拉等和饮用受污染的水都可以造成流行或爆发”１。感染后潜伏期多在２４～４８ｈ，少数在１８～７２ｈ。发病突然，以恶心、呕吐、胃痛和腹泻为主要症状，儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，２４ｈ内腹泻４～８次，粪便呈水样，不带血，也少见粘液，便检白细胞阴性。以往认为ＨｕＣＶｓ具有自限性和症状很轻，但是有报道显示人类杯状病毒造成的严重胃肠炎（需药物治疗），不及时治疗亦有死亡的危险性，２００２年５月在驻阿富汗的英人中爆发ＮＬＶｓ急性胃肠炎中，２９名病人中前３名出现头痛、颈部强直、恐光症和脑梗阻，其中一位病人还伴弥散性血管内凝血（ＤＩＣ）。’“。ＮＬＶｓ感染存在明显的季节性，早期ＮＬＶｓ被描述为“冬季呕吐病”，该病毒引起的胃肠炎主要见于寒冷季节。但Ｌｏｐｍａｎ等。１对英国ＮＬＶｓ性胃肠炎进行７年的回顾性研究发现，前６年夏季ＮＬＶｓ感染明显少，但２００２年仲夏却出现一轮ＮＬＶｓ感染的高峰。这是由于新变异毒株的出现还是卫生保健设置的改变有待于进一步探讨。Ｐａｎｇ等。３用ＲＴＰＣＲ法对２３９８名２～２４个月龄儿童进行两年前瞻性非菌性急性胃肠炎病原调查，发现ＮＬＶｓ的检出率占２０％。Ｇｒｏｈｍａｎｎ等在悉尼对历时１１年收集到的住院患者中的腹泻病人类粪便标本进行了检测，成人中ＮＬＶｓ的阳性率为１６．９％。上述，可见，ＮＬＶｓ感染已成为国外非菌性急性胃肠炎暴发和散发的硕士学位论文重要原因之一。我国ＮＬＶｓ的研究起步较晚，直到发现该病毒的２７年后（１９９５年）方肇寅才在我徽腹泻患儿粪便中检出一例ＮＬＶｓ，世纪９０年代后期，靖宇、钱渊等在我国北京和太原进行研究中发现该两地区婴幼儿血清标本中检出特异性抗体两地区婴幼儿血清抗ＮＬＶｓ抗体阳性率即达８０％以上并随年龄而上升，证明我国人群中ＮＬＶ感染十分普遍。陈冬梅于近期（２００２年）在北京地区２３３名腹泻婴幼儿的粪便标本中检出５８份（阳性率２４．９％）ＮＬＶｓ，并且基因型较复杂多样。谢华萍等对１９９８—２００１年间长春儿童医院５岁以下腹泻患儿的１２６４份粪标本中检出ＨｕＣＶ２０２份，阳性率为１６％”“。同时，戴迎春（２００３年）等也证实了在广州地区存在ＮＬＶｓ的散发和暴发“…。可见该病毒既是我国的优势流行株，也是全球ＮＬＶ流行的优势株。结合近年来国内相关疫情分析，ＮＬＶｓ不仅是我国婴幼儿急性腹泻散发病例的主要病原之一，亦已证实其为成人急性腹泻暴发的重要病原。３．致病机制及免疫研究由于缺乏组织培养系统，以及无合适的动物感染模型，尽管对研究了３０年，ＮＬＶｓ的原型ＮＶ的复制及发病机制知道的并不多。１９９０年，Ｊｉａｎｇ等人克隆了ＮＶ的全基因组并利用杆状病毒表达系统表达出了（ｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＶＬＰｓ），为ＮＬＶｓ研究带来了新的曙光，紧接着各种基因型的ＮＬＶｓ均利用杆状病毒表达系统表达出了相应的ＶＬＰｓ“““。这种病毒样颗粒可以在体外自行装成空壳状类病毒颗粒，其大小、形状及免疫源性与天然病毒相似。这就为研究ＮＬＶｓ的发病机制：包括受体、抗原抗体反应及ＮＬＶｓ与细胞之间相互作用等提供了基础。ＶＬＰｓ为三面对称，由１８０个衣壳蛋白单体形成Ｔ＝３的二十面体，每个衣壳蛋白由Ｓ域和Ｐ域组成，二者之间由一８氨基酸铰链，Ｓ域主要形成病毒衣壳内层，Ｐ域Ｃ段形成拱形向外突出，Ｐ域可以进一步分为Ｐ。、Ｐ２域，Ｐ。域在病毒衣壳最外面““。为了找到合适的易感染细胞繁殖传代，Ｗｈｉｔｅ等利用ＶＬＰｓ对多种哺乳动物细胞系进行了分析，发现Ｃａｃｏ一２细胞更易与ＮＬＶｓ相结合“”。２００１年Ｔａｍｕｒａ综述等人首次利用ｒＵＥＶＶＬＰｓ（Ｕｅｎｏｖｉｒｕｓ，ＮＶｓＧＩＩ）对Ｃａｃｏ２细胞进行了ＵＥＶ与细胞之间相互作用受体方面的研究，并提出一１０５ｋｄ的细胞结合蛋白可能是ＵＥＶ的作用受体“…。在对诺瓦克样病毒制病机制研究中，发现ＮＬＶｓ能识别人组织血清抗原（ｈｕｍａｎｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓＨＢＧＡｓ）为受体与之结合“７１…，ＮＬＶｓＶＬＰｓ能与结合到人ＡＢＯ、Ｌｅｗｉｓ、ｓｅｃｒｅｔｏｒ型ＨＢＧＡｓ上有四种不同方式“…，ｓｅｃｒｅｔｏｒ型抗原显性的胃十二指肠上皮细胞、唾液相结合，提示胃十二指肠上皮细胞可能为ＶＬＰｓ的受体。“。最近研究发现ＶＬＰｓ的Ｐ。域与ＨＢＧＡｓ结合有关。“。目前对ＮＬＶｓ致病机制的研究都以ＶＬＰｓ为替代物，对病毒与受体的结合有了一定的认识，但由于病毒衣壳蛋白里无ＲＮＡ，其致病机制是否与ＲＮＡ还有关，须进一步研究。Ｋａｒｓｔ等在２００３年的研究中首次发现小鼠诺瓦克病毒（ＭＮＶ一１），对ＭＮＶ一１和人类ＮＬＶｓ的比较揭示出它们在基因序列、结构和基因组总体的安排上存在诸多相似点。更令人兴奋的是，２００４年ＷｏｂｕｓＣＥ等从具先天免疫系统缺陷的小鼠中获得树突状细胞（ＤＣ）和巨噬细胞体外培养州Ｖ—ｌ成功，成为首个能在体外培养的诺瓦克病毒，研究中提示整合素可能在ＭＮＶ一１进入肠道后与ＤＣ表面受体结合并被摄取而进入肠下皮组织致病起着一定的作用，这也为研究人类的ＮＬＶｓ的致病机制提供一定的依据。３１２“。ＶＬＰｓ在大小、结构及抗原特性上都与天然病毒相似，最适于进行该病毒免疫应答和黏膜免疫的研究。１９９９年Ｂａｌｌ。”通过给与体内有该病毒预存血清抗体的成人志愿者服用ＶＬＰｓ完成了其Ｉ期试验，结果发现摄入ＶＬＰｓ是安全而有免疫原性的，但其针对ＶＬＰｓ的免疫应答水平要比野生型病毒感染的志愿者明显低，但这种中等水平的免疫应答能否有效地保护近期ＮＬＶｓ感染，这种无复制能力的疫苗能否诱导缺乏预存抗体的志愿者产生同样的免疫应答，口服ＶＬＰｓ候选疫苗能否保护个体免受同源（或异种）ＮＬＶｓ的攻击等，均有待进一步探讨。随后的研究证实口服杆状病毒表达的ＶＬＰｓ可刺激小鼠的系统和黏膜抗体应答并提高已接受ＮＶ的人类志愿者的抗体应答水平。Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ等的研究表明，用表达ＶＬＰｓ的委内瑞拉马脑炎复制子接种小鼠可以诱导其产生较强的系统和黏膜及异型抗体应硕士学位论天答，随后采用单纯生化方法对３种不同的委内瑞拉马脑炎表达的ＶＬＰｓ与来自ｌ型或３型生物合成途径的不同ＡＢＨ血型系统抗原的特异性结合进行评价，并对ＮＶ感染的志愿者和使用两种不同候选疫苗接种小鼠的抗血清的受体阻断力进行对比，结果表明来自感染的志愿者或试验性接种小鼠的抗血清均可以阻断ＶＬＰｓ与ＡＢＨ血型系统抗原的结合，该研究暗示了ＮＶ抗体介导的中和作用的潜在机制。”２“。总之，人们以ＶＬＰｓ为基础，在免疫机制、疫苗筛选取得了重大进展，这为防治ＮＬＶｓ腹泻奠定了坚实的基础。４．防治措施目前对此类病毒引起的感染尚无特殊的治疗手段，预防的重点是切断粪一口传播途径。因此，要加强水源和粪便的管理，改善供水条件，搞好环境卫生和个人卫生，同时要进行流行病学监测。以ＶＬＰｓ为基础的疫苗研制虽然取得了重大进展，由于缺乏组织培养系统及无合适的动物感染模型，而不能采用传统的动物实验或组织培养综合测定评价这几种候选疫苗的相对有效性，故这些疫苗的效能有待通过人类志愿者的试验研究加以评价。目前，临床上对于病毒性腹泻尚无特效药，而中医药呈现出独特的优势，在我国已经研究出了一些确有疗效的中药和复方，筛选开发出新的抗病毒性腹泻中药新药方面有着十分广阔的前景。参考文献［１】Ｋｏｏｐｍａｎｓ，Ｍ．ｅｔａ１．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆｈｕｍａｎｅｎｔｅｒｉｃｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓｉｎｔｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２０００；１８１，￥２６２一￥２６９．【２】ＣａｕｌＥＯ．Ｖｉｒａｌｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ：ｓｍａｌｌｒｏｕｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｖｉｒｕｓｅｓ，ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓａｎｄＩＩ．Ｔｈｅａｓｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．Ｐａｒｔｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＰａｔｈｏｌ，１９９６Ｄｅｃ；４９（１２）：９５９—６４．［３】ＧｒｅｅｎＫＹ．Ｓｕｍｍａｒｙｏｆｔｈｅｆｉｒｓｔｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｗｏｒｋｓｈｏｐｏｎｈｕｍａｎｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］．ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ２０００：１８１（Ｓ２）：￥２５２—３．综述【４】ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（ＣＤＣ）．ＯｕｔｂｒｅａｋｏｆａｃｕｔｅｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＮｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｅｓａｍｏｎｇＢｒｉｔｉｓｈｍｉｌｉｔａｒｙｐｅｒｓｏｎｎｅｌ—Ａｆｇｈａｎｉｓｔａｎ，Ｍａｙ２００２［Ｊ１．ＭＭＷＲＭｏｒｂＭｏｒｔａｌＷｋｌｙＲｅｐ．２００２Ｊｕｎ７；５１（２２）：４７７—９．【５】ＬｏｐｍａｎｖｏｍｉｔｉｎｇＢＡ，ＲｅａｃｈｅｒＭ，ＧａｌｌｉｍｏｒｅｏｆＣ，ｅｔａｌ．Ａｓｕｍｍｅｒ－ｔｉｍｅｉｎＥｎｇｌａｎｄａｎｄｐｅａｋｏｆｗｉｎｔｅｒｔＯｄｉｓｅａｓｅ：ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅｎｏｒｏｖｉｒｕｓｅｓＷａｌｅｓ，１９９５２００２［Ｊ］．ＢＭＣＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，２００３，３（１）：１３ａｃｕｔｅ［６１ＰａｎｇＸＬ，ＨｏｎｍａＳ，ＮａｋａｔａＳ，ｅｔａｌ．Ｈｕｍａｎｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓｉｎｙｏｕｎｇｃｈｉｌｄｒｅｎｉｎｔｈｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．ＪＩｎｆｅｃｔｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓｏｆＤｉｓ，２０００，１８１（Ｓｕｐｐｌ２）：２８８—２９４．ａｇａｉｎｓｔ［７】ＪｉｎｇＹ，ＱｉａｎＹ，ＨｕｏＹ’ｅｔｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓｉｎａ１．ＳｅｒｏｐｒｅｖａｌｅｎｃｅＮｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｈｕｍａｎｂｅＯｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ【Ｊ】．ＪＭｅｄＶｉｒｏｌ，２０００，６０（１）：９７—１０１．［８］谢华萍，方肇寅，王光，等．长春市儿童医院１９９８～２００１年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究［Ｊ］．病毒学报，２００２，１８（４）：３３２—６．［９］陈冬梅，张又，钱渊，等．北京地区婴幼儿人类杯状病毒感染状况及型别分析［Ｊ］．中华儿科杂志，２００２，４０（７）：３９８—４０．［１０］戴迎春，聂军，刘翼，等．广州地区人类杯状病毒感染的初步研究［Ｊ］．第一军医大学学报．２００４，２４（３）：２９０—２９２【１１】ＪｉａｎｇＸ，ＷｉｌｔｏｎＮ，ＺｈｏｎｇＷＭ，ｅｔａ１．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｅｓｂｙｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ．ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２０００；１８ｌ（Ｓ２）：￥３４９—３５９【１２】ＦａｒｋａｓＴ，ＴｈｏｒｎｔｏｎＳＡ，ＷｉｌｔｏｎＮ，ｅｔａ１．ＨｏｍｏｌｏｇｏｕｓｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔＯｕｓｅｏｆｖｅｒｓｕｓｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓａｆｔｅｒａｃｕｔｅＮｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｏｎｖｉｒｕｓｅｓａｍｏｎｇｃｒｅｗｍｅｍｂｅｒｓｇａｓｔｒｏｃｎｔｅｒｉｔｉｓｏｕｔｂｒｅａｋｓ【１３】Ｇｏｏｄｒｉｄｇｅ２ＵＳＮａｖｙｖｅｓｓｅｌｓ［Ｊ］．ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２００３；１８７（２）：１８７—９３ｐｏｉｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＬ，ＧｏｏｄｒｉｄｇｅＣ，ＷｕＪ，ｅｔａ１．Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｎｏｒｏｖｉｒｕｓｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｂｙｃａｐｉｌｌａｒｙｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇｗｉｔｈｗｈｏｌｅｃｏｌｕｍｎｉｍａｇｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｎａｌＣｈｅｍ．２００４，７６（１）：４８—５２．【１４】Ｐｒａｓａｄ，Ｂ．Ｖ，Ｍ．Ｅ．Ｈａｒｄｙ，ｅｔａｌ．Ｘ—ｒａｙｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅＮｏｒｗａｌｋ３８硕士学位论文ｖｉｒｕｓｃａｐｓｉｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２８６：２８７—２９０．［１５】ＷｈｉｔｅＬＪ，ＢａｌｌＪＭ，ＨａｒｄｙＭＥ，ｅｔａｌ．ＡｔｔａｃｈｍｅｎｔａｎｄｅｎｔｒｙｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＮｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓｃａｐｓｉｄｓｔｏｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎａｎｄａｎｉｍａｌｃｅｌｌｌｉｎｅｓ［Ｊ］．ＪＶｉｒ０１．１９９６；７０：６５８９－石５９７．［１６】ＴａｍｕｒａＭ，ＮａｔｏｒｉＫ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＭ，ｅｔａ１．ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＮｏｒｗａｌｋＶｉｒｕｓＰａｒｔｉｃｌｅｓｗｉｔｈｔｈｅ１０５一ＫｉｌｏｄａｌｔｏｎＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ，ａＣａｎｄｉｄａｔｅＲｅｃｅｐｔｏｒＭｏｌｅｃｕｌｅｆｏｒＶｉｒｕｓＡｔｔａｃｈｍｅｎｔ［Ｊ］．ＪＶｉｒ０１．２０００，７４（２４）：１１５８９—９７．［１７１Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＥＲ．，Ｌ．Ｌｉｎｄｅｓｍｉｔｈ，ｅｔａｌ．ＢｉｎｄｉｎｇｏｆＮｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｔｏＡＢＨｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓｉｓｂｌｏｃｋｅｄｂｙａｎｔｉｓｅｒａｆｒｏｍｉｎｆｅｃｔｅｄｈｕｍａｎｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙｖａｃｃｉｎａｔｅｄｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｒ０１．７６：１２３３５—１２３４３．【１８】Ｈｕａｎｇ，Ｐ．Ｗ，ＴＦａｒｋａｓ，ｅｔａｌ．ＮｏｒｏｖｉｒｕｓｅｓｂｉｎｄｔｏｈｕｍａｎＡＢＯ．Ｌｅｗｉｓａｎｄｓｅｃｒｅｔｏｒｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｄｉｓｔｉｎｃｔｓｔｒａｉｎ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｔｅｒｎｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８８：１９—３１．：【１９】Ｈｕｔｓｏｎ，Ａ．Ｍ．，Ｒ．Ｌ．ｍｔｍａｒ，ｅｔａｌ．ＮｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｄｉｓｅａｓｅｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＡＢＯｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｔｙｐｅ［Ｊ］．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８５：１３３５—１３３７．［２０】Ｈｕｔｓｏｎ，Ａ．Ｍ．，Ｒ．Ｌ．Ａｔｍａｒ，ｅｔａｌ．Ｎｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｂｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｈｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｒ０１．７７：４０５－４１５．【２１】ＭａｒｉｏｎｎｅａｕＳ，ＲｕｖｏｅｎＮ，ＬｅＭｏｕｌｌａｃＶａｉｄｙｅＢ．ｅｔａｌ．Ｎｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓｂｉｎｄｓｔｏｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓｐｒｅｓｅｎｔｏｎｇａｓｔｒｏｄｕｏｄｅｎａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｓｅｃｒｅｔｏｒｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００２，１２２（７）：１９６７１９７７．【２２】Ｔａｎ，Ｍ．，Ｐ．Ｈｕａｎｇ，Ｊ．Ｍｅｌｌｅｒ，ｅｔａｌ．ＭｕｔａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅＰ２ｄｏｍａｉｎｏｆＮｏｒｏｖｉｒｕｓｃａｐｓｉｄａｆｆｅｃｔｂｉｎｄｉｎｇｔｏｈｕｍａｎｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｂｉｎｄｉｎｇｐｏｃｋｅｔ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｒ０１．７７：１２５６２—１２５７１．【２３】ＫａｒｓｔＳＭ，ＷｏｂｕｓＣＥ，ＬａｙＭ，ｅｔａ１．ＳＴＡＴｌ一ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｎａｔｅｉｍｍｕｎｉｔｙｔｏａＮｏｒｗａｌｋ—ｌｉｋｅｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００３，２９９（５６１２）：１５７５—８．【２４】ＷｏｂｕｓＣＥ，ＫａｒｓｔＳＭ，ＴｈａｃｋｒａｙＬＢ，ｅｔａ１．ＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＮｏｒｏｖｉｒｕｓｉｎｃｅｌｌ综述ｃｕｌｔｕｒｅｒｅｖｅａｌｓａｔｒｏｐｉｓｍｆｏｒｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓａｎｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＢｉ０１．２００４，２（１２）：ｅ４３２．Ｅｐｕｂ２００４Ｎｏｖ３０．［２５】ＢａｌｌＪＭ，ＧｒａｈａｍＤＹ＇ＯｐｅｋｕｎｐａｒｔｉｃｌｅｓｇｉｖｅｎｏｒａｌｌｙｔｏＡＲ，ｅｔａｌ．ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＮｏｒｗａｌｋｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅＩｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ：ｐｈａｓｅｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９９９Ｊｕｌ；１１７（１）：４０—８．［２６】ＨａｒｒｉｎｇｔｏｎＰＲ，ＹｏｕｎｔＢ，ＪｏｈｎｓｔｏｎＲＥ，ｅｔａｌ．Ｓｙｓｔｅｍｉｃ，ｍｕｃｏｓａｌ，ａｎｄｈｅｔｅｒｏｔｙｐｉｃｉｍｍｕｎｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈＶｅｎｅｚｕｅｌａｎｅｑｕｉｎｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｒｅｐｌｉｃｏｎｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＮｏｒｗａｌｋ—ｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，２００２，７６（２）：７３０—７４２．ＰＲ，ＬｉｎｄｅｓｍｉｔｈＬ，ＹｏｕｎｔＢ，ｅｔａ／．Ｂｉｎｄｉｎｇｏｆ［２７】ＨａｒｒｉｎｇｔｏｎＮｏｒｗａｌｋ—ｖｉｒｕｓ—ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｔｏＡＢＨｈｉｓｔｏ—ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐａｎｔｉｇｅｎｓｉｓｂｌｏｃｋｅｄｂｙａｎｔｉｓｅｒａｆｒｏｍｉｎｆｅｃｔｅｄｈｕｍａｎｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ１２３４３ｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙｖａｃｃｉｎａｔｅｄｍｉｃｅ［Ｊ］＿ＪＶｉｒｏｌ，２００２，７６（２３）：１２３３５一４０硕士学位论文附录一随机数字表按就诊顺序１－－１８６名患儿用ＳＰＳＳｌｌ．０产生随机数字表（随机种子为２００００００）将以下随机数除以３余数为０的入第１组，余数为１的入第２组，余数为３的入第３组。就诊顺序１随机数字．１４分组情况３．００就诊顺序１１随机数字．１４分组情况３．００就诊顺序２ｌ随机数字．１０分组情况２．００就诊顺序３ｌ随机数字．１２分组情况１．００就诊顺序４１随机数字．２１分组情况１．００就诊顺序５ｌ随机数字．５６分组情况３．００就诊顺序６１随机数字．３３分组情况１．００２．４３２．００１２３．６１２．００４．２９３．００１４．１５１．００２４．２２２．００３４５．１６２．００１５．７２１．００２５．６１２．００６．７０２．００１６７８．４５１．００９．０５３．００１９．７２１．００２９．０５３．００３９．５０３．００４９．７７３．００５９２．００６０２．００２０．０４２．００３０．７４３．００１０．３５３．００１７１３．６２３．００２３．２３３．００３３１８．２６３．００２８．３４２．００３８．３５３．００４８．５２２．００５８．９２３．００６８．３７２．００．０４２００．９３１．００２６．９５３．００．５８２．００２７．２４ｉ．００３７．８７１．００４７．３２３．００２２．７３２．００３２．０６１．００４２．７７３．００５２．９８３．００３５６８３６．６９１．００４６．９４２．００４０．７０２．００５０２．００４３．０７２．００５３．３３１．００６３．６４２．００２．００４４．５３３．００５４．５４１．００６４．７５１．００３．００４５．６６１．００５５．５１１．００６５．２０３．００５６．２８２．００５７．３５３．００６７．４５１．００３．００６９．４９２．００２．００７０６２．６２３．００６６．１４３．００２．００４１附录就诊顺序７１随机数字．７３分组情况２．００就诊顺序８１随机数字２３７２．０４２．００７３．１７３．００７４．２９３．００８４．１８１．００９４．６４２．００１０４．９９１．００７５．６７２．００８５．２８２．００９５．６４２．００１０５．２７１．００７６．７６７７．８０３．００７８．７０２．００８８．１２１．００９８．４１３．００１０８６０７９．０５３．００８９．５１１．００９９．５７１．００１０９．９３１．００８０．３９１．００９０．１２１．００１００．８４１．００１１０．８４１．００１２０．９８３．００１３０２．００８６．７０２．００８２．７３２．００８３．８８２．００８７．９０１．００分组情况３．００就诊顺序９１随机数字．９２分组情况３．００就诊顺序１０１随机数字．１９分组情况２．００就诊顺序１１１随机数字．９５分组情况３．００就诊顺序１２１随机数字．６６分组情况１．００就诊顺序１３１随机数字．１１分组情况３００９２．５２２．００１０２．２４１．００１１２．５４１．００１２２．７４３．００１３２．３８３．００１４２．９８３．００１５２．４４９３．２７１．００１０３．１９２．００９６．８５２．００１０６９７．０７２．００１０７２．００１１６．４８１．００１２６．０４２．００２．００１１７１．００１１３１１４１１５３８１１８１１９５８１．００１２３．２９３．００１３３．７５１．００１４３．６８３．００１．００１２４．３７２．００１３４．９５３．００１４４．７０２．００３．００１２５６６１．００１３５．４４３．００１４５．０３２．００２．００１２７．８１１．００１３７．５８２．００１４７．７８１．００１５７．５６２．００２．００１２９．６０１．００１３９．５３３．００１２８．５６３．００１３８．０５３．００１４８．８９３．００１５８．７６２．００１３６．７１３．００１４６．０１２００１４０．３６１．００就诊顺序１４１随机数字．４８分组情况１．００就诊顺序１５１随机数字．６８１４９．５３３．００１５９．０６１５０．２０３００Ｌ６０．７２１５３．４１１５４．５０ｔ５５．２７１５６．０６硕士学位论文分组情况３．００３．００３．００３．００１．００１．００３．００２．００１．００１．００４３附录附录二编号年月日临床观察表一般情况姓名：发病时间：诱因：家庭住址：联系电话：性别：年月日年龄：时分入院方式：门诊就诊时间：年月住院日时分对比情况入院情况２４ｈ大便次数腹痛恶心呕吐临床症状大便性状咳嗽鼻塞、流涕食欲不振脱水症状舌象脉象实验室检查大便常规：粪Ｎａ＋：粪糖：病毒检测不良事件中医证型（１）湿热型（３）脾虚型（２）风寒型ＲＶ（１ＮＬＶ（治疗后三天情况有有℃无无有有无无℃止吐时间：体温成形水粪夹杂有有有有退热时间：稀溏不成形纯稀水无无无无成形水粪夹杂止泻时间：有有有有无无无无稀溏不成形纯稀水大便常规：粪Ｎａ＋：粪糖：）ＲＶ（１ＮＬＶ（）有无硕士学位论文成果一、发表论文情况ｌ、张学森，周迎春，吴旖芬，等．用序贯试验法观察番石榴叶对婴幼儿诺瓦克样病毒腹泻的治疗．中国中医药信息杂志，２００５，１２（９）：６３—６４２．、张学森，周迎春，吴旖芬．番石榴叶对诺瓦克样病毒性腹泻患儿唾液中ＳＩｇＡ、ＩｇＧ水平的影响．；辽宁中医杂志，２００６，３３（４）：８－９３．、张学森，周迎春，吴旖芬，等．番石榴叶治疗ｄ＇ＪＬ诺瓦克样病毒性腹泻的临床观察．成都中医药大学学报，待发。二、参与编著１、《心脏血管病食疗》２、《中医名著名家名方系列丛书．中医急症分册》致谢致谢本研究是在我的导师周迎春副教授悉心指导下完成的，在这里我特别要感谢恩师我学习、生活、工作等多方面亲切关怀和谆谆教诲，让我难以忘怀。恩师对工作认真负责的态度和实事求是的严谨治学态度将成为我今后工作和做人的榜样。感谢中医内科的全体医护人员在我就读期间给予我的支持和帮助！感谢我的同学吴依芬、詹惠春、胡勇。同时我也要感谢我的家人和所有的亲朋好友，是他们的支持和帮助，才使我顺利完成了学业。硕士学位论天第一军医大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属第一军医大学。本人承诺承担本声明的法律效果。作者签名：惦轧日期：矿峰Ｉ－Ｉ－月妒日Ｖ％龙葛少日期：矿肆学位论文版权使用授权书月≯。日本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第一军医大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“√”）：１、保密口，在一年解密后适用本授权书。２、不保密酬作者签名：出，专茅秒／ｏ、∥６新戳：／嘞日期：沙缉ｒ月妒日日期：耐年ｒ月≠，日４７