第２７卷第１期 ２０１２年２月 大学化学 ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｖｏｌ＿２７ Ｎｏ．１ Ｆｅｂ．２０１２ 色谱－质谱联用法在体液小分子检测中的应用 王少敏张凯杨贯羽 （郑州大学化学与分子工程学院河南郑州４５００５２） 摘要体液小分子的种类和含量反映了机体的代谢信息。色谱一质谱联用技术在体液小分子检测中显示 出巨大的发展潜力。本文简要介绍近年来不同类型的色谱一质谱联用法在体液小分子检测中的应用，并对未 来的发展给予了展望。 关键词 色谱一质谱联用法体液小分子应用 近年来，随着联用技术的不断革新，色谱－质谱联用技术在体液小分子分析中发挥了越来越重要的 作用。色谱的优势在于分离，可将复杂混合物中的各组分分离，但定性和确定物质结构的能力较差；质 谱能够提供物质的结构信息，但样品需要纯化后才能进样分析。接口技术将这两种分析方法结合起来， 协同作用，取长补短，使色谱一质谱联用法在生物样品分离分析中备受青睐，已广泛应用于体液小分子的 检测 。 ． 体液即身体内的液体，主要包括尿液、血液、唾液、羊水、人奶、精液、脑脊髓、肺腔的液体等。体液中 除了水还含有丰富的化合物。体液小分子通常是指相对分子质量小于１０００的物质，主要有核苷、氨基 酸、糖类和其他一些代表性化合物。这些物质在体液中的种类和含量反映了机体的代谢状况，而利用色 谱一质谱联用技术检测体液小分子所得到的一系列样品信息，对研究人类机体代谢有着积极的指导意 义。色谱一质谱联用技术主要包括气相色谱一质谱联用、液相色谱．质谱联用和毛细管电泳．质谱联用。这 些联用技术凭借各自的优势为分离分析体液小分子提供了广阔的平台。 １气相色谱．质谱联用法（ＧＣ．ＭＳ） ＧＣ—ＭＳ是分析仪器中最早实现联用技术的仪器。ＧＣ主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的 差异来实现混合物的分离。样品进入气化室气化后，被载气带人色谱柱，载气的流动使样品组分在运动 中进行反复多次的分配，最终载气中分配浓度大的组分先流出，固定相中分配浓度大的组分后流出。经 气相色谱柱分离后的样品呈气态，并且流动相也是气体，与质谱的进样要求相匹配，可直接引入质谱，而 质谱又具有高灵敏度、高鉴别力的特点，因此ＧＣ．ＭＳ是分析复杂混合物最为有效的手段之一。对于极 性强、挥发性低的物质，需要衍生化后再进行ＧＣ．ＭＳ分析，在改善分析对象的挥发性同时还能提高检测 灵敏度。例如梅慧芬等 在利用ＧＣ．ＭＳ技术对半乳糖血症患儿尿液成分的分析中检测到至少３４种代 谢物。 体液的种类繁多，但目前用于实验研究的主要是尿液和血液，这是由于这两种类型的体液来源广 泛，采样方便并且可以连续性取样。而尿液以其非侵入性无损取样的优势，应用最为广泛。因此，我们 的综述内容也主要集中于色谱 质谱技术在尿液和血液中的小分子检测。 １．１ ＧＣ—ＭＳ法检测尿液中小分子 人的尿液中包含上万种化合物，这些化合物代表了人体的代谢状况。准确分离分析尿液中的小分 通讯联系人 ５２ 大学化学 第２７卷 子化合物，能为各种疾病的诊疗提供可能的依据。例如，Ｎａｓｒａｌｌａｈ Ｆ等 利用ＧＣ．ＭＳ法分析了肌酸缺 乏症（ＣＤＳ）患者尿液中胍基乙酸和肌酸的含量，并将实验结果与ＨＰＬＣ—ＭＳＭＳ法比较，最终认定该法对 于诊断ＣＤＳ是一种快速、可靠、可行的方法。 肝癌是一种常见的恶性肿瘤，ｗｕ Ｈ等 处理了２０位男性肝癌患者和２０位男性正常人的尿样，经 衍生化后通过ＧＣ－ＭＳ检测，发现了１０３种代谢产物，其中６６种是已经标记过的已知物质，１８种代谢产 物在肝癌患者和正常人中有显著性差异——这种以尿样代谢物作为生物标志物的非侵入性技术具有重 要的临床意义；朱凤英等 研究发现４一庚酮和二甲硫醚的含量与膀胱癌具有相关性。推测二甲硫醚可 能来源于含硫化合物在人体内的合成降解，而４－庚酮可能来源于增塑剂邻苯二甲酸二异辛脂在人体内 的降解；胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，目前主要依靠胃镜、病理、血清学等技术确诊，但这些手段 有些敏感性不足，有些有一定创伤。张东兵等 比较了胃癌患者术前、术后尿液和健康人尿液的分析 结果，发现患者尿液中天冬氨酸、赖氨酸、２一甲基一３－氧一丁酸乙酯含量升高，对胃癌的诊断具有潜在临床 价值。 在生物遗传的研究中，８一羟基脱氧鸟苷在ＤＮＡ的复制和修复过程中诱发ＤＮＡ点突变，被公认为是 ＤＮＡ氧化损伤的一种主要的标记物。研究发现癌症患者尿液中的８一羟基脱氧鸟苷含量明显高于正常 人，这在医学上有着重要的应用价值。梅素荣等 利用ＧＣ．ＭＳ测定了尿液中８－羟基脱氧鸟苷的含量， 验证了ＧＣ．ＭＳ法的实用性，为癌症患者的诊疗提供了一种新的可能手段。 Ｋｏｃｈｎｏｖａ Ｅ Ａ等 以ＧＣ．ＭＳ技术分析了运动员尿液中的甾体化合物，共定量检测出３６种内源性 甾体化合物。 随着科学家对人类基因和遗传代谢研究的深入以及各种实验分析技术的发展，越来越多的遗传代 谢病被检测和识别。韩连书等 ９ 应用串联质谱和ＧＣ—ＭＳ法检测了氨基酸代谢病、有机酸血症和脂肪酸 氧化代谢病等一系列遗传性代谢病患者的尿液，发现两种技术结合，能够同时检测出３０余种遗传代 谢病。 １．２ ＧＣ—ＭＳ法检测血液中小分子 人体各器官的生理和病理变化，往往会引起血液成分的改变，通过分析血液成分可以了解人体状 况。例如血清葡萄糖的含量是人体健康状况的重要指标，能为糖尿病、高血压以及心脑血管等疾病的诊 疗和防控提供有效依据。丁兆婷等¨。。运用同位素稀释质谱法配制了一系列溶液，并向血清样品中加入 内标，利用ＧＣ．ＭＳ法测定血糖含量，大大减低了测量结果的不确定度，完善了血糖含量检测的参考系 统。 酒后驾车是非常严重的交通安全问题，乙醇在体内代谢很快，一般酒后几小时体内就检测不到乙醇 成分，但是一部分乙醇进入体内会与尿嘧啶核苷＿５ ．二磷．葡萄糖醛酸结合形成乙基葡萄糖醛酸苷，如果 事故时间间隔过长，血液中乙醇成分无法检测，却可以通过检ｉ贝０乙基葡萄糖醛酸苷的含量来解决问题。 运用ＧＣ．ＭＳＭＳ联用方法检测血液中乙基葡萄糖醛酸苷，简单、快速，适合于检验案例 。 Ｋａｗａｎａ Ｓ等¨ 建立了一种简单快速分析血样中氨基酸的ＧＣ．ＭＳ方法，其中包括缬氨酸、亮氨酸、 异亮氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸等，血样经过处理衍生化后，实验回收率为６９．８％一８７．９％，每个样品 的分析时间为２６分钟，这几种物质的检测限依次为２４．２、１６．７、８．７、１．５和１２．９ｔｘｍｏＬ／Ｌ。 １．３ ＧＣ—ＭＳ法检测羊水中小分子 有机酸是氨基酸、脂肪、糖类中间代谢过程中产生的羧基酸，但是由于某种酶缺陷会导致这些酸代 谢异常在体内累积，因此检测体液有机酸含量可以作为疾病诊疗的一种手段。丁一峰¨ 利用ＧＣ—ＭＳ 分析了６３例正常羊水，共检测出１３１种有机酸代谢物，并计算出代谢物浓度，提供了代谢物参考值，为 今后遗传代谢病的羊水产前诊断提供了方法和依据；方法具有检测时间短，避免母源性污染的特点。 第１期 王少敏等：色谱－质谱联用法在体液小分子检测中的应用 ５３ １．４ ＧＣ—ＭＳ法检测唾液中小分子 ＧＣ—ＭＳ法在检ｉ贝０唾液中化合物也有一定应用。例如Ｊａｎｏｗｓｋａ Ｅ等 将唾液酶解、脱蛋白、固相萃 取、衍生化，选取 ．吗啡和Ｄ 一可待因作为内标，利用Ｇｃ—Ｍｓ法检测唾液中吗啡和可待因的含量。吗啡 和可待因的检测限分别是４ｎｇ／ｍＬ和５ｎｇ／ｍＬ，定量限依次为１４ｎｇ／ｍＬ和１５ｎｇ／ｍＬ，定量范围２０～ １０００ｎｇ／ｍＬ，回收率为５０％～６０％。为了检验方法的实用性，随机抽取１０位吸毒者的唾液验证，结果表 明该方法适用于追踪戒毒过程。 ２液相色谱．质谱联用法（ＬＣ—ＭＳ） ＥＳＩ源的出现使ＬＣ—ＭＳ技术飞速发展。ＬＣ．ＭＳ法的基本原理是依靠分析物质在固定相和流动相中 分配系数的差异，经过色谱柱将物质分离，陆续进入质谱检测。ＬＣ．ＭＳ除了能够分析ＧＣ—ＭＳ法不能分 析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物外，还具有分离能力强、定性分析可靠、检测限低等优点，因此 在体液小分子的检测中具有更广泛的应用。 ２．１ ＬＣ．ＭＳ法检测尿液中小分子 尿液中的修饰核苷是机体ＲＮＡ的代谢产物，由于不能被机体再利用而通过尿液排出体外，因此尿 液修饰核苷的含量能够反映机体细胞ＲＮＡ的代谢速率以及细胞增殖状况。依托ＬＣ—ＭＳ法检测尿液中 修饰核苷的研究，完善了肿瘤标志物的种类，增强了疾病检测的手段。例如，Ｊｅｎｇ Ｌ Ｂ等¨ 利用ＬＣ—ＭＳ 技术对２５位肝癌患者和２０位健康人的尿液核苷进行了分析，结果发现肝癌患者尿液中的腺苷、胞苷和 次黄苷的平均含量明显高于正常人，认为这３种核苷可以作为潜在的肿瘤标志物用于肝癌的诊断。大 连化物所许国旺课题组分别以ＨＩＬＩＣ和ＲＰＬＣ分离法，利用ＵＰＬＣ．ＭＳ技术分析了肝癌患者和正常人尿 液成分，结果发现ＨＩＬＩＣ比ＲＰＬＣ具有更高的灵敏度和稳定性＿ｌ 。此外，他们在对结肠癌研究中加入 良性结肠肿瘤对照，通过ＵＰＬＣ—ＭＳ和ＳＰＥ．ＨＰＬＣ对３４位正常人、３４位良性肿瘤（ＢＣＴ）患者和５０位结 肠癌（ＣＲＣ）患者的尿液进行了分析，结果发现苯乙酸谷氨酸有加快细胞凋亡、控制细胞增殖和调节致 癌基因表达的作用，在ＣＲＣ中含量最高，其含量的升高能够反映癌症的转变。在尿液核苷的检测中， ２，２一二甲基鸟苷和 ．甲基腺苷在ＣＲＣ和ＢＣＴ中含量较高，但两者没有明显差异；而假尿苷、胞苷、尿苷 和１．甲基腺苷在ＣＲＣ中含量高。研究结果表明，肿瘤细胞的核苷代谢比正常人复杂，肿瘤细胞具有更 高的代谢能力 ＂ 。 单一的方法可能会使极重要的潜在生物标志物缺失，中国医学科学院／北京协和医学院再帕尔・阿 不力孜课题组 选用不同离子源模式如（±）ＥＳＩ．ＭＳ、（±）ＡＰＣＩ—ＭＳ、（－４－）ＡＰＰＩ—ＭＳ检测肺癌患者尿液。 有１１种物质被识别，包括５种氨基酸、５种核苷和１种吲哚代谢物，为研究肺癌代谢组学提供了有力的 依据。此外，他们［１９ ３利用ＲＲＬＣ—ＭＳＭＳ法，在数据分析中创新性地引入偏相关分析方法构建相关性网 络，结合多变量分析方法共同寻找可能的生物标记物，在乳腺癌患者尿液的检测中识别出涉及氨基酸、 有机酸和核苷的ｌ２种潜在肿瘤标志物。 此外，Ｈｓｕ Ｗ Ｙ等＿２。。利用ＬＣ．ＭＳ技术分析尿液核苷来寻求更加灵敏和精确的大肠癌标记物。 Ｌｅｅ Ｓ Ｈ等＿２ 对老年痴呆症病人的尿液检测中发现３一甲基尿苷、ｌ－甲基腺苷、８－羟基＿２ 一脱氧鸟苷、２一脱 氧鸟苷、假尿苷和 ， ．二甲基鸟苷等６种核苷含量比正常人显著增高。我们也利用ＬＣ—ＭＳ法在淋巴 癌患者尿液提取物中鉴定出２６种核苷，其中包括３ 甲基腺苷、７．甲基腺嘌呤、５ ．脱氢＿２ 一脱氧次黄苷、 ３．甲基鸟嘌呤、０６＿甲基鸟苷和７－甲基一１－乙基鸟苷６种未见报道的核苷 。 尿液激素类化合物的检测也是研究热点之一。在类固醇类激素的研究中，王萌烨等 采用 ＬＣ．ＭＳＭＳ方法，建立起测定尿液中睾酮、表睾酮、脱氢表雄酮、雄酮和苯胆烷醇酮等５种激素的方法替代 ＧＣ—ＭＳ法用于日常分析工作。 ５４ 大学化学 第２７卷 ２．２ ＬＣ—ＭＳ法检测血液中小分子 系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）是一种涉及多个系统和脏器的自身免疫性疾病，我国的ＳＬＥ的患病率高于 西方国家。俞颖等 应用ＬＣ．ＭＳ技术对ＳＬＥ患者血浆样本进行了代谢指纹图谱分析，定性鉴定出７ 种代谢标志物，发现患者的氨基酸、磷脂和卟啉代谢异常，完善了该病的诊断依据。 血液中的激素也可以利用ＬＣ－ＭＳ法检测。孕酮对妊娠妇女维持正常的妊娠过程起重要作用。张 超等 建立了测定血液中孕酮含量的ＬＣ．ＡＰＣＩ－ＭＳＭＳ联用方法：线性范围０．２—５０ｎｇ／ｍＬ，最低定量限 为０．２ｎｇ／ｍＬ，灵敏度高、检出限低。初阳等 同样利用ＨＰＬＣ．ＭＳＭＳ联用技术建立了测定人血清内源 性激素睾酮含量的方法。 在对血浆氨基酸的检测中，赵华等 利用ＬＣ—ＭＳ技术检测了血浆中的异亮氨酸异构体，并测定了 血浆中异亮氨酸异构体的含量。血浆氨基酸代谢谱与糖尿病有相关性，韩晓菲等¨２引采用邻苯二甲醛柱 前在线衍生反相ＨＰＬＣ法建立了血浆中２１种氨基酸代谢谱的相对定量方法，通过比较糖尿病患者与志 愿者的氨基酸代谢发现，有７种氨基酸承载了分组的重要信息，可作为反映血糖值高低变化的标志物 组，对于糖尿病的早期诊断及深入研究具有潜在的科研及临床价值。 ２．３ ＬＣ—ＭＳ法检测唾液中小分子 唾液中物质的检测主要应用于药物的服用检测。例如，Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃ等 利用ＬＣ．ＭＳＭＳ分析唾液中 的一种新的镇疼药ｔａｐｅｎｔａｄｏｌ及其代谢产物Ｎ—ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｔａｐｅｎｔａｄｏｌ（ＤＭＴ），检测线性范围是 １０～ｌＯＯｎｇ／ｍＬ，最低定量限是ｌＯｎｇ／ｍＬ，两者回收率均大于９９％。虽然ＬＣ—ＭＳ技术能够检测８０％有机 化合物，但其自身也有不足，还需要不断完善。 ３毛细管电泳一质谱联用法（ＣＥ．ＭＳ） ＣＥ是近年发展迅速的一种分离分析方法，其基本原理是电泳和色谱，是一类以毛细管为分离通道、 以高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术。ＣＥ—ＭＳ与ＬＣ．ＭＳ的应用在方法学和分析对象上 有许多相似之处。例如都适用于小分子和大分子的分析，适用于热不稳定、强极性分子乃至离子型化合 物的分离分析，具有分离效率高、分析速度快、样品适应面宽、试剂盒样品消耗量少、分离模式多等特点。 它的高度分离能力与质谱的强鉴定能力联用在一起，是一种理想的完美结合。例如，Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｏｎ Ｎ 等 建立了用于阑尾炎病人血样中生物标记物筛选的ＣＥ．ＭＳ方法，发现病人治疗前后的血样有差异， 两种不同类型的阑尾炎也有差异。Ｍａｙｂｏｒｏｄａ Ｏ Ａ等 利用ＣＥ．ＴＯＦ—ＭＳ技术分析尿样中的氨基酸，通 过调节ｐＨ可使大多数氨基酸检出限低于５０ｎｍｏｌ，并成功分析了关节炎病人尿样。浙江大学程翼宇课 题组 利用ＣＥ—ＭＳ法分析了２０位膀胱癌患者和２Ｏ位正常人患者尿液，检测到ｍ／ｚ ３１７、２９０、３０４可以 作为潜在的生物标志物。 ４结语 人类探寻自身奥秘的过程是一部科技发展史。色谱一质谱联用法的发展推动了体液小分子检测的 进程，目前的联用方法实现了对生物样品快速准确的分析，具有高通量、高灵敏度的特点。ＧＣ—ＭＳ相比 ＬＣ．ＭＳ来说具有通用型检测器，并且具有丰富的谱图检索库，使得物质的定性分析快速方便准确，但由 于其对样品挥发性的限制，不能直接分析难挥发的有机化合物。ＧＣ—ＭＳ直接导入型接口的载气限于氦 气和氢气，当从色谱柱出口进入质谱离子源的载气流量高于２ｍＬ／ｍｉｎ时，离子源的真空度会下降。因 此，ＧＣ—ＭＳ在简化样品预处理过程，改进衍生化方法等方面仍有改进的空间。 对于ＬＣ．ＭＳ来说，仪器昂贵，使用有机溶剂作为流动相，分析成本高于ＧＣ；当采用含不挥发性盐的 流动相时，质谱的灵敏度会下降，且离子源会被污染；此外，Ｌｃ不能分析常规气体；ＬＣ—ＭＳ目前还没有像 ｝—｝ 【 第１期 Ｍ 王少敏等：色谱．质谱联用法在体液小分子检测中的应用 ；｜二 １ｊ １ｊ １｛ １ｊ他 ］加 ５５ ＧＣ．ＭＳ那样的通用谱库。这些都影响了ＬＣ—ＭＳ作为常规方法的应用。 ＣＥ．ＭＳ技术的发展尚不完善，在分析重现性和灵敏度等方面仍需不断改进。除了不能使用不挥发 性盐以外，无鞘流电喷雾接口的稳定性还较差。不断改进接口技术，ＣＥ—ＭＳ技术会在药物分析、临床医 学、单细胞分析尤其是蛋白质组学等热门领域发挥更全面、更强大的作用。可以预见，随着科学技术的 不断成熟，联用法在体液小分子检测乃至其他领域的应用将越来越广阔，具有巨大的发展空间。 参考文献 许国旺．代谢组学——方法与应用．北京：科学出版社，２００８ 梅慧芬，刘丽，李秀珍，等．实用儿科临床杂志，２００６，２１（２０）：１３７１ Ｎａｓｒａｌｌａｈ Ｆ，Ｆｅｋｉ Ｍ，Ｂｒｉａｎｄ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１０，４３（１６－１７）：１３５６ Ｗｕ Ｈ，Ｘｕｅ Ｒ Ｙ，Ｚｅｎｇ Ｈ Ｚ，ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ ＣｈｉｍＡｃｔａ，２００９，６４８（１）：９８ 朱凤英，虞爱娜，邱意弘，等．分析化学，２００７，３５（８）：１１３２ 张东兵，徐露，燕敏．医学临床研究，２００９，２６（６）：９６６ 梅素荣，王鹏，吴采樱．华中科技大学学报（自然科学版），２００６，３４（５）：１１８ Ｋｏｅｈｎｏｖａ Ｅ Ａ，Ｓｏｂｏｌｅｖｓｋｉｉ Ｔ Ｇ，Ｓｉｚｏｉ Ｖ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｚａｖｏｄｓｋａｙａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｙａ，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ Ｍａｔｅｒｉａｌｏｖ，２０１０，７６（８）：２０ 韩连书，叶军，邱文娟，等．中华医学杂志，２００８，８８（３０）：２１２２ 丁兆婷，全灿，金君素，等．北京化工大学学报（自然科学版），２０１０，３７（２）：１０９ 沈保华，严慧，赵晖，等．法医学杂志，２００９，２５（６）：４３１ Ｋａｗａｎａ Ｓ，Ｎａｋａｇａｗａ Ｋ，Ｈａｓｅｇａｗａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ，２０１０，８７８（３Ｏ）：３１１３ 丁一峰．质谱技术对尿液和羊水代谢物的分析．上海：上海交通大学硕士学位论文，２００９ Ｊａｎｏｗｓｋａ Ｅ，Ｐｉｅｋｏｓｚｅｗｓｋｉ Ｗ．Ｃｈｅｍ Ａｎａｌ（Ｗａｒｓａｗ），２００１，４６（６）：８５７ Ｊｅｎｇ Ｌ Ｂ，Ｌｏ Ｗ Ｙ，Ｈｓｕ Ｗ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ Ｃｏｍｍｕｎ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ，２００９，２３：１５４３ Ｃｈｅｎ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｗ Ｚ，Ｌｖ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ａｎａｌ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，２００９，６５０：３ Ｗａｎｇ Ｗ Ｚ，Ｆｅｎｇ Ｂ，Ｌｉ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌ Ｂｗｓｙｓｔ，２０１０，６：１９４７ Ａｎ Ｚ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｙ，Ｚｈａｎｇ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ，２０１０，９：４０７１ Ｃｈｅｎ Ｙ Ｈ，Ｚｈａｎｇ Ｒ Ｐ，Ｓｏｎｇ Ｙ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｒｍｌｙｓｔ，２００９，１３４：２００３ Ｈｓｕ Ｗ Ｙ，Ｃｈｅｎ Ｗ Ｔ Ｌ，Ｌｉｎ Ｗ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，２００９，４０２：３１ ｍ Ｉ，Ｃｈｕｎｇ Ｂ Ｃ．Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００７，４０：９３６ ［２１ｊ Ｌｅｅ Ｓ Ｈ，Ｋｉ［２２］ 李华雨，刘宏民， 闪闪，等．高等学校化学学报，２００９，３０（４）：６６１ ［２３］ 王萌烨，向平，严慧，等．色谱，２００８，２６（１）：１０ ［２４］ 俞颖，曹毅，陈益民，等．色谱，２０１０，２８（７）：６４４ ［２５］ 张超，吴筑平，张新荣．液相色谱．质谱联用测定血液中孕酮含量／／中国化学会第７届分析化学年会暨原子光谱学术会议．重庆，２０００：９８３ ［２６］ 初阳，李丹．医药导报，２０１０，２９（４）：４４３ ［２７］ 赵华，李晶，袁佩，等．分析化学研究简报，２００６，３４（１０）：１４３３ ［２８］ 韩晓菲，黄宇虹，王龙星，等．分析化学研究简报，２０１０，３８（５）：６９７ ［２９］ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃ，Ｔａｒｕｃ Ｍ，Ｔｕｙａｙ Ｊ，ｅｔ ａ１．ＪＡｎａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０１０，３４（８）：４５８ Ｏｌｓｓｏｎ Ｌ，Ｂａｃｋｓｔｒｉｆｍ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２００７，２８：１４３５ ［３０］ Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｏｎ Ｎ，［３１］ Ｍａｙｂｏｒｏｄａ Ｏ Ａ，ＮｅｕｓａＢ Ｃ，Ｐｅｌｚｉｎｇ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｊ ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００７，１１５９：１４９ ［３２］ Ｍａｏ Ｙ，Ｚｈａｏ Ｘ Ｐ，Ｗａｎｇ Ｓ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ａｎａｌ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，２００７，５９８：３４
