中华Ｉ临床医师杂志ｆ电子版）２０１４年３月第８卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ ｅ１ ｄａｎｓ伯ｌｅｃｔｒｏｎ￣ｃ Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ｍａｒｃｈ １．２０１４．ｖｏＬ８．Ｎｏ ・临床论著・ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ２ １参与调控膀胱癌细胞增殖 及多柔比星敏感性的研究 邓夏珩李鹏超陶俊刘康秦超居小兵李杰 吕强殷长军 【摘要】 目的能。方法膀胱移行细胞癌是一种常见的恶性肿瘤，且复发率很高。由于ｍｉｃｒｏＲＮＡ．２１ （ｍｉＲ－２１）在多种类型肿瘤中参与肿瘤发生及耐药，故通过此次研究探索其在膀胱移行细胞癌中的功 肿瘤组织及癌旁正常组织中的ｍｉＲ．２１及目的蛋白ＰＴＥＮ表达水平分别采用实时ｑＲＴ－ＰＣＲ 与癌旁正常膀胱组织相比， 及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法进行测量。采用ＭＴＴ法评估ｍｉＲ．２１对于癌细胞增殖以及多柔比星敏感性的影 响。采用流式细胞术探究Ｔ２４细胞系中多柔比星引起的细胞凋亡。结果ｍｉＲ－２１在膀胱肿瘤组织中的表达水平显著上调，而ＰＴＥＮ蛋白表达低水平。活体内研究发现ｍｉＲ－２１ 与ＰＴＥＮ表达呈负相关。ｍｉＲ．２１过表达可显著促进Ｔ２４细胞系的细胞增殖与多柔比星敏感性。 结论ｍｉＲ－２１可能是膀胱移行细胞癌的致癌因素，有望成为膀胱移行细胞癌的治疗新靶点。 【关键词】 膀胱肿瘤； 癌，移行细胞； 微ＲＮＡ－２１；ＰＴＥＮ磷酸水解酶； 多柔比星； 敏感性 ｍｉｅｒｏＲＮＡ－２１ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｉｎ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ＤｅｎｇＸｉａｈｅｎｇ，ＬｉＰｅｎｇｃｈａｏ，ＴａｏＪｕｎ，ＬｉｕＫａｎｇ，Ｑ Ｃｈａｏ，ＪｕＸｉａｏｂｉｎｇ，ＬｉＪｉｅ，Ｌｙｕ Ｑｉａｎｇ，Ｙｉｎ Ｃｈａｎ￣ｄｕｎ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ， ｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＮａｎｊｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｉｆｎｇ ２１００２９， Ｃｈｍａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．＂ＬｙｕＱｉａｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒｌｖｑｉａｎｇ＠ｓｉｎａ，ｃｏｍ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｒａｎｓｉｉｔｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ（ＴＣＣｓ）ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ａｒｅ ｃｏｍｍｏｎ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ、）ｌ，ｉｍ ａ ｈＪ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｒａｔｅ．Ｓｉｎｃｅ ｍｉｃｒｏＲＮＡ一２１（ｍｉＲ－２１）ｍａｙ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｍａｎｙ ｃａｎｃｅｒ ｔｙｐｅｓ．ｗｅ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｉｔｓ ｅｆｉｃａｃｙ ｉｆｎ ＴＣＣｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １１１ｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ－２ １ ａｎｄ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔ ＰＴＥＮ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｑＲＴ－ＰＣＲ ａｎｄ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ａｄｊａｃｅｎｔ ｎｏｎ－ｔｕｍｏｒ ｍｕｃｏｓａ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉＲ－２ １ ｏｎ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＭＴＴ ｍｅｔｈｏｄ．Ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｎｄｕｃｅｄ ｉｂｙ ｄｏｘｏｍｂｉｃｉｎ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｌｏｗ ｆｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｔ２４ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＭｉＲ－２１ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｈｉｌｅ ＰＴＥＮ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｌｏｗｅｒ ｌｅｖｅｌｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｎｏｎ－ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｍｉＲ－２１ ａｎｄ ＰＴＥＮ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ／ｎ ｖｉｖｏ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏ ｄｏｘｏｍｂｉｔｃｉｎ ｗｅｒｅ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｙ ｂｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ．２１ ｉｎ Ｔ２４ ｃｅｌｌｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌｄｄｅｒａ ｎｅｏｐｌｓｍｓ；Ｃａａｒｃｉｎｏｍａ，ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ ｃｅｌｌ；ｍｉｃｒｏＲＮＡ－２１；ＰＴＥＮ ｐｈｏｓｐｈｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ；Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ；Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ 在我国，膀胱肿瘤是泌尿道最常见的肿瘤 ¨， 其中大部分是移行细胞癌，大约７０％的肿瘤初次诊 断时局限于黏膜或黏膜下。根据现有指南，这些非 平滑肌侵袭性的肿瘤经尿道切除后通常需行膀胱 灌注治疗，多柔比星及其衍生物常常被用做膀胱灌 注的治疗药物。然而，仍然有３１％￣７８％的患者５ 年内会复发。更加严峻的是，大约２０％的复发患者 疾病会进展【２Ｊ。复发通常在膀胱灌注治疗中或治疗 后出现，所以我们认为，膀胱肿瘤细胞的耐药性或 ＤＯＩ：ＩＯ．３８７７／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—０７８５．２０１４．０５．００１ 基金项目：国家自然科学基金（８１２７２８３２）；江苏省自然科学基金 （ｂｋ２０１１８４８） 作者单位：２１００２９南京医科大学第一附属医院泌尿外科 通讯作者：吕强，Ｅｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒｌｖｑｉａｎｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ 中华临床医师杂志ｒ电子版）２０１４年３月第８卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅｌｅｃ￣ｏｎｉｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ｍａｒｃｈ １．２０１４．ｖｏ１．８．Ｎ 许是疾病再现的一个重要机制。 ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是一组短链非编码 ＲＮＡ，通过与其相关的ｍＲＮＡ分子３端非编码区 （ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ，ＵＴＲ）互补配对，参与基因表 达的转录后调控，促进ｍＲＮＡ降解，抑制蛋白翻译。 ｍｉＲＮＡ可以同时调控成百上千的目的ｍＲＮＡ表达， 进而调控细胞周期，影响细胞增殖、分化、凋亡以 及肿瘤发生【３］。在乳腺癌、结肠癌、肺癌及前列腺 癌等多种肿瘤中ｍｉＲ－２１呈高表达，表明Ｉ１ｌｉＲ．２１与 肿瘤发生有密切关系【４Ｊ。近期研究发现，ｍｉＲ．２１参 与了肿瘤细胞对细胞毒药物的耐药性，且ｍｉＲ－２１ 表达越高细胞耐药性就越明显。这些研究结果说明 ｍｉＲ．２１可能是～个潜在的治疗靶点，并且表明其可 能通过抑制肿瘤抑制基因诸如ＰＴＥＮ、ＰＤＣＤ４或者 ＴＰＭ１的表达促进肿瘤发生发展。 资料与方法 １．组织样本及细胞培养：所有的肿瘤组织样本 均收集自２０１３年７～１Ｏ月间疑似膀胱癌患者行膀 胱赘生物切除术时，共８例患者，男７例，女１例。 术后经病理检查确诊为膀胱癌。癌旁正常组织亦如 是，其中半数被送至病理检验确定没有被肿瘤组织 污染。临床标本的收集和使用得到医院伦理委员会 的同意，肿瘤根据ＴＮＭ分期进行分期和ＷＨ０２００４ 分级标准进行分级。人类膀胱肿瘤细胞系Ｔ２４购自 中国科学院（中国，上海）细胞库，用含１５％小牛 血清的ＲＰＭＩ．１６４０，１００ Ｕ／ｍｌ青霉素及１００ 链霉素的培养基，在３７℃，５％ＣＯ２条件下培养。 以０．０５％的胰蛋白酶消化传代，２ ｄ传代１次。 ２．ＲＮＡ提取与实时定量ｑＲＴ．ＰＣＲ：采用Ｔｒｉｚｏｌ 法从组织内提取ＲＮＡ，采用Ｔａｑｍａｎ探针法检测 ｍｉＲ．２１的表达。采用基因特异性茎环结构ＲＴ引物， １ ０ ｎｇ ＲＮＡ进行转录反应。每份样本重复三次无ＲＴ 及无模板对照实验。数据通过比较Ｃｔ值进行分析。 ３．转染：转染前ｌ ｄ将细胞接种到６孔板上， 使之达到７０％的汇合度。运用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００ （购自Ｉｎｖｉｒｔｏｇｅｎ公司）转染试剂，按照说明书进行 细胞转染。采用的ｍｉＲ－２１ ｍｉｍｉｃ的序列：ｓｅｎｓｅ， ５ ７ＡＣ 兀，ＡＩ『ＣＡＧＡＣＩ『ＧＡＩ『Ｉｎ１兀『ＧＡ－３’：ａｎｔｉ—ｓｅｎｓｅ， ５’．Ｉ『ＣＡＡＣＡＵＣＡＧＵＣＵＧＡＬ ＡＧＣＧＣＵＡ一３’。与人 类基因序列无同源序列的ＲＮＡ作为阴性对照组 （ＮＣ）：ｓｅｎｓｅ，５’．ＵＵＣＵＣＣＧＣＣＧＣＣＧＡＡＣＧＣＧＵ ＧＵＣＡＣＧＣＧＵＴＴＴＴ．３’：ａｎｔｉ．ｓｅｎｓｅ，５’一ＣＡＧＵＡＣＵ ＵＵＵＧＵＧＵＡＧ．ＵＡＣＡＡ．３’，以上均由上海基因制药 公司设计并合成。 ４．细胞增殖分析：转染后２４ ｈ，将细胞分别以 ３ ０００个／每孔接种于９６孔板，分别培养２４ ｈ、４８ ｈ、 ７２ｈ和９６ｈ进行检测，并使用ＭＴＴ法检测细胞增 殖。在酶标仪上以波长４９０ ｎｌｎ测各孔的吸光度值。 以上实验重复６次。增殖曲线根据每个时间点的平 均吸光度作出。 ５．药物敏感性分析：转染后４８ ｈ，消化细胞将 细胞以３ ０００个／每孔接种于９６孔板，隔夜后予不 同浓度的多柔比星进行处理。４８ ｈ后采用ＭＴＴ法 检测细胞活性。抑制率计算如下：抑制率＝（１一 ＯＤｔｒｅａｔ￣ｌ／ＯＤ。。ｎ们１）Ｘ １００％。采用Ｐｒｏｂｉｔ回归模型作 出不同浓度的剂量．效应曲线计算ＩＣ５０。每个浓度 囊括５个副孔，且进行三次独立实验以确定ＩＣ５０ 的平均值。 ６．细胞凋亡分析：转染后４８ ｈ，适当浓度多柔 比星处理细胞２４ ｈ，提取细胞，冰冷ＰＢＳ洗涤两遍， 然后加入５山Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ．ＦＩＴＣ和１０ 碘化丙啶 （ＰＩ）室温避光１５ ｍｉｎ，用流式细胞术分析。凋亡 细胞具有高Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ荧光信号和低ＰＩ信号。 ７．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析：采用的ＰＴＥＮ一抗来自 于生物世界技术公司（美国），１３－ａｃｔｉｎ抗体来自圣 克鲁斯生物公司。取等量４０ 蛋白加入上样缓冲 液制备组织蛋白变性样本，１ ２．５％十二烷基磺酸钠 （ＳＤＳ）．聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＧＥ）分离蛋白。电泳 后，转移至聚偏氟乙烯（ＰＤＶ．Ｆ）膜，经５％脱脂牛 奶封闭后加入一抗，洗膜后加入相应酶标二抗辣根 过氧化物酶，暗室胶片曝光。采用ＡｌｐｈａＥａｓｅＦＣ软 件进行条带读取和分析。 ８．统计学处理：采用ＳＰＳＳ １２．０软件进行统计 学处理。定量数据以均数±标准差（ ±ｓ）表示， 采用Ｓｔｕｄｅｎｔ＇ｓ ｔ检验，频率数据采用 检验。采用 Ｐｒｏｂｉｔ回归模型作剂量．效应曲线计算ＩＣ５０。Ｐ＜０．０５ 为差异有统计学意义。 结 果 １．ｍｉＲ－２１在膀胱移行细胞癌组织样本中高表 达且与ＰＴＥＮ表达呈负相关：我们首先测定膀胱移 行细胞癌组织样本中ｍｉＲ－２１与目的蛋白ＰＴＥＮ的 表达水平。由于一些技术原因，这些组织样本均取 自膀胱肿瘤切除术，仅能代表早期肿瘤（表１）。 如图ｌ所示，与癌旁正常组织相比，ｍｉＲ．２１在肿瘤 ４ 表１ 每份样本的临床和病理特点及相对ｍｉＲ－２１和ＰＴＥＮ表达水平 注：。表达为ＡＡＣｔ，以ＲＮＵ６Ｂ为标准。 以１３－ａｃｔｉｎ不同浓度区分ＰＴＥＮ浓度进行计算。所有的值均经过．１ｏｇ２转化。Ｔ：肿瘤组织；Ｎ：癌旁 正常组织 组织中的表达显著增高（ＪＰ＜０．０５），ＰＴＥＮ表达显 在５００ｎｇ／ｍｌ多柔比星引起细胞凋亡中的作用。如 著降低（尸＜Ｏ．０５）。相关分析表明ｍｉＲ－２１和ＰＴＥＮ 图３所示，ｍｉＲ．２１过表达可以降低大约５０％的凋 有一定程度的负相关关系（，．＝－－０．８６ Ｐ＜０．０１）。 亡率，然而ｍｉＲ．２１下调能够明显促进细胞死亡 这些结果表明ｍｉＲ．２１在膀胱移行细胞癌组织高表 （均Ｐ＜０．０１）。此结果与之前药物敏感性分析的结 达，且可能通过抑制ＰＴＥＮ发挥功能。 果相同 表明ｍｉＲ一２１引起的药物敏感性改变可能 ２．Ｔ２４细胞系中ｍｉＲ－２１促进肿瘤细胞增殖： 与细胞凋亡通路相关。 膀胱肿瘤Ｔ２４细胞具有高侵袭性，ｍｉＲ－２１表达量中 等。为了探究Ｔ２４细胞中ｍｉＲ．２１在细胞增殖的生 讨 论 物学效应，我们通过转染合成的ｍｉＲ－２ １ ｍｉｍｉｃｓ和 此次研究中我们进行了体外ｍｉＲ．２１在膀胱肿 ｉｍＲ－２１抑制物上调和下调ｍｉＲ－２１水平。如图２Ａ 瘤中的功能研究，表明了其在细胞增殖、凋亡以及 中所示，与对照组相比，上调ｍｉＲ．２１水平７２ ｈ和 药物敏感性中的重要作用。我们同时也揭示了 ９６ ｈ后细胞显著增殖，而下调ｍｉＲ－２１水平４８ ｈ后 ｍｉＲ．２１的致癌作用或许与其在Ｔ２４细胞中抑制 细胞增殖暂停。这些结果表明ｍｉＲ－２１可能调节细 ＰＴＥＮ基因表达有关。 胞生长并且在膀胱肿瘤产生中起到致癌作用。 ｉｍＲ－２１一直被认为在肿瘤发生过程中起到重 ３．ｍｉＲ－２１调节Ｔ２４细胞对多柔比星的药物敏 要作用，并且在多种肿瘤中表达上调，参与肿瘤细 感性：越来越多的证据表明，抑制ｍｉＲ－２１治疗可 胞生长和增殖、加速细胞周期进展、抑制细胞凋亡 能提高多种肿瘤的化疗敏感性。多柔比星是一种常 以及促进肿瘤细胞产生化疗药物耐药性。最近一些 用于膀胱灌注化疗及用于膀胱肿瘤早期患者全身 研究发现，由于ｍｉＲ－２１表达量不同，膀胱移行细 化疗的药物，我们检测了ｒｎｉＲ－２１是否能够调节Ｔ２４ 胞癌的侵袭性也有所改变［５刮。我们的研究结果表明 细胞对多柔比星的敏感性。每组都作出了剂量．效应 ｍｉＲ．２１在早期膀胱肿瘤患者中上调明显，促进膀胱 曲线。如图２Ｂ所示，与对照组相比ｍｉＲ一２１ ｍｉｍｉｃｓ 肿瘤细胞增殖，这是与前人研究结果一致的。 组的曲线向内变动，表明细胞对药物脱敏。与此相 细胞生长被多种信号级联方式控制，包括细胞 反，图２Ｃ则表明ｍｉＲ－２１抑制物可以调高细胞对此 周期控制、生长因子通路影响以及蛋白的合成。其 药物的敏感性。ｍｉＲ－２１ ｍｉｍｉｃｓ组ＩＣ５０为（１ ２８４．２± 中，同源性磷酸酶．张力蛋白（ＰＴＥＮ）是一类４７ ｋＤａ ２８０．３） ，对照组为（６８９．４±５８．３）ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜ 的磷脂酰肌醇．３，４，５．三磷酸肌醇３．磷酸酶，包括 ０．０５）。而ｌＩ１ｉＲ－２１抑制物组ＩＣ５０为（３６９．７±６５．８） 了一个张力蛋白类似域及一个催化域，与双特异性 ｎｇ／ｍｌ，对照组为（６９２．４±３５．１）ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜Ｏ．０５， 蛋白酪氨酸磷酸酶结构类似。这类蛋白使得磷酸肌 图２Ｄ）。这些结果表明ｍｉＲ．２１可影响Ｔ２４细胞对 醇去磷酸化，负性调节胞内ＰＩＰ３的水平并且可能 多柔比星的药物敏感性。 借此影响ＡＫＴ信号通路。ＰＴＥＮ被认为是一类抑癌 ４．ｍｉＲ－２１影响多柔比星引起的Ｔ２４细胞凋亡： 基因，常常在包括膀胱癌的大量肿瘤中产生突变 丌。 为了进一步探究，我们采用流式细胞术评估ｍｉＲ－２１ ｍｉＲＮＡ主要通过与ｍＲＮＡ ３’未翻译区相结合调节 中华临床医师杂志ｆ电子版）２０１４年３月第８卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｅｄｉｉｔｏｎ）．Ｍａｒｃｈ １￣０１４．ｖ０ｌ＿８．Ｎ 转录后基因表达发挥功能。研究表明，ｍｉＲ．２１直接 性。这些结果揭示了ｍｉＲ．２１在肿瘤形成中的致癌 作用于Ｐｎ 基因，负性调节其蛋白表达，发挥其 致癌作用【８ ¨。我们的研究发现，与癌旁正常组织 相比，肿瘤组织中ＰＴＥＮ蛋白水平下调而ｍｉＲ－２１ 作用，并且为治疗膀胱移行细胞癌提供了潜在的治 疗靶点。 （本文图片见光盘） 水平增高，并且两者呈负相关关系。此次研究中， 我们仅仅探索了复杂的肿瘤发生机制中ｍｉＲＮＡ可 能具有的功能，并不能排除ｍｉＲ．２１所参与的其他 机制。但是，ＰＴＥＮ有可能参与了ｍｉＲ．２１介导膀胱 移行细胞癌的发生。 我们同时也首次表明了ｍｉＲ．２１上调可能影响 Ｔ２４细胞对多柔比星的耐药性，下调可能促进Ｔ２４ 细胞对多柔比星的敏感度。多柔比星广泛应用于膀 参考文献 【１］ 韩苏军，张思维，陈万青，等．中国膀胱癌死亡现状及流行趋势 分析【 现代泌尿外科杂志，２０１３，ｌ８（３）：２２８－２３２． 【２］ Ｂａｂｊｕｋ Ｍ，Ｏｏｓｔｅｒｌｉｎｃｋ Ｗ Ｓｙｌｖｅｓｔｅｒ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＥＡＵ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｎ ｎｏｎ－ｍｕｓｃｌｅ・ｉｎｖａｓｉｖｅ ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆｔｈｅ ｂｌａｄｄｅｒ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｕｍｌ， ２００８，５４（２）：３０３—３ ｌ４． 【３】Ｌｅｅ ＹＳ，Ｄｕｔｔａ Ａ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐａｔｈｏｌ，２００９，４： １９９－２２７． 【４】Ｌａｎｄｇｒａｆ Ｒｕｓｕ Ｍ，Ｓｈｅｒｉｄａｎ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ａ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｍｉｃｒｏＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｔｌａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ， 胱内以及静脉灌注化疗，用以治疗表面以及平滑肌 侵袭的膀胱肿瘤。多柔比星是一类葸环类抗生素， 通过嵌入ＤＮＡ序列防止ＤＮＡ再次密闭阻止复制， 最终破坏ＤＮＡ结构，促进细胞遏止和凋亡。但是 近来，化疗药物耐药已成为治疗失败的一大原因， ２００７，１２９（７）：１４０１—１４１４． ［５】 Ｗｓｚｏｌｅｋ ＭＦ，Ｒｉｅｇｅｒ－Ｃｈｒｉｓｔ ＫＭ，Ｋｅｏｎｅｙ ＰＡ，ｅｔ ａ１．Ａ ＭｉｃｒｏＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｈｅ ｉｔｎｖａｓｉｖｅ ｂｌａｄｄｅｒ ｔｕｎｌｏｒ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ［Ｊ］． Ｕｒｏｌ Ｏｎｅｏｌ，２０１ｌ，２９（６）：７９４—８０１． ［６】Ｎｅｅｌｙ ＬＡ，Ｒｉｅｇｅｒ－Ｃｈｒｉｓｔ ＫＭ，Ｎｅｔｏ ＢＳ，ｅｔ ａ１．Ａ ｒｎｉｃｒｏＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｎｖａｓｉｉｖｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ｂｌａｄｄｅｒ ｔｕｍｏｒｓ［Ｊ］． Ｕｒ０ｌ Ｏｎｃｏｌ，２０１０，２８（１）：３９－４８． 化疗药物耐药性产生的原因包括多药耐药基因相 关的信号通路作用，ＤＮＡ破坏修复的增加以及细胞 凋亡减弱等。我们的研究发现ｍｉＲ－２ １过表达能够 下调多柔比星引起Ｔ２４细胞凋亡而敲除ｍｉＲ－２１可 以促进细胞死亡。 【７】Ｐｌａｔｔ ＦＭ，Ｈｕｒｓｔ ＣＤ，Ｔａｙｌｏｒ ＣＦ，ｅｔ ａ１．Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔ０ｌ ３－ｋｉｎａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ ｇａｎｅ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｂｌｄｄｅｒａ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００９，１５（１９）：６００８－６０１７． 【８】Ｍｅｎｇ Ｈｅｎｓｏｎ Ｗｅｈｂｅ－ＪａｎｅｋＨ，ｅｔ ａ１．ＭｉｅｒｏＲＮＡ－２１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＰＴＥＮ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｔｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００７，１３３（２）：６４７—６５８． 【９】Ｖｉｎｃｉｌ￣ａｅｒｒａ Ｍ，Ｓｇｒｏｉ Ａ，Ｖｅｙｒａｔ－Ｄｕｒｅｂｅｘ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ 膀胱腔内化疗药物灌注长期以来一直被认为 是非平滑肌侵袭性膀胱肿瘤患者化疗的标准方案， 虽然其效果与卡介苗治疗类似［２】。但是考虑到卡介 苗可能产生的不可预料反应，化疗可能是最被医生 和患者所广泛接受的治疗方案。然而，腔内化疗的 肿瘤复发率确实不容忽视的。另外，尽管许多细胞 ｔｅｎｓｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇ（ＰＴ￣３ ｖｉａ ｍｉｅｒｏＲＮＡ一２１ ｐｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｎ ｉｅｎ ｈｅｐａｔｏｅｙｔｅｓ阴，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００９，４９（４）：１１７６・１１８４． 【１０】Ｚｈａｎｇ ＪＧ，Ｗａｎｇ ＪＪ，Ｚｈａｏ Ｆ＇ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ－２１（ｍｉＲ－２１）ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ＰＴＥＮ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ￣ＳＣＬＣ） ．Ｃｌｎ Ｃｌｉａｉｍ Ａｃｔａ，２０１０， ４１１（１１／１２）：８４６—８５２． 【１Ｉ】Ｑｉ Ｌ，Ｂａｒｔ Ｊ，Ｔａｎ ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ一２１ ａｎｄ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔｓ Ⅱ！Ｎ，ＰＤＣＤ４，ｒＭ１）ｉｎ ｆｌａｔ ｅｐｉｈｅｌｔｉｌ ａｔａｙｐｉａ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｄｕｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎ ｓｉｔｕａｎｄｉｎｖａｓｉｖｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ，２００９，９：１６３． 毒药物均可用于膀胱肿瘤的化疗，但没有任何一种 药物具有明显优势【２】，说明细胞固有的耐药性起到 了主要作用。我们结果表明在体外实验中，ｍｉＲ－２１ 可能参与调节对细胞毒药物的敏感性。最近有研究 【１２】ＮｏｇａｗａＭ，Ｙｕａｓａ Ｋｉｍｕｒａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ ｔａｒｇｅｔｎｇ ＰＬＫ－１ｉ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｔｈｅ 表明，转染抗药物敏感寡核苷酸为治疗膀胱肿瘤提 供了一种可能【１ 。因此，我们需要进一步的机体内 部研究。 ｇｒｏｗｔｈ ｏｆｂｌｄｄｅｒ ａｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２００５，１１５（４）：９７８—９８５． （收稿日期：２０１４－０１．０７） （本文编辑：郝锐） 综上所述，ｍｉＲ－２１在膀胱移行细胞癌中高表 达，促进细胞增殖和肿瘤细胞Ｔ２４细胞的药物耐药 邓夏珩，李鹏超，陶俊，等．ｍｉｃｒｏＲＮＡ．２１参与调控膀胱癌细胞增殖及多柔比星敏感性的研究【Ｊ／ＣＤ］．中华临床医师杂志：电子版，２０１４，８ （５）：８１０．８１４．
