生化分离工程复习题

1生物分离技术：是指从动植物与微生物的有机体或器官、生物工程产物（发酵液、培养液）及其生物化学产品中提取、分离、纯化有用物质的技术过程。 2凝聚：在电解质作用下，破坏细胞菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，使胶体粒子聚集的过程。

3.絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间发生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程.

4．分配系数：在一定温度、压力下，溶质分子分布在两个互不相溶的溶剂里，达到平衡后，它在两相的浓度为一常数叫分配系数。

5．过滤：是在某一支撑物上放过滤介质，注入含固体颗粒的溶液，使液体通过，固体颗粒留下，是固液分离的常用方法之一。

6．吸附：是利用吸附剂对液体或气体中某一组分具有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面的过程.

7．离子交换：利用离子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分离组分，依据其电荷差异，依靠库仑力吸附在树脂上，然后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，达到分离的目的。

8．色谱技术：是一组相关分离方法的总称，色谱柱的一般结构含有固定相（多 孔介质）和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同（由于亲和力差异），经 过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸），达到分离的目的。

9．膜分离：利用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差作为推动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移率不同而实现分离的一种技术。

10.超临界流体：超临界流体是状态超过气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。

11.萃取：当含有生化物质的溶液与互不相溶的第二相接触时，生化物质倾向于在两相之间进行分配，当条件选择得恰当时，所需提取的生化物质就会有选择性地发生转移，集中到一相中，而原来溶液中所混有的其它杂质（如中间代谢产物、杂蛋白等）分配在另一相中，这样就能达到某种程度的提纯和浓缩。

12.Aqueous Two Phase Extraction双水相萃取：双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相容性，当聚合物或无机盐浓度达到一定值时，就会分成不互溶的两相。因使用的溶剂是水，因此称为双水相，活性蛋白或细胞在这种环境中不会失活，但可以不同比例分配于两相。

13.(Reversed micellar extraction) 反胶团萃取：表面活性剂在非极性的有机相中超过临界胶团浓度而聚集形成反胶团,在有机相内形成分散的亲水微环境。由

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于反胶团内存在微水池这一亲水微环境,可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子。因此,反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化,特别是蛋白质类生物大分子。。

14.SFE supercritical fluid extraction 超临界流体萃取 ：超临界流体具有类似气体的较强穿透力和类似于液体的较大密度和溶解度，具有良好的溶剂特性，可作为溶剂进行萃取、分离单体。其最大的优点在于可以在室温条件下进行目标产物分离，并且无溶剂残留。

15．膜的浓差极化：是指但溶剂透过膜，而溶质留在膜上，因而使膜面浓度增大，并高于主体中浓度。

16．微滤：以多孔薄膜为过滤介质，压力差为推动力，利用筛分原理使不溶性粒子（0.02-10um）得以分离的操作。操作压力0.05-0.1MPa。

17.超滤：是以压力差为推动力，利用超滤膜不同孔径对液体中溶质进行分离的物理筛分过程。孔径为2-20nm，截留相对分子量在数千～数百万Dalton膜分离过程称为超滤，它主要是用于从溶剂或小分子溶质中将大分子筛分出来操作压0.1-1MPa。

18.纳滤：利用超滤膜不同孔径对液体中溶质进行分离的物理筛分过程。纳滤截留物相对分子量范围约为 200～1000 ，能透过无机盐和水200～1000Dalton或直径1nm左右的溶质粒子 19．反渗透：在外加压力驱动下借助半透膜的选择截留作用溶剂由高浓度溶液透过半膜向低浓度渗透称为反渗透。

20．流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或租临界体等，都称为流动相。

21．NPC： normal phase chromatography，正相色谱，流动相极性小于固定相的分配色谱法称为正相色谱法。在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快，先从柱中流出来。

22．RPC：reversed phase chromatography,反相色谱：流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相色谱法。在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。

23.TLC：Thin-Layer Chromatography 薄膜色谱法，利用分布成薄层的介质，在合适的展开剂作用下完成物质的分离。

24．吸附色谱法(adsorption chromatography，AC)是靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差异而分离的方法。

25．分配层析：是根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术。

26．凝胶色谱：以各种具有网状结构的凝胶颗粒为固定相，根据流动相中所含各组分的分子大小不同而达到物质分离目的的一种色谱技术。

27．IEC：ion exchange chromatography 离子交换色谱，离子交换色谱中的固

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定相是一些带电荷的基团， 这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合，从面完成不同带电离子的分离。

28．High Performance Liquid Chromatography，HPLC高效液相色谱：是指选用颗粒极细的高效耐压新型固定相，借助高压泵来输送流动相，并配有实时在线检测器，实现色谱分离过程全部自动化的液相色谱法。

29.基线：色谱分析中无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。 30．保留时间(tR)：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间。 31．亲和层析：依据 生物高分子物质 能与相应专一配基分子可逆结合的原理，采用一定技术，把与目的产物具有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，则含有目的产物的混合物（流动相）流经此固定相后，可把目的产物从混合物中分离出来，这种分离技术称为亲和层析。。

32．疏水层析：是利用表面偶联弱疏水性基团（疏水性配基）的疏水性吸附剂为固定相，根据蛋白质与疏水性吸附剂之间的弱疏水性相互作用的差别进行分离纯化的层析技术。

33.等电点：是两性物质在其质点的净电荷为零时介质的pH值,溶质净电荷为零，分子间排斥电位降低，吸引力增大，能相互聚集起来，沉淀析出，此时溶质的溶解度最低。

34.分子印迹：分子印迹技术是指制备对某一特定的目标分子 (模板分子、印迹分子或烙印分子) 具特异选择性的聚合物技术。

35.电泳：electrophoresis, EP带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳()。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。

36.等电聚焦电泳：是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中，当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷，向负极移动；若其处在高于其本身等电点的环境中，则带负电向正极移动。当泳动到其自身特有的等电点时，其净电荷为零，泳动速度下降到零，具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置 ，形成一个个清晰的区带，分辨率极高。

37.包涵体外源目的基因在宿主系统中高水平表达时，因各种原因导致基因表达产物的一级结构（即氨基酸序列）虽然正确，而其高级结构是错误的，即：没有

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生物活性的包涵体。 填空

1、生物分离工艺要求： 4 2、杂蛋白的去除方法有：4 3、常见的固液分离方法有：5 4、细胞的机械破碎法又可分为3

5、双水相萃取中常采用的双聚合物系统为聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)/葡聚糖(dextran，Dx，PEG/Dx)，该双水相的上相富含聚乙二醇(PEG)，下相富含葡聚糖(Dx)。

6、阳离子交换树脂按照活性基团分类，可分为（强酸型），（弱酸型）和（中等强度）；其典型的活性基团分别有（磺酸基团），（羧基），（磷酸基）。 7、蛋白质分离常用的色谱法有4

8、离子交换分离操作中，常用的洗脱方法有2

9、阴离子交换树脂按照活性基团分类，可分为（强碱型），（弱碱型）和（中等强度）；其典型的活性基团分别有（季氨基）、（伯、仲、叔氨）、（强弱基团都具备）。

10、多糖基离子交换剂包括（2两大类。 11、离子交换树脂由（3组成。 12、影响离子交换选择性的因素有8

13、离心机按速度和离心力可分为：常速离心机、高速（冷冻）离心机、超速离心机等。

14、工业离心设备从形式上可分为3等型式。

15、膜分离过程中所使用的膜，依据其膜特性（孔径）不同可分为 （微滤膜） ，（超滤膜），（纳滤膜）和（反渗透膜）。 16、工业上常用的超滤装置有4 17、 影响吸附的主要因素有6 18、影响盐析的因素有4

19、反相高效液相色谱的固定相是（非极性）的，而流动相是（极性）的；常用的固定相有（C18）和（C8）；常用的流动相有（甲醇）和（乙睛）。

20、超临界流体的特点是与气体有相似的（粘度（扩散系数）），与液体有相似的

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（密度）。

21、离子交换树脂的合成方法有（共聚（加聚））和（均聚（缩聚）） 两大类； 22、等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其（等电点（pI））的不同； 23、根据分离机理的不同，色谱法可分为（吸附色谱） ，（离子交换色谱），（凝胶色谱），（分配色谱）和（亲和色谱）。

24、衡量色谱峰宽度的参数三种表示方法有标准偏差()、半峰宽(Y1/2)、峰底宽(Wb)。

25、高效液相色谱仪的种类很多，但是无论何种高效液相色谱仪，基本上由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统或色谱工作站等五大部组成。

26、气相色谱的选择条件有6 27．气相色谱柱主要有2 28、典型的工业过滤设备有（2 29、常用离心设备可分为（2 两大类；

30、根据物化理论，萃取达到平衡时，溶质在萃取相和萃余相中的（浓度的比值）一定；

31、根据吸附剂与吸附质之间存在的吸附力性质的不同，可将吸附分为4吸附； 32、离子交换操作一般分为（动态）和（静态）两种；

33、蛋白质等生物大分子，在溶液中呈稳定的分散状态，其原因是由于（2 34、盐析用盐的选择需考虑4等几个方面的因素； 35、影响有机溶剂沉淀的因素有（5。 36. 盐析的影响因素有5 37. 影响有机溶剂沉析的因素5 38. 等电点沉析注意事项有4

39、液－液萃取从机理上分析可分为（物理萃取）和（化学萃取）两类； 40、大孔网状吸附剂有（非极性）、（中等极性）和（极性）三种主要类型； 41、影响离子交换速度的因素有（7

42、分配色谱的基本构成要素有（载体）、（固定相）和（流动相）。 43、分子筛色谱也称（凝胶色谱）的主要应用是（脱盐）和（分级分离）

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44、根据膜结构的不同，常用的膜可分为（对称性膜）、（非对称膜）和（复合膜）

三类；

45、当超声波在介质中传播时包括：机械效应、空化作用、热效应和化学效应4

种效应： 46、微波的基本性质通常呈现为穿透、反射、吸收三个特性 47、按分离原理不同，电泳可分为 4

48、根据分离时一次进样量的多少，色谱分离的规模可分为 分析规模、半制备、制备规模和工业生产规模。

49、吸附法的关键是选择吸附剂和展开剂 50、影响电泳分离的主要因素有7

选择题：

1．HPLC是哪种色谱的简称（ ）。

A．离子交换色谱 B.气相色谱 C.高效液相色谱 D.凝胶色谱 2．针对配基的生物学特异性的蛋白质分离方法是（ ）。 A.凝胶过滤 B.离子交换层析 C.亲和层析 D.纸层析 3．盐析法沉淀蛋白质的原理是（ ）

A.降低蛋白质溶液的介电常数 B.中和电荷，破坏水膜 C.与蛋白质结合成不溶性蛋白 D.调节蛋白质溶液pH到等电点

4．从组织中提取酶时，最理想的结果是（ ）

A.蛋白产量最高 B.酶活力单位数值很大 C.比活力最高 D.Km最小 5．适合于亲脂性物质的分离的吸附剂是（ ）。 A．活性炭 B.氧化铝 C.硅胶 D.磷酸钙

6．下列哪项酶的特性对利用酶作为亲和层析固定相的分析工具是必需的？（ ）

A.该酶的活力高 B.对底物有高度特异亲合性 C.酶能被抑制剂抑制 D.酶具有多个亚基 7．用于蛋白质分离过程中的脱盐和更换缓冲液的色谱是（ ） A．离子交换色谱 B.亲和色谱 C.凝胶过滤色谱 D.反相色谱 8．适合小量细胞破碎的方法是（ ）

A高压匀浆法 B.超声破碎法 C.高速珠磨法 D.高压挤压法 9．盐析法沉淀蛋白质的原理是（ ）

A.降低蛋白质溶液的介电常数 B.中和电荷，破坏水膜 C.与蛋白质结合成不溶性蛋白

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D.调节蛋白质溶液pH到等电点

10．蛋白质分子量的测定可采用（ ）方法。

A．离子交换层析 B.亲和层析 C.凝胶层析 D.聚酰胺层析 11．基因工程药物分离纯化过程中，细胞收集常采用的方法（ ） A．盐析 B.超声波 C.膜过滤 D.层析 12．离子交换剂不适用于提取（ ）物质。

A．抗生素 B.氨基酸 C.有机酸 D.蛋白质

13．人血清清蛋白的等电点为4.，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（）

A ：正极移动；B：负极移动；C：不移动；D：不确定。 14．蛋白质具有两性性质主要原因是（ ）

A：蛋白质分子有一个羧基和一个氨基；B：蛋白质分子有多个羧基和氨基；C：蛋白质分子有苯环和羟基；D：以上都对 15．使蛋白质盐析可加入试剂（ ）

A：氯化钠；B：硫酸；C：汞；D：硫酸铵 16．凝胶色谱分离的依据是（ ）。

A、固定相对各物质的吸附力不同 B、各物质分子大小不同

C、各物质在流动相和固定相中的分配系数不同 D、各物质与专一分子的亲和力不同 17．非对称膜的支撑层（ ）。

A、与分离层材料不同 B、影响膜的分离性能C、只起支撑作用 D、与分离层孔径相同

18．下列哪一项是强酸性阳离子交换树脂的活性交换基团（ ）

A 磺酸基团（-SO3 H） B 羧基-COOH C 酚羟基C6H5OH D 氧乙酸基-OCH2COOH 19．依离子价或水化半径不同，离子交换树脂对不同离子亲和能力不同。树脂对下列离子亲和力排列顺序正确的有（ ）。

A、Fe3+﹥Ca2+﹥Na+ B、Na+﹥Ca2+﹥Fe3+ C、Na+﹥Rb+﹥Cs+ D、Rb+﹥Cs+﹥Na+ 20．如果要将复杂原料中分子量大于5000的物质与5000分子量以下的物质分开选用（ ）。 A、Sephadex G-200 B、Sephadex G-150 C、Sephadex G-100 D、Sephadex G-50 21．在蛋白质初步提取的过程中，不能使用的方法（ ）。

A、双水相萃取 B、超临界流体萃取 C、有机溶剂萃取 D、反胶团萃取

22．离子交换法是应用离子交换剂作为吸附剂，通过（ ）将溶液中带相反电荷的物质吸

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附在离子交换剂上。

A、静电作用 B、疏水作用 C、氢键作用 D、范德华力 23．丝状（团状）真菌适合采用（ ）破碎。

A、珠磨法 B、高压匀浆法 C、A与B联合 D、A与B均不行 24．用来提取产物的溶剂称（ ）。

A、料液 B、萃取液 C、萃取剂 D、萃余液。 25．阴离子交换剂（ ）。

A、可交换的为阴、阳离子 B、可交换的为蛋白质 C、可交换的为阴离子 D、可交换的为阳离子

26．分配层析中的载体（ ）。

A、对分离有影响 B、是固定相 C、能吸附溶剂构成固定相 D、是流动相 27．凝胶色谱分离的依据是（）。

A、固定相对各物质的吸附力不同 B、各物质分子大小不同

C、各物质在流动相和固定相中的分配系数不同 D、各物质与专一分子的亲和力不同 28．洗脱体积是（ ）。

A、凝胶颗粒之间空隙的总体积 B、溶质进入凝胶内部的体积

C、与该溶质保留时间相对应的流动相体积 D、溶质从柱中流出时所用的流动相体积 29．工业上强酸型和强碱型离子交换树脂在使用时为了减少酸碱用量且避免设备腐蚀，一般先将其转变为（ ）。

A、钠型和磺酸型 B、钠型和氯型 C、铵型和磺酸型 D、铵型和氯型 30．吸附色谱分离的依据是（）。

A、固定相对各物质的吸附力不同 B、各物质分子大小不同

C、各物质在流动相和固定相的分配系数不同 D、各物质与专一分子的亲和力不同 31．下面哪一种是根据酶分子专一性结合的纯化方法（ ）。 A. 亲和层析 B. 凝胶层析 C. 离子交换层析 D. 盐析 32．纯化酶时，酶纯度的主要指标是：（ ）

A .蛋白质浓度 B. 酶量 C .酶的总活力 D. 酶的比活力 33．盐析法纯化酶类是根据（ ）进行纯化。

A.根据酶分子电荷性质的纯化方法 B.调节酶溶解度的方法

C.根据酶分子大小、形状不同的纯化方法 D.根据酶分子专一性结合的纯化方法

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34．分子筛层析纯化酶是根据（ ）进行纯化。

A.根据酶分子电荷性质的纯化方法 B.调节酶溶解度的方法

C.根据酶分子大小、形状不同的纯化方法 D.根据酶分子专一性结合的纯化方法 35．颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（ ） A.越小 B.越大 C.不变 D.无法确定 36．工业上常用的过滤介质不包括（ ）

A.织物介质 B.堆积介质 C.多孔固体介质 D.真空介质 37．下列物质属于絮凝剂的有（ ）。

A、明矾 B、石灰 C、聚丙烯类 D、硫酸亚铁 38．下列哪项不是蛋白质的浓度测定的方法（ ）。 A、凯氏定氮法 B.双缩脲法 C.福林-酚法 D.核磁共振 39．供生产生物药物的生物资源不包括（ ） A.动物 B植物 C.微生物 D.矿物质 40．发酵液的预处理方法不包括（ ）

A. 加热 B絮凝 C.离心 D. 调pH

41．其他条件均相同时，优先选用那种固液分离手段（ ） A. 离心分离 B过滤 C. 沉降 D.超滤 42．那种细胞破碎方法适用工业生产（ ）

A. 高压匀浆 B超声波破碎 C. 渗透压冲击法 D. 酶解法 43．高压匀浆法破碎细胞，不适用于（ ）

A. 酵母菌 B大肠杆菌 C. 巨大芽孢杆菌 D.青霉 44．关于萃取下列说法正确的是（ ）

A. 酸性物质在酸性条件下萃取 B碱性物质在碱性条件下萃取

C. 两性电解质在等电点时进行提取 D. 两性电解质偏离等电点时进行提取 45．液一液萃取时常发生乳化作用，如何避免（ ）

A.剧烈搅拌 B低温 C.静止 D.加热

46．在葡聚糖与聚乙二醇形成的双水相体系中，目标蛋白质存在于（ ）

A.上相 B下相 C.葡聚糖相 D.以上都有可能

47．当两种高聚物水溶液相互混合时，二者之间的相互作用不可能产生（）

A. 互不相溶，形成两个水相 B两种高聚物都分配于一相，另一相几乎全部为溶剂水

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C. 完全互溶，形成均相的高聚物水溶液 D.形成沉淀

48．超临界流体萃取中，如何降低溶质的溶解度达到分离的目的（ ）

A.降温 B升高压力 C.升温 D.加入夹带剂 49．盐析操作中，硫酸铵在什么样的情况下不能使用（ ）

A.酸性条件 B碱性条件 C.中性条件 D.和溶液酸碱度无关 50．有机溶剂为什么能够沉淀蛋白质（ ）

A.介电常数大 B介电常数小 C.中和电荷 D.与蛋白质相互反应 51．蛋白质溶液进行有机溶剂沉淀，蛋白质的浓度在（ ）范围内适合。 A. 0.5％-2％ B 1％-3％ C. 2％-4％ D. 3％-5％ 52．若两性物质结合了较多阳离子，则等电点pH会（ ） A.升高 B降低 C.不变 D.以上均有可能

53．若两性物质结合了较多阴离子，则等电点pH会（ ） A.升高 B降低 C.不变 D.以上均有可能

．生物活性物质与金属离子形成难溶性的复合物沉析，然后适用（ ）去除金属离子。 A. SDS B CTAB C. EDTA D. CPC 55．那一种膜孔径最小（ ）

A.微滤 B超滤 C.反渗透 D. 纳米过滤 56．超滤技术常被用作（ ）

A.小分子物质的脱盐和浓缩 B小分子物质的分级分离C.小分子物质的纯化 D.固液分离 57．微孔膜过滤不能用来（ ）

A. 酶活力测定 B mRNA的测定及纯化 C. 蛋白质含量测定 D.分离离子与小分子 58．吸附剂和吸附质之间作用力是通过（ ）产生的吸附称为物理吸附。 A. 范德华力 B库伦力 C.静电引力 D.相互结合 59．羧酸型离子交换树脂必须在（ ）的溶液中才有交换能力 A. pH＞5 B pH﹤7 C. pH＞7 D. pH﹤5 60．分子筛层析指的是（ ）

A. 吸附层析 B分配层析 C. 凝胶过滤 D. 亲和层析 61．常用的紫外线波长有两种（ ）

A. 256nm和365nm B2nm和365nm C. 2nm和367nm D. 256nm和367nm 62．进行梯度洗脱，若用50g吸附剂，一般每份洗脱液量常为（ ）

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A. 20mL B50mL C. 90mL D. 100mL

63．离子交换用的层析柱直径和柱长比一般为（ ）之间 A. 1/10-1/20 B 1/10-1/50 C. 1/10-1/30 D. 1/20-1/50 ．离子交换层析的上样时，上样量一般为柱床体积的（ ）为宜。 A. 2％-5％ B1％-2％ C. 1％-5％ D. 3％-7％

65．通过改变pH值从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来，可使用（ ） A. 阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱 B阳离子交换剂一般是pH值从高到低洗脱 C. 阴离子交换剂一般是pH值从低到高 D. 以上都不对 66．那一种凝胶的孔径最小（ ）

A. Sephadex G-25 B Sephadex G-50 C. Sephadex G-100 D. Sephadex G-200 67．那一种凝胶的吸水量最大（ ）

A. Sephadex G-25 B Sephadex G-50 C. Sephadex G-100 D. Sephadex G-200 68．葡聚糖凝胶可使用那种溶剂溶胀（ ） A.甲醇 B乙醇 C.缓冲液 D.乙酸乙酯 69．疏水亲和吸附层析通常在（ ）的条件下进行 A.酸性 B碱性 C.中 D. 高浓度盐溶液 70．当硅胶吸水量在（ ）以上时，就失去其吸附作用 A. 13% B 17% C. 10% D. 15% 71．气相色谱的载气不能用（ ） A. 氢气 B氦气 C.氧气 D. 氮气 72．关于电泳分离中迁移率描述正确的是（ ）

A.带电分子所带净电荷成正比 B分子的大小成正比 C. 缓冲液的黏度成正比 D.以上都不对 73．珠磨机破碎细胞，适用于（ ）

A. 酵母菌 B大肠杆菌 C. 巨大芽孢杆菌 D.青霉 74．为加快过滤效果通常使用（ ）

A.电解质 B高分子聚合物 C.惰性助滤剂 D.活性助滤剂 75．不能用于固液分离的手段为（ ） A.离心 B过滤 C.超滤 D.双水相萃取 76．下列哪个不属于高度纯化：( )

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A. 层析 B. 吸附法 C. 亲和层析 D.凝胶层析 77．物理萃取即溶质根据（ ）的原理进行分离的 A.吸附 B.相似相溶 C分子筛 D 亲和 78．纳米过滤的滤膜孔径（ ）

A 0.02～10µm B 0.001～0.02µm C <2nm D < 1nm

79．人血清清蛋白的等电点为4.，在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（）

A ：正极移动；B：负极移动；C：不移动；D：不确定。

80．单宁沉析法制备菠萝蛋白酶实验中，加入1%的单宁于鲜菠萝汁中产生沉淀，属于( )沉析原理。

A盐析 B有机溶剂沉析 C等电点沉析 D有机酸沉析 81．适用于分离糖、苷等的SephadexG的分离原理是（ ）

A、吸附 B、分配比 C、分子大小 D、离子交换 E、水溶性大小 82．下列哪项不属于发酵液的预处理： （ ） A.加热 B.调pH C.絮凝和凝聚 D.层析 83．下列哪个不属于初步纯化：( )

A .沉淀法 B. 吸附法 C. 离子交换层析 D. 萃取法 84．颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（ ） A.越小 B.越大 C.不变 D.无法确定 85．盐析法沉淀蛋白质的原理是（ ）

A.降低蛋白质溶液的介电常数 B.中和电荷，破坏水膜 C.与蛋白质结合成不溶性蛋白 D.调节蛋白质溶液pH到等电点

86．超滤膜通常不以其孔径大小作为指标，而以截留分子量作为指标。所谓“分子量截留值”是指阻留率达（ ）的最小被截留物质的分子量。 A 80%以上 B 90%以上 C 70%以上 D 95%以上

87．在凝胶过滤（分离范围是5000-400000）中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下来（ ） A．细胞色素C（13370）B．肌球蛋白（400000）C．过氧化氢酶（247500） D．血清清蛋白（68500）E．肌红蛋白（16900）

88．“类似物容易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附极性物质（ ）

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A．极性溶剂 B．非极性溶剂 C．水 D．溶剂

．能够除去发酵液中钙、镁、铁离子的方法是 （ ） A． 过滤 B． 萃取 C． 离子交换 D． 蒸馏 90．从四环素发酵液中去除铁离子,可用 （ ） A． 草酸酸化 B． 加黄血盐 C． 加硫酸锌 D． 氨水碱化

91．当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度 （ ） A、增大 B、减小 C、先增大，后减小 D、先减小，后增大

92．为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是 （）

A、观察柱床有无沟流 B、观察色带是否平整 C、测量流速 D、测量层析柱的外水体积 93．下列细胞破碎的方法中，哪个方法属于非机械破碎法( ) A.化学法 B. 高压匀浆 C. 超声波破碎 D.高速珠磨 94．超滤膜截留的颗粒直径为( )

A 0.02～10µm B 0.001～0.02µm C <2nm D < 1nm 95．超临界流体萃取法适用于提取（ ）

A、极性大的成分 B、极性小的成分 C、离子型化合物 D、能气化的成分 E、亲水性成分 96．分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用 （ ） A、分离量大分辨率低的方法 B、分离量小分辨率低的方法

C、分离量小分辨率高的方法 D、各种方法都试验一下，根据试验结果确定 97．蛋白质类物质的分离纯化往往是多步骤的，其前期处理手段多采用下列哪类的方法。（ ）

A．分辨率高 B.负载量大 C.操作简便 D.价廉 98．反渗透膜的孔径小于( )

A 0.02～10µm B 0.001～0.02µm C <2nm D < 1nm

99．亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱方法称作 （ ）

A、 阴性洗脱 B、 剧烈洗脱 C、竞争洗脱 D、非竞争洗脱

100．将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为 （ ）

A、亲和沉淀 B、聚合物沉淀 C、金属离子沉淀 D、盐析沉淀 101．在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是 ）

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A、粗且长的 B、粗且短的 C、细且长的 D、细且短的

102. 下列三个化合物用硅胶吸附色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（95：5）洗脱，判断三者由先到后流出色谱柱的顺序为（）。

OHOOCOCH3

a b c

A: a→b→c B: b→a→c C: c→b→a D: c→a→b

103 已知某组分峰的峰底宽为20 s，保留时间为600 s ，此色谱柱的理论塔板数为。（） A:14400块 B: 14000块 C: 12400块 D: 1200块

 三、判断题

1. 植物细胞产物多分泌到细胞外培养液，动物细胞多为胞内产物。（×） 2. 通过加入某些反应剂是发酵液进行预处理的方法之一。（√） 3. 极性溶剂与非极性溶剂互溶。（×） 4. 溶剂萃取中的乳化现象一定存在。（×） 5. 临界压力是液化气体所需的压力。（×） 6. 进料的温度和pH会影响膜的寿命。（√） 7. 流动相为气体则称为气相色谱。（√）

8. 生物物质中最常用的干燥方法是减压干燥。（√） 9. 冷冻干燥适用于高度热敏的生物物质。（√）

10. 溶剂的极性从小到大为丙醇＞乙醇＞水＞乙酸。（√ ） 11. 蛋白质变性，一级、二级、三级结构都被破坏。（× ）

12. 离子交换剂是一种不溶于酸、碱及有机溶剂的固态学分子化合物。（√ ）

13. 当某一蛋白质分子的酸性氨基酸残基数目等于其碱性氨基酸残基数目时，此蛋白质的等

电点为7.0。（ √ ）

14. 高压匀浆法可破碎高度分枝的微生物。（× ）

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15. 超声波破碎法的有效能量利用率极低，操作过程产生大量的热，因此操作需在冰水或有

外部冷却的容器中进行。（√ ）

16. 蛋白质为两性电解质，改变pH可改变其荷电性质，pH﹥pI蛋白质带正电。（× ） 17. 蛋白质为两性电解质，改变pH可改变其荷电性质，pH﹥pI蛋白质带负电。（√ ） 18. 离心是基于固体颗粒和周围液体密度存在差异而实现分离的。（√ ）

19. ．不同高分子化合物的溶液相互混合可形成两相或多相系统，如葡聚糖与聚乙二醇（PEG）

按一定比例与水混合后，溶液先呈浑浊状态，待静置平衡后，逐渐分成互不相溶的两相，上相富含PEG，下相富含葡聚糖。（√ ）

20. 超临界流体温度不变条件下，溶解度随密度（或压力）的增加而增加，而在压力不变时，

温度增加情况下，溶解度有可能增加或下降。（√ ）

21. 盐析是利用不同物质在高浓度的盐溶液中溶解度的差异，向溶液中加入一定量的中性

盐，使原溶解的物质沉淀析出的分离技术。（√ ）

22. 在低盐浓度时，盐离子能增加生物分子表面电荷，使生物分子水合作用增强，具有促进

溶解的作用。（√ ）

23. 向含有生化物质的水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，能使生化物质沉淀析出。

（√ ）

24. 有机溶剂与水混合要在低温下进行。（√ ） 25. 有机溶剂沉析分辨能力比盐析高。（√ ）

26. 若两性物质结合了较多阳离子，则等电点pH降低。（× ） 27. 等电点沉淀在实际操作中应避免溶液pH上升至5以上。（√ ） 28. 纳米过滤膜孔径最小。（× ）

29. 分离纯化极性大的分子（带电离子等）采用反相色谱（或正相柱），（× ） 30. 吸附力较弱的组分，有较低的Rf值。（× ） 31. 凝胶柱层析可进行生物大分子分子量的测定。（√ ） 32. 在高浓度盐溶液中疏水性相互作用减小。（× ） 33. 色谱分离技术中固定相都是固体。（× ） 34. 色谱分离技术中被检测物质的峰越宽越好。（× ）

35. 制备型HPLC对仪器的要求不像分析型HPLC那样苛刻。（√ ）

36. 在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS），影响凝胶的形成。（× ） 37. 等电聚焦电泳会形成的一个由阳极到阴极逐步递减的pH梯度。（× ）

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38. 等密度梯度离心中，梯度液的密度要包含所有被分离物质的密度。（√ ） 39. 可以用纸色谱的方法来选择、设计液-液萃取分离物质的最佳方案。（ √ ） 40. Sephadex LH-20的分离原理主要是分子筛和正相分配色谱。（ √ ） 41. 等密度梯度离心适于分离大小相同密度不同的物质。（√ ）

42. 当气体的温度超过其临界温度，压力超过临界压力之后，物质的聚集状态就介于气态和

液态之间，成为超临界流体。（√ ）

43. 盐析反应完全需要一定时间，一般硫酸铵全部加完后，应放置30min以上才可进行固-液分离。（√ ）

44. 层析点样时用一根毛细管，吸取样品溶液，在距薄层一端1.5-2cm的起始线上点样，样

品点直径小于5 mm。（√ ）

45. 水提醇沉法时根据物质溶解度差别进行分离的方法。（√ ）

46. 采用溶剂提取法提取中草药有效成分时，选择溶剂的原则是“相似相溶原则”。 （ √ ） 47. 凝聚与絮凝作用的原理是相同的，只是沉淀的状态不同。（× ）

48. 冻结-融化法冻结的作用是破坏细胞膜的疏水键结构，增加其亲水性和通透性来破坏细

胞的。（√ ）

49. 由于pH值可能对蛋白的稳定性有较大的影响，故一般通常采用改变离子强度的梯度洗

脱（√ ）

50. 盐析作用也能减少有机溶剂在水中的溶解度，使提取液中的水分含量减少。可以促使生

化物质转入有机相从而提高萃取率。（√ ）

51. 凝胶层析会使得大分子物质后流出，小分子物质先流出。（×）

52. 有机溶剂（如胍、乙醇、尿素和异丙醇等）可以削弱疏水分子间的相互作用。可以用于

任何规模的细胞破碎。（√ ）

53. 细胞破碎技术是生物分离操作中必需的步骤。（× ）

. 离心操作时，对称放置的离心管要达到体积相同才能进行离心操作。（×）

55. 分配系数K与溶质的浓度和相体积比无关，它主要取决于相系统的性质、被萃取物质的

表面性质和温度。（√ ）

56. 氨基酸、蛋白质、多肽、酶、核酸等两性物质可用等电点沉析。（√ ） 57. 同时含有酸、碱两种基团的树脂叫两性树脂（√ ）

58. 盐析一般可在室温下进行，当处理对温度敏感的蛋白质或酶时，盐析操作要在低温下（如

0℃-4℃）进行。 （√ ）

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59. 蛋白质类的生物大分子在盐析过程中，最好在高温下进行，因为温度高会增加其溶解度。

（×）

五、简答

1．溶剂萃取过程的机理是什么？

答：1）、简单分子萃取：简单的物理分配过程，被萃取组分以一种简单分子的形式在两相间屋里分配。以中型分子存在，不发生化学反应。2）、中型溶剂络合萃取：被萃取物是中型分子，萃取剂也是中型分子，萃取剂与被萃取物结合成为络合物进入有机相。 3）、酸性阳离子交换萃取：萃取剂为弱酸性有机酸或酸性鳌合剂。金属离子在水相中以阳离子或能解离为阳离子的络离子的形式存在，金属离子与萃取剂反应生成中性鳌合物。4）、离子络合萃取：①金属离子在水相中形成络合阴离子，萃取剂与氢离子结合形成阳离子，二者构成离子缔合体系进入有机相；②金属阳离子与中性鳌合剂结合成鳌合阳离子，再与水相中的阴离子构成离子缔合体系而进入有机相。 2．试述凝胶色谱的原理？

答：将混合原料加在柱上并用流动相洗脱，则无法进入孔隙内部的大分子直接被洗脱下来，小分子因为可以进入孔隙内部而受到很大的阻滞，最晚被洗脱下来，而中等大小的分子，虽然可以进入孔隙内部但并不深入，受到的阻滞作用不强，因而在两者之间被洗脱下来。

3．在色谱操作过程中为什么要进行平衡？

答：1）、流速平衡：流速是柱层析操作当中的主要影响因素，流速的快慢直接影响着分离的效果，流速过快，混合物得不到完全的分离，流速过慢，整体分离的时间要延长，因此在分离前首先要确定留宿。2）、液体环境：为了保持被分离物质运动的均一性，以及好的吸附和解析效果，因此要保持孔隙内部和外部液体环境的一致，所以进行液体环境的平衡。

4．在离子交换色谱操作中，怎样选择离子交换树脂？

答：1）、对阴阳离子交换树脂的选择：正电荷选择阳离子交换树脂，负电荷选择阴离子交换树脂。2）、对离子交换树脂强弱的选择：较强的酸性或碱性，选择选用弱酸性或弱碱性树脂。3）、对离子交换树脂离子型的选择：根据分离的目的，弱酸或弱碱性树脂不使用H或OH型。

5．简述盐析的原理及产生的现象？

答：当中性盐加入蛋白质分散体系时可能出现以下两种情况：

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（1）“盐溶”现象—低盐浓度下，蛋白质溶解度增大

（2）“盐析”现象—高盐浓度下，蛋白质溶解度随之下降，原因如下：

（a）无机离子与蛋白质表面电荷中和，形成离子对，部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间的排斥力减弱，从而能够相互靠拢；

（b）中性盐的亲水性大，使蛋白质脱去水化膜，疏水区暴露，由于疏水区的相互作用导致沉淀；

6.简述吸附色谱分离技术的原理？简述硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭这四种吸附剂的主要用途和特点？

答: 利用混合物中各成分在两相中吸附力 (范德华力，包括色散力、诱导力、定向力以及氢键)的差异而实现分离. 硅胶可分离各类成分。氧化铝分离碱性或亲脂性成分。活性炭分离水溶性成分。聚酰胺是氢键吸附，适合分离黄酮成分。 7.在运用离子交换技术提取蛋白质时，为什么要使用多糖基离子交换剂？

答:因为离子交换树脂孔径小,大分子蛋白质难以进入。同时，树脂内部主要为疏水性，对亲水性的蛋白质会产生影响。而多糖基离子交换剂没有上述问题。 8.区分渗透与反渗透？

答：渗透是由于存在化学势存在梯度而引起的自发扩散现象。因此，通常情况下，o其结果是水从纯水一侧透过半透膜向溶液侧渗透，使后者的液位抬高。如果在溶液一侧施加压力P1，外界力做功使溶液中水的化学势升高，则纯水通过膜的渗透就会逐渐减小，并最终停止，此时的压力差就是溶液的渗透压。当一侧向纯水一侧移动，此种渗透称之为反渗透。 9.何谓等电点沉析法？

答:蛋白质在等电点下的溶解度最低，根据这一性质，再溶液中加入一定比例的有机溶剂，破坏蛋白质表面的水化层和双电层，降低分子间斥力，加强了蛋白质分子间的疏水相互作用，使得蛋白质分子得以聚集成团沉淀下来。 10.何谓超临界流体萃取，并简述其分离原理？

答：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。 11.简述凝胶色谱的分离原理？

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P1P0时，水将从溶液

答：凝胶排阻色谱的分离介质（填料）具有均匀的网格结构，其分离原理是具有不同分子量的溶质分子，在流经柱床是，由于大分子难以进入凝胶内部，而从凝胶颗粒之间流出，保留时间短；而小分子溶质可以进入凝胶内部，由于凝胶多孔结构的阻滞作用，流经体积变大，保留时间延长。这样，分子量不同的溶质分子得以分离。 12.膜分离过程中，有那些原因会造成膜污染，如何处理？

答：（1）膜污染主要有两种情况：一是附着层被滤饼、有机物凝胶、无机物水垢胶体物质或微生物等吸附于表面；另一种是料液中溶质结晶或沉淀造成堵塞。（3分） （2）膜污染是可以预防或减轻的，措施包括料液预处理、膜性质的改善、操作条件改变等方式。（2分）

（3）膜污染所引起的通量衰减往往是不可逆的，只能通过清洗的处理方式消除，包括物理方法冲洗和化学药品溶液清洗等。（2分） 13.超临界萃取的原理及SC-CO2萃取的优点？

答:原理：溶质在超临界流体中的溶解度，与其密度有关，密度越大，溶解度越大。在临界点附近，微小的压力增加或温度下降，则溶剂的密度大幅度增加，对溶质的溶解度将大幅度增加，有利于溶质的萃取。而在临界点附近，微小的压力下降或温度上升，则溶剂的密度大幅度减少，对溶质的溶解度将大幅减少，有利于溶质的分离和溶剂的回收。 优点：无毒无腐蚀性，不可燃烧，价格低廉，传质好萃取快，临界温度和临界压力较低适合于热敏生物制品，可获萃取物或萃余物

14.何谓免疫亲和层析，简述亲和免疫层析介质的制备过程?

答、免疫亲和层析是利用亲和技术和色谱分离集成产生的一种高效色谱分离技术，其分离原理是通过抗原-抗体之间特异性的相互作用，从而实现高效的分离。

层析介质的制备过程包括：抗体的制备、抗体提取、载体活化，手臂链的连接、抗体的连接等步骤。

15.何谓亲和吸附，有何特点？

答：亲和吸附是吸附单元操作的一种，它是利用亲和吸附剂与目标物之间的特殊的化学作用实现的高效分离手段。亲和吸附剂的组成包括：惰性载体、手臂链、特异性亲和配基。亲和吸附的特点是高效、简便、适用范围广、分离速度快、条件温和，但载备难度大，通用性差，成本较高。 16.简述生物分离过程的特点?

答: 1、产品丰富：产品的多样性导致分离方法的多样性

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2、绝大多数生物分离方法来源于化学分离 3、生物分离一般比化工分离难度大 （1）成分复杂

（2）悬液中的目标产物浓度低 （3）生物活性，条件相对温和 （4）生物产品要求高质量 （5）获得高纯度的干燥产品 （6）卫生

17.试比较凝聚和絮凝两过程的异同？

答：凝聚与絮凝处理过程就是将化学药剂预先投加到悬浮液中，改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，使其聚集起来,增大体积以便固液分离。凝聚和絮凝技术常用于菌体细小而且黏度大的发酵液的预处理中。

凝聚和絮凝是两种方法，两个概念。凝聚：指在投加的化学物质（铝、铁的盐类）作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成１ mm 大小块状凝聚体的过程。絮凝：指使用絮凝剂（天然的和合成的大分子量聚电解质）将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。其中絮凝剂主要起架桥作用。

18.简述有机溶剂沉析的原理？

答：1）、概念：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。2）、原理：（1）降低了溶质的介电常数，使溶质之间的静电引力增加，从而出现聚集现象，导致沉淀。（2）由于有机溶剂的水合作用，降低了自由水的浓度，降低了亲水溶质表面水化层的厚度，降低了亲水性，导致脱水凝聚。 19. 膜分离技术的类型和定义？

答：膜分离过程的实质是物质透过或被截留于膜的过程，近似于筛分过程，依据滤膜孔径大小而达到物质分离的目的，故而可以按分离粒子大小进行分类：

（1）微滤：以多孔细小薄膜为过滤介质，压力为推动力，使不溶性物质得以分离的操作，孔径分布范围在0.025-14μm之间；

（2）超滤：分离介质同上，但孔径更小，为0.001~0.02 μm，分离推动力仍为压力差，适合于分离酶、蛋白质等生物大分子物质；

（3）反渗透：是一种以压力差为推动力，从溶液中分离出溶剂的膜分离操作，孔径范围在0.0001~0.001 μm之间；（由于分离的溶剂分子往往很小，不能忽略渗透压的作用，

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故而成为反渗透）；

（4）纳滤：以压力差为推动力，从溶液中分离300~1000小分子量的膜分离过程，孔径分布在平均2nm；

（5）电渗析：以电位差为推动力，利用离子交换膜的选择透过性，从溶液中脱除或富集电解质的膜分离操作； 20. 影响液一固分离的因素？

1）微生物种类的影响

一般真菌的菌丝比较粗大，液一固分离容易，含真菌菌体及絮凝蛋白质的发酵液，可采用鼓式真空过滤或板框过滤。对于酵母菌体，离心分离的方法具有较好的效果。但是细菌或细胞碎片相当细小，液一固分离十分困难，用一般的离心分离或过滤方法效果很差，因此应先用预处理的各种手段来增大粒子，才能获得澄清的滤液。 2）发酵液的黏度

液一固分离的速度通常与黏度成反比。影响发酵液黏度的因素很多： （1）菌体种类和浓度不同，其黏度有很大差别。

（2）不同的培养基组分和用量也会影响黏度，如用黄豆饼粉、花生饼粉作氮源，用淀粉作碳源会使黏度增大。发酵液中未用完的培养基较多或发酵后期用油作消沫剂也会使过滤困难。

21. 影响有机溶剂萃取分离的因素？

影响液一液萃取的因素主要有目的物在两相的分配比（分配系数K）和有机溶剂的用量等。分配系数K值增大，提取效率也增大，萃取就易于进行完全。当K值较小时，可以适当增加有机溶剂用量来提高萃取率，但有机溶剂用量增加会增加后处理的工作量，因此在实际工作中，常常采取分次加入溶剂，连续多次提取来提高萃取率。 22. 交换容量及其影响因素？

交换容量是指离子交换剂能提供交换离子的量，它反映离子交换剂与溶液中离子进行交换的能力。通常所说的离子交换剂的交换容量是指离子交换剂所能提供交换离子的总量，又称为总交换容量，它只和离子交换剂本身的性质有关。

影响交换容量的因素很多，主要可以分为两个方面，一方面是离子交换剂颗粒大小、颗粒内孔隙大小以及所分离的样品组分的大小等影响。另一些影响因素如实验中的离子强度、pH值等主要影响样品中组分和离子交换剂的带电性质。 23. 疏水柱层析分离原理？

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亲水性蛋白质（酶）表面均含有一定量的疏水性基团。尽管在水溶液中蛋白质（酶）具有将疏水性基团折叠在分子内部而表面显露极性和荷电基团的趋势，但总会有一些疏水性基团或极性基团的疏水部位暴露在蛋白质（酶）表面。这部分疏水基团可与亲水性固定相表面偶联的短链烷基、苯基等弱疏水基会发生疏水性相互作用，被固定相（疏水性吸附剂）所吸附。 24. 生物分离的基本原理？

主要是依据离心力、分子大小（筛分）、浓度差、压力差、电荷效应、吸附作用、静电作用、亲和作用、疏水作用、溶解度、平衡分离等原理对原料或产物进行分离、纯化。不同的分离对象需要采用不同的分离方法才能有效地被分离。 25. 离心分离技术基本原理？

是基于固体颗粒和周围液体密度存在差异，在离心场中使不同密度的固体颗粒加速沉降的分离过程。不同密度或不同大小及形状的物质在重力作用下的沉降速率不同，在形成密度梯度的液相体系中的平衡位置不同。离心分离过程就是以离心力加速不同物质沉降分离的过程。被分离物质之间必须存在或经人为处理产生的密度或沉降速率差异才能以离心方法进行分离。离心分离方法中差速离心法操作最简便，使用最广泛，但其分离纯化分辨率低于密度梯度离心。

26. 简述生物活性物质分离纯化的主要原理？

答： 生物大分子分离纯化的主要原理是：1）根据分子形状和大小不同进行分离，如差速离心与超离心、膜分离、凝胶过滤等；2）根据分子电离性质（带电性）差异进行分离，如离子交换法、电泳法、等电聚焦法；3）根据分子极性大小及溶解度不同进行分离，如溶剂提取法、逆流分配法、分配层析法、盐析法、等电点沉淀及有机溶剂分级沉淀等；4）根据物质吸附性质的不同进行分离，如选择性吸附与吸附层析等；5）根据配体特异性进行分离，如亲和层析法等。 27 液一液萃取时溶剂的选择要注意以下几点？

（1）选用的溶剂必须具有较高选择性，各种溶质在所选的溶剂中之分配系数差异愈大愈好。

（2）、选用的溶剂，在萃取后，溶质与溶剂要容易分离与回收。

（3）、两种溶剂的密度相差不大时，易形成乳化，不利于萃取液的分离，选用溶剂时应注意。

（4）、要选用无毒，不易燃烧的价廉易得的溶剂。

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28. 试述活性炭的吸附剂的吸附特点？

（1）在水溶液中吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。

（2）对极性基团（-COOH、-NH2、-OH等）多的化合物的吸附力大于极性基团少的化合物。

（3）对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物。 （4）对分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物。

（5）发酵液的pH与活性炭的吸附效率有关，一般碱性物质在中性下吸附，酸性下解吸；酸性物质在中性下吸附，碱性解吸。

（6）活性炭吸附溶质的量在未达到平衡前一般随温度升高而增加；但在升高温度时应考虑到溶质对热的稳定性。

29. 根据溶解度不同，蛋白质有几种分离纯化方法。

利用蛋白质溶解度的差异是分离蛋白质的常用方法之一。影响蛋白质溶解度的主要因素有溶液的pH值、离子强度、溶剂的介电常数和温度等。

1)等电点沉淀蛋白质在等电点时溶解度最小。单纯使用此法不易使蛋白质沉淀完全，常与其他方法配合使用。

2)盐析沉淀 中性盐对蛋白质胶体的稳定性有显著的影响。一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质盐析沉淀。盐析沉淀的蛋白质一般保持着天然构象而不变性。有时不同的盐浓度可有效地使蛋白质分级沉淀。通常单价离子的中性盐(NaCl)比二价离子的中性盐[(NH4)2SO4]对蛋白质溶解度的影响要小。

3)低温有机溶剂沉淀法在一定量的有机溶剂中，蛋白质分子间极性基团的静电引力增加，而水化作用降低，促使蛋白质聚集沉淀。此法沉淀蛋白质的选择性较高，且不需脱盐，但温度高时可引起蛋白质变性，故应注意低温条件。一般在0～40℃之间，多数球状蛋白的溶解度随温度的升高而增加；40～50℃以上，多数蛋白质不稳定，并开始变性。因此对蛋白质的沉淀一般要求低温条件。 30．试述柱层析的基本操作过程。 答：1)、装柱：①干法装柱 ②湿法装柱

注意：湿法装柱中柱内预留一部分水，防止气泡的产生，装柱过程要连贯。平衡。

2)、加样：①干法加样 ②湿法加样

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注意：加样过程中，要防止产生飞溅，量要适中。

3)、洗脱：以设定好的流速加入洗脱剂，可以是单一溶剂，也可以梯度洗脱。 注意：不使柱表面的溶液流干，柱上端保留一层溶液。

4)、收集：每隔一定体积收集一试管，使用层析的手段或紫外检测器进行实时的检测，合并具有相同物质的流份。

31． 熟悉本学期所做的各项分离实验大概操作流程及原理

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