化 工 进 展 ２０１５年第３４卷第６期 ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＩＮＤＵＳＴＲＹ ＡＮＤ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ ＰＲＯＧＲＥＳＳ ・１６３１・ 不同溶剂萃取小球藻油脂结构及组分差异 戴欣 ，杨雪薇 ，崔岩 ，王波 ，周连宁 ，成家杨 （ 北京大学深圳研究生院，环境与能源学院，深圳藻类新能源技术开发和应用工程实验室，广东深圳５１８０５５； 深圳市深港产学研环保工程技术股份有限公司，广东深圳５１８０００） 摘要：随着化石能源枯竭，微藻生物柴油日益成为研究热点，但对藻油的高效、高选择性萃取仍存在技术瓶颈。 该文选择不同沸点、极性和油水分配系数的有机溶剂萃取微藻藻油，并通过ＦＴＩＲ及ＧＣ—ＭＳ对微藻生物质结构 及藻油组分差异进行明晰。结果表明：乙腈和正庚烷对藻油的提取率最高，分别为２２．１０％和１８．７１％，且与温度 正相关，但是溶剂的极性和油水分离系数对其萃取率无显著影响，主要取决于所萃取产物的组分及结构；对微 藻生物质结构及藻油组分研究表明不同溶剂对烃类、醇类、酯类等不同物质的萃取有较强的选择性；二氯甲烷 和丙酮对烃类的萃取率高，为７２．７４％和６９．５０％，正庚烷对酯类的萃取率较高，为８０．４６％，乙腈对胺类的萃取 率较高，为５８．５２％，乙酸乙酯对醇类的萃取率较高，为２４．６５％。 关键词：微藻；生物柴油；溶剂萃取 中图分类号：Ｑ ８１９ 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００—６６１３（２０１５）０６—１６３１—０６ Ｄ０Ｉ：１０．１６０８５０．ｉｓｓｎ．１０００－６６１３．２０１５．０６．０２１ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ｃ Ｉｏｒｅｌｌａ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ＤＡＩＸｉｎｌ，ＹＡＮＧＸｕｅｗｅｉ ，ＣＵＩ Ｙａｎ ，ＷＡＮＧ Ｂｏ２，ＺＨＯＵＬｉａｎｎｉｎｇ２，ＣＨＥＮＧＪｉａｙａｎｇ （１Ｓｈｅｎｚｅｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ａｌｇａｌ Ｂｉｏｆｕｅｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｎａｄ Ｅｎｅｒｇｙ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ—Ｓｈｅｒｔｚｈｅｎ Ｇｒａｄｕａｔｅ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８０５５，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ； ＩＥＲ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８０００，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：、７ｌ，ｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ ｓｕｐｐｌｉｅｓ ｏｆ ｆｏｓｓｉｌ ｆｕｅｌｓ，ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ ｈａｖｅ ａｔｔｒａｃｔｅｄ ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ａｔｔｅｎｔｉｏｎ ａｓ ａ ｆｅｅｄｓｔｏｃｋ ｆｏｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ａ ｂｏｔｔｌｅｎｅｃｋ ｉｓｓｕｅ ｗｉｔｈ ａｌｇａｌ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｉｓ ｔｈｅ ｌａｃｋ ｏｆ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ，ｓｉｘ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｏｉｌｉｎｇ ｐｏｉｎｔｓ，ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｏｉｌ－ｗａｔｅｒ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｌｉｐｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ．Ｔｈｅ ｂｉｏｍａｓｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｖ Ｆ１１＿ＩＲ ａｎｄ ＧＣ—ＭＳ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ａｎｄ ｎ－ｈｅｐｔｎａｅ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ２２．１０％ａｎｄ １８．７１％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｗａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｅｘ仃ａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｍａｙ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ，ｗｈｉｌｅ ｐｏｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ｏｉｌ—ｗａｔｅｒ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＳＯｌｖｅｎｔ ｄｉｄ ｎｏｔ ａｆｆｅｃｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｄｉｒｅｃｔｌｙ￣Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ ｂｉｏｍａｓｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ 收稿日期：２０１４．１１－０２：修改稿日期：２０１４—１１－２４。 第一作者：戴欣（１９８８一），男，硕士研究生。Ｅ－ｍａｉｌ ｂｕｈｕｉｆｅｉ＠ｐｋｕ． 基金项目：国家海洋公益性行业科研专项（２０１３０５０２２）、中国博士后 ｅｄｕ．ｃｎ。联系人：成家杨，博士，教授，北京大学环境与能源学院 科学基金（２０１２Ｍ５２０１０６）、中国博士后科学基金第六批特别资助项 院长，美国北卡罗莱那州立大学终身教授。Ｅ—ｍａｉｌ ｃｈｅｎｇｊｙ＠ｐｋｕｓｚ． 目（２０１３Ｔ６００２５）及深圳市战略新兴产业发展专项 ｅｄｕ．ｃｎ。 （ＪＣＹＪ２０１３０３２９１７５９１９５２７，ＣＸＺＺ２０１２０６１８１１１１５０００９）项目。 化 工 进 展 ２０１５年第３４卷 ｈｉｇｈｌｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｌｉｋｅ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ，ａｌｃｏｈｏｌ，ａｎｄ ｅｓｔｅｒ． Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ａｎｄ ａｃｅｔｏｎｅ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｎ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ，ｗｉｔｈ ｕｐ ｔｏ ７２．７４％ ａｎｄ ６９．５０％， －ｈｅｐｔａｎｅ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｎ ｅｓｔｅｒ（８０．４６％１，ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｎ ａｍｉｎｅ（５８．５２％），ａｎｄ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｎ ａｌｃｏｈｏｌ（２４．６５％）． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ；ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ；ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ 随着自然资源过度开掘和持续消耗，能源枯竭 不需要昂贵的设备投入，但是弊端也很明显，有机 及环境污染问题日益严重，大力倡导低碳经济、开 溶剂萃取大多使用毒性较高的有机溶剂，例如以氯 发新型能源利用，已成为我国抢占国际竞争战略制 仿和甲醇为溶剂的Ｂｌｉｇｈ．Ｄｙｅｒ萃取法（Ｂ—Ｄ法）ＩｌｌＪ； 高点的重要举措［１１。微藻作为重要的生物质资源， 同时，现有的有机溶剂在萃取时针对性不强，萃取 利用生物炼制技术从微藻原料中获取生物柴油、乙 出来的粗油中杂质较多（包括胡萝卜素、叶绿素、 醇等液体燃料和其他高附加值产品，已成为替代化 甾类等），还需要进一步纯化；加之在有机溶剂萃取 石能源和实现生物能高值化的重要途径。与传统的 前需要将微藻干燥、萃取后需要将有机溶剂去除， 油料作物相比，微藻具有生长速度快、光合作用效 都需要消耗大量能源。即使目前已经发展出多种改 率高、不与农业争地等优势ｌ２】，而且可用海水或工 进措施（比如索氏提取、多种破壁辅助以及微波超 业废水进行大量繁殖。利用微藻生产生物柴油的工 声波法Ｉ１２】等），并没有在本质上改变其毒性大、污 艺过程包括富油藻种筛选、光照规模培养、细胞采 染严重、萃取针对性不强、能耗高的缺陷。 收、油脂提取和生物柴油转化等众多环节ｐＪ。其中， 针对目前研究的瓶颈问题，通过设计使用价格 效率低下、成本高昂的提取方法极大地了微藻 低廉、不同极性且毒性较低的有机溶剂萃取，明晰 生物柴油的大规模生产。目前微藻油脂的提取一般 不同溶剂萃取藻油效率、组分及结构差异，探索一 采用具有良好渗透性的溶剂进行提取，提取方法主 种高效、高选择性、毒性小、污染小的有机溶剂萃 要有有机溶剂萃取、超临界二氧化碳萃取【４］、亚临 取方法，为萃取目的产物优化溶剂选择及配比提供 界溶剂提取 、水酶法【６Ｊ和反复冻融乙醇提取法【７ｊ 重要理论支撑，为高效、定向、绿色的生产微藻生 等，其中有机溶剂萃取法因操作简便、成本投入低 物柴油提供技术支撑。 而获得比较广泛的应用，但常用的有机溶剂在萃取 时针对性不强，萃取出来的粗油中杂质较多（包括 １ 材料与方法 胡萝卜素、叶绿素、甾类等），进一步纯化增加了能 １．１实验材料与试剂 源的消耗。 微藻藻种为Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ，来自深圳市 实验证明多种极性溶剂、非极性溶剂和混合溶 藻类新能源重点工程实验室，实验室编号为ＰＫＵ 剂对微藻油脂都有很好的萃取效率，如苯、环己烷、 ＡＣ１７８。该藻种在前期实验室研究中表现出较好的 正己烷、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇等。杨 生物特性：生长速度快、密度高，并且有较高的含 勋等［８１使用氯仿、甲醇、水的混合溶剂（比例从５： 油量［１３］。所用培养基为ＢＧ一１ １，所含成分如下［１４Ｊ： １０：９到３０：１０：９）对Ｍｏｎｏｒａｐｈｉｄｉｕｍ ｓｐ．进行提 ＮａＮＯ３，１．５ｇ／Ｌ￣ＭｇＳＯ４‘７Ｈ２０，７５ｍｇ／Ｌ￣ＣａＣｌ２’２Ｈ２Ｏ， 取，辅以超声波破壁手段，最高可达２２．９５％的出油 ３６ｍｇ／Ｌ；柠檬酸，６ｍｇ／Ｌ；Ｈ３ＢＯ３，２．８６ｍｇ／Ｌ； 率；孙协军等［９１使用微波萃取的方法，结果显示多 ＭｎＣ１２‘４Ｈ２０，１．８ｌｍｇ／Ｌ；ＺｎＳＯ４‘７Ｈ２０，２２２ Ｌ； 种有机溶剂均有较好的萃取效率（石油醚１２．４３％， Ｎａ２ＭｏＯ４‘２Ｈ２０，３９０￣ｔｇ／Ｌ；ＣｕＳＯ４‘５Ｈ２０，７９ｇｇ／Ｌ： 正己烷１３．８９％，丙酮ｌ４．８２％，三氧六环１３．１８％）， Ｃｏ（ＮＯ３）２・６Ｈ２Ｏ，４９．４ ／Ｌ；柠檬酸铁铵，６ｍｇ／Ｌ； 验证了不同溶剂对微藻的油脂提取存在差异； Ｎａ２ＣＯ３，２０ｍｇ／Ｌ；ＫＨ２ＰＯ４，３０．５ｒｎｇ／Ｌ。在琼脂培 Ａｎｔｏｎｉｏ Ｒａｍｉｒｅｚ Ｆａｊａｒｄｏ等【Ｊ 使用９６％（体积比） 养基上保存的藻种放入恒温光照培养箱（ＭＧＣ． 乙醇对Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ ｔｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍ提取，并使用气 ４５０ＢＰ ２，一恒，上海右一仪器有限公司）中光照 相色谱 质谱联用仪（ＧＣ．ＭＳ）分析萃取产物，含量 活化，在无菌环境下将藻种接种于ＢＧ．１１的培养液 最多的为二十碳五烯酸（ＥＰＡ），达到细胞干重的 中，在光照摇床（ＴＳ２１１２Ｂ，上海秣马）中恒温光 １．４１％。 照培养。然后将藻液倒入６０Ｌ圆柱形透明光反应器 有机溶剂萃取操作简单、萃取效率很高，而且 中室外培养。通过超高速管式离心机（ＧＱ．４５Ｎ，上 第６期 戴欣等：不同溶剂萃取小球藻油脂结构及组分差异 海金舒电机设备有限公司）在２２０００ｒ／ｍｉｎ转速下离 心收获微藻藻浆，藻浆在台式冷冻干燥机（型号为 Ｆｒｅｅｚｏｎｅ ２．５，ＬＡＢＣＯＮＣＯ）中冻干２４ｈ获得干藻， 用研钵研磨成均匀的粉末，以备后续实验使用。 为探究微藻油脂提取的机理，本研究采用不同 沸点、极性和油水分离系数（１ｇＰ）的６种溶剂分别 进行微藻油脂提取，所使用溶剂包括二氯甲烷（沸 点３９．８℃，极性３．４，１ｇ尸 １．０１）、丙酮（沸点５６．５℃， 极性５．４，ｌｇＰ＝一０．２４）、正己烷（沸点６８．７℃，极性 ０．０６，ｌ ３．８）、乙酸乙酯（沸点７７．２℃，极性４．０， ｌｇ尸 ０．２９）、乙腈（沸点８２℃，极性６．２，ｌｅｆ＝ｏ．１７）、 正庚烷（沸点８６℃，极性０．２，ｌｇＰ＝３．４２），所使用 溶剂均为分析纯，购于天津市致远化学试剂有限公 司。这６种溶剂属性差异大，具有较高的代表性。 此外，这６种溶剂的毒性都相对较低，根据中 华人民共和国卫生部《化学品毒性鉴定技术规 范》【１ ，所使用溶剂的毒性为：二氯甲烷（低毒）、 丙酮（微毒）、正己烷（微毒）、乙酸乙酯（微毒）、 乙腈（低毒）、正庚烷（中毒）：而且所选用溶剂价 格低廉，市场价格均在５０００￣１５０００元／ｔ之间，分 别约为：二氯甲烷（４０００元／ｔ）、丙酮（７０００元／ｔ）、 正己烷（８０００元／ｔ）、乙酸乙酯（５０００元／ｔ）、乙腈 （１５０００元／ｔ）、正庚烷（１３０００元／ｔ），这为以后的 工业化生产打好了基础。 １．２微藻藻油的提取及测定 藻油的提取采用２５０ｍＬ索氏提取器，磁力搅拌 电热套（ＺＮＣＬ—ＤＬ智能多联，河南爱博特科技发 展有限公司），所用滤纸为定性滤纸，为消除滤纸可 能引入的误差，将滤纸在６０℃下，通过Ｂ—Ｄ法使用 甲醇：氯仿＝２：１的混合溶剂抽提２４ｈ，以去除滤 纸中的有机残余物，抽提后的滤纸放入６５℃的烘箱 烘干至恒重，于干燥器中保存待用。 实验过程中，称取３份平行各１５０．０ｍｇ干燥藻 粉，分别用滤纸包裹，并将滤纸包放入干燥的 ２５０ｍＬ索氏抽提器的提取管中，并在提取瓶中加入 １８０ｍＬ有机溶剂（二氯甲烷、丙酮、正己烷、乙酸 乙酯、乙腈、正庚烷），磁力搅拌下缓慢加热升温至 溶剂沸腾，使用水浴冷凝器回流使溶剂进入提取管 中，在提取管中溶剂装满后通过虹吸管回流至提取 瓶中，经过持续反复萃取４８ｈ，至萃取管中萃取液 呈无色透明，以确保萃取完全。此时索氏提取器的 提取管中盛装微藻包部分为无色透明，萃取产物与 溶剂呈深绿色，处于提取瓶瓶中。 萃取前干燥滤纸的质量为ｍ ，干藻粉样品的质 量为ｍ２。萃取完成后，将滤纸包放入６５℃烘箱中 烘干２４ｈ，质量为ｍ３。微藻油脂的萃取率计算公式 如式（１）。 萃取率：竺！＋＿ 二 ×１００％ （１） ２ １．３微藻细胞结构分析 采用傅里叶红外光谱仪（ＦＴ－ＩＲ）（ＩＲ Ｐｒｅｓｔｉｇｅ一２１，ＳＨＩＭＡＤＺＵ）对微藻萃取前后的结构 差异进行分析。样品制备方法如下：称取经过预处 理的微藻藻粉和不同溶剂提取后的的干燥藻粉各 ２．Ｏｍｇ，分别加入到６０．Ｏｍｇ纯度为９９．９９７％的溴化 钾（ｍｅｔａｌｓ ｂａｓｉｓ，Ａｌａｄｄｉｎ）中，充分研磨均匀后压 片制成样品，使用ＦＴ－ＩＲ仪扫描分析。扫描２０次， 分辨率为４ｃｍ－ ，波数范围为４００￣４０００ｃｍ－ ，扫描 结果使用Ｏｍｎｉｃ ８．０软件进行分析。 １．４微藻藻油组分分析 采用气相色谱．质谱联用仪ＧＣ．ＭＳ（６８９０Ｎ， Ａｇｉｌｅｎｔ）对提取物的结构组分和含量进行分析。样 品制备方法如下：将萃取后得到的萃取液在旋转蒸 发仪（Ｒ、厂１Ｏ，ＩＫＡ）内，５０℃减压蒸馏，得深绿色 油状液体，加入１０ｍＬ色谱纯正己烷（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ）溶解样品用于色谱分析。分析条件为： 毛细管色谱柱（ＨＰ一５ＭＳ ５％Ｐｈｅｎｙｌ Ｍｅｔｈｙｌ Ｓｉｌｏｘａ， ３０．０ｍｘ２５０．ＯＯｐｍｘＯ．２５￣ｔｍ，Ａｇｉｌｅｎｔ），进样口温度 ２８０℃，检测器温度２５０℃，初始柱温８０℃，３ｒａｉｎ 后，柱温以５℃／ｍｉｎ的速度上升至３１５℃，保持 １２ｍｉｎ，进样１止不分流，载气为氦气，流量为 １．ＯｍＬ／ｍｉｎ。所得质谱图使用ＭＳＤ Ｃｈｅｍ—ｓｔａｆｆｏｎ和 ＮＩＳＴｍｓ ｓｅａｒｃｈ ２．０软件进行分析。 ２结果与分析 ２．１不同溶剂对萃取率的影响 通过实验分别得到６种溶剂的萃取率，如图１ 图１ 不同溶剂对油脂萃取的影响 ・１６３４・ 化 工 所示，其中萃取效率最高的是乙腈，达到了２２．１０％， 其次是正庚烷（１８．７１％）。另外３种溶剂的萃取率 在ｌ５％左右，分别是丙酮（１５．８５％）、二氯甲烷 （１５．７２％）和正己烷（１４．５４％），萃取率最低的是 乙酸乙酯（１２．４０％）。乙腈和正庚烷的沸点是几种 溶剂中最高的，分别为８２℃和８６℃，因此使用索氏 提取法时，温度也最高为８２℃和８６℃，实验结果显 示其萃取效率也较其他几种溶剂更优，说明萃取率 跟萃取温度有直接关系，温度越高则提取效率越高， 这也与其他研究小组的结果吻合，如邓祥元等［１６１对 超声波破壁后的聚球藻索氏提取，随着温度从８Ｏ。Ｃ 提升到９５℃，萃取效率提高了一倍。通过对比可以 发现，极性和油水分配系数对溶剂的绝对萃取率并 没有显著的相关性，这可能与微藻细胞内具体的藻 油成分、萃取产物结构有关 ７］ｏ ２．２不同溶剂对微藻生物质结构影响 萃取前后的微藻ＦＴ－ＩＲ分析结果如图２所示。 根据表１所列的不同波段与官能团的对应关系： ３４００￣３３００ｃｍ－ 属于醇类的特征吸收峰，乙酸乙酯 萃取后的藻粉生物质在此处吸收明显弱于其他样 品，表明乙酸乙酯对醇类的萃取能力最强；２９７０￣ ２９６０ｃｍ～、２９３０＂－－２９２０ｃｍ－ 、２８７５￣２８５０ｃｍ－ 对应 的是烃基的特征吸收，烃类、脂肪醇、脂肪酸都有 此特征吸收峰，结果表明乙腈萃取过后的藻粉生物 质在此处的吸收峰无明显变化，而其他样品均有不 同程度的减弱，可以推断乙腈对烃类、脂肪醇、脂 肪酸等物质的萃取能力不强；１７４５￣１７３４ｃｍ－ 对应 的是酯基的特征吸收峰，可以看到萃取前的藻粉生 物质在此处有一吸收峰，萃取后的样品中，正己烷、 乙酸乙酯、正庚烷萃取后的藻粉生物质在此处无明 显吸收，说明这三种溶剂对酯类的萃取能力较强； １５４５￣１５４０ｃｍ－ 为氨基、亚氨基的特征吸收，分析 比较表明正己烷、乙腈萃取后的藻粉生物质在此处 的相对吸收要更弱，说明正己烷和乙腈对胺类的萃 取能力相对其他４种溶剂更强。 综上所述，不同溶剂对不同结构的物质显示了 不同的萃取能力：乙酸乙酯对醇类的萃取能力更强； 正己烷、乙腈对胺类的萃取能力更强；所选取的溶 剂中大部分都对烃类、酯类有不错的萃取效果。 ２Ｉ３不同溶剂萃取物的组分分析 使用６种溶剂萃取所得组分的ＧＣ．ＭＳ结果如 表２、表３所示。二氯甲烷主要的萃取产物是烃类 （７２．７４％），其次是酯类（１１．０２％），而且所提取的 酯类为单一种类（ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ，ｄｉｉｓｏｏｃｔｙｌ ｅｓｔｅｒ邻 进 展 ２０１５年第３４卷 图２溶剂萃取前后微藻生物质ＦＴ－ＩＲ谱图分析 （Ｏ～６依次为：萃取前、二氯甲烷萃取后、丙酮萃取后、正己烷萃取后、 乙酸乙酯萃取后、乙腈萃取后、正庚烷萃取后） 表１不同波段的吸收峰所对应的官能团结构与组分 注：ｖ为对称伸缩振动；Ｖａｓ为不对称伸缩振动； 为弯曲振动。 苯二甲酸二异辛酯）；丙酮的主要萃取产物也是烃类 （６９．５０％），所提取的烃类中２，６，６．三甲基．二环 ［３．１．１］庚烷含量达到３８．５３％，提取的粗油组分中第 二大物质为酯类（２０．４１％）；正己烷对烃类 （２９．１ｌ％）、酯类（３７．１９％）、胺类（２７．７４％）都有 不错的萃取效果，值得注意的是，正己烷所萃取的 酯类组分较单一，均为ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ，ｄｉｉｓｏｏｃｔｙｌ ｅｓｔｅｒ （邻苯二甲酸二异辛酯）；乙酸乙酯萃取的组分中主 要是酯类（４１．４４％）、烃类（２６．９９％）￣ＦＩ醇类（２４．６５％） 也占多数，且乙酸乙酯萃取的酯类中邻苯二甲酸异 丁基苯酯占据了３７．３４％；乙腈提取的产物中含氮的 胺类（５８．５５％）占据大多数，且几乎全部为Ⅳ＿甲 基一１一十八胺，其次为烃类（３４－３６％）；正庚烷的萃 取产物中主要组分是酯类（８０．４６％），而且全部为 邻苯二甲酸二异辛酯，此外还有少量烃类（Ｉ１．１４％） 及胺类（７．９９％）。 通过对比发现，萃取烃类能力最强的溶剂是二 氯甲烷和丙酮，分别达到了７２．７４％和６９．５０％；对 醇类提取能力最强的是乙酸乙酯，萃取率可达 第６期 戴欣等：不同溶剂萃取小球藻油脂结构及组分差异 ・１６３５・ 表２不同溶剂萃取所得物的组分含量 表３不同溶剂主要萃取物的组分组成 ２４．６５％，而其他溶剂对醇类的提取能力普遍较低； 对酯类提取能力最强的正庚烷，达到了８０．４６％，且 主要是单一成分的酯类（邻苯二甲酸二异辛酯），正 己烷和乙酸乙酯提取酯类的的能力其次，且所提取 的酯类组分也较为单一；羧酸或者氨基酸由于其极 性较大以及含量较少，各种溶剂都很难将它萃取出 来，含量最高的正己烷中也仅占到所萃取组分的 ５．８０％；对胺类物质的萃取能力最强的是乙腈，为 ５８．５２％，正己烷、二氯甲烷和正庚烷也能萃取部分 胺类，含量分别为２７．７４％、８．９４％￣ｔｌ ７．９９％，其余 两种溶剂的萃取产物中没有检测到胺类物质。 综合以上分析结果显示，温度升高对微藻的萃 取有正向的作用。不同溶剂萃取藻油组分的选择性 有较大差异，可以根据萃取目的选择所用溶剂。如 果要提高萃取烃类物质萃取率可以选择二氯甲烷和 丙酮，要提高脂类物质萃取率可以选择正庚烷，要 提高胺类物质萃取率可以选择乙腈，要提高醇类物 质萃取率可以选择乙酸乙酯。 ３ 结 论 通过对比不同溶剂的萃取率可以得出如下结论。 萃取温度更高的乙腈和庚烷有更好的萃取效果，而 极性和油水分离系数对微藻的绝对萃取率并没有直 接的影响，这可能更多的与微藻细胞内具体藻油成 分、萃取产物有关。通过ＦＴ－ＩＲ分析可以发现，不 同溶剂对烃类、醇类、酯类等不同物质的萃取有很 强的选择性，有些溶剂（乙酸乙酯）对醇类的提取 能力更强，有些溶剂（正己烷、乙腈）对胺类的萃 取能力更强。通过ＧＣ—ＭＳ进一步分析表明：烃类 更容易被二氯甲烷和丙酮萃取出来，酯类更容易被 正庚烷萃取，胺类更容易被乙腈萃取出来，醇类更 容易被乙酸乙酯萃取出来。从经济性与安全性分析， 丙酮、正己烷、乙酸乙酯因其较低的价格与毒性， 更适合用于大规模的工业化生产。 以上不同溶剂对微藻萃取的高度选择是突破性 和原创性的，对指导微藻生物柴油生产有很大的现 实意义。通过本研究，明确了不同溶剂对不同微藻 组分的萃取差异，指明了溶剂萃取微藻油脂的方向， 为获取特定成分的萃取产物的溶剂选择和配比奠定 了重要的理论基础。 参考文献 ［１】Ｙａｎｇ Ｘ，Ｄａｉ Ｘ，Ｇｕｏ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｐｅｔｒｏｄｉｅｓｅｌ—ｌｉｋｅ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ａｌｋａｎｅ ａｎｄ ｆａｔｔｙ ａｌｃｏｈｏｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏａｌｇａ Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，１３６：１２６・１３０． ［２】 陈国，赵瑶，苏鹏飞，等．研究开发微藻产生物柴油研究进展［Ｊ】．化 工进展，２０１１，３０（１０）：２１８６—２１９３． ［３】Ｖｉｊａｙａｒａｇｈａｖａｉｌ Ｋ，Ｈｅｍａｎａｔｈａｎ Ｋ．Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｒｆｅｓｈｗａｔｅｒ ａｌｇａｅ［Ｊ］．Ｅｎｅｒｇｙ＆Ｆｕｅｌｓ，２００９，２３（１ １）：５４４８・５４５３． 『４１ Ｈａｌｉｍ Ｒ，Ｇｌａｄｍａｎ Ｂ，Ｄａｎｑｕａｈ Ｍ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｏｉｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ ｆｏｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ叨．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２０１１，１０２（１）：１７８．１８５． ［５】Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ－Ｍｅｉｚｏｓｏ Ｉ，Ｊａｉｍｅ Ｌ，Ｓａｎｔｏｙｏ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｂｅｒｉｔｉｃａｌ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｒｏｍ Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｅｕｓ ｐｌｕｖｉａｌｉｓ ｍｉｃｒｏａｌｇａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＡｎａｌｙｓｉｓ，２０１０，５１（２）：４５６－４６３． ［６】Ｌｉ Ｓ，Ｈａｎ Ｄ，Ｒｏｗ Ｋ Ｈ．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｓｏｍｅ ｍａｒｉｎｅ ａｌｇａｅ ｂｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ［Ｊ］．ＫｏｒｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０１２，２９ （５）：６５０－６５６． ［７】 王雪青，苗惠，翟燕．微藻细胞破碎方法的研究［Ｊ］．天津科技大学 学报，２００７，２２（１）：２１—２５． 【８］ 杨勋，刘平怀，郝宗娣，等．富油微藻Ｍｏｎｏｒａｐｈｉｄｉｕｍ ｓｐ．的分离 及其油脂提取工艺研究［Ｊ】．安徽农业科学，２０１１，３９（３２）： １９９８８—１９９９０． 【９］ 孙协军，王珍，李秀霞．盐藻油微波辅助提取工艺优化［Ｊ】．食品科 （下转第１６５１页） 第６期 王豪等：微波水热法制备含磷Ｗ／Ａ１２Ｏ３催化剂及其加氢脱氮性能 Ｔｏｄａｙ，２００３，８６（１－４）：１７３—１８９． ・１６５１・ ｖｉａ ａｎ ｏｘａｌｉｃ ａｃｉｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］． ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｔａｌｙｓｉｓ，２００８，２６０（１）：１１９－１２７． Ｈ，Ｆａｎ Ｙ，Ｓｈｉ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｇｈｌｙ ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ ＮｉＷ／７一Ａ１２０３ ｃａｔａｌｙｓｔ ［９】 Ｗａｎｇ ［１８】唐清华．微波辐射下ＰＥＴ水解过程中分子量的变化与解聚机理研 究［Ｄ】．温州：温州大学，２０１２． ［１９］Ａｔａｎａｓｏｖａ Ｐ，Ｔａｂａｋｏｖａ Ｔ，Ｖｌａｄｏｖ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｎｄ ａｍｅｔｈｏｄ ｏｆｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｈｅ ｔｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｈｅ ｔｏｘｉｄｅ ｏｒｍ ｆｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ・－ｎｉｃｋｅｌ・・ｔｕｎｇｓｔｅｎ／ａｌｕｍｉｎａ ｈｙｄｒｏｔｒｅａｔｉｎｇ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌ ｄｅｐｏｓｉｉｔｏｎ ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｃａｔａｌｙｓｉｓ Ｔｏｄａｙ， ２００７，１２５（３－４）：１４９．１５４． ｎｇＨ，ＷｕＹ，ＬｉｕＺＷ，ｅｔａ１．ＤｅｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆＷＯ３ ｏｎＡ１２０３ ｖｉａ ａ 【ｌＯ】 Ｗａｍｉｃｒｏｗａｖｅ ｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ ｃａｔａｌｙｓｔｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＣａｔａｌｙｓｉｓ ：Ｇｅｎｅｒａｌ，１９９７，１６１（１－２）：１０５—１ｌ９． Ｗ／ＡＩ２０３ ｈｙｄｒｏｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ｃａｔａｌｙｓｔ［Ｊ］．Ｆ“Ｐ，，２０１４，１３６：１８５—１９３． Ｒａｇｈｕｖｅｅｒ Ｃ Ｓ，Ｔｈｙｂａｕｔ Ｊ Ｗ，Ｄｅ Ｂｒｕｙｃｋｅｒ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｐｙｒｉｄｉｎｅ ｈｙｄｒｏｄｅｎｉｔｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｏｖｅｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ＮｉＭｏ／７－Ａ１２０３ ｃａｔａｌｙｓｔ： ［２Ｏ］靳明程，段爱军，兰玲，等．磷改性的含ＵＳＬ沸石催化剂在柴油 加氢精制中的应用［Ｊ］．工业催化，２０１０（１０）：４２．４９． 【２１】Ｙａｎｇ Ｘ，Ｇａｏ Ｒ，Ｄａｉ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆｔｕｎｇｓｔｅｎ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ ｏｎ ｈｅ ｔｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ＷＯ３／ＳＢＡ一１５ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｓ ｐｈａｓｅ ｋｉｎｅｔｉｃ ｍｏｄｅｌｓ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ ｐｈａｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］． ｅ，，２０１４，１２５：２０６．２１８． ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｅｎｅ ｔｏ ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＰｈｙｓｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｃ，２００８，１１２（１０）：３８１９—３８２６． ［１２】Ａｎａｂｔａｗｉ Ｊ Ａ，Ｍａｎｎ Ｒ Ｓ，Ｋｈｕｌｂｅ Ｋ Ｃ．Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｏｆｐｙｒｉｄｉｎｅ ｏｖｅｒ Ｎｉ—Ｗ／ＡＩ２０３ ｃａｔａｌｙｓｔ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｆＣａｔｏａｌｙｓｉｓ，１９８０，６３（２）： ４５６－４６２． 【２２】Ｃｒｕｚ Ｊ，Ａｖａｌｏｓ Ｂｏｒｊａ Ｍ，Ｌ６ｐｅｚ Ｃｏｒｄｅｒｏ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆｐＨ ｏｆ ｈｅｔ ｉｍｐｒｅｇｎａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｉｎ Ｗ／Ａ１２０３ Ｍ］．上海：华东理工大学出版 【ｌ３】 姜传海．ｘ射线衍射技术及其应用［社，２０１０：２１０—２１３． ｈｙｄｒｏｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｔａｌｙｓｔｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＣａｔａｌｙｓｉｓＡ：Ｇｅｎｅｒａｌ，２００２，２２４ （１）：９７．１ｌ０． 【１ ４】 吴雁，王豪，钟婷，等．水滑石负载碳酸钾的微波法制备及其催 ［２３］ＤｕａｎＡ，ＬｉＲ，ＪｉａｎｇＧ，ｅｔａ１．Ｈｙｄｒ０ｄｅｓｕｌｐｈｕｒｉｚａｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆ ＮｉＷ／ＴｉＯ２－Ａ１２０３ ｃａｔａｌｙｓｔ ｆｏｒ ｕｌｔｒａ ｃｌｅａｎ ｄｉｅｓｅｌ［Ｊ］．Ｃａｔａｌｙｓｉｓ Ｔｏｄａｙ， ２００９，１４０（３．４）：１８７—１９１． 化酯化原油脱酸性能［Ｊ］．燃料化学学报，２０１１（１１）：８３１－８３７． ｅｍｏｎｅｓｉ Ａ，Ｂｅｒｓａｎｉ Ｄ，Ｌｏｔｔｉｃｉ Ｐ，ｅｔ ａ１．ＷＯ３ ｔｈｉｎ ｉｌｆｍｓ ｂｙ ｓｏｌ—ｇｅｌ 【ｌ５】 Ｃｒｆｏｒ ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｒｏｍｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＮｏｎ－Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ Ｓｏｌｉｄｓ， ２Ｏ０４，３４５／３４６：５００．５０４． ［２４］Ｙａｏ Ｓ，Ｚｈｅｎｇ Ｙ，Ｎｇ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆｎａｎｏｂｅｔａ ｚｅｏｌｉｔｅ ｉｎ ＮｉＭｏ ｈｙｄｒｏｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｔａｌｙｓｔｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃａｔａｌｙｓｉｓ Ａ：Ｇｅｎｅｒａｌ，２０１２， ４３５．４３６：６１．６７． ｎＹ，Ｘｉａｏ Ｈ，Ｓｈｉ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ—ａｓｓｉｓｔｅｄｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌ ｍｅｔｈｏｄ ［１６］ Ｆａｏｒ ｐｒｅｆｐａｒｉｎｇ ＮｉＷ／ＵＳＹ－ＡＩ２０３ ｕｌｔｒａｄｅｅｐ ｈｙｄｒｏｄｅｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ ［２５］Ｘｉｎｇ Ｃ，Ｃｈａｉａ Ｙ，Ｆａｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｄｅｓｌｆｕｒｉｕｚａｔｎｎ ａｎｄ ｈｙｄｉｒｏｄｅｎｉｔｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｃａｔａｌｙｓｔｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｔａｌｙｓｉｓ，２０１１，２７９（１）：２７—３５． ｃｏｓｉａ Ｄ，Ｐｒｉｍ Ｒ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆｆｌｕｏｒｉｎｅ，ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｎｄ ａ［１７】 Ｓｕｎ Ｍ，Ｎｉｐｒｅｓｕｌｉｆｄｅｄ ＮｉＭｏ／Ａ１２０３ ｃａｔａｌｙｓｔ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＦｕｅｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｙ ａｎｄ ｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３９（５）：３５５—３６０． ｃｈｅｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ ｏｎ ｈｙｄｒｏｔｒｅａｔｉｎｇ ｃａｔａｌｙｓｔｓ ａｎｄ ｃａｔａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｔａｌｙｓ妇 ，ｔ 《 、 《 、《 《 《 、－《！ 、 《 《 、《 、 《 汐、 《 汐、－Ｅ２ ， ２ 、《 《 、 、罐 （上接第１６３５页） 学，２０ｌ２，３３（１０）：８７．９１． Ｃｈｅｍｉｓｔｓ Ｓｏｃｉｅ ，２００３，８０（Ｉ１）：１０６３—１０６７． ［１０】 ＦａｊａｒｄｏＡＲ，ＣｅｒｄｆｉｎＬＥ，ＭｅｄｉｎａＡＲ，ｅｔａ１．Ｌｉｐｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍ 【１８】Ｄｅａｎ Ａ Ｐ，Ｍａｒｔｉｎ Ｍ Ｃ，Ｓｉｇｅｅ Ｄ Ｃ．Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｄｏｍｉｎａｎｔ ｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ａ ｅｕｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｋｅ ｕｓｉｎｇ ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ－ｂａｓｅｄ ｈｅ ｍｉｔｃｒｏａｌｇａ Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ ｔｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＬｉｐｉｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７・１０９（２）：１２０—１２６． ｇｈ Ｅ Ｇ，Ｄｙｅｒ Ｗ Ｊ．Ａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｌｉｐｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ 【１１］ ＢｌｉＦｏｕｒｉｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｆｒａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．Ｐｈｙｃｏｌｏｇｉａ，２００７・４６（２）： １５１—１５９． ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙ ａｎｄ ｒＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ｌ９５９，３７（８）：９ｌ１．９ｌ７． ｒｇ Ｍ，Ｃｏｈｅｎ Ｍ，Ｂｅｎ－Ａｍｏｔｚ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｎ—ｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ 【ｌ２】 Ｋｏｂｅｄｉｒｅｃｔｌｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ ｂｉｏｍａｓｓ ｏｆ Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｂｙ ［１９】ＨｅｒａｎｄＰ，ＷｏｏｄＢＲ，ＴｏｂｉｎＭ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｍ￣ｐｉｎｇ ｏｆｎｕｔｒｉｅｎｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ａｌｇａｌ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ ｉｎｆｒａｒｅｄ ｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ，２００５，２４９（２）： ２１９—２２５． ｉｃｒｏｗａｖｅ ａｍｎｄ ｕｌｒｔｓｏｕａｎｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２０１１，１０２（５）：４２６５－４２６９． ｏｃｈ Ｍ，Ｓｈａｏ Ｃ，Ｌｉｕ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｉｄｓ ａｎｄ ｒｅｓｕｌｔａｎｔ 【１３］ ＤａｒＦＡＭＥ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ ｆｒｏｍ ｃｏａｓｔａｌ ｗａｔｒｓｅ ｏｆ Ｐｅａｒｌ Ｒｉｖｅｒ ［２０］Ｂｅｎｎｉｎｇ Ｌ Ｇ，Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｖ Ｒ，Ｙｅｅ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｉｌｉｃｉｉｃａｔｆｉｏｎ：Ａｎ ｉｎｆｒｒｅａｄ ｍｉｃｒｏ—ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ ｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ ＣｏｓｍｏｃｈｉｍｉｃａＡｃｔａ，２００４，６８（４）： ７４３．７５７． Ｄｅｌａ［ｔＪ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，１４６：１９２—１９９． ｅｎ Ｂ Ｄ，Ｗｉｌｌｉｓ Ｒ Ｍ，Ｓｅｅｆｅｌｄｔ Ｌ Ｃ．Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ 【１４］ Ｗａｈｌｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｌｉｐｉｄｓ ｆｒｏｍ ［２１］Ｖａｒｄｙ Ｓ，Ｕｗｉｎｓ Ｐ．Ｆｏｕｒｉｒ ｅｒｔｎｓｆａｏｒｍ ｉｎｆｒｒｅｄ ａｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｓ ａ ｔｏｏｌ ｔｏ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ ａｎｄ Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍａ［Ｊ］． ＡｐｐｌｉｅｄＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，２００２，５６（１２）：１５４５—１５４８． ｉｃｒｏａｍｌｇａｅ，ｃｙａｎｏｂａｃｔｒｉｅａ，ａｎｄ ｗｉｌｄ ｍｉｘｅｄ－ｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，１０２（３）：２７２４—２７３０． ［２２】Ｃｈｉｏｖｉｔｔｉ Ａ，Ｈｅｒａｕｄ Ｐ，Ｄｕｇｄａｌｅ Ｔ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｖａｌｅｎｔ ｃａｔｉｏｎｓ ｓｔａｂｉｌｉｚｅ ｔｈｅ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｌｆａｔｅｄ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｈｅ ａｄｈｅｓｉｔｖｅ ｎａｎｏｆｌｂｅｒｓ Ｓ】．北京：卫生部卫生法制与 【ｌ５】 卫生部．化学品毒性鉴定技术规范［监督司，２００５． ［１６】 邓祥元，高坤，景吉，等．索氏法提取微藻油脂的工艺优化研究［Ｊ］． ｏｆｔｈｅｂｉｏｆｏｕｌｉｎｇｄｉａｔｏｍＴｏｘａｒｉｕｍｕｎｄｕｌａｔｕｍ［Ｊ］．ＳｏｆｔＭａｔｔｅｒ．，２００８， ４（４）：８ｌＩ－８２０． ［２３】ＧｉｏｒｄａｎｏＭ，ＫａｎｓｉｚＭ，ＨｅｒａｕｄＰ，ｅｔａ１．Ｆｏｕｒｉｅｒｔｒｎｓｆａｏｒｍｉｎｆｉ＇ａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｏｏｌ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌｒ ａｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｒ ａｐｏｏｌｓ ｉｎ ｈｅ ｍａｒｔｉｎｅ ｍｉｃｒｏａｌｇａ Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ ｍｕｅｌｌｅｒｉｉ 安徽农业科学，２０１２，４０（２２）：１１３７０，１１３８５． ｅａｕ Ｒ Ａ，Ｐｏｗｅｌｌ Ｍ Ｊ，Ｓｉｎｇｈ Ｖ．Ｐｒｅｓｓｕｒｉｚｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ 【ｌ７】 Ｍｏｒｐｏｌｒ ａａｎｄ ｎｏｎｐｏｌｒ ｌａｉｐｉｄｓ ｉｎ ｃｏｒｎ ａｎｄ ｏａｔｓ ｗｉｈ ｈｅｘａｔｎｅ，ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ （Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｅ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００１，３７（２）： ２７１ ２７９． ｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ，ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｏｉｌ
