内蒙古医学杂志Inner Mongolia Med J 2008年第40卷第12期 1447 乳腺癌中微血管密度和ki一6 7核抗原的表达及意义 郭云娣,白光辉 (江苏省苏州市立医院病理料、普外科,江苏苏州 215008) [摘要]目的:分析探讨乳腺癌组织中用CD105的定量值表达的微血管密度(MVD)和Ki一67核抗原的 表达及意义。方法:应用免疫组织化学二步法,检测60例乳腺癌组织和20例乳腺良性病变组织(纤维腺病 和纤维腺瘤)中的CD105、Ki一67的表达,用CD105的定量值表示微血管密度(MVD);用阳性细胞比例表示 Ki一67的表达程度。结果:①在60例乳腺癌和20例乳腺良性病变组织中,MVD在乳腺癌组明显高于良性 病变组(P≤O.01);在乳腺良性病变组织即纤维腺病和纤维腺瘤之间的MVD差异无统计学意义(P> 0.05)。②MVD与Ki一67核抗原呈正相关(P<0.01)。结论:①MVD在乳腺浸润性导管癌中高表达;②乳 腺癌中间质的MVD与主质癌细胞的增殖细胞核抗原呈正相关。 [关键词】CD 105;Ki 67;微血管密度;乳腺癌 [中图分类号]R363.2[文献标识码] A[论文编号】1004—0951(zoo8)12—1447—03 Expression and Significance of Microvessel Density and Ki一6 7 Nuclear Antigen in Breast Carcinoma GUO Yun—di.BAI Guang—hui (Department ofPathology,General Surgery,The Hospital ofSuzhou City,Suzhou215008 China) [Abstraet]Objective:To study the relationship between the expression and significance of MVD and Ki一6 7 in breast carcinoma.Methods:By using polymer detection system for Immuno histological Staining to study the expression of CD 105、Ki一67 in the 6O cases breast carcinoma and 2O cases breast benign lesions(fibroadenosis and fibroadenoma),MVD was expressed by quantifiaction of CD 105;Ki一67 was expressed by the percentage of opsitive cells.Results:①Among the tissues of 60 cases breast carcinoma and 2O cases breast benign lesions,MVD in the breast carcinoma group was higher than in the breast benign lesions group(P≤O.01);there was no sig— nificant difference between fibroadenosis and fibroadenoma(P>0.05).②There was positive correlation between、 MVD and Ki一67 nuclear antigen(P<0.01).Conclusion:①MVD was higher expression inbreast invasive duc— tal acrcinoma.②There was positive correlation between MVD in interstitila of breast carcinoma and proliferative nuclear antigen of parenehymal carcinoma ceils. [Key words]CD 105;Ki一67;MVD;Breast carcinoma 乳腺癌发病率及检出率正逐年上升,居女性恶 用CD105的免疫组织化学染色决定肿瘤区内的微 性肿瘤的前列。目前研究表明,肿瘤要维持其持续 血管密度(microvessel density,MⅥ)) J。 生长必须要有血管的生成以获得其增殖所必须的氧 用Ki一67核抗原的抗体标记的乳腺癌组织用 和营养物质,故血管生成(angiogenesis)在肿瘤的发 于反映除G0期以外其它细胞周期的癌细胞的增殖 生发展中是至关重要的l1 J。 活性。本研究用免疫组织化学二步法检测乳腺癌中 转化生长因子13(transforming growth factor— MⅧ(用CD105的定量值表示)和Ki一67核抗原, p,TGF—p)是目前发现的血管生成调节因子,属于 以探讨其在乳腺癌中的表达及意义。 血管生成促进因子;ED 105是TGF一8的一部分, 是一种跨膜糖蛋白成分,它可以独立存在于细胞膜 1材料与方法 表面及细胞浆中L2]。Akagi K等研究表明:CD105 1.1标本 . 与血管发生发展和维持血管完整性有关,并且可以 收集赤峰学院附属医院病理科2OOl~2oo4年 1448 乳腺癌根治标本或改良根治术石蜡包埋病理档案乳 腺癌标本60例。术前未经任何化疗和抗肿瘤治疗。 患者均为女性,年龄范围26~72岁,中位年龄47.5 岁。同时收集2004年良性病变蜡块2o例(乳腺腺 病和纤维腺瘤各1O例)。 1.2免疫组化染色 4 m厚连续切片、脱蜡、枸橼酸缓冲液(PH为 6.0)微波修复。抗体为工作液均购自北京中杉金桥 生物技术有限公司。采用免疫组织化学二步法染 色。每批染色均设置阳性、阴性对照。分别用已知 高表达的乳腺癌组织为阳性对照,以PBS(0.01 mol/L,pH 7.4)替代一抗为阴性对照。 1.3阳性结果判断及MVD计算方法 用阳性细胞比例表示Ki一67的表达程度,即阳 性细胞数>1O%为阳性(+);阳性细胞数>30%为 阳性(++);>50%为阳性(+++);>75%为阳性 (++++);Ki一67的阳性表达部位在细胞核。 CD 105的阳性表达部位在细胞浆。按Weilder[ J等 报道的方法算出MVD。即先用100倍光镜扫视整 个切片,选出3个微血管密度最高区(热区),在400 倍光镜下计数热区被抗CD 105染成棕黄色的数 目,凡单个孤立的或多个紧密排列的内皮细胞团,只 要与邻近肿瘤细胞及周围结缔组织成分分界清楚, 无论有无血管腔,即可计数为1个微血管数。取3 个视野的微血管数的平均值作为MVD。 1.4统计学方法 应用SPSS for windows12.0统计分析软件包进 行各组数据的统计分析。MVD值以 ±S表示,乳 腺良性病变与乳腺癌的关系比较采用t检验、单因 素方差分析;Ki一67表达强度和MVD间的关系比 较采用spearman’S秩检验。 2结果 2.1微血管密度【CD 105的定量值)在乳腺良性病 变组织中的表达及定位 本组良性病变组织选取10例乳腺纤维腺瘤 (MvD值为8.764±5.832)、10例乳腺纤维腺病 (MvD值为8.692±6.632),两者差异无统计学意 义(P>0.05)。乳腺良性病变组织中MVD较小, CD105的着色仅在间质的血管内皮细胞浆上,而且 血管比较成熟(图1、2)。 2.2微血管密度(CD 105的定量值)在乳腺癌组织 中的表达及定位 乳腺癌组织中CD 105标记的MVD分布不均 匀,具有异质性,大多局限于肿瘤实质边缘的间质, 新生血管的内皮细胞排列不规则,较少见有明显的 内蒙古医学杂志InnerMong0uaMed J 2008年第4o卷第12期 管腔,即使有管腔也不规则,壁薄仅一层内皮细胞且 内皮细胞多幼稚、分化差、无平滑肌组织出现;尚可 见到陷于癌组织中的正常血管。 在乳腺浸润性导管癌中,MVD主要分布于癌 巢周围,其新生血管数量多,结构粗糙,尚可见到不 规则狭窄、扩张和扭曲的小管腔(图3、4);MVD的 另外一种分布形式是在肿瘤组织中见到扭曲、幼稚 的新生血管(图5)。 乳腺小叶癌、乳腺黏液腺癌、乳腺导管内癌(原 位癌)MvD数量比较少、分散;仅在癌巢周围有少 量新生血管。 2.3微血管密度(CD105的定量值)在乳腺良、恶 性病变中的比较 乳腺良性病变组织与乳腺癌的MVD差异有统 计学意义(P<0.01)。这显示随着恶性程度的增 高,MVD有明显增加的趋势(见表1),说明MVD 可作为一种反映血管新生程度的指标;血管新生与 乳腺癌进展有密切关联。 表1 MVD与乳腺良恶性病变类型的关系 6O例乳腺癌中有1O例为乳腺小叶癌、乳腺黏 液腺癌、乳腺导管内癌(原位癌)其MVD值较低,与 乳腺良性病变的MVD值比较(t检验)差异无统计 学意义(P>0.05)。 2.4乳腺癌中MVD与Ki一67表达的关系 Ki一67在乳腺良、恶性病变中均表达,从60例 乳腺癌MVD值与Ki一67的关系分析中得到,50例 浸润性导管癌K卜67的表达均在(++)以上,其 MVD的平均值大于34,而1O例乳腺小叶癌、乳腺 黏液腺癌、乳腺导管内癌(原位癌)的Ki一67(+); MVD值均低于34。 MVD与Ki~67的表达采用spearman’S秩检 验,其结果呈正相关(r=0.550,P<0.01),即随着 细胞增殖活性增强,MVD的值增高(见表2)。 表2乳腺癌MVD与Ki一67表达强度的关系 3讨论 3.1 MVD与乳腺良恶性病变的关系 组织中新生的血管对于肿瘤的生长和转移是必 内蒙古医学杂志Inner Mongolia Med J 2008年第40卷第12期 1449 需的[5]。CD105是一种活化、增殖内皮细胞的标记 物,能表达新形成的和重塑血管的蛋白质,显著地表 达于增殖的肿瘤血管的内皮细胞上 ],而在正常的 血管中则很少表达。 MVD定量研究提示:乳腺癌组MVD明显高于 多少的时候就可以帮助病理医生诊断是乳腺癌而不 是良性病变?②CD 105明显高于正常人可以提示 患有恶性肿瘤吗?有关对CD 105诸多问题的回答 有待于我们对更多标本的检测及临床分析。 目前,对肿瘤的诊断和治疗正面临着新的挑战, 随着分子生物学技术的不断完善,对瘤区内微血管 计数(MvD)的准确测量可能成为肿瘤诊断和判断 肿瘤治疗是否有效的途径。 (附图见封三) 良性病变组(P<0.01),而浸润性导管癌的MVD 又高于乳腺小叶癌、乳腺黏液腺癌、乳腺导管内癌 (原位癌)组(P<0.05),故MVD在浸润性导管癌 中高表达。 MVD值的增高即新生血管之内皮细胞增殖活 性增强、新形成的血管又为肿瘤细胞的生长、繁殖提 [参考文献] [1] Carm ̄et P,Jam RK.Angiogenesis in cancer and other disease [J].Nature,2000,407:249—257. 供了氧和营养物质,说明血管新生与乳腺癌的恶性 进展有密切关联,因此,MVD可作为一种反映血管 新生程度的指标。在浸润性导管癌中高表达的 MVD还有可能为其诊断提供定量依据。 3.2 MVD与乳腺癌K卜67的表达的关系及其意 义 [2]Li C,Hampson I N,Harapson。et a1.CD105 antagonizes the in. hibimry s ̄naling of transforming growth factor B1 on human vascular endotheil celals[J].FASEB,2000,14:55~64. [3]Akagi K,Ikeda Y,Sumlyoshi Y,et a1.E ̄imafion of angiogenesis with anti—CD105immunostairdng in the process of coloreetal CD105标记的MVD在乳腺癌组织中的表达与 Ki一67的表达呈正相关。这可能是由于乳腺癌组 织的MVD越高,就越容易为肿瘤细胞提供更多的 营养,使细胞增殖活性增强。 本实验结果提示,如能对乳腺癌手术切除组织 cancer development[J].Surgery,2002,131:109—113. [4]Weilder N.Current pathologic methods for measuring ntiratumoral microvessd density within breast carcinoma and other solid tu— mom[J].Breast Cancer Restr ̄t,1995,36(2):168—180. [5]Sarah E,DI .CD 105 is important for angiogenesis:evidence nd aotentpilaapplications[J].The FASEB Journal,2003,17:984— 992. 进行瘤区内微血管计数(MvD)的准确测量,结合 Ki一67表达水平的评估,可在诊断的同时为临床筛 选出高危患者(高MVD值)进行抗血管生成等辅助 治疗提供有力依据。 [6]Di&son MC, Martin js, Cousins FM,et a1.Defective haematopoisies and vasculogenesis in transforming growth factor —beta 1 knock outmice[J].Development,1995,121:1845. [7] Li C,G11o B,Wilson PB,et al,Plasma levels of solubh cD 105 3.3有关CD105的问题与展望 从本研究中可知,用CD 105标记的MVD在乳 腺癌组织中明显增高,国外学者已检测到乳腺癌患 者的血浆中CD 105也明显高于正常组【7 J,Sarah 等[5]研究指出:化疗能显著的降低血浆中CD 105的 水平。进一步值得我们探讨的是:①MVD的值是 correlate with metastasiS in patient with breast cancer[J].Int J Cancer,2000,89(2):122—126. [收稿日期]2008—1o一2o [作者简介]郭云娣(1964一),女,内蒙古赤峰市人。副主任 医师,副教授,医学硕士。 投稿注意事项 文稿一律打印(用A4纸打印),每行22字。旗、县级以上单位作者请以网上形式投稿,并在稿件 中标明作者网址(本刊编辑部E—mail:NMYZ@chinajourna1.net.cn),写明作者姓名、单位及联系电 话。投稿须附单位推荐信,作者单位应保证资料来源的真实性,确保无一稿两投或多投,不涉及保密, 署名无争议等。若论文属基金资助,或国家攻关项目,或获科技成果奖者,请在文稿首页左下角注明 基金编号,并附相关证明材料的复印件,此类稿件我们将以最快的速度优先处理。投寄稿件的同时请 通过邮局汇出稿件处理费20元/篇,并在汇单注明论文文题。稿件处理费请寄本部编辑部收。来稿 请自留底稿,无论刊登与否恕不退稿。如拟采用即由本编辑部提早通知缴版面费,未按时交费者以自 动放弃刊登处理;出版后,即赠当期杂志1册(均寄第一作者)。来稿请注明详细通讯地址、邮政编码、 联系人和联系电话。文稿请勿寄给个人,以免遗漏。 经流式细胞仪分选神经细胞技术方法的建立(正文见1416页)21416F1一A为FITc标记的神经元N和GFAP双标结果B为cy3标记的星形胶质细胞C为Neu,可见神经元和星形胶质细胞阳性标记无重叠FL2.A图2星形胶质细胞和神经元的流式细胞分选结果图版编号:10040951(2008)12——1416F2一乳腺癌中微血管密度和ki一67核抗原的表达及意义(正文见1447页)1图版编号:1004习—8)120951(20(】—1447一F1图2图◆麒F3图1CDl05图2cDl05图3×400乳腺纤维腺瘤着色部位。在间质血管内皮细胞浆上×400乳腺纤维腺病着色部位在。间质血管内皮细胞浆上3cDl05Dl05××40200200新生向管在乳腺癌巢周边新生血管在乳黼巢周边。图44c。图5CDl05j4图版编号:10040951(2008)121447F4——一×新生成血管在乳腺癌巢中。图5图版编号:10040951(2008)12——1447F5一