４ 南昌大学学报（医学版）２０１４年第５４卷第１期Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｅｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）２０１４，Ｖｏ１５４ Ｎｏ．１ ．胞浆内线粒体ＤＮＡ在脂多糖诱导 肺泡巨噬细胞炎症反应时的变化 曾振国 ，钱克俭 ，刘 芬 ，李 勇 ，黄彩雪 ，邓文刚 （南昌大学第一附属医院ａ．重症医学科；ｂ．肿瘤科，南昌３３０００６） 摘要：目的观察胞浆内线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）在脂多糖（１ｉｌ）ｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，Ｉ．ＰＳ）诱导的 ＮＲ８３８３肺泡巨噬细胞炎症反应时的动态变化。以初步探讨胞浆内ｍｔＤＮＡ在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用。 方法将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（ＮＲ８３８３）用终浓度为１／ｌｇ・ｍＬ 的ＬＰＳ刺激０ ３、６、１２和２４ ｈ后收集 细胞培养上清液及细胞，采用差速离心法分离胞浆中的ｍｔＤＮＡ，实时荧光定量聚合酶链反应（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ）检测 胞浆中ｍｔＤＮＡ表达情况，采用酶联免疫吸附法（ＥＩ ＩＳＡ）检测细胞培养上清液中ＩＬ一１Ｂ蛋白水平。结果 Ｉ ＰＳ刺 激后３、６、１２和２４ ｈ ＩＩ 一１８及胞浆中ｍｔＤＮＡ的含量均显著高于０ ｈ组（Ｐ＜Ｏ．Ｏｉ）。结论胞后，胞浆中ｍｔＤＮＡ含量升高，推测其可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应。 ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细 关键词：线粒体ＤＮＡ；ＩＬ一１８；肺泡巨噬细胞；脂多糖；动物，实验；大鼠 中图分类号：Ｒ－３３２ 文献标志码：Ａ 文章编号：２０９５—４７２７（２０１４）０１－－０００４－－０３ Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｉｎ Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｌｖｅｏｌａｒ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ＺＥＮＧ Ｚｈｅｎ・ｇｕｏ。。ＱＩＡＮ Ｋｅ－ｊ ｉａｎ ，Ｌｉｕ Ｆｅｎ ，ＬＩ Ｙｏｎｇ ，ＨＵＡＮＧ Ｃａｉ ｘｕｅ ，ＤＥＮＧ Ｗｅｎ－ｇａｎｇ （ａ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ｂ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３０００６，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ （ｍｔＤＮＡ）ｉｎ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ，ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｉｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ（ＮＲ８３８３）ｗｅｒｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＬＰＳ（１ ｇ・ｍＬ ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ ａｎｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ０，３。６，１ ２ ａｎｄ ２４ ｈｏｕｒｓ，ａｎｄ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｍｔＤＮＡ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ， ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ—ｌｆｌ（ＩＬ一１１３）ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＬ一１８ ｉｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ ａｎｄ ｍｔＤＮＡ ｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｆｔｅｒ ＬＰＳ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ３，６，１２ ａｎｄ ２４ ｈｏｕｒｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ａｔ ｔｈｅ ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ ｏｆ ＬＰＳ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎ ｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ｉｎ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｏｆ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ａｆｔｅｒ ｓｔｉｍ— ｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＬＰＳ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｍｔＤＮＡ ｍａｙ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ；ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１８；ａｌｖｅｏｌａｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ；ｌｉｐｏｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ａｎｉｍａｌｓ，ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；ｒａｔｓ 收稿日期 ２Ｏ１３—１０－２８ 基金项目 国家自然科学基金（８１２６０２８８） 男，博士，副教授，主要从事多器官功能障碍的基础与临床研究。 作者简介 曾振国（１９７４一），通信作者 钱克俭，教授，主任医师，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｋ］０６０７＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ。 曾振国等：胞浆内线粒体ＤＮＡ在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞炎症反应时的变化 ５ 肺泡巨噬细胞是肺泡腔内常驻的免疫细胞，是 肺组织免疫系统的第一道天然屏障，肺泡巨噬细胞 的过度激活可释放多种炎症因子及炎症介质，造成 炎症的级联瀑布反应，最终可能导致急性肺损伤／急 性呼吸窘迫综合征（ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｉｕｒｙ／ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒ— ａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＩ Ｉ／ＡＲＤＳ）的发生 ｊ。 最近有研究圳发现，ＬＰＳ与ＡＴＰ刺激骨髓来源的 巨噬细胞后有大量的ｍｔＤＮＡ易位到胞浆中，活化 关键效应蛋白半胱天冬酶一ｌ（ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ ａｓｐａｒｔａｔｅ－ ｓｐｃｅｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅａｓｅ一１，ｃａｓｐａｓｅ－１），诱导ＩＬ一１ｊ３等炎症因 子释放。但对于ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞后胞浆中 ｍｔＤＮＡ的含量变化尚未见报道。因此，本实验选 取ＮＲ８３８３肺泡巨噬细胞作为研究对象，观察ＩＩ 一１Ｂ 和胞浆中ｍｔＤＮＡ在ＬＰＳ诱导的肺泡巨噬细胞的 动态表达，探讨ｍｔＤＮＡ与肺泡巨噬细胞炎症反应 的关系。 １材料和方法 １．１实验材料 大鼠肺泡巨噬细胞系ＮＲ８３８３（购于中国科学 院细胞库）；Ｈａｍ’Ｓ Ｆ－１２Ｋ培养基（美国Ｓｉｇｍａ— Ａｌｄｒｉｃｈ公司）；胎牛血清（美国ＨｙＣｌｏｎｅ公司）；大 鼠ＩＬ一１ｐ定量酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测试剂盒 （上海森雄科技实业有限公司）；ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ试剂盒（美国Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ公司），蛋白 酶抑制剂（美国Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ公司）；ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＴＭ １１（日本ＴａＫａＲａ公司），氯仿、异 戊醇、饱和酚及无水乙醇等均为国产分析纯。 １．２实验方法 １．２．１细胞培养 ＮＲ８３８３细胞培养于含１５ 的胎牛血清、 １．５ ｇ・Ｌ 碳酸氢钠、２ ｍｍｏｌ・Ｌ 的Ｌ一谷氨酰胺 的Ｈａｍ’Ｓ Ｆ－１２Ｋ培养基中，置于大气压下３７。Ｃ， ５ ＣＯ 温湿培养箱中，２～３ ｄ更换１次培养液， ３～４ ｄ传代１次。 １．２．２细胞处理及分组 将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（ＮＲ８３８３）按 ２×１Ｏ 个・孔 接种于六孔板，每孔２ ｍＬ，每组设 ３个复孔，细胞贴壁９０ ｍｉｎ，给予终浓度为１ ｇ・ ｍＬ 的ＬＰＳ溶液刺激０、３、６、１２和２４ ｈ后收集细 胞培养上清液和细胞沉淀。 １．２．３ 酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测细胞因子 ＩＬ一１Ｂ的变化 将各时相点收集的细胞培养上清液，用大鼠 ＩＬ一１ｐ ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＩＩ 一１Ｂ蛋白的表达变化， 操作按照ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书进行。 １．２．４胞浆ｍｔＤＮＡ的提取纯化 将上述各时相点收集的细胞沉淀各取１×１Ｏ 个细胞，加入１００ ｍｍｏｌ・Ｌ～Ｔｒｉｃｉｎｅ—ＮａＯＨ缓冲 溶液（ｐＨ ７．４，包含０．２５ Ｍ蔗糖，１ ｍｍｏｌ・Ｉ ＥＤＴＡ和蛋白酶抑制剂），用玻璃匀浆器匀浆，离心 力７００ ｇ，４℃，离心１０ ｒｎｉｎ，弃沉淀，取上清液，离心 力１０ ０００ ｇ，４。Ｃ，离心３０ ｒａｉｎ，弃沉淀，得到粗提的 ｍｔＤＮＡ，用ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ试剂盒纯 化ｍｔＤＮＡ，操作按照试剂盒说明书进行。胞浆中 ｍｔＤＮＡ的分离主要采用差速离心法，以保证既不 受正常线粒体ＤＮＡ影响，亦排除核ＤＮＡ的干扰。 根据不同的细胞器可在不同离心力作用下沉降分 离，细胞核的沉淀离心力为５Ｏ０～１ ０００ ｇ，而沉淀线 粒体的离心力为１０ ０００￣２０ ０００ ｇｌｌＥ ］。故本实验采 用７００ ｇ的离心力先去除细胞核、细胞碎片及杂质， 再以１０ ０００ ｇ的离心力沉淀线粒体，则剩下的部分 则含有易位到胞浆中的ｍｔＤＮＡ。纯化后的ｍｔＤ－ ＮＡ采用ＲＴ—ＰＣＲ检测ｍｔＤＮＡ的表达水平。 １．２．５ ＲＴ—ＰＣＲ检测ｍｔＤＮＡ的表达水平 参照Ｎａｋａｈｉｒａ等ｌ＿４ 采用ＲＴ—ＰＣＲ测定胞浆内 ｍｔＤＮＡ水平，采用ｍｔＤＮＡ编码的细胞色素Ｃ氧 化酶Ｉ的表达含量来表示ｍｔＤＮＡ的含量，以核 ＤＮＡ编码的１８Ｓ ｒＲＮＡ作为内参，１８Ｓ的上游引物 为５，＿ＴＡＧＡＧＧＧＡＣＡＡＧＴＧＧＣＧＴＴＣ一３ ，下游引 物为５ 一ＣＧＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＣＡＧＴＧＴ一３ ；大鼠细胞 色素Ｃ氧化酶Ｉ的上游引物为５，＿ＧＣ— ＣＣＣＡＧＡＴＡＴＡＧＣＡＴＴＣＣＣ一３ ，下游引物为５ ＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＴＣＣ一３ 。ｍｔＤＮＡ的相 对表达量采用２也ｍ方法计算。 １．３统计学方法 采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件分析数据，数据以均 数±标准差（ ±ｓ）表示，多样本均数比较采用单因 素方差分析，组间两两比较采用ＬＳＤ－ｔ检验。Ｐ＜ ０．０５为差异有统计学意义。 ２ 结果 ２．１ ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞后细胞培养上清液中 ＩＬ－ｌｐ含量的表达变化 ＬＰＳ刺激３，６，１２和２４ ｈ后，ＩＬ一１ｊ３蛋白的表达 量显著高于０ ｈ组（Ｐ％０．０１），且随着刺激时间的延 长，ＩＬ一１Ｂ的表达量逐渐升高，１２ ｈ达高峰，后渐降， 见表１，图１。 ６ 南昌大学学报（医学版）２０１４年１月，第５４卷第１期 表１ ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞后上清液ＩＬ－ｌｐ的表达变化ｎ＝３， 士 ，ｐ／（ｎｇ・Ｌ ） ＊Ｐ＜０．Ｏ１，各时间点与０ ｈ比较。 ９０ ８Ｏ ７０ 一２．２ ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞后胞浆中ｍｔＤＮＡ的 表达变化 ６ｏ Ｓ ５０ ＬＰＳ刺激３、６、１２和２４ ｈ后，胞浆中ｍｔＤＮＡ ．罢４Ｏ 邑３ｏ 的表达量均高于０ ｈ（Ｐ＜０．０１），ＬＰＳ刺激１２ ｈ后 鲁２Ｏ ｍｔＤＮＡ表达水平达高峰，２４ ｈ下降，见表２，图２。 １Ｏ ０ ＊Ｐ＜０．ｏ１，各时间点与ｏ ｈ比较（７＂／一３）。 图１细胞培养上清液中ＩＬ－Ｉ￣Ｉ蛋白表达水平的变化 表２ ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞后胞浆中ｍｔＤＮＡ的表达变化 ｎ－－３，ｉ士ｓ ＊Ｐ％０．０１，各时间点与０ ｈ比较。 籁５ 外所致。而Ｓｈｉｍａｄａｌ１。。等通过免疫组化实验，荧光 ４ 显微镜观察发现易位到胞浆ｍｔＤＮＡ通过与ＮＬ— 篓 ＲＰ３炎性体结合后激活ＮＬＲＰ３炎性体介导ＩＩ 一１Ｂ 茎２ 的分泌。根据Ｎａｋａｈｉｒａ和Ｓｈｉｍａｄａ等人的结果，结 合本实验结果，推测ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞后会导 璺０ 致ｍｔＤＮＡ大量易位到胞浆中，并通过激活炎性体 ０ ｈ ３ ｈ ６ ｈ １２ ｈ ２４ ｈ 介导炎症因子的分泌，因此，易位到胞浆中的ｍｔＤ— ＊Ｐ＜０．０１，各时间点与０ ｈ比较（ｎ一３）。 ＮＡ可能是肺泡巨噬细胞炎症反应发生的又一重要 图２ ＲＴ—ＰＣＲ检测胞浆内ｍｔＩ）ＮＡ的表达倍数 原因。 ３讨论 综上所述，肺泡巨噬细胞过度活化，失控性释放 炎症因子，是脓毒症肺损伤的根本原因。本研究已 ＬＰＳ是革兰阴性细菌细胞壁的主要成分，作为 初步证实ｍｔＤＮＡ可能参与了炎症反应。下一步拟 一种病原相关分子模式，它能够激活Ｔｏｌｌ样受体４ 加强胞浆中ｍｔＤＮＡ的清除，研究ｍｔＤＮＡ对肺泡 （Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－４，ＴＬＲ４）一核转录因子－ＫａｐｐａＢ 巨噬细胞炎症反应的调控及作用机制，为治疗ＡＬｌ／ （ＮＦ—ＫＢ）信号转导通路，诱导１Ｌ一１Ｂ、ＴＮＦ—ｄ等多种 ＡＲＤＳ寻找新的治疗策略。 炎症因子的释放＿７ ］。Ｎａｋａｈｉｒａ［４ 等在实验中发现 ＬＰＳ与ＡＴＰ预处理的骨髓来源的巨噬细胞有大量 参考文献： 的ｍｔＤＮＡ易位到胞浆中，且巨噬细胞体外转染 ｍｔＤＮＡ后再给予ＬＰＳ与ＡＴＰ刺激，可诱导巨噬细 胞ＩＬ＿１８、ＩＬ－ｔ８等炎症因子的释放，而且ＩＬ－Ｉ￣等炎 症因子的释放与ｍｔＤＮＡ呈剂量依赖性。本实验发 现ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞后，胞浆中的ｍｔＤＮＡ的 含量显著升高，且随着ＬＰＳ刺激时间的延长而逐渐 升高，１２ ｈ达高峰，之后逐渐下降，与上述研究结果 一致。胞浆中ｍｔＤＮＡ在ＬＰＳ刺激２４ ｈ后下降的 原因可能是ＬＰＳ刺激后，细胞损伤严重，甚至坏死， 导致细胞通透性增加，胞浆中的ｍｔＤＮＡ释放到胞 ２６ 南昌大学学报（医学版）２０１４年１月，第５４卷第ｌ期 开正常肺、心脏、脊髓等重要器官而导致靶区剂量不 肿瘤有较高的局控率，疗效满意，急性放射反应可耐 受，远期疗效及组织损伤尚有待长期随访观察。 目前食管癌ＩＭＲＴ治疗国内外尚无成熟经验， 文献报道也较少，其剂量学方面如最佳剂量分割模 式、最大耐受剂量的研究也未达成共识，而且目前的 影像学检查对于准确地勾画食管癌ＣＴＶ还不能提 供满意的答案，仍在探索之中。调强放射治疗还处 于起步阶段，今后研究重点应放在靶区尤其是ｃＴＶ 的确定、三维立体适形放疗和调强放射治疗条件下 食管最佳照射的时间一剂量分割模式和最大耐受剂 量的研究上。 高，食管癌根治性放射治疗后５年生存率为１０ 左 右，失败的原因为局部病灶未控或复发，大部分患者 在１～２年内复发。文献报告局部治疗失败占全部 失败的６Ｏ ～８８ ［３］。笔者认为局部残存和复发 主要原因是靶区漏照、剂量不足以及剂量均匀性差。 放射治疗的基本目标是最大限度地提高肿瘤靶区的 剂量来杀灭肿瘤细胞，而使周围正常组织少受或免 受不必要的照射。 调强放射治疗是一种较为理想的照射技术，以 往的调强放疗即序贯加量调强放疗是先给肿瘤靶区 和临床靶区相同的照射剂量，然后缩野给ＧＴＶ追 加剂量才能达到靶区的根治剂量。ｓＩ ＩＭＲＴ是一 种在同一个照射野内对ＧＴＶ和ＣＴＶ同时进行不 参考文献： ［１］吴隆秋，赵快乐．食管癌的放射治疗进展［Ｊ］．中国癌症杂志， ２０１１，２１（７）：５３８—５４２． 同分割剂量的照射方法，可对原发灶区域给予高剂 量照射，同时亚临床灶或选择性治疗区予以较低剂 量的照射，理论上不仅可获得良好的靶区适形度，减 少加量区周围高剂量的范围，还可更好地保护危及 器官 ］，这一技术的发展可最大限度地增加肿瘤的 ［２］ 王尚礼，史增祥．调强放射治疗与三维适形放射治疗疗效比较 ［Ｊ］．中国当代医药，２０１１，１８（１９）：９３—９５． ［３］ Ｋｏｓｈｙ Ｍ。Ｅｓｉａｓｈｖｉｔｌｉ Ｎ，Ｌａｎｄｒｙ Ｊ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍａｎａｇｅ ｍｅｎｔ ｍｏｄａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ：ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｍｏｄａｌｉｔｙ ｍａｎ— ａｇｅｍｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，２００４，９（２）：１４７ １５９． ［４］ Ｂａｒ Ｓｈａｌｏｍ Ｒ，Ｇｕｒａｌｎｉｋ １ ，Ｔｓａｌｉｃ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ ｖａｌｕｅ ｏｆ ＰＥＴ—ＣＴ ｏｖｅｒ ＰＥＴ ｉｎ ＦＤＧ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ 局部控制概率（ＴＣＰ）和减低正常组织的放射并发症 发生率（ＮＴＣＰ），而且从生物学角度有可能减少肿 瘤克隆源细胞的加速再增殖，并显示出更好的肿瘤 控制率。ＳＩＢ－ＩＭＲＴ在头颈、乳腺肿瘤等的应用均 显示了一定的优势＿４ ］。在满足不同靶区获得相应 ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ Ｍｏｌ Ｉｍａｇｉｎｇ，２００５，３２：９１８—９２４． ［５］ Ｋｏｎｓｋｉ Ａ，Ｄｏｓｓ Ｍ，Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ １８一 ｆｌｕｏｒｏ－ ｄｅｏｘｙ—－ｇｌｕｃｏｓｅ ｐｏｓｉｔｒｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｅｎｄｏ—－ ｓｃｏｐｉｃ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ——ｐｌａｎｎｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｅｓｏｐｈａ—－ 所需不同剂量的同时缩短了治疗时间，在整个治疗 ｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ，２００５，６１： １１２３—１ｌ２８． 过程中仅用一个治疗计划，具有精确高效和不易出 错的优点，又有靶区剂量分布满意，生物效应高的优 点 一 。 ［６］任瑞美，付正，于金明，等．ＦＤＧ ＰＥＴ—ＣＴ在食管癌放疗靶区勾 画中的作用［Ｊ］．中华放射肿瘤学杂志，２００９，１８（６）：４２９—４３０． ［７３ Ｂｏｓ Ｉ Ｊ，Ｄａｍｅｎ Ｅ Ｍ，ｄｅ Ｂｏｅｒ Ｒ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏＩｒｅｅｔａｌ ｄｏｓｅ ｂｙ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ Ｏｆ ｔｈｅ ｂｏｏｓｔ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｒｇｅ—ｆｉｅｌｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ 本研究采用５野或７野同步整合加量调强技术 对３０例颈及胸上段食管癌初治患者进行逆向计划 ｐｌａｎ ｆｏｒ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｔ ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ， ２００２，５２（１）：２５４－２６５． 设计治疗，３Ｏ例患者初期疗效ＣＲ２６例（８６．７ ）， ＰＲ４例（１３．３ ），有效率（ＣＲ＋ＰＲ）为１００ ，１、２、 ［８］ 张书旭，王兆武，沈国辉，等．鼻咽癌调强放疗受照剂量分布特 性研究ＥＪ］．肿瘤基础与临床，２００６，１９（３）：２０３—２０５． ３年生存率分别为６５．０ 、４２．４ 和３３．５ ，且无 严重急性放射反应。结果显示ＳＩＢ－ＩＭＲＴ对食管 （上接第６页） Ｅ４］Ｎａｋａｈｉｒａ Ｋ，Ｈａｓｐｅｌ ｊ Ａ，Ｒａｔｈｉｎａｍ Ｖ Ａ，ｅｔ ａ１．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ ｐｒｏ— ｔｅｉｎｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅ— ｌｅａｓｅ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ＮＡＬＰ３ ｉｎｆｌａｍ— （责任编辑：况荣华） ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１ｌ，３１（５）：３７９—４４６． ［８］Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｏ，Ａｋｉｒａ ｓ Ｐａｔｔｅｒｎ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍ ｍａｔｉｏｎ［－Ｊ＇］．Ｃｅｌｌ，２０１０，１４０（６）：８０５—８２５． ｍａｓｏｍｅＥＪ］．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１１，１２（３）：２２２—２３０． ［５］ 闫华超，贾少波，许恒龙，等．动物线粒体ＤＮＡ提取简易流程 及其优化［Ｊ］．生物技术通讯，２００７，１８（１）：９５—９７． ［６］Ｋｏｎｇ Ｗ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｙ，Ｗａｎｇ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈ— ｏｄｓ ｆｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍｅｍｂｒａｎａｔｅ ｉｎｎｅｒ ｅａｒ ［９］ 曾振国，李勇，刘芬，等．ＭｉｃｒｏＲＮＡ一１４６ａ在脂多糖诱导的肺泡 巨噬细胞中表达的动态变化［Ｊ］．中华急诊医学杂志，２ｏｉｌ，２Ｏ （２）：１３４ １３６． ［１Ｏ］ Ｓｈｉｍａｄａ Ｋ，Ｃｒｏｔｈｅｒ Ｔ Ｒ，Ｋａｒｌｉｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎ— ｄｒｉａｌ ＤＮＡ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｔｈｅ ＮＩ ＲＰ３ ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ ｄｕｒｉｎｇ ａｐｏｐ— ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｒａｔｓ［Ｊ￣．Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ（Ｅｎｇ１），２００６，１１９（１２）：９８６—９９０． ［７］ Ｒｏｓｓｏｌ Ｍ，Ｈｅｉｎｅ Ｈ，Ｍｅｕｓｅｈ Ｕ，ｅｔ ａ１．ＬＰＳ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０１２，３６（３）：４０１－４１５． （责任编辑：刘大仁）
