ｌ２８ ２０１３年８月 第３４卷第１６期 Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａ １）ｅｖｅｌｏｏｍｅｎｔ 食品研究笔并发 专题论述 ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１３．１６．０３６ 脂肪酶催化合成生物柴油的现状与展望 杨建军。关卫省 （１．长安大学环境科学与工程学院化工系，陕西西安７１００５４； ２．陕西省地下水与生态环境工程研究中心（长安大学），陕西西安７１００５４） 摘要：生物柴油是一种可替代、可再生、无污染的机动车燃料。传统的酸碱法生物柴油生产工艺能耗大，同时产生 副产物甘油和皂化物，增加了生物柴油分离和提纯的难度。现在人们把注意力集中在利用脂肪酶作为生物催化剂生 产生物柴油的相关研究上，这主要得益于其温和的操作条件和相对简单的生物柴油下游处理工艺。相对于传统的化 学反应过程，酶法生产生物柴油的障碍主要是脂肪酶的使用成本高、反应速率小、甲醇和甘油引起的脂肪酶失活等。 就酶催化生产生物柴油过程中，影响脂肪酶催化活性和稳定性的因素进行综述，以此来展望酶法生产生物柴油的 前景。 关键词：生物柴油；脂肪酶；酰基受体；酯交换反应 Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｌｉｐａｓｅ—ｃａｔａｌｙｚｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｄｉｅｓｅｉ ＹＡＮＧ Ｊｉａｎ－ｊＵＢ，ＧＵＡＮ Ｗｅｉ—ｓｈｅｎｇ （１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｈａｎｇ Ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ＇ａｎ ７ １００５４，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆＧｒｏｕｎｄｗａｔｅｒ ａｎｄ Ｅｃｏ—Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｏｆＳｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｘｉ ａｎ ７１００５４， Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ，ｍｏｒｅ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｐｅｏｐｌｅ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｉｎｔｅｒｅｓｔｅｄ ｉｎ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ａｓ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ， ｒｅｎｅｗａｂｌｅ，ｎｏｎ—ｐｏｌｌｕｔｉｎｇ ｍｏｔｏｒ ｖｅｈｉｃｌｅ ｆｕｅ１．Ａｃｉｄ ａｎｄ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｒｅ ｅｎｅｒｇｙ ｃｏｎｓｕｍｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｎｅｒａｔｅ ｕｎｄｅｓｉｒａｂｌｅ ｂｙ—ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｔｈａｔ ｍａｋｅ ｄｉｉｃｕｌｔｆ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅ１． Ａｔｔｅｎｔｉｏｎ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｄｅｄｉｃａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｌｉｐａｓｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｖｏｒａｂｌｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｇｅｎｔｌｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｓｉｍｐｌｅ ｐｕｒｉｉｃａｔｉｏｎ ｓｔｅｐｓ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌｆ ａｎｄ ｂｙ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙ ｔｏ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｏｂｓｔａｃｌｅｓ ｆｏｒ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ａｒｅ ｔｈｅ ｃｏｓｔ ｏｆ ｌｉｐａｓｅｓ，ｔｈｅ ｓｌｏｗ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐａｓｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｇｌｙｃｅｒｏ１．Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｌｉｐａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｐａｓｅ—ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗｅｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｕｔｌｏｏｋ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ；ｌｉｐａｓｅ；ａｃｙｌ ａｃｃｅｐｔｏｒ；ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｉｆｏｎ 生物柴油又称脂肪酸甲酯（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓ— ｔｅｒｓ，ＦＡＭＥｓ），是以植物果实、种子、植物导管乳汁或动 物脂肪油、废弃的食用油等作原料，通过酯交换反应 个单独的脂肪酸甲酯分子，从而大大降低了产品的黏 度，增加了流动性，适用于现有标准柴油发动机使用。 用于生物柴油生产的催化剂可以分为四类：碱，酸，酶 和无机多相催化剂。脂肪酶（ＥＣ ３．１．１－３）主要用于催化 水解反应和各种合成反应：酯化反应、酯交换反应和氨 解反应。脂肪酶在非水介质中具有良好的催化活性和 或酯化反应合成。人们可以在不同的催化体系下，经 过酰基转移反应之后，一个植物油的大分子被分成三 基金项目：中国博士后科学基金面上项目（２０１２Ｍ５１１９６３） 作者简介：杨建军（１９７３一），男（汉），讲师，博士，研究方向：生物质能源 化工。 稳定性。在许多有机合成包括动力学拆分和不对称合 成中，脂肪酶的特异性、专一性和对映选择性都得到了 成功运用ｌｌｌ。近十年来，脂肪酶作为生物催化剂生产生 通信作者：关卫省（１９６Ｏ一），男，教授，博士生导师。 专题论述 杨建军，等：脂肪酶催化合成生物柴油的现状与展望 物柴油已经引起了人们的注意。这主要得益于脂肪酶 可以在温和条件下，催化不同来源的底物得到生物柴 油，且下游产品处理变得更加容易，是一个对环境更 加友好的工艺过程。 １脂肪酶 １．１胞内脂肪酶 胞内脂肪酶最主要的微生物来源有Ｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ， Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ．Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ和Ｐｓｅｕｄ—ｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ。对于生物催化生产生物柴油的研究主要集中 在脂肪酶的筛选和对影响反应速率因素的研究上。胞 内脂肪酶具有制备过程相对简单，生产成本低的优点， 但是在许多情况下，只能仅仅被使用一次就失去了催 化活性。酶的固定化技术有效的增强了脂肪酶的可重 复性和操作稳定性，并且缩短了反应时间，提高了底物 的转化速率闭。 到目前为止，研究最透彻的商业化固定化脂肪酶 有Ｎｏｖｏｚｙｍ ４３５，Ｌｉｐｏｚｙｍｅ ＴＬ ＩＭ，Ｌｉｐｏｚｙｍｅ ＲＭ ＩＭ和脂 肪酶ＰＳ—Ｃ。对于酶法生产生物柴油，脂肪酶的固定化 方法有：吸附法、交联法、包埋法、微胶囊法和共价法 等，如表ｌ。 表１不同胞外脂肪酶的固定化 Ｔａｂｌｅ １ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｉｐａｓｅ 吸附法固定化脂肪酶是研究最多的方法，大量的 不同载体被用于吸附固定化脂肪酶的研究，如：丙烯 酸树脂、大孔或微孔树脂、硅胶、水滑石、沸石，多孔高 岭石、硅藻土和纺织膜等。有研究者应用交联技术固 定化Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ脂肪酶，所得生物催化剂在没有明显 酶活力损失的情况下可被重复使用网，将蛋白质涂层 在微晶体上以降低传质阻力和提高底物转化率也是 一种可行的脂肪酶固定化方法ｌ ７ｌ。Ｄｉｚｇｅ等嘲成功地将 Ｔ．Ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕ脂肪酶通过聚戊二醛共价结合到苯乙 烯一二乙烯苯共聚物上，对催化芥子花油进行甲醇分 解，得到的生物柴油收率在９７％上。 １．２胞外脂肪酶 胞外脂肪酶复杂的分离纯化工艺过程增加了其 催化生产生物柴油时的使用成本。与此形成鲜明对比 的是，使用正在产生胞内脂肪酶的整个微生物细胞作 为生物催化剂，在保证一定的底物转化率情况下，其使 用成本相对较低。丝状真菌被认为是用于生物柴油生 产的较好的全细胞生物催化剂［９１，其中Ｒｈｉｚｏｐｕｓ和 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ应用最广。Ａｔｋｉｎｓｏｎ等开发了一种使用多孔 生物载体粒子（ｂｉｏｍａｓｓ ｓｕｐｐｏ￣ｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＢＳＰｓ）的技术 用于固定全细胞脂肪酶㈣。Ｂａｎ等Ⅲ１已经用网状聚氨酯 泡沫塑料体ＢＳＰｓ固定Ｒ．ｏｒｙｚａｅ细胞脂肪酶，催化大 豆油进行甲醇分解，转化率９０％以上。Ｈａｍａ ２１研究 了全细胞生物催化剂细胞膜中脂肪酸的组成对生物 柴油生产的影响，另外，他们还重点研究了Ｒ．ｏｒｙｚａｅ全 细胞生物催化剂催化甲醇分解反应中脂肪酶的专一 性。将经过基因重组的Ａ．ｏｒｙｚａｅ全细胞生物催化剂用 泡沫ＢＳＰｓ固定化后用于生物柴油生产，在生产９６ ｈ 后，转化率达到了９４％。与胞外脂肪酶相比，对于工业 应用来说，固定化全细胞脂肪酶意味着一个更低成本 的生产工艺，但也须克服较低的底物与产物传质效率 这一大障碍。 １－３脂肪酶催化的专一性和选择性 基于催化专一性和选择性脂肪酶可以分为三类： 位点专一性脂肪酶、脂肪酸型专一性脂肪酶和甘油酯 专一性脂肪酶（甘油单酸酯，甘油二酸酯或甘油三酸 酯）。从区域选择性来说，脂肪酶也可被分为三类：ＳＨ一 １，３位点专一性脂肪酶（水解酯键的Ｒ１或Ｒ３位点）， ｓｎ一２位点专一性脂肪酶（水解酯键Ｒ２位点）和非专一 性脂肪酶（不能区别出酯键分列的位点）。众所周知， 多种因素可以影响脂肪酶的位点专一性，其取决于甘 油三酸酯的取代基结构。例如，当ｓｎ一２位上的酰基被 烷基残基所替代时，Ｃ．ｖ￣ｃｏｓｕｍ脂肪酶催化专一性就 从ｓｎ一３位转移到了ｓｎ一１位，在甘油三酸酯分子内酰 基迁移的现象，也有多次研究报道 。脂肪酶底物专 一性在于它能区别酰基链的不同结构特点，如酰基的 性质（自由脂肪酸、烷基酯、甘油酯等），双键的长度及 位点和侧基团的位点等。例如，Ｒ．Ｏｒｙｚａｅ脂肪酶能区分 不同碳链长度的脂肪酸，在最佳条件下，适合催化 Ｃ１８一脂肪酸和ｃ２一Ｃ４一醇的酯交换反应㈣。因此，对于 不同的可再生油脂原料，脂肪酸的选择性对于生物柴 油生产十分重要。 １．４脂肪酶催化动力学和反应机制 脂肪酶催化的醇解反应，对于甘油三酸酯中的每 杨建军，等：脂肪酶催化合成生物柴油的现状与展望 专题论述 ＿－＝＝＝＝１ ３ｏ 个酯键都存在着两步反应机制。第一步是酯键水解和 醇基的释放，接着是第二步酯化，如图１。 Ｈ ｃ一０Ｈ Ｈ２ 一０ｃ０Ｒ，Ｈｃ一０ｃｏＲ１ Ｈ２ 一０Ｈ ２ＮＨ２ 川ｆＨ２Ｃ——０ｃ０Ｒ３ ∞ —— Ｈ， 川ｆＨ２Ｃ——０ｃｏＲ３ ∞ 川 —圳—。 川 一∞ １ ＮＨ２ ＮＨ ＦＡＭＥ Ｅ．Ａｅ Ｍｅ Ｅ 图１酶促甘油三酸酯合成脂肪酸甲酯机制阎 Ｆｉｇ．１ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｌｉｐａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ＦＡＭＥｓ ｆｒｏｍ ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓｔ＝］ 甘油三酸酯的醇解机制常常遵循Ｐｉｎｇ—Ｐｏｎｇ Ｂｉ— Ｂｉ机制，常被用来描述脂肪酶的催化反应，当然简化 了的米氏方程也可用来拟合实验数据。关于甘油ｌ一酸 酯醇解的动力学研究偶见报道。Ａ１一Ｚｕｈａｉｒ等在遵循 Ｐｉｎｇ—Ｐｏｎｇ Ｂｉ—Ｂｉ机制时，将醇的抑制行为和脂肪酸的 释放一并考虑 。Ｐｉｌａｒｅｋ等ｌ２ ｌ所描述的Ｐｉｎｇ—Ｐｏｎｇ Ｂｉ— Ｂｉ动力学模型为醇竞争性抑制，其假定：甘油酯键的 断裂和脂肪酶的失活都是不可逆过程，甘油单酯的异 构化则是可逆的。为了酶醇解甘油三酸酯的动力学模 型能更真实地反映实际情况，对影响反应的其它因素 也应进行考虑，如：脂肪酶的类型、试剂的用量、有机溶 剂、过渡态的形成与转化、传质阻力、温度对脂肪酶失 活和平衡转化限制的影响。因此，用动力学来描述这 样一个多相的复杂反应体系，各个方面因素的考虑变 得尤为重要。 ２影响酶催化酯交换反应的因素 ２．１油脂来源 通过酯交换反应合成生物柴油时，脂肪酶催化剂 具有竞争力的一个原因是多种甘油三酸酯都可以作 为不同来源脂肪酶的催化底物，如表１。 向日葵油可以有效地被Ｃ．Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ，Ｒ．ｍｉｅｈｅｉ，Ａ． ｎｉｇｅｒ，Ｃ．ｕｇｏｓａ，Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ，Ｒ．ｏｒｙｚａｅ． Ｊｌ￣ｏｒｅｓｃｅｎ． ｌａｎｕｇ－ ｉｎｏｓａ脂肪酶进行催化反应。大豆油也可以被不同来源 的自由脂肪酶，比如 Ｍｉｅｈｅｉ，Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ，Ｒ．Ｄｅｌｅｍａｒ脂 肪酶或者固定化Ｃ．Ａ ｎｔａｒｃｔｉｃａ脂肪酶（Ｎｏｖｏｚｙｍ ４３５）， ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ脂肪酶（ＬｉｐｏｚｙｍｅＴＬＩＭ）和Ｒ．ｍｉｅｈｅｉ脂肪酶 （Ｌｉｐｏｚｙｍｅ ＲＭ ＩＭ）催化合成生物柴油。菜籽油则可以 在催化体系中被Ｍ．ＣｉｒｃｉｎｅＵｏｉｄｅｓ，Ｍ．ｍｉｅｈｅｉ，Ｔ．Ｌａｎｕｇｉ— ｎｏｓ。和其它的脂肪酶催化酯交换反应。由于成本因 素，食用油被用来生产生物柴油是无利可图的，经济可 行的办法就是使用废弃或无用的油脂作为甘油三酸 酯的来源。牛油已经成功的用于Ｍ．ｍｉｅｈｅｉ和ｃ． Ａ ｎｔａｒｃｔｉｃａ脂肪酶催化的酯交换反应 。米糠油为廉价 的含有超过８０％自由脂肪酸的非食用油也被用于生 物柴油的生产［２４１。 ２．２酰基受体 伯醇、叔醇、直链醇、支链醇、酯类都可以被用于 脂肪酶催化的酯交换反应的酰基受体。出于成本和实 际考虑，甲醇和乙醇是目前工业化生产生物柴油中最 常用的醇类。但它们也有缺点，相比较长链醇更容易 使脂肪酶变性失活。Ｃｈｅｎ等 报道了脂肪酶失活的 程度与醇的碳原子数成反比，Ｎｅｌｓｏｎ【 １考察了对于 刚一ｃ４不同链长醇，脂肪酶催化酯交换反应的能力。 发现Ｍ．Ｍｉｅｈｅｉ脂肪酶在酰基受体为伯醇时，产品收 率最高；Ｃ．ａｎｔａｒｃｔｉｃａ脂肪酶在叔醇时收率最高；在无 溶剂体系中，Ｐ．Ｃｅｐａｃｉａ脂肪酶催化棕榈仁油的酯交 换反应，收率则在丁醇时比乙醇时（７２％）要低得多ｌ５Ｉ。 甲醇在生物柴油的酶法生产中得到了广泛应用，但相 比于其他醇更具有抑制作用，使酶活性降低。解决这 一问题可采取的措施有：醇的多步添加，选择新的酰 基受体，溶剂工程对反应体系的改造。以有机溶剂作 为反应介质，可以有效减弱甲醇对脂肪酶失活的影响， 不足之处在于有机溶剂回收困难，在Ｔ业化生产中 不具备优势。 ２．３有机溶剂 在酶促合成生物柴油中，有机溶剂作为介质可以 促进疏水性甘油三酸酯和亲水性醇的互溶，还可以防 止由于醇浓度过高而使酶变性。最适合于酶法合成生 物柴油的有机溶剂应是疏水性的，例如异辛烷、正庚 烷、石油醚、正己烷、环己烷等。当使用不溶性甘油时， 在反应器中其吸附在固定化脂肪酶上，会存在与无溶 剂体系同样的问题。亲水性有机溶剂在酶法生产生物 柴油中很少使用，主要是因为酶分子的必需水层问存 在着强烈的交互作用。亲水性１，４一二氧杂环己烷和叔 丁醇都能确保有较高酯交换反应收率［２６１。叔丁醇适度 的极性有助于溶解甘油和甲醇，以致于短链醇和甘油 对酶活性的消极作用可以完全消除，从而提高反应收 率和脂肪酶的稳定性。有机溶剂的使用消除了逐步添 加醇的必要性，但是又不得不考虑如何降低因此增加 的后序产品纯化成本。在有或无溶剂时，也许人们可 以得到相似的产品收率，但是有机溶剂更有利于人们 获得较高的反应速率，无疑对于酶法工业化生产生物 柴油有着积极的意义。 专题论述 杨建军，等：脂肪酶催化合成生物柴油的现状与展望 ２．４温度 为了防止脂肪酶活性的损失，酶催化的酯交换反 应总要比普遍的化学反应温度低一些。来源不同的脂 肪酶用于生物柴油生产的最适温度保持在３Ｏ℃～５５℃ 范围之内。Ｉｓｏ等 报道用Ｐ．ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｓ脂肪酶来催化 油酸乙酯的合成，酯交换反应速率随着温度增加而增 加。其它一些研究表明当温度逐渐从３０。ｃ上升到４０℃ 时，Ｔ．１ａｎｕｇｉｎｏｓ ＩＭ催化的生物柴油合成率也在增加， 但是反应温度超过５０℃时酶的稳定性便会下降 。 Ｊｅｏｎｇ和Ｐａｒｋ报道说Ｎｏｖｏｚｙｍ４３５的最佳反应温度是 ４０℃，然而对于Ｒ．ｏｒｙｚａｅ脂肪酶反应温度超过４０ ｃｃ会 导致脂肪酶活性的降低 。总之，脂肪酶酯交换反应的 最佳温度的确定需在酶的操作稳定性和酯交换反应 速率之间找到一个平衡点。 ２．５含水量 脂肪酶在非水介质中催化生产生物柴油，水具有 多种作用且水会对脂肪酶的活性和稳定性产生重要 影响。水可以在脂肪酶分子的微环境中产生一个油水 界面，以保证脂肪酶构象的“柔性”变化，从而保证了酶 的催化活性。水的添加量决定了此界面面积的大小， 进一步决定了酯交换反应的收率。脂肪酶在亲水环境 中表现为水解酶，过量的水将加速水解反应而减少酯 交换反应收率。众多研究显示，添加小剂量的水于酶 催化反应体系中，可以提高脂肪酸酯的合成速率。Ｓｈａｈ 等［３０］报道，没有含水的酯交换反应收率为７０％，而含 有５％水的酯交换反应收率则可以达到９８％。ＫａｉｅｄａＩ ］ 用Ｃ．ｒｕｇｏｓａ，Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ和ＰＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ自由脂肪酶来 测试含水量对酶催化反应的影响。Ｃ．ａｎｔａｒｃｔｉｃａ脂肪酶 （Ｎｏｖｏｚｙｍ ４３５）在较低的水含量条件下表现出较高的 催化活性 ，因为高含水量可降低酶的使用寿命。对于 每一个酶催化的酯交换反应来说，最佳含水量是添加 水含量增加水一油界面面积获得最大酶活性和减小水 含量使酶水解反应最小化之间的最佳平衡点。 ３反应器 人们设计了不同的反应装置和反应器用于酶法 生产生物柴油。用于酶法生产生物柴油的最常用的生 物反应器是半歇式搅拌釜反应器（ｂａｔｈ—ｓｔｉｒｒｅｄ ｔａｎｋ ｒｅａｃｔｏｒｓ，ＢＳＴＲｓ）和填充床反应器（ｐａｃｋｅｄ ｂｅｄ ｒｅａｃｔｏｒｓ， ＰＢＲｓ ｏ为了减少操作费用，生物柴油的酶法生产应在 一个连续的操作单元中进行。在实验室规模上，这些 连续的操作单元可以为ＣＳＴＲｓ，ＰＢＲｓ，流化床和膜反 应器等。ＰＢＲｓ非常适用于连续的生物柴油生产，但是 也有不足之处，副产物甘油滞留在反应器的底部，且 １３１＝，． 沉积在固定化脂肪酶的表面，从而降低了其催化效率， 所以必须及时地除去甘油。有报道将ＰＢＲｓ成功地用于 生物柴油的酶法生产：使用单一ＰＢＲ逐步添加甲醇闭， 单一的循环ＰＢＲ ｒ３２￣，三个串联的ＰＢＲｓ，并通过中间的 ＰＢＲ移除甘油和添加甲醇［２９１，在九个串联的ＰＢＲｓ之后 有一个分离装置来分离甘油［３３Ｊ。ＰＢＲ使用的一个最大 好处就是不管有没有溶剂参与，酶的稳定性都可以保 持一个很长的时间。ＰＢＲｓ在无溶剂条件下，必须减小 其压力降和液体流速，这主要通过增大载体尺寸或者 使用溶剂来减少流体流速来实现 。增大载体尺寸也 就增加了传质阻力，从而影响了酶的表观催化活力，是 不可取的。 ４展望 在酶法生产生物柴油中，研究对象涉及多种脂肪 酶、底物甘油三酸脂和酰基受体，他们已经成功的用于 废弃油脂的转化，从而消除了传统碱法酯交换反应所 面临的问题。使用甲醇时必须采取预防措施来避免其 对脂肪酶的抑制作用。酶法生产生物柴油时完全可以 在较短的生产时间内获得较高的生产效率，而且脂肪 酶完全可以多次重复使用。当然，这些方面还需要进 一步的改进和提高，相信不久的将来，将开发出酶法生 产生物柴油的绿色工艺，应该是一个不错的选择。 参考文献： ［１］杨建军，马晓迅，陈斌．生物柴油合成中脂肪酶的应用研究进展 ［Ｊ］．化工进展，２００８（１１）：１７７８—１７８３ ［２］Ａ１－ｚｕｈａｉｒ Ｓ，Ｈａｓａｎ Ｍ，Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ Ｋ Ｂ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｚｙ— ｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐａｌｍ ｏｉｌ ｂｙ ｌｉｐａｓｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００３，３８： １１５５—６３ ［３］Ａ１－ｚｕｈａｉｒ Ｓ，Ｊａｙａｒａｍａｎ Ｋ Ｖ，Ｋｒｉｓｈｎａｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｂｙ ｌｉｐａｓｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｅｎｇ Ｊ，２００６，３０：２１２－７ ｆ４］ Ｃｏｓｔａ Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ Ｒ，Ｖｏｌｐａｔｏ Ｇ，Ａｙｕｂ Ｍａｚ，ｅｔ ａ１．Ｌｊｐａｓｅ—ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｅｔｈａｎｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｏｉｌ ｉｎ ａ ｓｏｌｖｅｎｔ－ｆｒｅｅ ｓｙｓｔｅｍ ｕｓｉｎｇ ｃｅｎｔｒｌａ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｊ Ｃｈｅｍ Ｔｅｃｈ— ｎｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００８，８３：８４９—８５４ ［５］Ｃｈｅｎ Ｘ，Ｄｕ Ｗ，Ｌｉｕ Ｄ Ｈ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｓｏｌｕｂｌｅ ｌｉｐａｓｅ— ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｐｈａｓｉｃ ａｑｕｅｏｕｓ－ｏｉｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００８，２４：２０９７—２１０２ ［６］Ｋｕｍａｒｉ Ａ，Ｍａｈａｐａｔｒａ Ｐ，Ｇａｒｌａｐａｔｉ Ｖ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉ－ ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｊａｔｒｏｐｈａ ｏｉｌ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｆｕｅｌｓ，２００９，２：１ ［７］Ｋｕｍａｒｉ Ｖ，Ｓｈａｈ Ｓ，Ｇｕｐｔａ Ｍ Ｎ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｂｙ ｌｉｐａｓｅ－ ｃａｔｌａｙｚｅｄ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｌｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｏｉｌ ｆｒｏｍ Ｍａｄｈｕｃａ ｉｎｄｉｃａ［Ｊ］．Ｅｎｅｒｇ Ｆｕｅｌｓ，２００７，２１：３６８—３７２ ［８］Ｄｉｚｇｅ Ｎ，Ａｙｄｉｎｅｒ Ｃ，Ｉｍｅｒ Ｄ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓｕｎ－ ｌｆｏｗｅｒ，ｓｏｙｂｅａｎ，ａｎｄ ｗａｓｔｅ ｃｏｏｋｉｎｇ ｏｉｌｓ ｂｙ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ 杨建军，等：脂肪酶催化合成生物柴油的现状与展望 专题论述 １３２ ｌｉｐａｓｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｏｎｔｏ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｉｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｐｏｌｙｍｅｒ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２００９，１００：１９８３—１９９１ ［９］Ｆｕｋｕｄａ Ｈ，Ｈａｍａ Ｓ，Ｔａｍａｌａｍｐｕｄｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌ ｂｉｏｃａｔｌａｙｓｔｓ ｆｏｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｕｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００８，２６：６６８—６７３ 【１０１ Ａｔｋｉｎｓｏｎ Ｂ，Ｂｌａｃｋ Ｇ Ｍ，Ｌｅｗｉｓ Ｐ Ｊ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｏｆ ｇｉｖｅｎ ｓｉｚｅ，ｓｈａｐｅ，ａｎｄ ｄｅｎｓｉｔｙ ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅａｃｔｏｒｓ【Ｊ］． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ，１９７９，２１：１９３－２００ ［１ １】Ｂａｎ Ｋ，Ｈａｍａ Ｓ，Ｎｉｓｈｉｚｕｋａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｐｅａｔｅｄ ｕｓｅ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ ｂｉｏ－ ｃａｔａｌｙｓｔｓ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｗｉｔｈｉｎ ｂｉｏｍａｓｓ ｓｕｐｐｏ￣ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｕｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔｌａ Ｂ Ｅｎｚｙｍ，２００２，１７：１５７－１６５ 【１２】Ｈａｍａ Ｓ，Ｙａｍ￣ｉ Ｈ，Ｋａｉｅｄａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｎ ｗｈｏｌｅ—ｃｅｌｌ ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ ｏｆｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌｅｆｕｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ［Ｊ１＿Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｅｎｇ Ｊ，２００４，２１：１５５—６０ ［１ ３】Ｌｉ Ｌ Ｌ，Ｄｕ Ｗ，Ｌｉｕ Ｄ Ｈ，ｅｔ １ａ．Ｌｉｐａｓｅ—ｃａｔｌａｙｚｅｄ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｏｉｌｓ ｏｆｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｎｏｖｅｌ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔ ａｓ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ［Ｊ］．Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔａｌ Ｂ Ｅｎｚｙｍ，２００６；４３：５８－６２ 【１４］Ｓｈａｈ Ｓ，Ｇｕｐｔａ Ｍ Ｎ．Ｌｉｐａｓｅ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｒｏｍ Ｊａｔｒｏｐｈａ ｏｉｌ ｉｎ ａ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒｅｅ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００７，４２： ４０９－４１４ ｆ１５］Ｍｉｔｔｅｌｂａｃｈ Ｍ．Ｌｉｐａｓｅ—ｃａｔａｌｙｚｅｄ ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｏｉｌ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１９９０，６７：１６８—１７０ ［１６］Ｔｏｎｇｂｏｒｉｂｏｏｎ Ｋ，Ｃｈｅｉｒｓｉｌｐ Ｂ，Ｈ—ｋｉｔｔｉｋｕｎ Ａ．Ｍｉｘｅｄ ｌｉｐａｓｅｓ ｆｏｒ ｅｍ— ｃｉｅｎｔ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｒｏｍ ｕｓｅｄ ｐａｌｍ ｏｉｌ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ａ ｓｏｌｖｅｎｔ－ｆｒｅｅ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔａｌ Ｂ Ｅｎｚｙｍ，２０１０，６７： ５２－５９ 【１７］Ｗｏｎｇ Ｄ Ｗ Ｓ．ＬＩＰＡＳＥ．ＩＮ：ＷＨＩＴＡＫＥＲ ＪＲ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｆｏｏｄ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ［Ｍ］．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ，２００２，５２： ６６７—６８０ ［１ ８］Ｓｏｕｍａｎｏｕ Ｍ Ｍ，Ｂｏｒｎｓｃｈｅｕｅｒ Ｕ Ｔ．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｌｉｐａｓｅ—ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒｓ ｒｆｏｍ ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｏｉｌ【ＪＪ．Ｅｎｚｙｍ Ｍｉ— ｃｒｏｂ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，３３：９７—１ ０３ ｌ １９】Ｇｈａｍｇｕｉ Ｈ，Ｋａｒｒａ—ｃｈａＡｂｏｕｎｉ Ｍ，Ｇａｒｇｏｕｒｉ Ｙ．１一Ｂｕｔｙｌ ｏｌｅａｔｅ ｓｙｎ— ｔｈｅｓｉｓ ｂｙ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｌｉｐａｓｅ ｆｒｏｍ Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ：ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｈｅｘａｎｅ ａｎｄ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒｅｅ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ】．Ｅｎｚｙｍ Ｍｉｃｒｏｂ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２００４，３５：３３５—３６３ ［２０］ＡＩ—ｚｕｈａｉｒ Ｓ，Ｈａｓａｎ Ｍ，Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ Ｋ Ｂ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｚｙ－ ｍａｒｉｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｐａｌｍｏｉｌｂｙｌｉｐａｓｅ［Ｊ］．ＰｒｏｃＢｉｏｃｈｅｍ２００３，３８：１１５５— １１６３ 【２１】Ｐｉｌａｒｅｋ Ｍ，Ｓｚｅｗｃｚｙｋ Ｋ Ｗ．Ｋｉｎｅｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ １，３一ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃ— ｅｒｏｌｓ ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｌｉｐａｓｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００７，１２７： ７３６－７４４ 【２２］杨建军．脂肪酶的固定化及在离子液体中催化合成生物柴油的 研究［Ｄ】．西安：西北大学，２００９：１０９ ［２３］Ｎｅｌｓｏｎ Ｌ，Ｆｏｇｌｉａ Ｔ，Ｍａｒｍｅｒ Ｗ．Ｌｉｐａｓｅ－ｃａｔｌａｙｚｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１９９６，７３：１ １９１—１ １９５ ［２４］Ｌａｉ Ｃ Ｃ，Ｚｕｌｌａｉｋａｈ Ｓ，Ｖａｌｉ Ｓ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｌｉｐａｓｅ－ｅａｔａｌｙｚｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｒｆｏｍ ｒｉｃｅ ｂｒａｎ ｏｉｌ［Ｊ］．Ｊ Ｃｈｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００５，８０： ３３１－３３７ ［２５】Ｃｈｅｎ Ｊ Ｗ，Ｗｕ Ｗ Ｔ．Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ ｏｆｒ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｅａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｅｎｇ，２００３，９５：４６６—４６９ ［２６］Ｒｏｙｏｎ Ｄ，Ｄａｚ Ｍ，Ｅｌｌｅｎｒｉｅｄｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｒｆｏｍ ｃｏｔｔｏｎ ｓｅｅｄ ｏｉｌ ｕｓｉｎｇ ｔ－ｂｕｔａｎｏｌ ａｓ ａ ｓｏｌｖｅｎｔ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅ— ｓｏｕｒ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２００７，９８：６４８—６５３ ［２７］Ｉｓｏ Ｍ，Ｃｈｅｎ Ｂ，Ｅｇｕｃｈｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｕｅｌ ｆｒｏｍ ｔｒｉｇｌｙｅｅｒｉｄｅｓ ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ ｕｓｉｎｇ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｌｉｐａｓｅ［Ｊ］．Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔｌａ Ｂ Ｅｎｚｙｍ．２００１．１６：５３—５８ ［２８］Ｘｕ Ｙ Ｙ，Ｄｕ Ｗ，Ｚｅｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｏｉｌ ｔｏ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｕｅｌ ｕｓｉｎｇ ｌｉｐｏｚｙｍｅＴＬ ＩＭ ｉｎ ａ ｓｏｌｖｅｎｔ－ｆｌｅｅ ｍｅｄｉｕｒｔｌ［Ｊ１．Ｂｉｏｃａｔａｌ Ｂｉｏ－ ｔｒａｎｓｆｏｒｉｌｌ，２００４，２２：４５—４８ 【２９】Ｃｈｅｎ Ｇ，Ｙｉｎｇ Ｍ，Ｌｉ Ｗ．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｗａｓｔｅ—ｃｏｏｋｉｎｇ ｏｉｌｓ ｉｎｔｏ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｆｕｅｌｅ ０ｄｉｅｓｅｌ［Ｊ］．Ａｐｐｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００６， ｌ３２：９ｌｌ－９２１ ［３０］Ｓｈａｈ Ｓ，Ｇｕｐｔａ Ｍ Ｎ．Ｌｉｐａｓｅ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｒｏｍ Ｊａｔｒｏｐｈａ ｏｉｌ ｉｎ ａ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒｅｅ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ［．Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００７，４２： ４０９－４１４ 【３１］Ｋａｉｅｄａ Ｍ，Ｓａｍｕｋａｗａ Ｔ，Ｋｏｎｄｏ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｗａ— ｔｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｆｕｅｌ ｆｒｏｍ ｐｌａｎｔ ｏｉｌ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｖａｒｉｏｕｓ ｌｉｐａｓｅｓ ｉｎ ａ ｓｏｌｖｅｎｔ—ｆｒｅｅ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｅｎｇ，２００１， ９１：１２－１５ ［３２］ＨＳＵ Ａ Ｆ，ＪＯＮＥＳ Ｋ Ｃ，ＦＯＧＬＩＡ Ｔ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒｓ ｏｆ ｇｒｅａｓｅ ｕｓｉｎｇ ａｎ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｌｉｐａｓｅ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，２００４，８１：７４９—７５２ 【３３】Ｎｉｅ Ｋ Ｌ，Ｘｉｅ Ｆ，Ｗａｎｇ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｌｉｐａｓｅ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓｉｓ ｔｏ ｐｒｏ— ｄｕｃｅ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ：ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ１．Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔａｌ Ｂ Ｅｎｚｙｍ，２００６，４３：１４２－１４７ ［３４］Ｆｊｅｒｂａｅｋ Ｌ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｋ Ｖ，Ｎｏｒｄｄａｈｌ Ｂ．Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ［ＪＪ＿ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ，２００９，１０２：１２９８—１３１５ 收稿日期：２０１２—１１－０６
