第３５卷第１期 ２０１０年２月 贵 阳 医 学 院 学报 ＶＯ１．３５ Ｎｏ．１ ＪＯＵＲＮＡＬ ０Ｆ ＧＵＩＹＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ２０１０．２ ・技术与方法・ 乳腺癌ｃｅｒｂＢ一２蛋白免疫组织化学染色方法的改进 刘启兰，薄 莉，杨文秀，刘 辉，钟 愉 （贵阳医学院病理学教研室，贵州贵阳５５０００４） ［摘 要］目的：建立免疫组织化学检测的ＨＥＲ－２蛋白免疫组织化学染色检测改良方法。方法：收乳腺浸润 性导管癌１００例，根据抗体来源、一抗孵育条件、组织类型、抗原修复方法进行分组，比较各组病例ＨＥＲ－２表达情 况，并进行统计学分析。结果：不同组织处理方法、３种来源的ｃｅｒｂＢ－２一抗、４种抗原修复方法标记的肿瘤细胞 阳性程度不尽相同，而不同孵育条件标记结果相似。结论：肿瘤组织的处理方法、一抗来源、抗原修复方法对乳 腺癌中ＨＥＲ一２蛋白表达的免疫组织化学检测有明显影响。 ［关键词］表皮生长因子；乳腺肿癌；免疫组织化学 ［中图分类号］Ｒ７３７．９ ［文献标识码］Ｂ ［文章编号］１０００．２７０７（２０１０）０１４３０９４－０２ 人类表皮生长因子受体．２（ＨＥＲ２，ｃｅｒｂＢ－２）是 １．２．１常规苏木素伊红染色按常用病理技术操 一种受体型的酪氨酸受体激酶，存在于乳腺和乳腺 作规范进行 Ｊ。简述如下：切片、脱蜡、梯度酒精 癌细胞表面，能控制癌细胞的生长、浸润和转 下行入水、苏木素染色、分化、伊红染色、脱水、透明 移¨ 。有研究发现，ＨＥＲ２高表达是乳腺癌的高 封片。 危因素，这类乳腺癌患者对一般的化疗、单纯的激 １．２．２ 免疫组织化学染色采用ｅｎｖｉｎｓｉｏｎ两步 素治疗产生耐受，而且病人的临床过程和预后较 法。分别采取不同的抗原修复方法：（１）高压热修 差 Ｊ。目前，正逐渐掀起的肿瘤靶向生物治疗，由 复：分别采用ｐＨ６．０的枸橼酸盐缓冲液或ｐＨ９．０ 于其具有的特异性和不产生类似化疗的严重反应， 的ＥＤＴＡ缓冲液进行修复，煮沸上大气后持续 已经越来越被病人所接受。近年来，一种针对 ３ ｍｉｎ，之后让其自然冷却；（２）微波修复：采用 ＨＥＲ２的单克隆抗体类药物赫赛汀（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ），它 ｐＨ６．０的枸橼酸盐缓冲液或ｐＨ９．０的ＥＤＴＡ缓冲 只针对ｃｅｒｂＢ．２高表达的肿瘤细胞产生作用。因 液，微波修复１０ ｍｉｎ，让其自然冷却；（３）２％胰蛋 此，客观准确地对乳腺癌患者ＨＥＲ２基因和蛋白进 白酶修复１０ ｍｉｎ；（４）不进行修复。一抗分别采用 行检测，对患者治疗方法的选择以及预后具有极为 购自３个公司的ＣｅｒｂＢ．２，稀释度为１：１００，一抗孵 重要的意义 育条件采用３７ ｏＣ １ ｈ或４℃冰箱过夜。标记用 ＤＡＢ显色，以０．Ｏ１ ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．２）的磷酸缓冲液 １材料和方法 代替一抗作为空白对照。 免疫组织化学结果判断：ＣｅｒｂＢ－２阳性信号定 １．１材料 位于细胞膜。根据最近推荐的阳性等级标准：肿瘤 收集贵阳医学院附属医院病理科２００７年２月 细胞膜无阳性信号为阴性，肿瘤细胞膜有清晰完整 ～２００８年１２月诊断的乳腺浸润性导管癌手术切 的细胞膜阳性信号并在１０％的肿瘤细胞中出现为 除或麦墨通穿刺肿瘤组织标本共１００例，选取其中 “＋”，在２０％的肿瘤细胞中出现为“＋＋”，在３０％ ３０例，每例选择冰冻后中性甲醛固定或直接用中 以上的肿瘤细胞中出现为“＋＋＋”。 性甲醛固定、石蜡包埋的肿瘤组织各１块作为研究 １．２．３统计学分析应用ＳＰＳＳ １１．５软件包进行 材料。通过常规ＨＥ染色观察进行病例诊断复查 分析，采用 检验，以Ｐ＜０．０５为差异有显著性。 和研究蜡块筛选。根据不同的可能影响因素进行 分组实验。实验用一抗为单克隆抗体，分别购自 ２ 结果 ＤＡＫＯ公司、福州迈新公司和北京中衫公司，检测 试剂盒购自北京中衫公司。 通过上述实验，不同方法处理的组织标记结果 １．２方法 明显不同（图１、图２），冰冻后中性甲醛固定的组 ９４ １期 郑黎明 化学发光法与ＥＬＩＳＡ法检测乙型肝炎病毒指标比较 ３讨论 的差异外，影响结果的可能性因素还与ＥＬＩＳＡ法 的试剂厂家有意调低了核心抗体的阳性率和发光 目前国内最常用ＥＬＩＳＡ法对乙型肝炎病毒 法直接用原血清，不稀释标本有关。 （ＨＢＶ）两对半定性测定，是临床分析和判断患者 综上所述，用化学发光法检测乙肝两对半具 传染性的重要依据之一＿２ Ｊ。与放射免疫技术相 有灵敏度高、重复性好、特异性强、准确性佳、检测 比，其最大优势在于该法避免了对环境和人体的危 快速、无放射性危害等优点，对于可疑的低值血清 害，操作简便并且试剂有效期较长。但其灵敏度重 、少见模式的检测更具优势，应积极推广使用 ］。 复性不及发光法，易造成漏检和假阳性，再加上酶 的纯度和反应过程容易受环境因素影响而导致结 ４参考文献 果稳定性不好。 ［１］陈慧英，张锦锋，岑小鹏，等．ＥＬＩＳＡ检测乙型肝炎ＨＢ— 对ＥＬＩＳＡ法检测为阴性的部分样本中，用化 ｓＡｇ室内质控血清的试剂和使用［Ｊ］．上海医学检验杂 学发光法进行检测，表明其为低浓度样本。因此， 志，２０００（４）：２０３—２０５． 通过化学发光法检测可以减少其漏检，这对一些低 ［２］孙南雄，黄诅瑚，刘雁雁，等．乙型肝炎患者９５７例血清 浓度ＨＢｓＡｇ携带者，特别是一些群体如医务工作 学标志分析［Ｊ］．中华医学检验杂志，１９９９（５）：２９６． 者及病人家属等的检测，做好早期预防有重要的现 ［３］覃亚勤，赵登蕴，李声方，等．慢性ＨＢＶ携带者检测血 清ＣＣＣＤＮＡ的临床意义［Ｊ］．实用临床医药杂志，２００８ 实意义。ＥＬＩＳＡ法为阳性而化学发光法为阴性样 （５）：３６． 本，对其两队半模式进行追踪，表明为少见模式。 ［４］张丽华．未经抗病毒治疗慢性乙肝患者ＨＢＶＤＮＡ的动 郑怀竞 报道，卫生部Ｉ临床检验中心用１９个厂家 态观察［Ｊ］．实用临床医药杂志，２００８（５）：３５． 的试剂同时检验１０６份血样本时，少见模式平均检 ［５］郑怀竞．乙型肝炎病毒与血清标志物［Ｊ］．肝病杂志， 出率约４．５％。经证实这些少见模式的报告，均属 １９９３（３）：１８１． 错误的。而王巧莲 报道，ＥＬＩＳＡ法为少见模式的 ［６］王巧莲．化学发光法与ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒血清标 样本用发光法绝大部分变为常见模式，认为是标本 志物结果比较［Ｊ］．包头医学院学报，２００６（１）：８２— 处理不当致溶血或样本本身的原因（如脂血和黄 ８４． 疸等）致假阳性。由此可见化学发光法可以减少 ［７］张丽民．化学发光标记及发光免疫分析［Ｊ］．基础医学 少见模式的发生，降低阳性率。就核心抗体而言， 与临床，１９９５（４）：２０１． （２００９—０９一Ｏｌ收稿，２００９—１０—１２修回） 发光法阳性率明显高于ＥＬＩＳＡ法，除了方法学上 …一●……………………………●一………………－－－…………………●…………………‘一………ｌ…………●一…… （上接第９５页） 者（Ｐ＜０．０５）。这可能是冻后组织内含有的冰晶 乳腺癌三苯氧胺耐药细胞的生长［Ｊ］．实用肿瘤学杂 影响染色效果。通过上述染色方法比较，主张使用 志，２００５（２）：１４３—１４６． 中性甲醛固定的石蜡包埋组织做ＨＥＲ２免疫组织 ［４］陈天明，现代病理诊断规范与操作技术［Ｍ］．２版．北 化学染色检测，推荐使用ＤＡＫＯ的ＨＥＲ２一抗，采 京：中国科学文化出版社，２００５：３０４—３２５． 用枸橼酸盐高压热修复。 ［５］仇加高．乳腺癌中Ｅ—Ｃａｄ，Ｃ—ｅｒｂＢ２、ＥＲ、ＰＲ的表达及其 意义［Ｊ］．实用临床医药杂志，２００８（３）：４８． ４参考文献 ［６］包刚，杨德启，周波，等．新辅助化疗对乳腺癌组织中 雌激素、孕激素受体及ｐ５３和ＣｅｒｂＢ－２表达的影响 ［１ Ｊ陈磊，石林祥，郑莉莉，等．ＣｅｒｂＢ．２、ｐ５３、ＥＲ、ＰＲ在乳 ［Ｊ］．中华医学杂志，２００７（４Ｏ）：２８４３—２８４５． 腺癌中的表达及临床意义［Ｊ］．同济大学学报・医学 ［７］陈灿铭，沈镇宙．癌基因ＨＥＲ２与乳腺癌的治疗［Ｊ］． 版，２００８（３）：３８—４１． 中国癌症杂志，２０００（５）：４４６—４４８． ［２］冉社伟，王小毅，谭金祥．乳腺癌组织学分级与雌激 ［８］曾暄，梁智勇，武莎斐，等．乳腺癌ＨＥＲ２蛋白表达阳性 素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体－２和ｐ５３表 者的基因状态分析［Ｊ］．中华病理学杂志，２００６（１０）： 达及淋巴结转移的相关性［Ｊ］．中国全科医学，２００８（ ５８４—５８８． ２）：１１７—１１９． ［３］赵文辉，张清媛，娄长杰．ＥＧＦＲ／ＣｅｒｂＢ－２／ＭＡＰＫ介导 （２００９一ｌＯ—ｏ９收稿，２００９—１１—０５修回） ９７