不同疾病标本中铜绿假单胞菌分离鉴定与多重耐药性分析

)２０１９,３５(３

中国人兽共患病学报

ChineseJournalofZoonoses

２３９

:/DOI１０．３９６９i．ssn．１００２－２６９４．２０１９．００．０１７j

􀅰实验研究􀅰

不同疾病标本中铜绿假单胞菌分离鉴定

与多重耐药性分析

２,陈　蓉１,张方圆２,严　杰１

Comact全自动细菌鉴定仪联合GN卡和１６SRNA基因PCR对不同疾病标本中铜绿假单胞菌进行分离鉴定.分别采用pVITEKＧ２Comact仪联合ASTＧGN卡KＧB纸片扩散法对铜绿假单胞菌分离株进行药物敏感试验.结果　仅检出铜绿假单p

２

).临床常用抗菌药物中,χ症监护病房(和普外科(铜绿假单胞菌分离株对氨苄西林、头孢唑林和头孢ICU)＝１７．７,P＜０．０５２２

),)胞菌１χ病人以≥６χ且主要来自重９９例病人所患主要疾病为下呼吸道感染(＝２４．８,P＜０．０５０男性为主(＝２６．１,P＜０．０５

摘　要:目的　了解不同疾病铜绿假单胞菌的感染状况以及该菌对不同抗菌药物的耐药性.方法　采用VITEKＧ２

/)/株多重耐药,优势多重耐药模式为青霉素＋头孢菌素＋碳青霉烯类(和５５．３％铜绿假单胞菌分离株(１１０１９９３０．９％,３４１１０)常见病原体,老年男性是该菌感染高危人群.临床标本中分离的铜绿假单胞菌有较强的耐药性,尤其对多种临床常用抗菌药物呈现多重耐药.

关键词:铜绿假单胞菌;疾病类型;多重耐药;易感人群

()中图分类号:R３７８．９９　　　文献标识码:A　　　文章编号:１００２－２６９４２０１９０３－０２３９－０６

).结论　铜绿假单胞菌是不同感染性疾病/菌株对青霉素＋头孢菌素＋碳青霉烯＋喹诺酮类(耐药(P＜０．０５３９．１％,４３１１０)

,.曲松耐药率较高(耐药率９但对哌拉西林、庆大霉素和左旋氧氟沙星相对敏感(敏感率７５．４８％~９８．９９％)０．５１％~８８．４４％)

,IsolationidentificationandmultidruesistanceofPseudomonasaeruinosaggr

fromsamlesofpatientswithdifferentdiseasesp

１２２１

,CHENRonZHANGFanＧuanYANJieg,gy

,

,(１．DeartmentoathoenBiolondMicrobioloZheianniversitchooloedicine,Hanzhou３１００５８China;pfPggyagy,jgUySfMg,２．ClinicalLaboratorSirRunRunShawHosital,Zheianniversitchooloedicine,Hanzhou３１００１６China)y,pjgUySfMg:seudomonasaeruinosaandresistanceaainstdifＧAbstractTheaimofthisstudistounderstandtheinfectionstatusofPyggP．aeruinosawasisolatedinthesamlesfrompatientswithdifferentdiseasesandthenidenＧferentantibioticsofthemicrobe．pgtifiedbITEKＧ２ComactAutoＧAnalzerplusGNcardand１６SRNAgeneＧbasedPCR．DruensitivitestwasperformedyVpygsytusinITEKＧ２ComactAutoＧAnalzerplusASTＧGNcard．Inthe１９９patientswithonletectableforP．aeruinosaintheirgVpyydg,samleslowerresiratorinfectionwasthemaorteofdiseases．Themalepatientswith≥６０yearsoldwerethesuscetibleppyjypp

,theisolatesofP．aeruinosapresentedhiherresistanceaainstamicillincefazolinandcefazolinwith９５．４８％－９８．９９％reＧggpg,sistanceratesbutwererelativelensitivetopieracillinentamcinandofloxacinwith７０．５１％－８８．４４％sensitiveratesyspgy/)５５􀆰３％(１１０１９９oftheP．aeruinosaisolatespresentedmultiＧdruesistanceinwhichpenicilins＋cehalosorins＋carＧgrppgredominantmultiＧdruesistancepattern．AlltheresultsleadtotheconclusionsthatP．aeruinosaisthecommonpathoenpgrgg/)/)boenems(３０．９％,３４１１０orenicilins＋cehalosorins＋carboenems＋quinolones(３９．１％,４３１１０resistanceactedastheppppp

,oulationmainlfromtheintensivecareunit(ICU)andgeneralsurer．IntheantiＧmicrobialdruscommonlsedinclinicppygygyu

fromclinicalsamleshavehiherdruesistanceeseciallresentationofmultileresistanceaainstmanommonlＧusedacＧpggrpyppgycy

:_b;通讯作者:严　杰,Emailmed＠zu．edu．cnpj

ofdifferentinfectiousdiseasesandoldmaleisthehihＧriskgroufP．aeruinosainfectionaswellasP．aeruinosaisolatesgpoggtibiotics．

:;mKewordsPseudomonasaeruinosa;teofdiseasesultiＧypgy

;druesistancesuscetiblepoulationgrpp:,:CorresondinuothorYanJieEmailmed．b＠zu．edu．cnpgapj

作者单位:浙江大学医学院病原生物学系,杭州　３１．１００５８;

３１００１６

ORCID:００００Ｇ０００３Ｇ２３６８Ｇ６８３７

浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科,杭州　２．

２４０

中国人兽共患病学报

()２０１９,３５３

俗称　　铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruinosa)g绿脓杆菌,广泛分布于自然界、人体皮肤与肠道以及

１Ｇ２]

.铜绿假单胞菌是常见机会多种医疗器械表面[

,致病菌(也是引起医院感oortunisticpathoen)ppg

]２Ｇ５

.有文献报道,染主要病原菌之一[铜绿假单胞菌

VITEKＧ２Comact全自动细菌鉴定仪及ASTＧGNp

药敏卡,检测上述铜绿假单胞菌临床分离菌株对１４

]１６(),规程[采用KCLSIＧB纸片扩散法检测铜绿假单胞菌临床分离菌株对美诺培南、米诺环素、哌拉西

]１３

,程»第４版规程[采用法国生物梅里埃公司

种抗菌药物的敏感性.根据美国临床标准化委员会

感染引起的疾病类型复杂多样,但以肺部感染最为

６Ｇ９]

.此外,常见[铜绿假单胞菌对多种临床常用抗生]１０Ｇ１２

.为了解不同疾病铜绿假单胞菌的素天然耐药[

林的敏感性.上述药物敏感试验中,铜绿假单胞菌ATCC２７８５３株作为质控菌株.根据CLSI标准判

]１６

.读药物敏感试验结果[

感染状况以及该菌对临床常用抗菌药物的耐药性,我们对２０１７年本院急诊或住院细菌性感染病人标本中铜绿假单胞菌进行了分离鉴定并检测和分析了分离菌株的耐药性,另选择仅检出铜绿假单胞菌的患者进行了年龄和性别与易感性、所致疾病类型、病人临床科室来源等进行了分析,以期为更有效地诊治铜绿假单胞菌感染性疾病提供依据.

　材料与方法

．１　标本来源　收集８５９例２０１７年院急诊或住院感染性疾病病人痰液、腹水１—１２月来本、尿液、切口分泌物或血液等标本.

．２　细菌分离培养全国临床检验操作程»第４版规程[３]

　根据«

规１图血平板(法国生物梅里埃,将不同临床标本分离划)和巧克力平板(线法国生接种物梅里埃)上,倒置平板在．３　８~细菌鉴定２４h,

以获得单个菌落５％CO２环境中养１３

７℃培全国临床检验操作规程.»第版规程[１３

omact全,单自动个　根据«

]细菌菌落鉴增定菌仪培(养法国后梅采里用埃V)IT公E司KＧ４及２．４Np

鉴定卡进行鉴定.

　PCR　采用铜绿假单胞菌性引物和连)[１４]

EXＧTaCR１试剂盒６SRN(A基因特异

T,大进行P,C对标本R检测中q高保真.仅采有用铜细绿P

菌假基单因胞组菌D的NA分a离Ka提出Ra取鉴试定

剂盒(组上游DANxyAg

,

e紫n,外US分A光)提取各铜绿假单胞菌分离株基因光度法测定其浓度和纯度[１５]

.T２７F引物序列:５′ＧAGAGTTTGATCCTGG

eTCTAGGTＧT３′A,C下G游AC１４T９２TR引物序列:Ｇ３′.引物由上G海GITnvTitrAoC

Ｇm０n公司合成.s、５８℃３０s、P７２℃９CR参数如下:０s进行３９５４个循环℃５mi,７n２℃１,９４℃０

增产物in

.采用溴乙锭预染色的琼脂糖凝胶电泳检测扩,铜绿假单胞菌特异性扩增片段大小为[１４

]CR中以铜绿假单胞菌ATCC２７８５１４２５

对照p.

.P３株为．５　药物敏感试验　根据«

全国临床检验操作规１．６　多重耐药模式分析铜绿假单胞菌多重耐药是指该菌对３类及以上不同类型至少　根据文献,

１种

抗菌药物耐药,其中素、头孢菌素和碳青β酶Ｇ

内酰胺类抗生素又分为青霉烯３类[１７]

对铜绿假单胞菌临床菌株多重耐药模式进行分析.根据上述标准.

,１．７　统计分析　采用卡方检验分析铜绿假单胞菌

临床分离菌株对不同抗菌药物的耐药率和多重耐药模式,P＜０．０５认为差异有统计学意义.

２　结　铜绿假单胞菌　果２．１的基因片段(NAP中CR检测结果,能扩增出　预１９期９例铜绿假单胞菌基因组D均大小的目自动细菌鉴定仪及１４２５bGpN),鉴定卡鉴定结果可靠表明VITEKＧ２Com(

p图ac１t全).M:株扩增条带分子量m(a对照rker);;１３:~空６白:４对株铜绿假单胞照;２:铜绿假菌单临胞床菌分A离T代CC表２７株８５扩３增条带

图１　铜绿假单胞菌分离株PCR检测结果

Fig

．１　ResultsofPCRdetectionofPseudomonasaerugiＧnosaisolates

２．２　铜绿假单胞菌所致疾病类型　１９９例铜绿假

单胞菌感染病人中,见(肤感３５染．７％(,７１/１９９)(以肺炎等下呼吸道感染最为常

χ２

＝２４．８,P＜０．０５)

,其次为皮１)、泌尿道１４．１感％染,２(８/１９９)、腹/腔感、染(１３．１％,２６

/４(９１９．００,．０P％＜０,２０．０/５１９)９,)１３．１％,２６１９９)

上耳和胆道感染道、血液和(７其．５他％感,１染５/呼１仅９吸９道占)７(χ感２

染．５＝％

１１１１１CGg

３bCC１３期

(/)().表１１５１９９

陈　蓉等:不同疾病标本中铜绿假单胞菌分离鉴定与多重耐药性分析２４１

表２　不同铜绿假单胞菌感染性疾病病人年龄分布Tab．２　Aedistributionofpatientswithdifferentg

表１　铜绿假单胞菌感染性疾病类型及其构成比Tab．１　TesandconstituentratiosofP．aeruinosaＧgyp

infecteddiseases

感染类型下呼吸道感染皮肤感染腹腔感染泌尿系统感染上呼吸道感染胆道感染耳道感染血液感染其他感染合计

病例数()n７１２８２６２４２０１５６６１９９３

病种/例数

肺炎/慢性阻塞性肺６６、

病/５

构成比/％

感染类型泌尿系统感染下呼吸道感染皮肤感染胆道感染腹腔感染上呼吸道感染耳道感染血液感染其他感染合计

P．aeruinosaＧinfecteddiseasesg病例数()n２４７１２８１５２６２０６６１９９３

)年龄分布(n

２６４９７０２４２２

≥６０岁病人构成比/％８７．５７８．９７１．４６６．７５３．８５５．０１６．７６６．７３３．３６９．３

≥６０４１－５９２０－４０２１５６２０１０１４１１１４１３８１

１０

１５２１３２５０１９０

３５．７１４．１１３．１１２．１１０．０７．５３．０３．０１００１．５

膀胱炎/尿道炎/前１０、９、列腺炎/５支气管扩张感染/鼻１７、炎/咽炎/２、１外耳道感染/内耳道感４、染/２

胸腔感染/肝脏感染/１、角膜炎/１、１

２．４　铜绿假单胞菌感染病人临床科室分布　１９９

/例铜绿假单胞菌感染患者中,来自重２７％(５４１９９)/)症监护病房、来自普外科,多于其他科２６％(５１１９９

２

)().χ室(表３＝１７．７,P＜０．０５

２．３　性别与年龄对铜绿假单胞菌感染率的影响　

/１９９例铜绿假单胞菌感染病人中,６２．８％(１２５１９９).病人年龄范围２其中２６．１,P＜０􀆰０５)２~９７岁,

/)/病人≥６病人６９．３％(１３８１９９０岁、２１．１％(４２１９９)/病人２４１~５９岁、９．６％(１９１９９)０~４０岁,≥６０岁

２

;χ人群更易感(各病种中泌尿系＝５９．５,P＜０．０５)).表２２０~４０岁病人耳道感染较为常见(

,统、下呼吸道和皮肤感染率相对较高(但＞７０％)

２

/χ为男性,为女性,男性更易感(３７．２％(７４１９９)＝

２．５　铜绿假单胞菌临床菌株耐药性　药物敏感试

验结果显示,１９９株铜绿假单胞菌临床菌株对妥布、其次为庆大霉素(左旋氧氟沙星９３􀆰４７％,８８．４４％)(,和哌拉西林(但对复方新诺明、７２．３６％)７０．５１％)头孢唑林、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素、).表４９８􀆰４８％、９７．９９％、９７．８０％和９５．４８％(头孢曲松耐药率较高,分别为９９．５０％、９８．９９％、霉素和丁胺卡那霉素敏感率分别为９５．４８％和

表３　铜绿假单胞菌感染病人临床科室分布

Tab．３　DistributioninclinicaldeartmentsofP．aeruinosaＧinfectedpatientsgp

　感染类型下呼吸道感染皮肤感染腹腔感染泌尿道感染上呼吸道感染胆道感染耳道感染血液感染其他感染合计

ICU３９２３４１３０２５４０

普外科１４２２００９００５１１５

急诊科４１０３８００３１９０

泌尿外科

００１１００００１１００

呼吸内科

６００１４０００１１０

神经内科

５００２２００００９

感染科１５０１００００１８

耳鼻喉科

００００２０６００８

内分泌科

２１００２００００５

其他∗

９５１２１３０１２３１

病例数＜５的临床科室　　∗:

２４２

中国人兽共患病学报

表４　铜绿假单胞菌临床菌株药物敏感试验结果

Tab．４　ResultsofdruensitivittestofP．aeruinosaisolatesggsy

抗菌药物

菌株数()n

株数１１０１２９

敏感敏感率/％７０．５１０．５１１．０１４．５２

株数４４

耐药耐药率/％２８．２１９８．４８９８．９９２８．１４９５．４８２６．１３２７．１３９７．９９３２．７９３７．１９５．０３４．５２２５．６３１１．０６９７．８０９９．５０６．０３

株数２２１８１３２２１２３０００

()２０１９,３５３

中介中介率/％１．２８１．０１００９．０９６．５３０．５０１．０９７．５４１．５１０５．５３１６．５８１．１００９．０５

哌拉西林氨苄西林头孢唑林头孢他定头孢曲松头孢吡肟

哌拉西林/他唑巴坦氨苄西林/舒巴坦美罗培南亚胺培南丁胺卡那霉素妥布霉素庆大霉素环丙沙星左旋氧氟沙星米诺环素复方新诺明

１５６１９９１９９１９９１９９１９９１９９１９９１８３１９９１９９１９９１９９１９９１９９１９９９１

１９６１９７１９０５２５４６０７４１０１２５１２２１９８８９９５６

１２５１３４１２３１２１１１０１８６１９０１７６１３０１４４１１３

６２．８２６７．３４６１．８１６６．１２５５．２８９３．４７９５．４８８８．４４６５．３３７２．３６１．１００．５０１．５１

１９５

１１．１１

１５

１１１８３３１０

２．６　铜绿假单胞菌临床菌株多重耐药模式　四环素类米诺环素和磺胺类复方新诺明临床使用较少.除米诺环素和复方新诺明外,５５．３％铜绿假单胞菌/)临床分离菌株(株多重耐药,多重耐药模式１１０１９９/复杂多样,其中３菌株对青霉素＋头０．９％(３４１１０)/孢菌素＋碳青霉烯类耐药,菌株对３９．１％(４３１１０)青霉素＋头孢菌素＋碳青霉烯＋喹诺酮类耐药,为)().表５０􀆰０５３　讨　论

２

χ铜绿假单胞菌优势多重耐药模式(＝２５．１,P＜

表５　绿假单胞菌临床菌株多重耐药模式

Tab．５　MultidruesistancemodelsofP．aeruinosaisolatesggr　　药物组合

青霉素＋头孢菌素＋碳青霉烯类青霉素＋头孢菌素＋碳青霉烯＋

喹诺酮类

青霉素＋头孢菌素＋碳青霉烯＋氨基糖苷类

青霉素＋头孢菌素＋碳青霉烯＋喹诺酮＋氨基糖苷类

青霉素＋头孢菌素＋氨基糖苷类青霉素＋头孢菌素＋喹诺酮类

多重耐药

)株数(n３４４３４１１１０５１１０１２

构成比/３０．９３９．１３．６１０．０１．８９．１４．６１０００．９％

铜绿假单胞菌为革兰阴性杆菌,分布广泛,是最

为常见的机会致病菌和医院感染病原菌之一.尽管铜绿假单胞菌感染所致疾病复杂多样,但国内外研究报道,肺炎是铜绿假单胞菌感染所致主要疾

１８Ｇ２０]

.本研究中,病[高达３５．７％病人为铜绿假单胞

青霉素＋头孢菌素＋氨基糖苷＋

喹诺酮类

青霉素＋喹诺酮＋氨基糖苷类合计

菌下呼吸道感染,其中６６例为肺炎、５例为慢性阻塞性肺病,气管插管和气管切开后使用呼吸机等有创医疗措施增加了铜绿假单胞菌下呼吸道感染风险,与国内外文献报道一致.值得关注的是,本研究中分别有１４．１％、１３．１％和１２．１％病人分别为铜绿

假单胞菌皮肤、腹腔和泌尿道感染,皮肤感染者多有下肢静脉曲张所致慢性溃疡、腹腔感染者多为腹腔镜术后感染、泌尿道感染者多发生于膀胱切除术或更换输尿管支架后.上述资料提示,在医院日常医

３期陈　蓉等:不同疾病标本中铜绿假单胞菌分离鉴定与多重耐药性分析２４３

疗工作中,加强环境空气和医疗器材消毒、减少和治愈皮肤损伤、加强术中消毒并在术后预防性使用抗菌药物,是降低铜绿假单胞菌感染的有效措施.为≥６疾病类型以泌尿道、下呼吸道０岁老年人群,和皮肤感染常见.众所周知,老年人机体免疫力显此外,铜绿假单胞菌感染病人在不同临床科室中的/分布存在明显差异,和普外科ICU(２７．１％,５４１９９)

２１Ｇ２２]

.著下降,易发生正常菌群所致的机会性感染[

药性强且多重耐药率较高,故对铜绿假单胞菌感染病人分离菌株并进行药物敏感试验极为必要,以期为选择敏感或相对敏感菌抗生素以及联合用药提高铜绿假单胞菌治疗效果提供依据.

利益冲突:无

]本中铜绿假单胞菌分离鉴定与多重耐药性分析[J．

引用本文格式:陈蓉,张方圆,严杰．不同疾病标

本研究中发现,６９．３％铜绿假单胞菌感染病人

(/)铜绿假单胞菌感染病人多于其他２５．６％,５１１９９

::中国人兽共患病学报,２０１９,３５(３)２３９Ｇ２４４．DOI

/１０．３９６９i．ssn．１００２Ｇ２６９４．２０１９．００．０１７j临床科室(P＜０．０５),前者多为下呼吸道感染(３９

/与４)插管或气管I,C后者多为皮肤和腹腔感染U病人因病情重以及抵抗(１力４＋弱２２且/５常１

施),行这可能气管切开、普外科病人通常进行手术有关.

上述资料提示,加强老年人群个人卫生并提高机体免疫力、侵入性医疗时特别注意无菌操作并加强消

毒措施,是减少铜绿假单胞菌感染率的针对性措施.

与其他临床常见病原菌比较,铜绿假单胞菌具有较强的耐药性,不仅对多种抗菌药物天然耐药,且其耐药机制也复杂多样[

２３Ｇ２４

]机制不同,临床常用抗生素分别为.根据分子结构和抗菌、一代头孢菌素类头孢β内酰胺类(青霉素类哌拉西林和氨苄西林等Ｇ

唑林等、三代头孢菌素类头孢他啶和头孢曲松等、四代头孢菌素类头孢吡肟等、碳青酶烯类美罗培南和亚胺培南等)、氨基糖苷类(丁胺卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素等)、喹诺酮类(环丙沙星、左旋氧氟沙星等)和大环内酯类(红霉素等).我们的药物敏感试验结果显示,铜绿假单胞菌临床菌株对氨苄西林、头孢唑林和头孢曲松耐药率高达８９５．４８％~

较强的半合成青霉素８􀆰．２９１９％％和,但对哌拉西林和头孢吡肟耐药率分别仅为２６．１３％,

这可能与哌拉西林为抗菌作、头孢吡肟为最新的四代头孢用菌素有关.产生生素耐药的主要机制βＧ内酰胺酶是细菌对,他唑巴坦和舒巴坦均为βＧ内酰胺类抗酰胺酶抑制剂[２５]

床菌株对哌拉西.林本研究中发现和氨苄西林,铜绿假单胞菌临βＧ

内耐药率分别为

林８􀆰/２舒巴坦耐药率分别为１％和９８．４８％、

对哌拉西林/他唑巴坦和氨苄西显降低细菌对哌拉西林和氨苄西林的耐药性２７．１３％和９７．９９％,未能明,提示上述铜绿假单胞菌临床菌株对哌拉西林和氨苄西林耐药可能与βＧ内酰胺酶无关.更为重要的是,耐药％铜绿假单胞菌临床菌株对临床常用抗生素多重５５．,其主要多重耐药模式为青霉素碳青霉烯类和青霉素＋头孢菌素类,铜绿假单胞菌临床菌株耐

＋＋头孢菌素碳青霉烯＋诺酮类.上述资料提示＋喹参考文献:

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