KDY-9820凯氏定氮仪操作规程

KDY-9820凯氏定氮仪操作规程

一、原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

二、试剂

1． 35%NaOH溶液：

35gNaOH溶于65mL水。

2． 2%硼酸溶液：

2g H3BO3溶于100mL水。

3． 甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：

（参照GB/T 603-2002 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备）

溶液Ⅰ：称取0.1 g 溴甲酚绿，溶于乙醇(95%)，用乙醇(95%)稀释至100mL 溶液Ⅱ：称取0.2 g 甲基红，溶于乙醇(95%)，用乙醇(95% )稀释至100mL 取 30 m L溶液I, 10mL溶液Ⅱ，混匀。

4．盐酸标准滴定溶液：

（参照GB/T 601-2002 化学试剂 标准滴定溶液的制备） 4.1配制

按表1的规定量取盐酸，注入1000m L水中，摇匀。

表1 盐酸标准滴定溶液的浓度盐酸的体积V/mL [c(HCl)]/(mol/L) 0.05 4.5 0.10 9.0 4.2标定

按表2的规定称取于270℃- 300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50m L水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时做空白试验。

表2 盐酸标准滴定溶液的浓度工作基准试剂无水碳酸钠的质量m/g [c(HCl)]/(mol/L) 0.05 0.10 0.10 0.20 盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCl)]。数值以摩尔每升(mol/L)表示，计算公式如下：

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c(HCl)m1000

(V1V2)M式中：

m ——无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g)； V1 ——盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL)；

V2 ——空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL)

1M ——[M (Na2CO3) = 52.994]，单位为克每摩尔(g/mol)。

2注：盐酸浓度根据样品蛋白含量自行选择。

5．催化剂：

硫酸钾:无水硫酸铜=10：1(w/w)

6．铬酸洗液：

将10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，加热使其溶解。然后边搅拌边慢慢注入180ml浓H2SO4。

三、实验步骤： （一）、消化

称取0.2g干燥样品（精确到0.0001g）移入干燥消煮管中。加入0.33g催化剂及10ml硫酸，稍摇匀后于管口放一小漏斗。放入消化炉中，温度升至300℃后持续1h，再升温至400℃消化4h。至液体呈无色澄清透明后，冷却。加入10mL蒸馏水稀释样品，冷却至室温。

（二）、蒸馏

1． 蒸馏水桶中加入10L去离子水，不得有气泄露。

配制35%NaOH溶液3至5L加入碱桶中，不得有气泄露。 配制2%硼酸溶液3至5L加入酸桶中，不得有气泄露。

2． 打开冷凝水和电源开关。等待2min后，检查液桶内空气是否充满，液桶鼓胀即可。

3． 检查空消煮管和三角瓶是否正确放置在托架上。按硼酸键，使硼酸液能够加到三角瓶中，待正常后再按硼酸键停止。按加碱键，使碱液能够加到消煮管中，待正常后再按加碱键停止。按蒸馏键，一般2-4min，蒸馏正常即可。

4． 按转换键，将加硼酸液时间设定为6s，加碱液时间设定为5s。将空三角瓶放在托盘上，有样品的消煮管放在托架上，要与上端的橡胶塞装紧。按转换键，仪器自动蒸馏。蒸馏完毕时，会发出提示响声。

5．测定结束后，用去离子水冲洗橡胶塞、蒸馏管及硼酸管，将空消煮管和三角瓶正确放置在托架上。关闭冷凝水及电源，拔出电源插头。

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（三）、滴定

取下三角瓶，加入10滴溴甲酚绿-甲基红指示液。用标准盐酸滴定液滴定至灰色，若过量一滴则溶液变红。（可参考附图）

（四）、计算

1.401MF 粗蛋白含量：P（%）（V-V0）W其中：

M——标准盐酸滴定液摩尔浓度（mol/L） W——样品重量（g）

V——样品滴定标准盐酸消耗量（mL）

V0——空白样品滴定标准盐酸消耗量（mL） F——粗蛋白转换系数，一般为6.25

四、注意事项：

1．消煮管均用铬酸洗液清洗，去离子水润洗，干燥后使用。 2．样品称量前干燥恒重。 3．加碱量和加酸量根据样品蛋白含量调整。加碱后消煮管内液体颜色应变为咖啡色或褐色。如果仍为乳白或浅蓝色表明碱量不够，需手动加碱。蒸馏完毕后，保证液量不超过管体积的1/3。

4．每个样品至少重复两次，相对标准偏差应<±1%。 5．仪器前部槽皿中，若有积液请擦净。

炼铁楼112A 2009-2-28

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附图：

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图1：加入指示剂后

图2：滴定终点

图3：滴定过量

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