2012年3月第9卷第8期
高效液相色谱法测定硫酸氢氯毗格雷片有关物质
李飞1张黎娟2孟祥松1施志顺1耿武松1孟磊1
1.安徽省毫州市药品检验所y安徽毫州23680012.安徽省毫州职业技术学院y安徽毫州
236800
[摘要]目的建立用高效液相色谱法测定硫酸氢氯毗格雷片有关物质的方法O方法色谱柱为ULTRONES-OVM(4.6mm>150.0mmy5Pm)y流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-乙睛(75I25)y流速1.0mL/miny检测波长为220nmy柱温为25Cy进样量为20PLO结果在该色谱条件下y硫酸氢氯毗格雷与各中间体\\杂质分离良好y辅料对有关物
质检测无干扰O结论本方法用于硫酸氢氯毗格雷片有关物质检测专属灵敏y方法可靠O[关键词]硫酸氢氯吮格雷犒 犒效液相色谱法 有关物质[中日分类号]R927.11[文献标识码]A[文童编号]1673-7210 2012 03 b -0106-03
DetermeminationofrelatedsubstanceinClopidogrelHydrogenSulphateTabletbyHPLC
LIFei1ZHANCLijucn2MENCXicngsong1SHIZziszun1CENCWusong1YILei1
1.BozhouInstituteforDrugControl,AnhuiProvince,Bozhou236800,China;2.BozhouVocationalandTechnicalCollege,AnhuiProvince,Bozhou236800,China
[abstract]ObjectiveToestablishthemethodfordetermeminationofrelatedsubstanceinClopidogrelHydrogenSulphateTablet.MethodsULTRONES-OVMcolumn(4.6mm>150.0mm,5Pm)wasused,mobilephasewas0.01mol/Lpotassi-unmdihydrogenphosphate-acetontrile(75I25),theflowratewas1.0mL/min,detectionwavelengthwas220nm,columntemperaturewas25C.Thesampleamountwas20PL.ResultsInthischromatographycondition,ClopidogrelHydrogenSulphateTablethadagoodseparationfromcentralsubstancesandimpuritysubstance;besides,excipientsdidn'tinterferetheresultsofrelatedsubstance.ConclusionThemethodfordetermeminationrelatedsubstanceofClopidogrelHydrogenSulphateTabletisexclusive,sensitiveandreliable.
[keywords]ClopidogrelHydrogenSulphateTablet;HPLC;Relatedsubstance
硫酸氢氯毗格雷是一种新型血小板聚集抑制剂y临床k用于治疗中风\\心肌梗死\\外周动脉疾病等[1]y市场需求量较大y但国内对其制剂有关物质检测报道较少y为了更有效地控制本品质量y本文参照美国药典[2]建立测定硫酸氢氯毗格雷片有关物质的HPLC法y方法专属\\灵敏\\可靠y有效地控制了本品的质量O1仪器与试药1.1仪器
岛津高效液相色谱仪y紫外检测器(型号ZSPD-20AD)y泵(型号ZLC-20AD)y色谱工作站(LCSolution色谱工作站)y电子天平(METTLERTOLODXS105电子天平)y紫外-可见分光光度仪(型号ZAgilent8453)O1.2试药
硫酸氢氯毗格雷片(合肥医工医药有限公司y规格Z75mg/片y批号Z20081226)y波立维(法国赛诺菲y规格Z75mg/片y批号Z2613)y泰嘉(深圳信立泰y规格25mg/片y批号Z20090312)y硫酸氢氯毗格雷对照品(中国药品生物制品检定所y批号Z100819-200601)y氯毗格雷杂质A对照品(USPy批号ZG0H250)y氯毗格雷杂质B对照品(USPy批号ZG1H047)y氯毗格雷杂质C对照品(USPy批号ZF2H215)y起始原料\\中间体及空白辅料(合肥医工医药有限公司提供)O1.3试剂
乙睛(色谱纯)y磷酸二氢钾(国药集团化学试剂有限公
[作者简介]李飞(1979.1-)y男y汉族y安徽涡阳人y本科y主管药师y主要从事新药方法学的考察及药品标准的完善等方面的研究工作O
司)y甲醇(分析纯)y水(纯化水)O
2方法与结果2.1色谱条件
色谱柱为ULTRONES-OVM(4.6mm>150.0mmy5Pm)y流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-乙睛(75I25)y流速为1.0mL/miny检测波长为220nmy柱温为25Cy进样量为
20PLO
2.2溶液的配制
2.2.1供试品溶液配制
本品细粉适量(约相当于硫酸氢氯毗格雷25mg)y精密称定y置100mL量瓶中y加甲醇适量使溶解y再加流动相稀释至刻度y摇匀y滤过y作为供试品溶液O
2.2.2对照品溶液配制
精密量取供试品溶液1mLy置100mL量瓶中y加流动相稀释至刻度y摇匀y作为对照品溶液O
2.2.3杂质对照品A溶液
取氯毗格雷杂质对照品A适量y精密称定y用甲醇溶解并稀释制成含氯毗格雷杂质对照品A(0.005mg/mL)O
2.2.4杂质对照品B溶液
取氯毗格雷杂质对照品B适量y精密称定y用甲醇溶解并稀释制成含氯毗格雷杂质对照品B(0.015mg/mL)O
2.2.5杂质对照品C溶液
取氯毗格雷杂质对照品C适量y精密称定y用甲醇溶解并稀释制成含氯毗格雷杂质对照品C(0.025mg/mL)O
106中国医药导报CHINAMEDICALHERALD
万方数据2012年3月第9卷第8期
3方法学考察
2.3.1测定波长的选择
取硫酸氢氯毗格雷对照品~起始原料~合成中间体~空白辅料适量,用甲醇溶解,再用流动相稀释至约30卜g/mL,参照紫外-可见分光光度法<<中国药典>2010年版二部附录wA>于200~400nm波长间扫描,结果显示硫酸氢氯毗格雷~起始原料~中间体在220nm处吸收强度基本相当<吸收系数比为1:1>,辅料基本无吸收不干扰有关物质测定,故选择220nm为有关物质检测波长较为适宜 2.3.2专属性考察
2.3.2.1样品溶液取本品细粉适量,加甲醇适量使溶解,再加流动相稀释制成每1mL含主药0.25mg的溶液,滤过,取续滤液10卜L进样,色谱图显示,主峰的保留时间为7.04min,杂质峰为3.24~3.80~5.86min,其中3.24min为杂质A,5.86min为杂质B,各杂质峰与主药峰分离良好
2.3.2.2杂质对照品A溶液取氯毗格雷杂质对照品A适量,精密称定,用甲醇溶解并稀释制成含氯毗格雷杂质对照品A0.005mg/mL,取k述溶液10卜L进样,色谱图显示,主峰的保留时间为3.33min
2.3.2.3杂质对照品B溶液取氯毗格雷杂质对照品B适量,精密称定,用甲醇溶解并稀释制成含氯毗格雷杂质对照品B0.015mg/mL,取k述溶液10卜L进样,色谱图显示,B1主峰的保留时间为5.72min,B2主峰的保留时间为8.54min
2.3.2.4杂质对照品C溶液取氯毗格雷杂质对照品C适量,精密称定,用甲醇溶解并稀释制成含氯毗格雷杂质对照品C0.025mg/mL,取k述溶液10卜L进样,色谱图显示,主峰的保留时间为14.38min
2.3.2.5杂质混合溶液取k述3份溶液和硫酸氢氯毗格雷片样品溶液混合,取混合溶液进样,色谱图显示,各杂质和样品分离良好
2.3.2.6光降解溶液取本品细粉适量,置40000lx强光下24h后,加甲醇适量使溶解,再加流动相稀释制成每1mL含主药0.25mg的溶液,滤过,取续滤液10卜L进样,色谱图显示,样品经强光后,2.73~3.03~12.52min处出现新杂质峰,各杂质峰与主药峰分离良好
2.3.2.7热降解溶液取本品细粉适量,置140C烘箱放置24h后,加甲醇适量使溶解,再加流动相稀释制成每1mL含主药0.25mg的溶液,滤过,取续滤液10卜L进样,色谱图显示,样品经高温,2.74~3.76min处出现较大杂质峰,4.42~4.92~14.08min处出现新杂质峰,各杂质峰与主药峰分离良好 2.3.2.8酸降解溶液取本品细粉适量,加甲醇适量使溶解,再加流动相稀释制成每1mL含主药0.5mg的溶液,作为母液,取母液5mL加0.1mol/L盐酸2.5mL,放置2h后,加0.1mol/L氢氧化钠2.5mL中和,滤过,取续滤液10卜L进样,色谱图显示,在2.70~2.88min处出现新杂质峰,各杂质峰与主药峰分离良好
2.3.2.9碱降解溶液取本品细粉适量,加甲醇适量使溶解,再加流动相稀释制成每1mL含主药0.5mg的溶液,作为母液,取母液5mL加0.1mol/L氢氧化钠2.5mL,放置2h后,加0.1mol/L盐酸2.5mL中和,滤过,取续滤液10卜L进样,色谱图显示,在2.34~2.68~12.83min处出现新杂质峰,原3.33min附近杂质峰变大,各杂质峰与主药峰分离良好
万方数据 药品检验
2.3.2.10氧化破坏降解溶液取本品细粉适量,加甲醇适量使溶解,再加流动相稀释制成每1mL含主药0.5mg的溶液,作为母液,取母液3.5mL加氧化破坏液<甲酸:双氧水=1:2>0.5mL,放置2h后,加1mol/L氢氧化钠3.5mL中和,滤过,取续滤液10卜L进样,色谱图显示,主峰有所降解,在2.81~3.86~6.11~14.40min处出现新杂质峰,各杂质峰与主药峰分
离良好
2.3.2.11辅料溶液取空白辅料,加流动相溶解并稀释制成每1mL相当于含硫酸氢氯毗格雷0.25mg的溶液,滤过,取续滤液10卜L进样,色谱图显示,辅料在2.7min附近出
峰,在杂质峰位置k未出峰,基本不干扰有关物质的检测
试验结果表明,硫酸氢氯毗格雷片降解物质与主药的分离效果令人满意,辅料基本不干扰有关物质的检测 2.3.3溶液稳定性考察
取硫酸氢氯毗格雷片细粉适量<约相当于硫酸氢氯毗格雷25mg>,精密称定,置100mL量瓶中,加甲醇适量使溶解,再加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,作为样品溶液,分别于晌晌<0~2~4~6h>分别吸取10卜L注入液相色谱仪,通过测定样品杂质个数及有关物质总量<按面积百分比>变化情况来考察样品溶液稳定性 结果主峰A的RSD=0.58% 不同时间段的主峰A见表1
表1
硫酸氢氯败格雷片样品溶蔽稳定性考寨
考察时间 主峰A 有关物质<%><按面积百分比计算> 杂质个数 新增杂质 056360690.183/256017810.193无455985130.203无6 5668270 0.21 3 无 k述试验结果表明,硫酸氢氯毗格雷样品溶液经6h后,主峰稳定,杂质种类和个数均未有增加,仅杂质总量稍有增加<但变化也在0.05%范围晌>,为准确测量硫酸氢氯毗格雷有关物质,建议在样品溶液配制后6h晌测定 2.3.4检测限 取空白基线一段,测量其噪音峰高,将样品溶液用流动相稀释至适当浓度,10卜L进样,使其主药峰高约为噪音峰高的3倍,此时的进样浓度为0.008卜g/mL,最低检出限为0.08ng,检测限结果显示,k述有关物质检测供试品溶液浓度是适宜的 2.3.5杂质A B C方法学考察 2.3.5.1杂质线性范围考察分别取氯毗格雷杂质A~B~C适