第４４卷第９期 ２０１３年９月 东北农业大学学报 ４４（９）：１１３￣１１９ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１３ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏａｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 网络出版时间２０１３—９—２３ １５：１２：３７ ［ＵＲＬ］ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２３．１３９１．Ｓ．２０１３０９２３．１５１２．００８．ｈｔｍｌ 虹鳟抗细胞凋亡因子（ＤＡＤ１）基因全长ｃＤＮＡ克隆与进化分析 王家庆 ， 李振刚 ，马 爽 ，李代宗。，王虹玲 ，王 亮 （１．沈Ｉ￣Ｈ－ｒ学院生命工程学院，辽宁抚顺１１３１２２；２．吉林大学生命科学学院，长春１３００１２ ３．；－＂Ｉ￣Ｌ农业大学海洋学院，河北秦皇岛０６６００３） 摘要：抗细胞凋亡因子ｌ（Ｄｅｆｅｎｄｅｒ ａｇａｉｎｓｔ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ １，ＤＡＤ１）是内质网内膜上糖基转移酶复合体亚基之 一。本文通过ＲＴ—ＰＣＲ及ＲＡＣＥ技术从虹鳟脑组织中克隆到ＤＡＤ１基因ｃＤＮＡ全长序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号： ＦＪ８４９０６１）。该基因包括８８ ｂｐ ５’ＵＴＲ、２９２ｂｐ ３＇－ＵＴＲ以及３４２ ｂｐ开放阅读框（ＯＲＦ）。该基因编码１１３个氨基酸， 存在三个明显跨膜区，无信号肽序列。通过蛋白序列比对显示虹鳟ＤＡＤ１蛋白序列与大西洋鲑、白斑狗鱼、斑马鱼 以及裸盖鱼同源性均在９０％；Ａ上。系统发育分析显示ＤＡＤ１蛋白主要聚成两个群：脊椎动物ＤＡＤ１群与无脊椎动物 ＤＡＤ１群。虹鳟ＤＡＤ１与大西洋￣Ｉ－ＤＡＤＩ蛋白亲源关系最近。 关键词：虹鳟；抗细胞凋亡因子；基因克隆；进化分析 中图分类号：￥９６５．１２２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５—９３６９（２０１３）０９—０１１３一ｏ７ 王家庆，李振刚，马爽，等．虹鳟抗细胞凋亡因子（ＤＡＤ１）基因全长ｃＤＮＡ克隆与进化分析【Ｊ】．东北农业大学学报，２０１３，４４（９）： １１３・１１９． Ｗａｎｇ Ｊｉａｑｉｎｇ，Ｌｉ Ｚｈｅｎｇａｎｇ，Ｍａ Ｓｈｕａｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉ—ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ（ＤＡＤ１）ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｍｙｋｉｓｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏ￣ｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔＹ，２０１ ３，４４（９）：１ １ ３—１ １ ９．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉ—ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ（ＤＡＤ１） ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ ＣＤＮＡ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒＯｍ Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｍｙｋｉｓＳ／ＷＡＮＧ Ｊｉａｑｉｎｇ，．ＬＩ Ｚｈｅｎｇａｎｇ。，ＭＡ Ｓｈｕａｎｇ’，ＬＩ Ｄａｉｚｏｎｇ。，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇｌｉｎｇ’，ＷＡＮＧ Ｌｉａｎｇ’（１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ｌｉｆｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｕｓｈｕｎ Ｌｉａｏｎｉｎｇ １ １ ３１ ２２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００１２，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｏｃｅａｎ，Ｈｅｂｅｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｈｕａｎｇｄａｏ Ｌｉａｏｎｉｎｇ ０６６００３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ａｎｔｉ—ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ １（Ｄｅｆｅｎｄｅｒ Ａｇａｉｎｓｔ ＣｅｌＩ Ｄｅａｔｈ １，ＤＡＤ１）ｉＳ ａ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ｇｌｙｃｏｓｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．Ｒ ＰＣＲ ａｎｄ ＲＡＣＥ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｌｏｎｅ ｔｈｅ ＤＡＤ１ ｇｅｎｅ ｆｕｌｌ—ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃ．Ｎｏ：ＦＪ８４９０６１）ｆｒ０ｍ ｒｅｉｎｂｏｗ ｔｒｏｕｔ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ．Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ ８８ ｂｐ ５’ＵＴＲ，２９２ ｂｐ ３’－ＵＴＲ ａｎｄ ３４２ ｂｐ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）． Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ １ １ ３ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ，ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｔｈｒｅｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｉｏｎ，ｎｏ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｈｏｗｓ ｒａｉｎｂｏｗ ｔｒｏｕｔ ＤＡＤ１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｔｌａｎｔｉｃ ｓａｌｍｏｎ，ｐｉｋｅ，ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ａｎｄ ｓａｂｌｅｆｉｓｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｉｓ ａｂｏｖｅ ９０％．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＤＡＤ１ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ：ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ＤＡＤ１ ａｎｄ ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ＤＡＤ１ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｒａｉｎｂｏｗ ｔｒｏｕｔ ＤＡＤ１ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｔｌａｎｔｉｃ ｓａｌｍｏｎ ＤＡＤ１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｖｅ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｒｅｃｅｎｔｌｙ ｐｈｙｌｇｏｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒａｉｎｂｏｗ ｔｒｏｕｔ；ａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ；ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ；ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ 收稿日期：２０１３—０１—２１ 基金项目：河北省科技厅科技计划项目（０６２４２４００１ １）；秦皇岛市科技计划项目（２００９０１Ａ０６８） 作者简介：王家庆（１９８卜），男，副教授，博士，研究方向为分子生物学及生物信息学研究。Ｅ－ｍａｉｈ ｊｉａｑｉｎｇ５２１２＠１６３．ＣＯｎｒ． ・１１４・ 东北农业大学学报 第４＿４卷 抗细胞凋亡因子是一类由动物免疫系统细胞 及少数其他类型细胞合成并分泌低分子质量多 肽，能够调节机体内多种细胞生理过程。抗细胞 凋亡因子（Ｄｅｆｅｎｄｅｒ Ａｇａｉｎｓｔ Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ １，ＤＡＤ１） 是当前细胞因子研究领域中最重要一类细胞因 子。ＤＡＤ１基因编码产物是一种内源性细胞凋亡抑 制因子，该基因最早是在对温度敏感突变异种仓 鼠细胞系中发现 】。 Ｄ１最初被归属为抗细胞凋 亡基因，后来被发现是内质网膜上糖基转移酶复 合物组分之一，它能够在糙面内质网腔面将甘露 糖寡聚糖转移至新生肽天冬酰胺残基上口 １。近年 来，对动物细胞程序性死亡遗传控制研究证实ｐ５３ 能够促进程序性细胞死亡，而ＤＡＤ１则抑制程序性 细胞死亡，而且ＤＡＤ１蛋白能够从Ｂｃｌ一２蛋白下游 发挥作用或自主性地阻断细胞凋亡过程 一。线虫 ＤＡＤ１基因表达能够抑制线虫细胞程序性死亡，鼠细 胞系由于缺失ＤＡＤ１蛋白而发生细胞凋亡现象 。 在鱼类中，目前公共数据库ＧｅｎＢａｎｋ中已提交黑 青斑河纯（ ｎｉｇｒｏｖｉｒｉｄｉｓ）及斑马鱼（Ｄ．ｒｅｄｏ）等鱼类 ＤＡＤ１基因序列，而关于其表达及功能方面研究仅 见于青岛文昌鱼（ ．ｂｅｌｃｈｅｒｉ）及青石斑鱼（Ｅ ａｗｏ． ａｒａ），但详细报道鱼类ＤＡＤ１相关研究文献资料尚 缺乏。 虹鳟属于冷水性名贵鱼类，原产于美国加利 福尼亚西海岸，因其具有重要经济价值而被世界 各地广泛驯化养殖［７１。国内外学者在虹鳟基因组测 序、胁迫相关ｅＤＮＡ文库构建、生理生化特性以及 育种与繁殖等方面做大量工作 ，但关于细胞凋亡 相关基因方面研究甚少。本文首次克隆并鉴定抗 细胞凋亡因子研究领域中一类重要细胞因子一虹 鳟抗细胞凋亡因子（ＤＡＤ１），分析其结构及序列特 征，旨在为水产动物抗细胞凋亡因子研究及应用 提供科学资料。 １ 材料与方法 １．１动物 ２龄虹鳟（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｍｙｋｉｓｓ）购自水产品批发 市场，雌雄各两尾，平均体重为（６０１．８＋＿９９．４）ｇ， 运回实验室后均立即分离脑组织，研磨均匀后用 于提取ＲＮＡ样品。 １．２试剂 使用Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司生产Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒提取总 ＲＮＡ；Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、ＤＮＡ Ｌｉｇａｓｅ、ｐＭＤ一 １９Ｔ载体和ＰＣＲ试剂盒均为ＴａＫａＲａ有限公司产 品；５＇ＲＡＣＥ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅＤＮＡ ｅｎｄｓ试剂盒为Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品；全部引物合成 均由ＴａＫａＲａ公司进行；使用Ｐｒｏｍｅｇａ公司生产 ｍＲＮＡ分离纯化试剂盒纯化ｍＲＮＡ。 １．３提取总ＲＮＡ及引物合成 按Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒说明步骤提取虹鳟脑组织中总 ＲＮＡ，再通过琼脂糖凝胶电泳对提取ＲＮＡ完整性 进行检测。下载ＧｅｎＢａｎｋ公共数据库中动物ＤＡＤ１ 基因ｅＤＮＡ全长序列，包括大西洋鲑（Ｊｓ．ｓａｌａｒ， ＢＴ０４８１１１）、白斑狗鱼（Ｅ．１ｕｃｉｕｓ，ＢＴ０８００５９）、青 石斑鱼Ｅ．ａｗｏａｒａ，ＤＱ４２１４１７）、斑马鱼（Ｄ．ｒｅｒｉｏ， ＮＭ＿００１１００４３９）等鱼类ＤＡＤ１ ｍＲＮＡ序列，经多序 列比对确定高度保守序列进行设计ＲＴ—ＰＣＲ引 物，合成引物Ｐ１：５’ＣＴＡＣＡＴＣＴＴＧＣＴＡＡＣＣＧ／ ＡＧＴＧ ３’及Ｐ２： ５’ＣＣＡＣＧＡＧＧＴＧＣ／ＴＡＧＧＡＣＡＧＴＧ ３’，用于扩增ＤＡＤ１基因保守编码区序列。 １．４ 虹鳟ＤＡＤ１基因ｃＤＮＡ全长克隆 根据逆转录ＰＣＲ反应（ＲＴ—ＰＣＲ）试剂盒操作 步骤克隆ＤＡＤｌｃＤＮＡ序列。将所得ｅＤＮＡ作为模 板，应用引物Ｐ１和Ｐ２进行ＰＣＲ扩增，将回收ＰＣＲ 产物与Ｔ载体连接，对所得阳性克隆产物送至Ｔａ— ＫａＲａ公司测序。应用ＢＬＡＳＴ程序对ＤＡＤ１基因测 序结果在ＧｅｎＢａｎｋ公共数据库中搜索，证实所克隆 产物为虹鳟ＤＡＤ１基因编码序列。使用Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ 公司研制ＲＡＣＥ试剂盒，按照说明书步骤实施 ５’ＲＡＣＥ及３’ＲＡＣＥ操作。依据ＲＴ—ＰＣＲ产物测序结 果，设计Ｐ３引物扩增出ｅＤＮＡ３’末端，设计Ｐ４引 物扩增出ｅＤＮＡ５味端。Ｐ３与Ｐ４引物序列分别为： Ｐ３ ５’ＧＧＡＧＡＣＴＹＣＣＴＧＴＣＣＡＴＡＴＣ ３’：Ｐ４：５’ＧＡＴ ＡＴＧＧＡＣＡＧＧＡＡＧＴＣＴＣＣ ３’。将获得扩增产物回收 并纯化后，连接Ｔ载体后进一步克隆并测序，再将 ５・ＲＡＣＥ及３＇ＲＡＣＥ产物序列与已克隆到ＤＡＤ１基因 编码区进行序列拼接，最终得到ＤＡＤ１基因全长 ｅＤＮＡ序列。 １．５虹鳟ＤＡＤ１基因翻译蛋白质理化特性分析 ＤＡＤ１蛋白质基本理化性质预测通过在线程序 ＥｘＰＡＳｙ—ＰｒｏｔＰａｒａｍ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ／ｔｏｏｌｓ／ｐｒｏｔ ｐａｒａｍ）ＳｅｑＦａｃｔｓ及（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｐ．ｗｅｉｚｍａｎｎ．ａｅ．ｉｌ／ｓｑｆｂｉｒｇ ｓｅｑｆａｃｔｓ）。蛋白质跨膜区及疏水性分析应用在线 程序ＴＭＨＭＭ一２．０（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｍｍｏｌ／）完成。 第９期 王家庆等：虹鳟抗细胞凋亡因子（ＤＡＤ１）基因全长ｅＤＮＡ克隆与进化分析 ・１１９・ ３讨论与结论 通过逆转录ＰＣＲ及ＲＡＣＥ技术克隆到虹鳟 ＤＡＤ１基因全长ｃＤＮＡ序列。ＤＡＤ１基因全长ｃＤＮＡ 为７２２ ｂｐ，编码一个ｌ１３个氨基酸多肽。对虹鳟 ＤＡＤ１基因编码蛋白质序列进行同源性分析表明， 虹鳟ＤＡＤ１基因编码蛋白质为一种抗细胞凋亡蛋白 质，ＤＡＤ１蛋白在糙面内质网腔面能将甘露糖寡聚 糖转移至新生肽天冬酰胺残基上，该蛋白序列在 植物及动物中均具有较高保守性，与其在细胞内 行使重要功能相关 。多序列比对显示虹鳟ＤＡＤ１ 蛋白序列与大西洋鲑、白斑狗鱼、斑马鱼、裸盖 鱼以及青石斑鱼同源性均在９０％。通常一个蛋白 质序列若与其他不同种属蛋白质序列同源性在 ３０％以上，则提示此蛋白质隶属于相应蛋白家族可 能性较高ｕ 。虹鳟ＤＡＤ１蛋白疏水性分析结果显 示，该蛋白存在三个明显疏水区，这与鱼类ＤＡＤ１ 蛋白多序列比对所显示三个跨膜区一致。对虹鳟 ＤＡＤ１蛋白序列进行系统发育分析显示ＤＡＤ１蛋白 主要聚成两个群：脊椎动物ＤＡＤ１与无脊椎动物 ＤＡＤ１。其中脊椎动物ＤＡＤ１群又可分为两支系： 陆生脊椎动物支系和水生脊椎动物支系（鱼类支 系）。鱼类支系共包括１３种鱼类，其中虹鳟、大西 洋鲑以及青石斑鱼三种鱼类明显聚成一个亚支， 三者碱基替换率也明显高于其他鱼类。虹鳟ＤＡＤ１ 与大西洋鲑ＤＡＤ１蛋白亲源关系最近，多序列比对 分析显示两种鱼类氨基酸同源性高达９８％，说明 在分类地位上越接近物种，在蛋白质水平上同源 性越高 ２１。 研究抗细胞凋亡因子有助于阐明分子水平免 疫调节机理，利用基因工程手段生产重组抗细胞 凋亡因子已用于治疗感染、炎症以及造血功能异 常等疾病，应用前景广阔ｎ １。鱼类天然免疫抗病相 关基因挖掘及功能研究是当前鱼类病害防治研究 热点，本研究克隆出虹鳟ＤＡＤ１基因序列并初步分 析其功能，为进一步解虹鳟不同细胞因子之间关 系，弄清分子机制，深入研究虹鳟ＤＡＤ１蛋白所参 与免疫反应信号转导途径奠定理论基础。 【参考文献】 【１】Ｎａｋａｓｈｉｍａ Ｔ，Ｓｅｋｉｇｕｃｈｉ Ｔ，Ｋｕｒａｏｋａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｅＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＤＡＤ１，ｗｈｏｓｅ ｄｅｆｅｃｔ ｃａｕｓｅｓ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｈａｍｓｔｅｒ ＢＨＫ２１ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１９９３，１３（１ｏ１：６３６７—６３７４． ［２】Ｖａｕｘ Ｄ Ｌ，Ｗｅｉｓｓｍａｎ Ｉ Ｌ，Ｋｉｍ Ｓ Ｋ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｂｃｌ一２ｆＪ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９２，２５８（５０５９）：１９５５－１９５７． ［３】Ｒｏｂｏｔｉ Ｐ，Ｈｉｇｈ Ｓ．Ｔｈｅ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔｓ ０ＳＴ４８， ＤＡＤ１ ａｎｄ ＫＣＰ２ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｓ ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｎ—ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．２０１２，１２５（１４）： ３４７４—３４８４． ［４】Ｂｒｅｗｓｔｅｒ Ｊ Ｌ，Ｍａｒｔｉｎ Ｓ Ｌ，Ｔｏｍｓ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｄａｄ１ ｉｎ ｍｉｃｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｄｅａｔｈｆＪ］．Ｇｅｎｅｓｉｓ， ２０００，２６（４）：２７１—２７８． 【５］Ｚｈｕ Ｌ，Ｓｏｎｇ Ｌ，Ｚｈａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｏ ｉｎｊｕｒｙ ｓｔｉｍｕｌｕｓ ｏｆ ａ ｄｅｆｅｎｄｅｒ ａｇａｉｎｓｔ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ １ （ＤＡＤ１）ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ｂａｙ ｓｃａｌｌｏｐｓ Ａｒｇｏｐｅｃｔｅｎ ｉｒｒａｄｉａｎｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｐ．２００８，３５【２）：１２５—１３２． 【６１ Ｗａｌｄｏ ＪＴ，Ｇｒｅａｇｏｒ ＳＡ，ＩｑｂａｌＡ Ｊ，ｅｔａ１．ＴｈｅＤａｄｌ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆｔｈｅ ｙｅａｓｔ ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ Ｄａｍｌ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｓ ａｌｌ ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０，４００（３）：３１３— ３１７． 【７】王家庆，刘晓慧，李代宗，等．虹鳟腺苷酸转移酶基因２（ａｎｔ２） ｅＤＮＡ克隆与蛋白结构分析［Ｊ］．武汉大学学报（理学版），２００９， ５５（３１：３２９—３３４． 【８］谷伟，户国，徐革锋，等．不同性别虹鳟形态性状对体重影响效 果分析［Ｊ】．东北农业大学学报。２０１３，４４（３）：１０８—１ １３． ［９］Ｗａｎｇ Ｊ Ｑ，Ｌｉ Ｌ Ｃ，Ｌｉｎ ＳＧ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ８ Ｈｏｍｏｌｏｇ ｅＤＮＡ ｉｎ ｔｈｅ Ａｔｌａｎｔｉｃ Ｈａｌｉｂｕｔ（Ｈｉｐｐｏｇｌｏｓｓｕｓ ｈｉｐｐｏ— ｇｌｏｓｓｕｓ）［Ｊ１．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｇｅｎｅｔ，２０１０，４８：５０４－５１５． 【１０１ Ｗａｎｇ Ｌ，Ｗｕ Ｘ Ｚ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ—ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｙｅｌｌｏｗ ｇｒｏｕｐｅｒ Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ ａｗｏａｒａ ｓｐｌｅｅｎ［Ｊ］．Ｆｉｓｈ Ｓｈｅｌｌｉｆｓｈ ｌｍｍｕｎｏｌ，２００７，２３（２）：３５４—３６３． ［１ １１ Ｍａｋｉｓｈｉｍａ Ｔ，Ｎａｋａｓｈｉｍａ Ｔ，Ｎａｇａｔａ—Ｋｕｎｏ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＤＡＤ１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｎ—ｌｉｎｋｅｄ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ Ｃｅｌｌｓ，１９９７，２（２）：１２９—１４１． ［１２】Ｎｉｓｈｉｉ Ｋ，Ｔｓｕｚｕｋｉ Ｔ，Ｋｕｍａｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ｄｅｖｅｌｏｐ— ｍｅｎｔａｌ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ Ｄａｄｌ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ Ｃｅｌｌｓ，１９９９，４ （４）：２４３—２５２． 【１３】Ｙａｍａｄａ Ｔ，Ｔａｋａｔｓｕ Ｙ，Ｋａｓｕｍｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａ ｈｏｍｏｌｏｇ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｆｅｎｄ— ｅｒ ａｇａｉｎｓｔ ａｐｏｐｔｏｔｉｅ ｄｅａｔｈ ｇｅｎｅ（ＤＡＤ１）ｉｎ ｓｅｎｅｓｃｉｎｇ ｇｌａｄｉｏｌｕｓ ｐｅｔ— ａｌｓ ｉｓ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｆＪ］．Ｊ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００４，１６１（１ １）：１２８１—１２８３．
