第４ ３卷第１２期 ２ ０ １ ６年１ ２月 湖南大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ＿４３，Ｎｏ．１２ Ｄｅ ｃ．２ Ｏ １ ６ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ） 文章编号：１６７４—２９７４（２０１６）１２—００８８—０５ ４一甲基伞形内酯衍生物的合成与生物活性研究 汪秋安 ，乔艳欣，毛 炎，刘 多 （湖南大学化学化工学院，湖南长沙４１００８２） 摘要：４－甲基伞形内酯（４－甲基－７－羟基香豆素，１）是一种具有重要生物活性的香豆素 类天然产物．本文以间苯二酚和乙酰乙酸乙酯为原料，经Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应合成４一甲基伞形 内酯（１）．然后以４一甲基伞形内酯（１）为底物，分别经Ｍａｎｎｉｅｈ反应、乙酰化、Ｆｒｉｅｓ重排、（）－ 甲基化、Ｂａｅｙｅｒ－Ｖｉｌｌｉｇｅｒ氧化、（）＿异戊烯基化和Ｃｌａｉｓｅｎ重排等反应步骤，合成了一系列４一 甲基伞形内酯衍生物２～１Ｏ．并对所合成的化合物进行了人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞的抑制活性测 试，结果发现新化合物４一甲基５一异戊烯基一８一羟基一７一甲氧基香豆素（１０）对Ｈｅｌａ细胞的抑制 活性（ＩＣ５０—２８．５８ ｔｌｍｏｌ／Ｌ），高于阳性对照药物顺铂（ＩＣ５ｏ＝４１．２５ ｔｔｍｏｌ／Ｌ），具有进一步 研究开发的价值． 关键词：４一甲基伞形内酯；香豆素衍生物；合成；生物活性 中图分类号：０６２５．１２ 文献标识码：Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ＷＡＮＧ Ｑｉｕ—ａｎ 。ＱＩＡＯ Ｙａｎ—ｘｉｎ，ＭＡＯ Ｙａｎ。ＬＩＵ Ｄｕｏ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ。Ｈｕｎａｎ Ｕｎｉｖ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ ４１００８２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：４一Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（４－ｍｅｔｈｙｌ－７－ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ，１）ｉｓ ａ ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗｉｔｈ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，４一ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（１）ｗａｓ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｆｒｏｍ ｒｅｓｏｒｃｉｎｏｌ ａｎｄ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔｏａｃｅｔａｔｅ ｂｙ Ｐｅｃｈｍａｎｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｎｉｎｅ ｃｏｕｍａｒｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（２～１０）ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｍａｎｎｉｃｈ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ，Ｆｒｉｅｓ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ，Ｏ－ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ，Ｂａｅｙｅｒ－Ｖｉｌｌｉｇｅｒ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ， Ｏ－ｐｒｅｎｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌａｉｓｅｎ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ４一ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（１）．Ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｈｅｌａ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ４－ ｍｅｔｈｙｌ一５一ｐｒｅｎｙｌ一８一ｈｙｄｒｏｘｙ一７一ｍｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ（１０，ＩＣ５０—２８．５８ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ）ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｄｒｕｇ ｃｉｓ—Ｐｌａｔｉｎ（ＩＣ５０：＝＝４１．２５ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ），ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｗｏｒｔｈｙ ｏｆ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ；ｃｏｕｍａｒｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ；ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ 香豆素是一类具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌和抗凝 血作用等重要生物活性的天然产物．例如，Ｋａｓｈ— ｍａｎ等从马来西亚热带雨林树木藤黄科胡桐树 （Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｌａｎｉｇｅｒｕｍ）中分离出来的Ｃａｌａｎｄｉｄｅ 具有很强的抗艾滋病毒活性Ⅲ．２００３年Ｌｅｅ等从缅 甸的Ｋａｙｅａ Ｏｓｓａｒｎｉｃａ树皮中分离得到的新香豆素 收稿日期：２０１６－０５－１３ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｊ１２１００４０），ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌ ＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（Ｊ１２１００４０） 作者简介：汪秋安（１９６２一），男，湖南常德人，湖南大学教授 十通讯联系人，Ｅ－ｍａｉｌ：ＷａｎｇＱＡ＠ｈｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ 第１２期 汪秋安等：４一甲基伞形内酯衍生物的合成与生物活性研究 ８９ ＴｈｅｒａｐｈｉｎｓＡ，Ｂ和Ｃ显示出很好的抗Ｃｏｌ２，ＫＢ 活性具有增强效果，例如，蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ，７一甲 氧基一８一异戊烯基香豆素）是近年来发现的一种很有 和ＬＮＣａＰ人肿瘤细胞活性［２］．张庆林等从蛇床子 （Ｃｎｉｄｉｕｍｍｏｎｎｉｅｒ）中分离出的３种香豆素对耐药 的肿瘤细胞ＫＢＶ２ｏｏ具有明显的逆转作用 Ｊ． Ｉｔｏｉｇａｗａ等从Ｃ．ｉｎｏｐｈｌｌｕｍ中分离出的１０种４一苯 基香豆素对肿瘤细胞Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ）具 有显著抑制活性 ］． ４一甲基伞形内酯（１）是一种简单的天然香豆素， 它对各种肿瘤细胞具有抑制活性，同时也是一种新 潜力的高效抗肿瘤的异戊烯基香豆素 ．为了进 一步研究４一甲基伞形内酯衍生物的生物活性及适 应新药开发的需要，我们首先以间苯二酚和乙酰乙 酸乙酯为原料，经Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应合成了４一甲基伞 形内酯（１），然后对４一甲基伞形内酯进行结构修饰， 分别经Ｍａｎｎｉｃｈ反应、乙酰化、Ｆｒｉｅｓ重排、（）＿甲基 化、Ｂａｅｙｅｒ－Ｖｉｌｌｉｇｅｒ氧化、（）－异戊烯基化和Ｃｌａｉｓｅｎ 型利胆药物［５ ］．由于它的分子量小、合成简便且 重排等反应，合成了一系列４一甲基伞形内酯衍生物 生物利用度高，由４一甲基伞形内酯所衍生出来的香 ２～１０．并对所合成的４一甲基伞形内酯衍生物进行 豆素衍生物显示出良好的生物活性和药理作用，已 了人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞的抑制活性测试．４一甲基伞 引起人们的广泛关注［７ 。。．现有的研究表明，异戊 形内酯（１）及其衍生物２～１０的合成路线如图１＾●●●●●● ｂ 烯基、甲氧基和含氮碱基对香豆素类化合物的生物 所示． Ｈ ２ ＮＲ Ｒ２＝Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）２ ３ ＮＲ１Ｒ２＝０ ４ ＮＲ Ｒ２＝ ｏＨ 肿 ＋从Ｏ ｏ Ｈ Ａ Ｈ Ｃ ｄ Ｈ３ Ｈ３ Ｈ３ Ｈ ｇ ｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ａｎｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：ａ．ＨｚＳＯ４，ｒ．ｔ．；ｂ．３７ ＨＣＨＯ（ａｑ），ａｍｉｎｅ，Ｃ２Ｈ５ＯＨ，Ｈ ，ｍｉｃｒｏｗａｖｅ（６００ Ｗ，８０℃）｝ｃ．ＡｃｚＯ，ＤＭＡＰ； ｄ．ＡＩＣＩ３，△；ｅ．（ＣＨｓ）２ＳＯ４，ａｃｅｔｏｎｅ，Ｋ２Ｃ０３；ｆ．Ｈ２０２；ｇ．ｐｒｅｎｙｌ ｂｒｏｍｉｎｅ，ａｃｅｔｏｎｅ，Ｋ２ＣＯ３；ｈ．ｍｉｃｒｏｗａｖｅ（６００ Ｗ，２００℃），ＤＥＡ． 图１ ４一甲基伞形内酯（１）及其衍生物２～ｌ０的合成路线 Ｆｉｇ．１ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｒｏｕｔｅｓ ｏｆ ４－ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ（１）ａｎｄ ｉｔｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ２～１０ 祥鹄科技发展有限公司）；薄层和柱层析用硅胶均为 １ 实验部分 青岛海洋化工厂产品；所用试剂和溶剂为化学纯和 分析纯，要求无水的溶剂都经过干燥剂或分子筛除 １．１仪器与试剂 水和重蒸处理． 熔点在ＸＲＣ－１型显微熔点仪上测定（温度计未 ４一甲基－７－羟基香豆素（１）按文献以间苯二酚和乙 校正）；ＮＭＲ用Ｂｒｕｋｅｒ Ａｍ－４００型核磁共振仪测定 酰乙酸乙酯为原料合成［１ ． （溶剂ＣＤＣｌ３或ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ为内标）；ＭＳ用 １．２ ４一甲基－７－羟基－８－亚甲基（１一二正丙胺）香豆素 Ａｇｉｌｅｎｔ １１００液一质联用仪或ＺＡＢ－ＨＳ型仪测定记 （２）合成 录（ＥＩ模式）；ＩＲ用ＦＤ－５ＤＸ仪（ＫＢｒ压片法）测 首先将０．８ ｍＬ甲醛、０．８ ｍＬ二正丙胺、５滴浓 定 微波加热用ＸＨ－ＭＣ－１实验室微波合成仪（北京 盐酸溶于５ ｍＬ乙醇中，室温下搅拌１０ ｍｉｎ，再称 ９０ 湖南大学学报（自然科学版） ２ｏ１６拄 取化合物１（２ＯＯ ｍｇ，１．１４ ｒｅｔｏｏ１）于１００ ｍＬ加有 １．５ ４一甲基一７一乙酰氧基香豆素（５）的合成 磁子的圆底烧瓶中，将２０ ｍＬ无水乙醇加入其中， 称取化合物１（５ＯＯ ｍｇ，２．８５ ｒｅｔｏｏ１），催化量的 微波条件（６００ Ｗ，８０℃）下溶解原料，回流３０ ｍｉｎ ４一二甲氨基吡啶于１００ ｍＬ圆底烧瓶中，加入１５ 左右，反应完毕，旋干反应液，加水，用乙酸乙酯 ｍＬ乙酸酐，５０℃反应２ ｈ，原料点几乎消失，停止 萃取３次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸除溶剂，用 反应，旋干反应液，用乙酸乙酯萃取３次，饱和食盐 乙酸乙酯～石油醚重结晶，得到黄色固体１６５ ｍｇ， 水洗涤，干燥，旋干溶剂，最后用二氯甲烷一石油醚 产率５Ｏ ，１ＴＩ．Ｐ．１２５～１２７℃， Ｈ ＮＭＲ（４００ 重结晶，得到白色固体４９７ ｍｇ，产率８０％，ｍ．Ｐ． ＭＨｚ，ＣＤＣ１３） ７．２４（ｄ，Ｊ＝８．５ Ｈｚ，１Ｈ，５一 １４２～１４４℃， Ｈ ＮＭＲ（４ＯＯ ＭＨｚ，ＣＤＣ１。） ７．５４ Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ一８．５ Ｈｚ，１Ｈ，６一Ｈ），５．８８（ｓ， （ｄ，Ｊ一８．４ Ｈｚ，１Ｈ，５一Ｈ），７．Ｏ７～６．９８（ｍ， １Ｈ，３一Ｈ），３．９１（Ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２），２．４１（ｔ，Ｊ一 ２Ｈ，６一Ｈ ａｎｄ ８一Ｈ），６．２０（Ｓ，１Ｈ，３一Ｈ），２．３６（Ｓ， ６．９ Ｈｚ，４Ｈ，ＮＣＨ２），２．２５（Ｓ，３Ｈ，４一ＣＨ３）， ３Ｈ，４一ＣＨ３），２．２８（Ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ ）．”Ｃ ＮＭＲ １．４６～１．４９（ｒｒｌ，４Ｈ，ＣＨ２），０．７８（ｔ，Ｊ＝６．７ （１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） １６７．８０，１５９．５１，１５３．０９， Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ３）．¨Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，ＣＤＣ１。） １５１．９７，１５０．９６，１２４．４０，１１７．１０，１１６．８２，１１３．４７， １６３．０９，１６０．８４，１５３．２２，１５２．２０，１２４．２８，１１３．１６， １０９．４４，２Ｏ．１２，１７．７４．ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｚ：２１８ ＥＭ３ ．Ａ＿ １１１．５９，１０９．９８，１０８．０８，５５．４７，５０．７９，１９．１８，１８．５５， ｈａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１２ Ｈ１ｏ Ｏ４：Ｃ ６６．０５，Ｈ ４．６２；ｆｏｕｎｄ Ｃ １１．５５．ＭＳ（ＥＩ）， ｚ：２８９ ＥＭ３ ．Ａｎａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃｌ７ ６５．９６，Ｈ ４．６３． Ｈ船０ｂＮ：Ｃ ７０．５６，Ｈ ８．Ｏ１，Ｎ ４．８４ ｆｏｕｎｄ Ｃ ７０．４８，Ｈ １．６ ４－甲基一８一乙酰基－７－羟基香豆素（６）的合成 ７．９８，Ｎ ４．８１． 称取化合物５（５００ ｎａｇ，２．２９ ｍｍｏ１），Ａ１Ｃ１３（１ ｇ， １．３ ４－甲基－７－羟基－８－亚甲基（１－吡咯烷）香豆素（３） ７．４９ ｍｍｏ１），适量ＮａＣｌ于ＩＯ０ ｍＬ圆底烧瓶中，在１４０ 的合成 合成方法同（２）得到黄色固体２０１ ｍｇ，产率 ℃下反应２４ ｈ，冷却，滴加１０ 稀盐酸至酸性，抽滤， 干燥，用ＣＨ２ Ｃｌ 溶解，过滤，最后重结晶，得到黄色 ６８％，ｍ．Ｐ．２２３～２２５℃， Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤＣ１ ） １３．０８（Ｓ，１Ｈ，０Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．７ 固体３２４ ｎａｇ，产率６５ ，舰ｐ．１６６￣１６８℃， Ｈ ＮＭＲ Ｈｚ，１Ｈ，５一Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ一８．７ Ｈｚ，１Ｈ，６一 （４Ｏ０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） １３．４５（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），７．５７（ｄ，， Ｈ），５．９７（Ｓ，１Ｈ，３一Ｈ），４．１０（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２）， ＝：＝８．９ Ｈｚ，１Ｈ，５一Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ一８．９ Ｈｚ，１Ｈ，６一 ２．６５（ｓ，４Ｈ，ＮＣＨ２），２．３Ｏ（Ｓ，３Ｈ，４一ＣＨ３）， Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ，３一Ｈ），２．８２（ｓ，３Ｈ，４一ＣＨ３），２．３３ １．８１（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２）．¨Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，ＣＤＣ１。） （ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ３）．”Ｃ ＮＭ （１００ ＭＨＺ， 。） １６３．１３，１６１．３７，１５３．４６，１５２．０２，１２４．４９，１１３．３７， ２０４．３２，１６６．５６，１５９．３１，１５５．０６，１５３．０７，１３１．２８， １１１．９１，１１０．３４，１０８．６０，７７．４６，７７．１４，７６．８２，５３．６Ｏ， １１５．０６，１１１．８２，１１０．９８，１０９．１８，３３．９１，１９．１９．ＭＳ ５１Ｉ ４３，２３．７Ｏ，１８．８３．ＭＳ（ＥＩ），ｍ／＝：２５９ ＥＭ３ ．Ａ— （ＥＩ），ｍ／ｚ：２１８［Ｍ］ ． １ａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ ＣＩ２ Ｈ１ｏ Ｏ４：Ｃ ｎａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃｌ５Ｈ１７ Ｏ３Ｎ：Ｃ ６９．４８，Ｈ ９．５１，Ｎ ７．７７； ６６．０５，Ｈ ４．６２ ｆｏｕｎｄ Ｃ ６６．１０，Ｈ ４．５７． ｆｏｕｎｄ Ｃ ６９．５７，Ｈ ９．３８，Ｎ ７．８３． １．７ ４一甲基一８一乙酰基一７一甲氧基香豆素（７）的合成 １．４ ４－甲基－７－羟基－８－亚甲基（４一羟基哌啶）香豆素 将化合物６（５００ ｍｇ，２．２９ ｍｍｏ１），碳酸钾 （４）的合成 （１．９Ｏ ｇ，１３．７４ ｍｍｏ１）放于圆底烧瓶中，加入２０ 合成方法同（２）得到黄色固体２１４ ｍｇ，产率 ｍＬ丙酮，４０℃下加热使原料溶解，滴加２ ｍＬ硫酸 ６５ ，ＩＴＩ．Ｐ．１５Ｏ～１５２℃， Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， 二甲酯，５ ｈ后，原料点几乎没有，停止反应，旋干 ＣＤＣｌ３）艿７．３９（ｄ，Ｊ一８．７ Ｈｚ，１Ｈ，５一Ｈ），６．７５ 滤液，重结晶，得白色固体４２５ ｍｇ，产率８０ ，ｍ． （ｄ，Ｊ一８．７ Ｈｚ，１Ｈ，６一Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ，３一Ｈ）， Ｐ．９５～９７℃， Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ７．５７ ４．０４（ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２），３．８４（ｓ，１Ｈ，ＣＨ（ＯＨ））， （ｄ，Ｊ＝８．９ Ｈｚ，１Ｈ，５一Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ：８．９ ２．９２（Ｓ，２Ｈ，ＮＣＨ２），２．３７（ｓ，５Ｈ，ＮＣＨｚ ａｎｄ ４一 Ｈｚ，１Ｈ，６一Ｈ），６．１１（Ｓ，１Ｈ，３一Ｈ），３．８９（ｓ， ＣＨ３），１．９５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２），１．６８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）．¨Ｃ ３Ｈ，ＯＣＨ３），２．５７（ｓ，３Ｈ，４一ＣＨ３），２．３８（Ｓ， ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ ） １６２．７１，１６１．３６，１５３．４８， ３Ｈ，ＣＯＣＨ ）．¨Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） １５２．４０，１２４．６０，１１３．４４，１１２．１６，１１０．４９，１０７．７２， １９９．４７，１５９．９５，１５８．３７，１５２．２４，１５０．５１，１２６．５０， ５３．８１，３３．８４，２９．９２，１８．７９．ＭＳ（ＥＩ）， ／ ：２８９ １１９．１９，１１３．８７，１１２．４１，１０７．４７，５６．２８，３２．４２， ［Ｍ］ ．Ａｎａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃｌ６ Ｈ１９ Ｏ４Ｎ：Ｃ ６６．４２，Ｈ ６．６２， １８．７３．ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｚ：２３２厂Ｍ３ ．Ａｎａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｎ ４．８４；ｆｏｕｎｄ Ｃ ６６．３６，Ｈ ６．７０，Ｎ ４．７５． Ｃ１３ Ｈ１２ Ｏ４：Ｃ ６７．２３，Ｈ ５．２１ ｆｏｕｎｄ Ｃ ６７．１６，Ｈ ５．２５． 第１２期 汪秋安等：４一甲基伞形内酯衍生物的合成与生物活性研究 １．８ ４一甲基一８一羟基－７－甲氧基香豆素（８）的合成 称量化合物７（２ＯＯ ｍｇ，０．８６ ｍｍｏ１）于１００ ｍＬ 圆底烧瓶中，加入１５ ｍＬ二氧六环，１２ ｍＬ ４ 氢 氧化钠溶液，４Ｏ℃加热，使原料溶解，冰浴条件下 将１Ｏ ｍＬ ３０ 的双氧水溶液滴入其中，反应３ ｈ 溶剂，硅胶柱层析（ 石油醚： ｌ己酸 醣一６：１），得到 黄色固体７０ ｍｇ，产率３５ ，ｍ．Ｐ．１２３～１２５℃， Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣ１３） ６．６０（ｓ，１Ｈ，６一 Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ，７一Ｈ），５．９９（ｓ，１Ｈ，ＣＨ）， ５．０６（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），３．８７（ｓ，３Ｈ，０ＣＨ３），３．５６ 左右，用冰的稀盐酸进行酸化使ｐＨ一１，原料点几 乎没有，停止反应，加水，用二氯甲烷萃取３～４ 次，萃取后，饱和食盐水洗涤有机层，干燥，旋除 溶剂，最后重结晶，得黄色固体８９ ｍｇ，产率５０ ， （ｄ，Ｊ一５．５ Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２），２．５２（ｓ，３Ｈ，４一 ＣＨ３），１．６２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．７５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）．ｎＣ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） １５８．７９，１５３．８３， １４７．３５，１４２．２７，１３２．３４，１３０．８１，１３０．４１， ＩＴＩ．Ｐ．８０～８２℃， Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣ１３） ７．１２（ｄ， 一８．８ Ｈｚ，１Ｈ，５一Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝ ８．８ Ｈｚ，１Ｈ，６一Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ一０．９ Ｈｚ，１Ｈ，３一 Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），２．３９（ｄ，Ｊ一１．１ Ｈｚ， ３Ｈ，４一ＣＨ ）． Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，ＣＤＣ１。） ｌ６Ｏ．１７，１５２．８５，１４９．３０，１４１．６１，１３２．７５， １１５．２４，１１４．３８，１１２．１８，１０７．３０，５６．４０，１８．６１． ＭＳ（ＥＩ）， ／ ：２０６ Ｉ－Ｍ］ ．Ａｎａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１１ Ｈ１０ ｏ ：Ｃ ６４．０７，Ｈ ４．８９；ｆｏｕｎｄ Ｃ ６４．１１，Ｈ ４．７８． １．９ ４一甲基一７一甲氧基一８一异戊烯氧基香豆素（９）的 合成 称量化合物８（２００ ｍｇ，０．９７ ｍｍｏ１），无水碳 酸钾（８００ ｍｇ，５．８０ ｍｍｏ１）于１００ ｍＬ圆底烧瓶中， 加入１５ ｍＬ丙酮，４Ｏ℃加热，使原料溶解，滴加 ０．２ ｍＬ异戊烯基溴，反应４ ｈ左右，停止反应，过 滤，旋转蒸除溶剂，用二氯甲烷～石油醚重结晶，得 到黄色固体２２６ ｍｇ，产率８５ ，ＩＴＩ．Ｐ．６６～６８℃， Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣ１。） ７．２９（ｄ，Ｊ一８．９ Ｈｚ，１Ｈ，５一Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．９ Ｈｚ，１Ｈ，６一 Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ，３一Ｈ），５．５９（ｔｄ，Ｊ一７．３， １．３ Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ），４．６４（ｄ，Ｊ一７．３ Ｈｚ，２Ｈ， ｏＣＨ２），３．９４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），２．３８（ｓ，３Ｈ，４一 ＯＣＨ３），１．７３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．６９（ｓ，３Ｈ， ＣＨ３）．¨Ｃ ＮＭＲ（１００ ＭＨｚ，ＣＤＣ１。） １５９．６８， １５４．８０，１５１．５５，１４７．１３，１３８．２３，１３３．９６， １１９．０２，１１８．４３，１１３．７０，１１１．３２，１０６．９４，６９．００， ５５．３Ｏ，２４．８０，１７．７５，１６．９７．ＭＳ（ＥＩ），ｍ／ｚ：２７４ ［Ｍ］ ．Ａｎａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１６ Ｈ１８ ０４：Ｃ ７０．０６，Ｈ ６．６１；ｆｏｕｎｄ Ｃ ７０．１１，Ｈ ６．５５． １．１０ ４－甲基一争异戊烯基一 羟基一７＿甲氧基香豆素 （１Ｏ）的合成 称量化合物９（２００ ｍｇ，０．７３ ｍｍｏ１）于１００ ｍＬ 圆底烧瓶中，加入１５ ｍＬ无水Ｎ，Ｎ一二乙基苯胺， 微波条件（６００ Ｗ，２００℃）下加热，反应２ ｈ左右， 原料点消失，停止反应，冷却至室温，加入４％稀 盐酸，用二氯甲烷萃取３次，萃取后用饱和ＮａＣ１ 溶液洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸除 １２２．２９，１１２．６６，１１１．８３，１０９．８５，５５．２１，３３．５７， ２４．５４，２３．５０，１７．１３．ＭＳ（ＥＩ）， ／ｚ：２７４［Ｍ］ ． Ａｎａ１．ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１６Ｈｌ８Ｏ４：Ｃ ７Ｏ．０６，Ｈ ６．６１；ｆｏｕｎｄ Ｃ ６９．９５，Ｈ ６．５９． １．１１生物活性测试 采用ＣＣＫ一８法对合成化合物１～１０进行体外抗 肿瘤细胞Ｈｅｌａ（宫颈癌细胞）的活性筛选．以顺铂 （ｃｉｓ－Ｐｌａｔｉｎ）作为阳性对照．实验流程如下：将每 ５ ０００个肿瘤细胞接种到９６孔板中（每一孔板接种 ５ ０００个细胞），待细胞贴壁之后（一般过夜或１２ ｈ） 给药，起始给药浓度ｉ００￣ｍｏｌ／Ｌ，３倍或４倍浓度 进行梯度稀释，一共稀释８个浓度（如：稀释４倍， 分别是ｌｏｏ ｔｌｍｏｌ／Ｌ，２５ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ，６．２５／ｌｍｏｌ／Ｌ， １．５６ ｔｌｍｏｌ／Ｌ，０．３９￣ｍｏｌ／Ｌ，０．０９７ ６ ｕｍｏｌ／Ｌ， ０．０２４ ４ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ，０．００６ １／￣ｍｏｌ／Ｌ），给药后孵育培 养４８ ｈ，弃去培养基，加入含１Ｏ ９，６ ＣＣＫ一８（检测线 号，只与活细胞结合，结合越多，吸光度越大）的 １６４０培养基（体外培养细胞所需的营养物质，主要 有糖、氨基酸和维生素三大类）１００ ｔＬＬ，孵育１～２ ｈ，检测波长范围４５０～４９０ ｎｍ，酶联免疫检测仪 （Ｂｉｏ－Ｒａｄ ６８０）读取各孔光吸收值，记录结果，以浓 度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲 线，应用两点法（Ｒｅｅｄ ａｎｄ Ｍｕｅｎｃｈ法）计算化合物 的ＩＣ５。值． ２结果与讨论 首先，以间苯二酚和乙酰乙酸乙酯为原料，经 香豆素合成的经典反应Ｐｅｃｈｍａｎｎ反应合成４一甲基 伞形内酯（１）．然后，４一甲基伞形内酯（１）分别与二 正丙胺、吡咯烷和４一羟基哌啶等３种二级胺和水合 甲醛的酸性醇溶液，在微波加热（６００ Ｗ，８０℃）下 进行Ｍａｎｎｉｃｈ反应，因香豆素１环上８位上的电子 云密度较大，且处于酚羟基的邻位，易发生具有亲 电特征的Ｍａｎｎｉｃｈ反应，生成８一位胺甲基取代的香 豆素衍生物２～４，这３种产物的结构通过 ＨＮＭＲ 谱确证，其中８位上的氢峰消失，出现了 ２．４１， ９２ 湖南大学学报（自然科学版） ２０１６正 ４．１０和４．Ｏ４胺甲基氢的吸收峰．微波促进的Ｍａｎ— ｎｉｃｈ反应已见文献报道［１ ，该法可大大缩短反应 时间，且副产物少，产率高． ４一甲基伞形内酯（１）与乙酸酐在催化量二甲基吡 啶（ＤＭＡＰ）作用下，发生乙酰化反应得到化合物５． 化合物５在Ｌｅｗｉｓ酸无水Ａ１Ｃ１。催化作用下，发生 Ｆｒｉｅｓ重排，可得邻位、对位羟基芳香酮类化合物， 本文的化合物５中因对位被占据，故得到邻位重排 产物６．曾选用ＣＳ 或硝基苯作溶剂，产率较低，可 能是溶剂中含有少量的水，使部分无水Ａ１Ｃ１。吸潮 水解，而使产率较低．在无溶剂条件下，于１４０℃ 反应２４ ｈ产率最高．化合物６的７一位经（）－甲基化 作用得化合物７．化合物７在双氧水中经Ｂａｅｙｅｒ－ Ｖｉｌｌｉｇｅｒ氧化得８一位有酚羟基的化合物８．化合物８ 与异戊烯基溴在无水Ｋ。Ｃ０。丙酮体系中，经亲核取 代反应得（）－异戊烯基化合物９．化合物９溶于无水 Ｎ，Ｎ－－－乙基苯胺（ＤＥＡ）溶剂中，在微波加热（６００ Ｗ，２００℃）条件下，发生Ｃｌａｉｓｅｎ重排得４一甲基－５－ 异戊烯基一７一甲氧基一８一羟基香豆素（１０）．对所合成 的４一甲基伞形内酯及其衍生物进行了体外抗人子 宫颈癌细胞Ｈｅｌａ细胞株的活性筛选，采用ＣＣＫ一８ 法Ｌ１ ，以顺铂（ｃｉｓ－Ｐｌａｔｉｎ）为阳性对照物，其结果见 表１．从表１的生物活性结果可以看出，化合物１， ５，６，７和１Ｏ对Ｈｅｌａ细胞增殖具有抑制作用，其 中化合物１０（ＩＣ 。一２８．５８ ｇｍｏｌ／Ｌ）的活性高于阳性 对照药物顺铂（ＩＣ 。一４１．２５／ｌｍｏｌ／Ｌ），也高于其母 体香豆素４一甲基伞形内酯（ＩＣ５。＝７１．９９ ｔ．ｔｍｏｌ／Ｌ）． 表１ 化合物１～ｌ０对Ｈｅｌａ细胞株的半数抑制浓度［ＩＣｓ０］ Ｔａｂ．１ Ｈａｌｆ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ［ＩＣｓｏ］ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ １～１０ ｏｎ ｔｈｅ Ｈｅｌａ ｃｅｌｌｓ ＩＣ化合物 ／（ ｓ。ＩＣ／（５。ｍ。卜Ｌ一 ） 化合物 “ｍ。Ｉ．Ｌ一 ） ｌ ７１．９９ ７ ６８．６８ ２ ＞１００ Ｓ ＞１００ ３ ＞１００ ９ ＞１００ ４ ＞１００ １０ ２８．５８ ５ ９６．７０ ｃｉｓ—Ｐｌａｔｉｎ＂４１．２５ ６ ８７．０８ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏ１． ３ 结 论 天然香豆素４一甲基伞形内酯经Ｍａｎｎｉｃｈ反应、 乙酰化、Ｆｒｉｅｓ重排、（）．甲基化、Ｂａｅｙｅｒ—Ｖｉｌｌｉｇｅｒ氧 化、（）－异戊烯基化和Ｃｌａｉｓｅｎ重排等反应，合成了一 系列４一甲基伞形内酯衍生物２～１０．所合成的目标 化合物经测试对人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞株的抑制活性， 发现异戊烯基香豆素１０的活性（ＩＣ 。一２８．５８ ￣ｔｍｏｌ／Ｌ）高于阳性对照物顺铂（ＩＣｓ。一４１．２５ ｔ￣ｍｏｌ／ Ｌ），具有进一步研究开发的价值． 参考文献 ［１］ ＫＡＳＨＭＡＮ Ｙ，ｃｕｓＴＡＦｓ０Ｎ Ｋ Ｒ，ＦｕＬＬＥＲ Ｒ Ｗ，ｅｔ ａ１． Ｔｈｅ ｃａｌａｎｄｉｄｅｓ，ａ ｎｏｖｅｌ ＨｌＶ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｃｏｕｍａｒｉｎｎ ｄｅ— ｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｒｏｐｉｃａｌ ｒａｉｎｆｏｒｅｓｔ ｔｒｅｅ．Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｌａｎ— ｉｇｅｒｕｍ ｌ，Ｊ３．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９２，３５（１５）： ２７３５—２７３８． ［２］ＬＥＥ Ｋ Ｈ，ＣＨＡＩ Ｈ Ｂ，ＴＡＭＥｚ Ｐ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃ— ｔｉｖｅ ａｌｋｙｌａｔｅｄ ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｋａｙｅａ ａｓｓａｍｉｃａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏ— ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，６４（２）：５３５—５４１． ［３３张庆林，赵静华，毕建进，等．蛇床予中３种逆转肿瘤细胞多 药耐药活性香豆素口］．中草药，２００３，３４（２）：１０４—１０６． ＺＨＡＮＧ Ｑｉｎｇ—ｌｉｎ，ＺＨＡＯ Ｊｉｎｇ—ｈｕａ，ＢＩ Ｊｉａｎ－ｊｉｎ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｒｅｅ ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ｆｒｏｍ ｓｅｅｄ ｏｆ ｃｎｉｄｉｕｍ ｍｏｎｎｉｅｒｉ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｕｈｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｅｖｅｒｓａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ ＴｒａｄｉｔｉｏｎａＩ ａｎｄ Ｈｅｒｂａｌ Ｄｒｕｇｓ，２００３，３４（２）：ｌＯ４—１０６．（Ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［４］ＩＴＯＩＧＡＷＡ Ｍ，ＩＴＯ Ｃ，ＴＡＮ Ｈ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｐｒｅ— ｖｅｎｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ，４－ｐｈｅｎｙｌｃｏｕｍａｒｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ ｉｎｏ— ｐｈｙｌｌｕｍ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒ，２００１，１６９（１）：１５—１９． ［５］ ＭＡＲＥｓｃ Ａ，ＳＵＰＵＲＡＮ Ｃ Ｔ．Ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇ ｈｙ— ｄｒｏｘｙｌ－－ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏ－－ｍｏｉｅｔｉｅｓ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｍｅｍ・－ ｂｒａｎｅ，ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ＩＸ ａｎｄ ＸｌＩ ｏｖｅｒ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｏｎｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０，２０（１５）：４５ｌ１—４５１４． ［６］ＤＯＵＧＬＡＳ Ｍ Ｙ，ＴＡＣＯＢ Ｊ Ｃ ｗ，ＫＥＮＮＥＴＨ Ｍ Ｄ．Ｇｒｅｅｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔ，ｌＪ，１．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍ— ｉｓｔｒｙ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，２０ｌ１，８８（３）：３１９—３２１． ［７３ ＭＡＲＩＡ Ｊ，ＡＬＹＳＳＡ Ｂ，ＪＡＭＥＳ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏ－ ｌｏｇｉｃａ１ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｐｒｅｎｙｌａｔｅｄ ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉ— ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１４，２４：４６５４—４６５８． ［８３ ＫＯＮＴｏＧＩｏＲＧｌｓ ｃ Ａ，ＨＡＤＪＩＰＡＶＩＯＵ—ＬＩＴＩＮＡ Ｄ Ｔ．Ｓｙｎ— ｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｏｕｍａｒｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ＥＪ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，４８：６４００—６４０８． ［９］ ＭＡＺＺＥＩ Ｍ，ＮＩＥＤＤＵ Ｅ，ＭＩＥＬＥ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｍａｎ— ｎｉｃｈ ｂａｓｅｓ ｏｆ ７－ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ［Ｊ］． Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１６（５）：２５９１—２６０５． ［ｉ０］ＬＩＵ Ｄ，ＣＡＩ Ｓ Ｌ，ＷＡＮＧ Ｑ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｌｏｎｇ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｃｙｌａｔｅｄ ｃｏｕｍａｒｉｎ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｅｓｔｅｒｓ ｗｉｔｈ ｌｉｐａｓｅ ａｓ ｃａｔａｌｙｓｔ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ， ２Ｏ１５，３１（４）：５３４—５３８． ［１１＇ｌ ＹＯＵ Ｌ Ｓ，ＡＮ Ｒ，ＷＡＮＧ Ｘ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｏｓｔ— ｈｏｌｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉ—ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｌ－Ｊ］． Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０，２０：７４２６— ７４２８． ［１２］ｗＵ ＺＨ，Ｆｕ ｘ Ｌ，ＷＡＮＧ Ｑ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓ— ｃｅｎｃｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃｏｕｍａｒｉｎ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｒｉａｚ０ｌｙｌｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ，２０１３，２９ （３）：４６０—４６５． ［１３］ＰＥＮＧ Ｙ Ｑ，ＤＯｕ Ｒ Ｌ，ｓ０ＮＧ Ｇ Ｈ，ｅｔａ１．Ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｌ— ｃｒａｔｅｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｆｆａｍｉｎｏｋｅｔｏｎｅｓ ｖｉａ ａｑｕｅｏｕｓ ｍａｎｎｉｃｈ ｒｅａｃ— ｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｍｉｃｒｏｗａｖｅ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｃｈｅｍｌｎｆｏｒｍ，２００６，３７（４）：２２４５—２２４７， ［１４＇ｌ ＸＵＡＮ Ｌ Ｎ，ＷＡＮＧ Ｐ，ＺＨＡＮＧ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｂｅｎｚｉｏｓｅｌｅｎａｚｏｌｏｎｅ ｄｅ— ｒｉｖａｔｉｖｅｓ［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，２４（２）：５４３ —５５２．