实验四 中药紫外光谱法鉴定

【实验原理】

紫外光谱法是利用中药中所含成分有不饱和结构及共轭双键结构，在紫外光的照射下，能引起物质内部原子、分子、运动状态的变化，消耗一部分能量后再透射出来，通过棱镜或光栅分成按波长顺序排列的吸收光谱，不同物质产生的紫外吸收光谱各不相同。由于不同中药所含不饱和成分的差异，即根据光谱图所提示的参数，如最大吸收波长、最小吸收波长、肩峰及吸收系数等作为鉴定的依据。紫外光谱法所依据的光谱是中药中被测成分吸收特定波长的光而产生的吸收光谱，可对中药进行定性、定量及结构分析。

【目的要求】

1.掌握可见-紫外光谱鉴定生药的基本理论、基本方法和基本技术。 2.掌握常用中药的紫外光谱鉴别特征。

【仪器、试剂、材料】

1.仪器：水浴锅，紫外分光光度计，容量瓶，分液漏斗，超声提取器，具塞试管，干燥器，电子天平，样品筛，碘量瓶，索氏提取器，粉碎机等。

2.试剂：石油醚，乙醚，无水乙醇，氨水，硫酸，甲醇，三氯甲烷，15%亚铁溶液，30%醋酸锌溶液，

3.材料：红花，五味子，黄芩，半夏，天麻，附子，香加皮，莪术。

【实验内容】

红花，五味子，黄芩，半夏，天麻，附子，香加皮，莪术的吸光度检测。

【实验方法】

1.红花 取本品粉末0.5g，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15min，静置，吸取上清夜，作为供试品溶液。另取红花对照品药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.五味子 取本品粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成对照品溶液（1mg/ml）。吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF2薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（2nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.黄芩 取本品粉末1g，加乙酸乙酯－甲醇（3 ：1）的混合溶液30ml，加热回流30min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取黄芩对照品药材1g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品、黄芩素对照品、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg、0.5mg、0.5mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各2μl及上述三种对照品溶液各1μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－甲酸（10∶3∶1∶2）为展开剂，预饱和30min，展开，取出，

晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱上中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显三个相同的暗色斑点。

4.半夏 紫外光谱 取本品粉末0.2g，加入乙醇20ml，放置12h，滤过，滤液供测试用。本品在212nm±3nm、220nm±2nm处有最大吸收。

5.天麻 取本品粉末0.5g，加70％甲醇5ml，超声处理30min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取天麻对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取天麻素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（9:1:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

6.附子 取黑顺片或白附片粗粉4 g，加乙醚30 ml与氨试液5 ml，振摇20 min，滤过。滤液置分液漏斗中，加0.25 mol/L硫酸液20 ml，振摇提取，分取酸液，照紫外-可见分光光度法（药典2005版 一部 附录ⅤA）测定，在231nm与274nm波长处有最大吸收。

7.香加皮 取香加皮粉末1 g，加乙醇10 ml，加热回流1 h，滤过，置25 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，量取1 ml，置20 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（药典2005版 一部 附录ⅤA）测定，在278nm波长处有最大吸收。

8.莪术 精密称取莪术中粉30 mg，加三氯甲烷10 ml，超声处理40 min或浸泡24 h，滤过，滤液转移至10 ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（药典2005版 一部 附录ⅤA）测定，在242nm波长处应有最大吸收，吸光度不得低于0.45。

【作 业】

1.简述紫外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2.总结常用中药的紫外光谱鉴定的主要特征。